07/06/2011
INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ
MATERIA:
TALLER DE INVESTIGACION I
TEMA:
CATEDRTICO:
INTEGRANTES DE EQUIPO:
CARRERA:
ING. BIOQUIMICA
SEMESTRE:
2|Pgina
INDICE
Portada.1
Presentacin.2
ndice.3
Capitulo I
Planteamiento del problema4
Introduccin.5
Antecedentes..6
Justificacin..7
Hiptesis....9
Objetivos..10
Captulo II
Marco terico11
Captulo III
Metodologa..37
Captulo IV
Resultados..46
Capitulo V
Discusin de resultados.49
Captulo VI
Conclusin..50
Captulo VII
Recomendaciones.51
Captulo VIII
Bibliografa.52
Capitulo IX
Cronograma55
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CAPITULO I
Las cual posee muchas propiedades curativas, dentro de ellas podemos mencionar los
siguientes: de actividad antiinflamatoria, analgsica, antiasmtica, diurtica,
antiespasmdica y antimicrobiana, toxicidad y genotoxicidad, entre otros.
El aceite esencial que posee el zacate de limn (Cymbopogon citratus) como componente
principal es el citral, que tiene un alto poder antibacteriano y antimictico, adems de
otras aplicaciones en las industrias de: perfumera, farmacutica, alimentos, entre otras.
Por lo que se han hecho estudios de esta maravillosa planta por lo cual se ha extrado su
aceite esencial con diferentes propiedades como ya las antes mencionadas, el cual pude
servir para futuros productos, con fines mdicos y teraputicos.
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1.2. Introduccin
Los aceites esenciales son metabolitos que han adquirido gran importancia ya que se ha
comprobado que poseen una fuerte actividad antimicrobiana contra bacterias, levaduras y
hongos, incluso frente a microorganismos que presentan resistencia a los antibiticos
(Prashar, 2003). Actividad atribuida a los compuestos por los que estn constituidos, tales
como: monoterpenos, sesquiterpenos, diterpenos, hidrocarburos y sus derivados.34,36
Una planta medicinal aromtica que posee grandes propiedades medicinales, es la del
zacate de limn (Cymbopogon citratus) la cual es empleada en diferentes medicamentos
gracias a su actividad analgsica, antiasmtica, diurtica, antiespasmdica,
antimicrobiana, toxicidad, entre otras.36,35
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1.3. Antecedentes
A las puestas del siglo XXI, el hombre ha alcanzado un extraordinario conocimiento de la
mente y el cuerpo humanos. Gracias a ello, nuestra capacidad para dominar la
enfermedad y los sufrimientos que esta causa, es en la actualidad mayor de lo que fue en
ningn momento de la historia. Obviamente, este progreso est ligado al hecho de que
hoy disponemos de ms centros de investigacin y apoyos a los mismos.
En las ltimas dcadas se ha producido un desarrollo tan espectacular de la industria
farmacutica, as como de la produccin de medicamentos sintticos. Los medicamentos
de sntesis qumica que proporciona la moderna industria farmacutica, han demostrado
su eficiencia en caso de procesos agudos y de afecciones graves, debido en parte a la
inmediatez de sus afectos. Ahora bien, ningn producto qumico se halla exento de
efectos secundarios ms o menos imprevisibles e importantes. Toda sustancia elaborada
en un laboratorio, y por lo tanto extraa a los organismos vivos, tiene que ser aceptadas
con la mxima prevencin por mdicos y enfermo, y no debe considerarse inofensivas sin
pruebas validas (Harold Burn). Estos fenmenos cada vez ms frecuentes, han sucintado
un renovado inters por los medicamentos naturales de origen vegetal, tanto por parte de
los mdicos como de los enfermos.
Las plantas han sido utilizadas como remedio para las dolencias de los seres humanos
como la de los animales, desde tiempos muy antiguos. Todas las civilizaciones se han
valido de ellas para aliviar el sufrimiento, y en muchos casos, hasta para curar la
enfermedad.
