Distribus Toksikan

Sifat Fisikokimia dan Pengikatan Protein

Penyerapan racun ke dalam darah perlu cukup tinggi sehingga akan memiliki efek
signifikan pada tempat beraksi di tubuh. Proses distribusi yang membawa obat terserap ke
jaringan bergantung pada berbagai faktor fisiologis dan sifat fisikokimia obat tersebut. Proses
ini merupakan gerakan reversibel dari racun antara darah dan jaringan atau antara
kompartemen ekstraselular dan intraselular. Namun, ada beberapa faktor rumit yang dapat
mempengaruhi distribusi racun. Misalnya, perfusi jaringan merupakan proses fisiologis yang
penting, karena beberapa organ memiliki perfusi yang baik (misalnya, jantung, otak) daripada
yang lain (mis., Lemak). Ada juga ikatan protein yang signifikan yang mempengaruhi
pengiriman obat ke jaringan.

Ada beberapa sifat physiochemical dari racun yang dapat mempengaruhi distribusi.
Ini termasuk kelarutan lipid, pKa, dan berat molekul). Bagi banyak racun, distribusi dari
darah ke jaringan adalah dengan difusi sederhana menuruni gradien konsentrasi.

Gradien konsentrasi akan dipengaruhi oleh koefisien partisi atau lebih tepatnya rasio
konsentrasi racun dalam darah dan jaringan. Jaringan massa dan aliran darah juga akan
memiliki dampak yang signifikan terhadap distribusi. Sebagai contoh, massa otot besar dapat
mengakibatkan peningkatan distribusi ke otot, sementara aliran darah terbatas pada jaringan
lemak atau tulang dapat membatasi distribusi. Rasio aliran darah ke massa jaringan juga
merupakan indikator yang berguna dari seberapa baik perfusi jaringan tersebut. Jaringan yang
perfusinya baik termasuk hati, ginjal, dan otak, dan perfusi jaringan yang rendah termasuk
lemak dan tulang di mana ada eliminasi lambat dari jaringan tersebut. Distribusi awal untuk
jaringan dengan perfusi baik (misalnya, jantung, otak) terjadi dalam beberapa menit pertama,
sementara pengiriman obat ke jaringan lain (misalnya, lemak, kulit) lebih lambat.
Jika afinitas untuk jaringan target tinggi, maka bahan kimia akan menumpuk atau
membentuk depot. Keuntungannya di sini adalah bahwa jika ini adalah obat, tidak perlu
memuat kompartemen sentral untuk sampai ke situs aktif. Namun, jika reservoir untuk obat
memiliki kapasitas besar dan mengisi dengan cepat, sehingga mengubah distribusi obat yang
jumlahmya lebih besar dari obat yang diperlukan awalnya untuk memberikan konsentrasi
yang efektif terapi di organ target. Jika ini adalah racun, ini mungkin menjadi fitur
menguntungkan karena tingkat racun pada situs target akan berkurang. Secara umum, racun
larut lipid tinggal terutama di plasma dan interstisial cairan, sementara racun larut lipid
menjangkau seluruh kompartemen, dan dapat menumpuk lemak.
Ada hambatan anatomi unik yang bisa membatasi distribusi racun. Contoh klasik
penghalang unik seperti penghalang darah-otak (BBB), yang dapat membatasi distribusi
racun ke dalam SSP dan cairan serebrospinal. Ada tiga proses utama atau struktur yang
menjaga konsentrasi obat atau racun di daerah ini: (1) BBB, yang terdiri dari sambungan
ketat endothelial kapiler dan sel glial, mengelilingi precapillaries, mengurangi filtrasi, dan
mensyaratkan bahwa racun tersebut melewati beberapa membran. untuk sampai ke CSF.
(Perhatikan bahwa sel endotel di organ lain dapat memiliki pankreas interseluler dan vesikula
pinositik.). (2) Sistem transportasi aktif di pleksus koroid memungkinkan pengangkutan asam
organik dan basa dari CSF ke dalam darah. (3) Proses produksi CSF yang terus menerus di
ventrikel dan drainase vena terus menerus mengencerkan konsentrasi toksik atau obat. Proses
penyakit seperti meningitis dapat mengganggu penghalang ini dan dapat memungkinkan
penetrasi antibiotik (misalnya aminoglikosida) yang seharusnya tidak mudah melewati
penghalang ini pada individu yang sehat. Hambatan jaringan / darah lainnya termasuk prostat
/ darah, testis / darah, dan bola mata / darah, namun peradangan atau infeksi dapat
meningkatkan permeabilitas penghalang ini. Toksinat dapat melewati plasenta terutama
dengan difusi sederhana, dan ini paling mudah dilakukan jika racun tersebut larut dalam
lemak (yaitu asam lemah atau basa lemah).

