mesfilos aerobios, coliformes totales y fecales, Salmonella y Vibrio cholerae.

Los ostiones se desconcharon en condiciones estriles, se pesaron 10 g de ostin recolectados al azar y se homogeneizaron
(homogeneizador marca Virtix), con 90 ml de agua destilada estril se efectuaron diluciones a la dcima desde 101 hasta
107. Con una pipeta automtica se extrajo 100 l del homogeneizado y se sembr en placas con medio de cultivo de
eosina azul de metileno (EMB), Salmonella-Shigella (S-S) y tiosulfato-citrato de sales de bismuto (TCBS), el inculo se
esparci en cada una de las placas de los medios de cultivo con una varilla de vidrio triangular acodada. Todos los cultivos
se incubaron durante 24 h a 35.5 C, despus de las cuales se efectu el conteo de unidades formadoras de colonias
(ufc/ml) con un contador de colonias tipo Quebec. Posteriormente, con una pipeta automtica, se extrajo

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SOCIEDADES RURALES, PRODUCCIN Y MEDIO AMBIENTE AO 2010 VOL.10 NM 20

CArgA BACterIAnA en oStIn (CrASSoStreA VIrgInICA), DeSDe SU reCoLeCtA...

1000 l del frasco con el homogeneizado original y se transfi ri a tubos de caldo lactosado, agua peptonada y caldo
tetrationato, a este ltimo se le agreg 1 ml de yodo-yoduro, y de nuevo se incubaron a 35.5 C durante 24 h, despus de
este tiempo 0.1 ml del cultivo de cada tubo se sembr en placas con agar de EMB, TCBS y S-S, respectivamente, y se
incubaron de nuevo bajo las condiciones mencionadas antes. Posteriormente, se efectu el proceso de purifi cacin de
las colonias que crecieron en las placas con los diferente medios selectivos, para lo cual se efectuaron resiembras sucesivas
en cada uno de los respectivos medios selectivos, hasta obtener cepas puras, lo que se comprob por el crecimiento
homogneo de las colonias por morfologa de colonial y celular, para esto ltimo se utiliz un microscopio de contraste
de fase previa tincin de Gram (APHA, 1994). Se identifi caron de forma presuntiva las colonias obtenidas, siguiendo los
criterios establecidos en el Manual de Merck (1994). Se efectu tincin de Gram y fi nalmente se procedi a confi rmar las
identifi caciones de las cepas por medio del sistema comercial API-20E (Biomrieux, 1997). Para confi rmar la identifi
cacin de las cepas todo el proceso se replic en paralelo con cepas de coleccin de la American Type Culture Collection
ATCC: Aeromonas hydrophila (ATCC356), Aeromonas caviae (ATCC154), Vibrio alginolyticus (ATCC177), Vibrio
parahaemolyticus (ATCC178) y Escherichia coli (ATCC2010).

Doc 2:
Se determin la presencia de mesfilos aerobios, coliformes totales y fecales, Salmonella y Vibrio cholerae. Los mtodos
de anlisis empleados son los siguientes:

Mesfilos aerbicos A partir de una dilucin 1:10 de la muestra en agua estril, se obtuvieron dos diluciones que se
sembraron por duplicado en placas de petri estriles conteniendo 20 ml de agar-cerebro-corazn. Se mezcl por
movimientos circulares y se dej solidificar. Las placas obtenidas se incubaron a 35C durante 24 horas. El recuento se
efectu en las cajas que presentaron de 30 a 300 unidades formadoras de colonias (UFC) basado en la NOM-092SSA1
(Amador y Rodrguez, 1991).

- Coliformes totales y fecales Se sembraron diluciones en caldo lactosado a partir de diluciones de la muestra en agua
estril. Se incubaron a 35C, durante 48 horas y se procedi a la interpretacin de los resultados. A partir de los tubos
positivos, se sembraron otros tubos con caldo verde brillante bilis al 2% incubndose a 35C, durante 48 horas. De los
tubos con produccin de gas se inocularon los correspondientes tubos con caldo verde brillante bilis al 2% incubndose
en bao Mara a 44.5C por 48 horas segn la NOM-112SSA1 (Amador y Rodrguez, 1991). Los resultados se calcularon
utilizando la tabla de conversin, en mL y g de acuerdo al Programa Mexicano de Sanidad de Moluscos bivalvos (SEPESCA-
SARH (CNA)-SEDUE-Ssa. 1989c).

Salmonella Partiendo de dos medios de enriquecimiento, caldo tetrationato y caldo selenito-cistina con 25 g la muestra,
incubndose en Bao Mara a 43C por 24 horas, se inocularon por estras, tres cajas de petri con ASB (agarsulfito de
bismuto), XLD (agar-xilosa-lisina-desoxicolato) y EMB (agar eosina-azul de metilo) incubndose a 35C por 24 horas, de las
colonias crecidas en estos medios, se procedi a su aislamiento y posteriormente a su identificacin con pruebas
bioqumicas segn la norma NOM-114-SSA1 (Avils y Eusebio, 1991).

- Vibrio cholerae El estudio se complet con el aislamiento de Vibrio cholerae por el mtodo de doble enriquecimiento
tanto en ostin fresco y congelado, como en agua con hispo de Moore. Se trituraron 50 g de ostin sin concha
mezclndose con 450 mL de APA estril. Se tom 1 mL de esta mezcla y se aadi a 9 mL de APA contenidos en un tubo
de ensaye. Se realiz la prueba por duplicado, incubndose a 37C y 42C por 8 horas. Se estri en placa con agartiosulfato-
citrato-sales biliares-sacarosa (TCBS), incubndose a la misma temperatura durante 24 horas. En el caso del anlisis del
agua se determin por medio del hispo de Moore. Se sumergi el hispo en el rea del agua del ostin a extraer y se
dej 24 horas. Se sumergi en 250 mL de APA estril, incubndose a 35C por 18 horas. Posteriormente se recogi con un
aplicador la pelcula blanquecina formada en la superficie, inoculando 9 mL de APA contenidos en un tubo de ensaye. Se
hicieron resiembras despus de 8 horas de incubacin a 35C en 2 cajas con medio TCBS, incubndolas a 37C por 24
horas, de las colonias crecidas en estos medios, se procedi a su aislamiento y posteriormente a su identificacin con
pruebas bioqumicas (Ssa. 1992. Manual de Vibrio cholerae O1).