Hoy conocemos con exactitud la composicin de muchsimas plantas medicinales, de
modo que las podemos aplicar de forma racional cuando mejor conviene, es por esto que
a partir de las sustancias activas de una planta, y de los resultados que proporciona la
investigacin farmacutica y clnica, se deducen sus aplicaciones medicinales.
A medida que las plantas medicinales se vayan conociendo mejor, sern ms y mejor
utilizadas y apreciadas.
Las plantas medicinales no se deberan de usar nicamente buscando en ellas una accin
curativa, como se hace con los frmacos, cuando ya se ha manifestado la enfermedad.
Precisamente una de las grandes virtudes es su capacidad para regular los procesos vitales
y para prevenir la enfermedad. El uso adecuado de las plantas medicinales, dentro de un
conjunto de hbitos de vida sana, puede evitar que las debilidades de nuestro organismo y
la predisposicin a padecer ciertas enfermedades evolucionen hasta convertirse en
enfermedades declaradas.
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1.4. Justificacin
Desde tiempos remotos, nuestros antepasados han recurrido a la cura de enfermedades
por medio de remedios elaborados a base de plantas, que aun mucha de ellas conservan
sus propiedades medicinales. Hoy en da hay plantas que fueron rescatadas ya que
muchas han sido extintas como consecuencia del descuido humano. Hoy en da podemos
encontrar una gran diversidad de plantas y con la ayuda de la tecnologa y nuevas
tcnicas que podemos explotarlas aun mas aprovechando todas sus propiedades entre
estas plantas podemos encontrar zacate de limn o te de limn (Cymbopogon citratus) en
la cual tiene muchas propiedades ; entre las propiedades farmacolgicas de dicha planta
son analgsicas, antiasmticas, expectorantes, antiespasmdico, etc.Gracias a su
naturaleza aromtica del genero Cymbopogon ha atrado la atencin del hombre a lo largo
de su historia. El agradable olor que poseen las diferentes especies de este gnero por sus
contenidos en aceites esenciales ricos en compuestos terpenicos ha creado una demanda
de estos para el desarrollo de la industria en pases como:
Alemania, Argentina, Brasil, Cuba, Ecuador, Sri Lanka, India, Singapur, Malaya, Java,
Formosa, China, Francia, Sudfrica, Seychelle, Islas Comoros, Madagascar, Hait, Puerto
Rico, Mxico, Guatemala, Honduras y Salvador.
Como sabemos, Mxico es un pas rico en plantas medicinales gracias a sus condiciones
climticas y geogrficas. Y en el caso del t de limn (Cymbopogon citratus) es una planta
adaptable casi a cualquier tipo de suelo ya que muchas veces se encuentra de manera
silvestre.
En nuestro pas varios estados del Altiplano Central, Golfo de Mxico y Sureste. En los
cuales se encuentra nuestro bello estado Chiapas, siendo de los 4 principales productores
a nivel nacional, no obstante eso si no que tambin genera nuevas alternativas de ingresos
para la poblacin rural, como en la regin de los Joaquines municipio de Cintalapa
Chiapas, donde se cuenta con parcelas productoras de zacate de te-limn orgnico
certificado al 100% por la empresa mexicana Certimex. Tambin este cultivo se encuentra
en establecimiento en la zona de la selva, Municipio de Ocosingo, Chiapas.
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Una de sus grandes peculiaridades es su funcin ya que puede ayudar a combatir
patologas humanas tanto como en plantas, es por eso que en algunos casos esta se utiliza
como insecticida agradable al ambiente.
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1.5. Hiptesis
El uso clnico del zacate de limn como un agente antimictico y antibacteriano, mediante
la extraccin de su aceite esencial, para la utilizacin de su aceite en un producto natural
para la poblacin en general para la sustitucin de algunos medicamentos sintticos con la
misma calidad.