Seperti yang telah ditunjukkan sebelumnya, sistem peredaran darah dan komponen
dalam aliran darah terutama bertanggung jawab untuk pengangkutan toxicants untuk
menargetkan jaringan atau waduk. Eritrosit dan getah bening dapat memainkan peran penting
dalam pengangkutan toxicants, tapi dibandingkan dengan protein plasma, peran mereka
dalam distribusi toksikan relatif kecil untuk sebagian besar racun. Pengikatan protein plasma
dapat mempengaruhi distribusi karena hanya racun yang tidak terikat yang bebas atau
tersedia untuk menyebar di seluruh membran sel. Reaksi pengikatan protein racun adalah
reversibel dan mematuhi hukum aksi massa:

Biasanya rasio konsentrasi plasma tak terikat (Cu) dari racun terhadap konsentrasi toksik total
dalam plasma (C) adalah fraksi obat yang tidak terikat, fu, yaitu,
 konstanta k1 dan k2 adalah konstanta laju khusus untuk asosiasi dan disosiasi,
masing-masing. Asosiasi konstan Ka akan menjadi rasio k1/ k2, dan sebaliknya, disosiasi
konstan, Kd akan k2/ k1. konstanta dan parameter yang sering digunakan untuk
menggambarkan dan, lebih penting, untuk membandingkan afinitas relatif xenobiotik untuk
protein plasma.
Banyaknya protein yang beredar, tetapi yang terlibat dalam mengikat xenobiotik
adalah albumin, 1-asam glikoprotein, lipoprotein, dan globulin. Karena banyak racun yang
lipofilik, mereka cenderung untuk mengikat plasma - dan .-lipoproteins. Ada terutama tiga
kelas lipoprotein, yaitu high-density lipoprotein (HDL), lowdensity lipoprotein (LDL), dan
sangat low density lipoprotein (VLDL). Obat-obatan asam terutama terikat pada albumin, dan
obat-obatan dasar terutama terikat pada glikoprotein asam-a1-asam dan -globulin. Albumin
membentuk 50% protein plasma total, dan ia bereaksi dengan berbagai macam obat dan
toksik. Glikoprotein asam 1 tidak memiliki banyak situs pengikatan seperti albumin, namun
memiliki satu situs pengikatan afinitas tinggi. Jumlah obat toksik yang terikat bergantung
pada konsentrasi obat bebas, dan afinitasnya untuk tempat pengikatan, dan konsentrasi
protein. Pengikatan protein plasma bersifat nonselektif, dan karena itu toksisitas dan obat-
obatan dengan karakteristik fisikokimia serupa dapat saling bersaing satu sama lain dan zat
endogen untuk tempat pengikatan.
Mengikat protein ini tidak serta merta mencegah racun tersebut mencapai lokasi tindakan,
namun memperlambat laju di mana toksik mencapai konsentrasi yang cukup untuk
menghasilkan efek toksikologi. Sekali lagi, ini terkait dengan fraksi racun apa yang bebas
atau tidak terikat (fu).