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1.6. Objetivos
10 | P g i n a
Captulo II
Marco terico
Las ltimas cuatro dcadas se han caracterizado por el renacimiento de una cultura
naturalista cientficamente fundamentada, que incluye tanto la actividad agropecuaria
como la mdica. Surge una revalorizacin en el suelo y produccin de las plantas
medicinales, tanto en estado natural, como de las sustancias y productos elaborados a
partir de ellas. La bsqueda se sustancias con actividad antibacteriana y antimictica, en
fuentes como las plantas superiores, es importante para encontrar alternativas
teraputicas efectivas contra las infecciones producidas por microorganismos resistentes
a los antibiticos.1
La medicina tanto tradicional como natural forman parte importante de cada pas y
regin del mundo con caractersticas propias, dependiendo de los recursos disponibles en
ellos, y teniendo en cuenta la idiosincrasia de sus habitantes.
Entre las plantas reconocida por sus comprobadas propiedades medicinales se encuentra
el cultivo de zacate limn (Cymbopogon citratus (D.C) Stapf), cuya importancia se centra
en la obtencin de aceite esencial, el cual es rico en citral, y presentan varias propiedades
entre ellas que es antibacteriano y antimictico.2
11 | P g i n a
Otros nombres comunes:
Aspectos taxonmicos:
Reino: Cormobionta
Divisin: Magnoliophyta
Subclase: Commelinidae
Orden: Cyperales
Sinnimos:
12 | P g i n a
Origen y distribucin:
Identificacin de la especie:
Antiguamente exista confusin sobre la taxonoma de las plantas de las Indias Orientales
y de las Indias Occidentales, productoras del aceite esencial denominado lemongrass.
Pero toda esta confusin finaliza cuando el cientfico Stapf, identifica a la planta de las
Indias Orientales como Cymbopogon Flexuosus y a la de las Indias Occidentales como
Cymbopogon citratus.8
Descripcin botnica:
El zacate limn es una planta herbcea, muy vigorosa. Su tamao es mediano, la altura
mxima a la cual la planta llega es de 1.50 hasta 2m con un dimetro de 5cm., y posee de
40 a 50 hijos.9
13 | P g i n a
Segn lo descrito por la doctora Rafaela Soto, en un anlisis bromatolgico realizado al
zacate limn se cuantifico su composicin, y se obtuvieron los datos descritos en la tabla
siguiente
PARTE DESCRIPCION
Raz El zacate limn posee una raz corta, muy
ramificada. Estudios realizados han
determinado que la mayor cantidad de
races se encuentran en el suelo a una
profundidad de 0.30 cm.
14 | P g i n a
Hojas Son de color verde oscuro, poseen una
vaina tubular la cual envuelve al tallo,
encontrndose agrupadas cerca de la
base. Tienen los bordes speros llenos de
cerdas (parecidos al filo de un serrucho),
que al manipular la planta cortan. El largo
de las hojas va de 60 cm. a 1 m., y el
ancho de (0.01 a 0.02) m, estas
dimensiones varan con cada estacin
climtica. Las hojas poseen un fuerte olor
a limn, ya que en el lado central del
mesofilo y entre las heces vasculares se
encuentran las clulas donde se almacena
el aceite esencial, el cual es rico en citral.
Las clulas epidrmicas de las hojas
poseen slice, el cual puede causar
ulceras.
Flor Esta planta generalmente no tiende a
florecer, cuando lo hace es porque ha
crecido en un clima propicio y no ha sido
cortada en varios aos. Las flores se
encuentran sostenidas en el tallo, en
varios racimos.
Ciclo de vida:
El ciclo de vida del zacate limn va alrededor de cuatro a cinco aos. En la bibliografa se
puede encontrar datos que hacen referencia a ciclos de vida de ms de 10 aos, esto
depende de las condiciones en las cuales est creciendo la planta.1, 10
Clima:
La cantidad de aceite esencial de planta varia de mes en mes en el ao, siendo los meses
de junio, julio y agosto los que ms aceite esencial produce la planta. Esto se debe
principalmente a que el calor, el sol y la humedad climtica de estos meses hacen que la
planta acumule mas aceite esencial, mientras que en pocas donde la presencia de lluvia
es constante el rendimiento de aceite disminuye, debido a que la planta llena de agua sus
clulas para protegerse del mal tiempo.12
15 | P g i n a
Una de las causas principales para que este cultivo vare en su produccin son los factores
ambientales (condiciones climticas, nutricionales y otros), los cuales afectan
directamente a la expresin de los genes responsables de la produccin de los principios
activos.13
PROPAGACION:
El zacate limn se propaga por divisin de matas, debido a que la obtencin de sus
semillas es muy difcil, ya que la planta no florece en la mayora de zonas del mundo
Las matas son extradas de las plantas madres que tengan uno o dos aos de edad, y se le
recorta la parte area y las races.1, 14
Las nuevas madres van a dar una produccin de 40 a 70 hijos en periodo de alrededor de
10 meses a un ao de ser plantadas.1, 15
SUELO:
El zacate limn es una planta muy resistente, razn por la cual se le encuentra en suelos
de buena calidad, con abono verde en suelos infrtiles, en pendientes montaosas, en
suelos arenosos, en suelos ligeramente cidos. Pero la produccin de aceite esencial de
esta planta se da en suelos arenosos-arcillosos.1, 12
Se debe preparar el suelo 40 das antes de la plantacin, ya que este debe estar en
condiciones ptimas para el buen crecimiento de la planta, para lo cual se debe realizar las
siguientes actividades:
16 | P g i n a
- Colocar una correcta cantidad de abono con productos tales como: estircol bien
fermentado, azufre.12, 16, 9
CULTIVO:
En la tabla siguiente se encuentran todos los pasos que se deben seguir para realizar el
cultivo de zacate de limn:
ACTIVIDAD DESCRIPCION
Plantacin Para realizar la plantacin de zacate limn
se deben tomar en cuenta algunos
aspectos importantes tales como: poca de
plantacin, adecuado uso en la radiacin
solar, evitar la presencia de malezas, la
conservacin del agua y del suelo, fertilidad
del suelo, entre otros.
La plantacin de zacate limn se realiza a
mano colocando en cada hoyo del suelo de
1 a 3 hijos, posteriormente se coloca tierra
hasta cubrir la raz. En la bibliografa se
encuentran varios datos de la distancia que
se deben guardar entre planta y planta,
siendo la distancia promedio (50x90) cm. la
poca de plantacin depende de la zona
donde la planta de zacate limn va a ser
cultivada.
Labores de cultivo Las labores de cultivo se las hace a los 20 a
25 das despus de realizada la plantacin,
y posteriormente cada quincena.
Esta actividad tiene la finalidad de
controlar el crecimiento de malezas en los
cultivos de zacate limn, ya que estas
hacen que el crecimiento de la planta
disminuya
Fertilizar orgnicamente el cultivo ya que
necesita nitrgeno, fosforo, potasio y
materia orgnica para su adecuado
crecimiento, previamente se debe hacer
limpieza de maleza.
Si en la zona donde se encuentra sembrada
la planta no llueve, se debe regar la planta
con agua potable si es posible. El riego se lo
debe hacer constantemente, ya que as la
planta crecer ms rpido y en correctas
17 | P g i n a
condiciones, evitando que se produzca un
envejecimiento de las hojas acelerado. El
zacate limn no se ve afectado de manera
significativa por plagas y enfermedades.
Cosecha La recoleccin del zacate limn suele
realizarse en cualquier poca del ao. Se
cortan con un machete las hojas a no
menos de 10 cm. de la superficie del suelo,
para permitir la reparacin del follaje. La
planta est lista para ser cortada cuando
empieza a envejecer, mostrando como
caracterstica la punta de las hojas de color
pardo amarillenta y el tallo un color rojizo.
Cuando la planta tiene de ocho meses a un
ao de edad se debe cortar solo una vez,
en los siguientes aos, se realizan de dos a
cuatro cortes, cada tres o cuatro meses.
Siempre la cosecha se la realiza a las
primeras horas de la maana, esto es entre
5 a 6 de la maana.
Poscosecha Una vez cosechada a las hojas de la planta
zacate limn, se le realiza el control de
calidad, es decir, se les examina retirando
aquellas que presentan envejecimiento,
manchas, huecos debido a que han sido
atacadas por insectos, posteriormente las
hojas son lavadas y llevadas al lugar donde
van a ser almacenadas, el cual debe ser
oscuro, tener aireacin y baja humedad.