Toksinat kompleks dengan protein oleh berbagai mekanisme. Pengikatan nonkovalen

sangat penting untuk distribusi karena toksisitas atau ligan dapat terdisosiasi lebih mudah
daripada yang bisa diikat kovalen. Dalam kasus yang jarang terjadi, ikatan nonkovalen
mungkin sangat stabil sehingga racun tetap terikat selama berminggu-minggu atau bulan, dan
untuk semua tujuan praktis, ikatan tersebut setara dengan yang kovalen. Jenis interaksi yang
menyebabkan pengikatan noncovalent di bawah kondisi fisiologis yang tepat meliputi ikatan
ion, ikatan hidrogen, gaya van der Waals, dan interaksi hidrofobik. Namun, ada beberapa
logam transisi yang memiliki konstanta asosiasi tinggi dan disosiasi yang lambat.
Meskipun pengikatan yang sangat spesifik (tinggi afinitas, berkapasitas rendah) lebih sering
terjadi pada obat-obatan, contoh pengikat khusus untuk racun cenderung tidak umum.
Tampaknya kemungkinan afinitas rendah, pengikatan berkapasitas tinggi menggambarkan
sebagian besar kasus pengikatan racun. Jumlah situs pengikatan hanya dapat diperkirakan,
seringkali dengan kesalahan yang cukup besar, karena sifat interaksi yang tidak spesifik.
Jumlah molekul ligan atau racun yang terikat pada molekul protein, dan jumlah maksimum
tempat pengikatan, n, menentukan kapasitas definitif protein. Pertimbangan lain adalah
afinitas mengikat Kbinding (atau 1 / Kdiss). Jika protein hanya memiliki satu situs pengikat
untuk racun, satu nilai tunggal, ikatan K, menggambarkan kekuatan interaksi. Biasanya lebih
dari satu situs pengikat ada, masing-masing situs memiliki konstanta pengikatan intrinsiknya,
k1, k2,. . . , kn. Jarang ada yang menemukan kasus dimana k1 = k2 =. . . = kn, di mana satu
nilai akan menggambarkan konstanta afinitas di semua lokasi. Hal ini terutama terjadi ketika
kekuatan pengikat hidrofobik dan van der Waals berkontribusi terhadap pengikatan afinitas
nonspesifik dan rendah. Jelas sifat kimia dari situs pengikat sangat penting dalam
menentukan ikatan. Struktur molekul tiga dimensi dari situs pengikatan, lingkungan protein,
lokasi umum dalam keseluruhan molekul protein, dan efek alosterik adalah semua faktor
yang mempengaruhi pengikatan.
Ada banyak metode untuk menganalisis pengikatan, tetapi keseimbangan dialisis
adalah yang paling banyak digunakan. Sekali lagi, fokus dari studi ini adalah untuk
menentukan persentase racun terikat, jumlah situs mengikat(n),dan konstanta afinitas
(Ka).Contoh-contoh yang disajikan di sini sangat disederhanakan untuk menghindari
kebingungan yang tidak semestinya ditimbulkan oleh subjek yang sangat kompleks.
Kompleks protein beracun yang memanfaatkan ikatan yang relatif lemah (energi dari
urutan ikatan hidrogen atau kurang) mudah diasosiasikan dan dipisahkan pada suhu
fisiologis, dan hukum tindakan massa berlaku terhadap ekuilibrium termodinamika:

Di mana pengikat K adalah konstanta kesetimbangan untuk asosiasi, [TP] adalah konsentrasi
molar kompleks protein racun, [T] adalah konsentrasi molar toksik bebas, dan [P] adalah
konsentrasi molar protein bebas. Persamaan ini tidak menggambarkan lokasi pengikatan atau
afinitas pengikatan. Untuk memasukkan parameter ini dan memperkirakan sejauh mana plot
timbal balik dari 1 / [TP] versus 1 / [T] dapat digunakan untuk menguji spesifisitas
pengikatan. Istilah 1 / [TP] juga bisa diartikan sebagai mol albumin per mol toksik.
Kemiringan garis lurus sama dengan 1 / nKa dan pencegatan garis ini dengan sumbu x sama
dengan -Ka. Garis regresi yang melewati titik asal menyiratkan pengikatan tak terbatas, dan
keabsahan menghitung konstanta afinitas dalam keadaan ini dipertanyakan. Gambar 6.10
mengilustrasikan satu kasus dengan empat pestisida, dan sisipan tersebut mengilustrasikan
sifat pengikatan yang rendah, "tidak dapat dideklarasikan", dalam contoh ini.

Dua kelas interaksi protein toksik yang dihadapi dapat didefinisikan sebagai (1)
spesifik, afinitas tinggi, kapasitas rendah, dan (2) nonspesifik, afinitas rendah, kapasitas
tinggi. Istilah afinitas tinggi menyiratkan konstanta afinitas (Kbinding) dari urutan 108 M-1,
sedangkan afinitas rendah menyiratkan konsentrasi 104 M-1. Pengikatan afinitas nonspesifik,
afinitas rendah mungkin paling khas dari senyawa nonpolar, walaupun kebanyakan kasus
tidak ekstrem seperti yang ditunjukkan pada Gambar 6.10.