Dichas condiciones deben de evitar el
deterioro de la planta en forma rpida.
La planta tendr varios destinos, puede ser
usada entera para procesos de elaboracin
de medicamentos, para la extraccin de su
aceite esencial en alambiques a vapor de
agua o a fuego directo.
La destilacin de le realiza con las hojas
enteras o picadas en trozos pequeos. El
tiempo que tarda el proceso de destilacin
es de dos horas cuando se utiliza arrastre
de vapor y dos horas y media cuando se
realiza a fuego directo.
18 | P g i n a
2.3. Aceites esenciales
Los aceites esenciales son compuestos formados por variad substancias orgnicas
voltiles, que pueden ser alcoholes, acetonas, cetonas, teres, aldehdo, y que se
producen y almacenan en los canales secretores de las plantas.
Origen
Las plantas elaboran los aceites esenciales con el fin de protegerse de las enfermedades,
ahuyentar insectos depredadores o atraer insectos benficos que contribuyen a la
polinizacin.
Los aceites esenciales son caractersticos de los magnoliales, los laurales, los
austrobaileyales, y los piperales, y tambin de algunas familias no emparentadas con estos
rdenes, como Myrtaceae, Rutaceae, las familias de apiales, Lamiaceae, Verbenaceae y
Asteraceae.
19 | P g i n a
Clasificacin de los aceites esenciales
a. Consistencia
Dentro del grupo de las resinas podemos encontrar a su vez una serie de posibles
combinaciones o mezclas:
20 | P g i n a
3. Gomorresinas, son extractos naturales obtenidos de un rbol o planta. Estn
compuestos por mezclas de gomas y resinas.
b. Origen. De acuerdo a su origen los aceites esenciales se clasifican como:
Los naturales se obtienen directamente de la planta y no sufren modificaciones
fsicas ni qumica posteriores, debido a su requerimiento tan bajo son muy
costosas.
Los aceites esenciales sintticos como su nombre lo indica son los producidos por
la combinacin de sus componentes los cuales son la mayora de las veces
producidos por procesos de sntesis qumica. Estos son ms econmicos y por lo
tanto son mucho ms utilizados como aromatizantes y saborizantes (esencias de
vainilla, limn, fresa, etc.).
c. Naturaleza qumica
21 | P g i n a
Son solubles en alcoholes y en disolventes orgnicos habituales, como ter o
cloroformo, y alcohol de alta gradacin.
Son liposolubles y muy poco solubles en agua, pero son arrstrables por el
vapor de agua.9,8
Caractersticas qumicas de los aceites esenciales (terpenoides)
Los terpenos derivan, de unidades de isopreno (C5) unidas en cadena. Los terpenos
son una clase de sustancia qumica que se halla en los aceites esenciales, resinas y
otras sustancias aromticas de muchas plantas, como los pinos y muchos ctricos.
Principalmente encontramos en los aceites monoterpenos (C10), aunque tambin son
comunes los sesquiterpenos (C15) y los diterpenos (C20). Pueden ser alifticos, cclicos
o aromticos. 11,13
22 | P g i n a
En la tabla 5. Se muestran los grupos funcionales de cada categora
Hidrocarburos monoterpnicos
Alcoholes
23 | P g i n a
Tambin el genariol, del geranio de olor (Pelargonium spp), el citronelol de la rosa
(Rosa gallica), en borneol del romero, y el santalol del sndalo (Santalum lbum, F.
Santalacea).
Aldehdos
Fenoles
24 | P g i n a
teres fenlicos
Cetonas
teres
25 | P g i n a
steres
El aceite esencial de hierba luisa al igual que la planta, posee variadas propiedades, antes
ya mencionadas.
26 | P g i n a
paratyph, diferentes dermatofitos: Epidermophyton floceosum, Microsporum canis,
Trichophyton mentagrophytes y T. rubrum, inhibe el desarrollo de bacterias como la
Escherichia coli, Bacillus subtilis, y Staphylococcus aureus. Tambin se ha comprob que
el aceite esencial acta sobre el Aspergillum flavus, siendo ms potente que los fungicidas
sintticos.28
Cave mencionar que tambin posee propiedades potenciales como anticancergeno por
el contenido de mirceno (el cual acta junto con otros componentes del aceite, solo no).
27 | P g i n a
28 | P g i n a
29 | P g i n a
Duracin del Aceite Esencial
30 | P g i n a
Usos del aceite esencial de hierba luisa
Importancia econmica
El aceite esencial de hierba luisa posee un alto valor agregado. Una botella que contenga
10ml est alrededor de $ 6.00.32
31 | P g i n a
2.5. Procesos industriales aplicados a los aceites esenciales
Son procesos que, aplicados a los aceites esenciales y otros extractos vegetales
aromticos, sirven para separar y concentrar los componentes, para facilitar su
procesamiento industrial o simplemente para homogenizar la calidad.35
Mtodos de obtencin
Destilacin por arrastre de vapor. Las plantas se colocan sobre un fondo perforado o
criba ubicado e cierta distancia del fondo de un tanque llamado alambique. La parte
ms baja de esta contiene agua hasta una altura algo menor que el nivel de la criba. El
calentamiento se produce con vapor saturado que se provee de una fuente de calor
que se compone el equipo, fluye mojado y a presin baja, penetrando a travs del
material vegetal. Los componentes se volatilizan, y condensan en un refrigerante,
siendo recogidos en un vaso florentino, donde se separa el agua del aceite por
diferencia de densidad.
Expresin del pericarpio. Una bandeja con pinchos, en cuya parte inferior hay un canal
para recoger el aceite esencial. Se emplea para ctricos sobre todo.36
La seleccin del disolvente pretende que sea capaz de disolver rpidamente todos los
principios y la menor cantidad de materia inerte, que tenga un punto de ebullicin
bajo y uniforme que permita eliminarlo rpidamente, pero evitando prdidas por
evaporacin, qumicamente inerte, para no reaccionar con los componente de los
aceites, no inflamable y barato.
Este disolvente ideal no existe, y los mas empleados son el ter de petrleo, con punto
de ebullicin de 30 a 70 C, que se evapora fcilmente y es inflamable, benceno, que
disuelve tambin ceras y pigmentos, y alcohol, que es soluble en agua. Se emplea
32 | P g i n a
cuando hay componentes de peso molecular elevado que no son lo suficientemente
voltiles. 33
Rectificacin
Desterpenado
Descerado
Filtrado
Para eliminar las impurezas de los aceites esenciales crudos se filtran con ayuda de
tierras filtrantes u otros materiales que retienen el agua residual (sulfato de sodio
anhidro, carbonato de magnesio, etc.)23
33 | P g i n a
Reacciones qumica
Para obtener nuevos productos aromticos con mayor valor agregado, con notas ms
agradables, entre ellas se encuentran:
Decoloracin
Para esencias con colores fuertes.
Petchuli
Palo santo
Clavo
Lavado
Para mejorar el olor desagradable debido a la presencia de cidos y fenoles se lava con
soluciones de hidrxido de sodio al 1% o carbonato de sodio al 10%.
Estandarizacin
Industria alimentaria
34 | P g i n a
Industria farmacutica
Industria de cosmticos
Desodorantes industriales
Industria tabacalera
Biocidas e insecticidas
Existen esencias con propiedades bactericidas, como el tomillo, clavo, salvia, mentas,
organo, pino, etc. Otras son insecticidas:
35 | P g i n a
Contra colepteros: Tenacetum, comino, ajenjo y tomillo, etc.
Contra cucarachas: menta, ajenjo, eucalipto, laurel, etc.
Contra nematodos: tagetes, salvia, calndula, Asparagus, etc.33
36 | P g i n a
CAPITULO III
3. Metodologa
3.1. Tipo de investigacin
3.2 Muestra
Se trabaj con 11300 gramos de zacate de limn (Cymbopogon citratus (DC) staff).