Perlakuan alternatif dan diterima dengan baik untuk studi pengikatan adalah persamaan
Scatchard terutama dalam situasi ikatan afinitas tinggi:

yang disederhanakan untuk perkiraan grafik,

dimana adalah mol ligan (racun) yang terikat per mol protein, [T] adalah konsentrasi toksik
bebas, k adalah konstanta afinitas intrinsik, dan n adalah jumlah situs yang menunjukkan
afinitas tersebut. Bila [T] diplotkan melawan , sebuah garis lurus diperoleh jika hanya satu
kelas pengikatan yang terbukti. Kemiringannya adalah -k, dan intersep pada sumbu menjadi
n (jumlah tempat pengikatan). Jika lebih dari satu kelas situs terjadi (mungkin situasi yang
paling umum untuk racun), kurva diperoleh dari mana konstanta dapat diperoleh. Ini
diilustrasikan pada Gambar 6.10b, dimana data menunjukkan tidak satu tapi dua spesies situs
pengikatan: satu dengan kapasitas rendah tapi afinitas tinggi, dan satu lagi dengan kapasitas
sekitar tiga kali tetapi kurang afinitas. Biasanya program komputer yang digunakan biasanya
memecahkan data tersebut dengan menentukan satu baris untuk pengikatan spesifik dan satu
baris untuk pengikatan nonspesifik, yang terakhir menjadi rata-rata banyak solusi yang
mungkin.

Bila pengikatan hidrofobik dari racun lipid terjadi, seperti halnya banyak kontaminan
lingkungan, pengikatan mungkin tidak terbatas pada satu jenis protein plasma. Misalnya,
pengikatan DDT hidrokarbon terklorinasi sangat kuat untuk lipoprotein dan albumin, namun
protein lain memperhitungkan bagian penting dari keseluruhan transportasi. Hasil serupa
telah diamati untuk beberapa senyawa dengan berbagai sifat fisiokimia.

Kehadiran racun dan / atau obat lain yang dapat mengikat di tempat yang sama juga
dapat meningkatkan jumlah obat bebas atau tidak terikat. Ini adalah contoh interaksi obat
yang dapat menimbulkan konsekuensi toksikologi atau farmakologis yang serius. Secara
umum, bila konsentrasi terikat kurang dari 90% dari total konsentrasi plasma, pengikatan
protein plasma kurang penting secara klinis. Pengikatan protein plasma menjadi penting bila
lebih dari 90%. Misalnya, jika racun 99% terikat pada protein plasma, maka 1% bebas,
namun jika ada interaksi racun (misalnya, ikatan kompetitif) yang menghasilkan 94% terikat,
6% sekarang bebas. Perhatikan bahwa karena interaksi ini, jumlah toksisitas yang tersedia
sehingga menyebabkan respons toksikologis meningkat enam kali lipat.

Skenario semacam itu dapat menyebabkan toksisitas akut parah. Pengikatan protein
plasma yang ekstensif dapat mempengaruhi pembersihan ginjal jika filtrasi glomerulus adalah
proses eliminasi utama di ginjal, namun tidak jika dilakukan dengan sekresi aktif di ginjal.
Pengikatan juga dapat mempengaruhi pembersihan obat jika rasio ekstraksi (ER) di hati
rendah, namun tidak jika UAB tinggi untuk racun tersebut. Pengikatan protein plasma dapat
bervariasi antara dan di dalam kelas kimia, dan juga spesifik spesies.

Ada beberapa variabel lain yang dapat mengubah konsentrasi protein plasma. Ini
termasuk kekurangan gizi, kehamilan, kanker, abses hati, penyakit ginjal, dan usia bisa
mengurangi albumin serum. Selanjutnya konsentrasi 1-glikoprotein dapat meningkat seiring
bertambahnya usia, pembengkakan, infeksi, obesitas, gagal ginjal, dan stres. Perubahan kecil
pada suhu tubuh atau perubahan keseimbangan asam basa dapat mengubah karakteristik
pengikatan protein kimia. Meskipun penghentian efek obat atau racun biasanya dilakukan
dengan biotransformasi dan ekskresi, hal itu mungkin juga terkait dengan redistribusi dari
tempat kerjanya ke jaringan lain. Contoh klasik dari hal ini adalah ketika obat yang sangat
larut dalam lipid atau racun yang bekerja pada otak atau sistem kardiovaskular diberikan
dengan IV atau terhirup.