3.3 Materiales
3.3.2 Microorganismos
37 | P g i n a
3..3.3 Materiales
3.3.4 Equipos
Equipos de destilacin
o Balon de 5L
o Manta de calentamiento
o Trampa Dean Strark con llave de tefln
o Refrigerante de bolas
o Mangueras
Picnometro
o Picnometro calibrado, con termometro
o Balanza anaitica
IR
o Equipos Shimadzu IR
o Celdas de cloruro de sodio
o Porta celdas
38 | P g i n a
3.4 Procedimiento experimental
39 | P g i n a
Grafico 4.1 Diagrama de flujo del proceso de extraccin de aceite esencial del zacate de limn
por HD
Pasar 1ml del tubo de ensayo con la muestra a cuatro cajas petri
Aadir en dos cajas 15 a 20ml del medio TSA.
Aadir en las otras dos cajas petri 15 a 20 ml del medio SAP
Agitar de forma que se permita una homogenizacin de la muestra con el medio de
cultivo
Dejar que el medio se solidifique a temperatura ambiente
Incubar las cajas de TSA en forma invertidas en una estufa de 2 a 4 das a una
temperatura de 32.5 +- 2.5 C.
Incubar las cajas de SAP en forma invertida por 5 a 7 das a una temperatura de 22.5
+- 2.5C.
Examinar las cajas petri cada 24hr y determinar si existe crecimiento
Si existe crecimiento calcular con la ecuacin 3.10
Si no existe desarrollo en ninguna de las cajas reportar como<10ufc/ml
40 | P g i n a
Grafico 4.14 Diagrama de flujo del proceso para determinar patgenos en el aceite
esencial
Grafico 4.15 Diagrama de flujos del proceso para determinar patgenos en el aceite
esencial
Colocar cada cepa ATCC liofilizada en tubos de ensayo que contiene caldo TSB.
o E.Coli ATCC 25922 (bacteria)
o S. Aureus ATCC 6538 (Bacteria)
o Candida albicans ATCC 10231 (levadura)
41 | P g i n a
o Aspergillus niger ATCC 16404 (hongo)
Incubar durante 24hrs, a temperatura de 35+- 2.5C las bacterias y la levadura.
Incubar durante 48 a 72 horas a temperatura de 20 +- 3.5C el hongo.
Sembrar las cepas ATCC en cajas petri que contienen los medios:
o TSA para E.coli, S. Aureus y
o SAP para C. Albicans, A. Niger.
Incubar en forma invertida las cajas durante 24hrs a temperatura de 35 +- 2.5C
para E.coli, S. Aureus y C. Albicans, A. Niger
Incubar en forma invertida las cajas de SAP con A. Niger, durante 48 a 72 horas a
temperatura de 20 +- 3.5C
Ver si existe crecimiento.
En cajas petri que contiene el medio TSA sembrar las cepas de E.coli, S. Y Aureus,
en el medio SAP sembrar C. Albicans, e incubar durante 24hrs a temperatura 35+-
2.5C.
En cajas petri que contienen el medio SAP, sembrar las cepas de A. niger, e incubar
durante 48 a 72 a temperatura 20+- 3.5C
Ver si existe crecimiento
42 | P g i n a
Sembrar de cada cepa ATCC en tubos de ensayo que contienen caldo TAT, e
incubar para bacterias y levaduras durante 24hrs a temperatura 35+-2.5C, la cepa
ATCC de hongos incubar pro 48 horas a temperatura de 20+-3.5C
Nuevamente sembrar en cajas petri que contienen el medio TSA las cepas de
E.coli, S. Y Aureus en SAP C. Albicans, incubar durante 24hrs a temperatura 35+-
2.5C, y en cajas petri que contiene el medio SAP sembrar las cepas de A. niger
incubar por 48hrs a 72 hrs a temperatura de 20+- 3.5C
Ver si existe crecimiento
Utilizar los tubos de TAT con los microorganismos listos del paso fase de
crecimiento
Colocar en tubos de ensayo que contienen TAT cada uno de los microorganismos a
trabajar hasta llegar a una escala Mc. Farland 0.5
43 | P g i n a
Realizar controles de cada tubo, y de cada caja.
Dividir cada caja petri en 4 mitades
En tubos de ensayo colocar 500l de TAT con cepas ATCC a escala de Mc. Farland
0.5 y 500l de aceite esencial.
Encender el cronometro
Sembrar con aza por estriado las cepas ATCC de bacterias con aceite esencial en
TSA a: imin, 2min, 5min, y 10min, e incubar durante 24hrs a temperaturas 32.5 +-
2.5C
Sembrar con aza por estriado las cepas ATCC de hongo y levadura con aceite
esencial en el medio SAP a: 1min, 2min, 5min y 10min, e incubar durante 24 horas
la levadura a 32.5 +- 2.5C y el hongo durante 48 a 72 hrs a 2.5+-2.5C
Realizar la correspondiente lectura
Si existe crecimiento reportar como positivo en el tiempo encontrado el desarrollo
del microorganismo
Grafico 4.18-a Diagrama de flujo para determinar la actividad del aceite esencial.
44 | P g i n a
Grafico 4.18-b Diagrama de flujo para determinar la actividad del aceite esencial
45 | P g i n a
CAPITULO IV
4. RESULTADOS
P= positivo
N=negativo
A cada muestra se realizaron las pruebas de patgenos. Se tienen como resultado que el
aceite de esencial no presenta patgenos.
46 | P g i n a
Prueba para determinar la actividad antimictica y antibacteriana de aceite esencial:
Tabla 10. Determinacin de la actividad antibacteriana del aceite esencial del zacate de
limn contra S.aureus
47 | P g i n a
Tabla 11. Determinacin de la actividad antimictica del aceite esencial del zacate de
limn contra C.albicans
Tabla 12. Determinacin de la actividad antimictica del aceite esencial del zacate de
limn contra A. niger
A cada muestra se les realizo las pruebas para determinar la actividad antibacteriana y
antimictica. Se tiene como resultado que el aceite esencial del zacate de limn es un
potente antimictico ya que inhibe el desarrollo de hongos y levaduras en un tiempo muy
corto. Tambin se demostr que posee actividad antibacteriana pero inhibe el desarrollo
de las bacterias en un tiempo ms largo.
48 | P g i n a
CAPITULO V
5. DISCUSIN RESULTADOS
Las bacterias Gram positivas fueron ms sensibles, similar a lo informado por Lemos
T,Hdez L y Almazora L. Sin embargo, algunos autores sealan lo contrario. Se conoce que
diferencias genticas entre algunas cepas de Cymbopogon ejercen una gran influencia en
la actividad antibacteriana del aceite esencial.26 Esta accin se atribuye al citral,
particularmente al geraniol (alfa citral) y al nerol (beta citral), incluso se plantea que el
mirceno, aunque solo no muestra tal actividad, como la parte del aceite, incrementa la
accin cuando se mezcla con los anteriores. 27, 28
Se puede concluir que la evaluacin del aceite esencial mostr el potencial antimicrobiano
de esta especie medicinal y posibilit desarrollar, a partir de una fuente natural
abundante, una crema con actividad farmacolgica definida. Como componente
mayoritario del aceite se registr el citral.
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CAPITULO VI
6. CONCLUSIN
- El aceite esencial del zacate limn obtenido mediante destilacin por arrastre de
vapor conservo todas sus caractersticas organolpticas durante cuatro meses,
almacenndolo a 4 C y con proteccin a la luz ultravioleta del sol.
- El aceite esencial del zacate limn presenta altas concentraciones del aldehdo
citral que junto con otras molculas con grupos funcionales en menores
proporciones: -pineno, linalol, trans crisanterma, lemonol, geranil acetato, le
dan la actividad antimicrobiana que posee el aceite esencial.
- El aceite esencial del zacate limn posee mayor actividad antimicrobiana, ya que
inhibi totalmente el crecimiento de la levadura C. albicans ATCC 10231 y del
hongo A. nigers ATCC 16404.
- El aceite esencial extrado de la planta del zacate limn mexicana posee una alta
actividad antimictica inhibiendo el crecimiento de la levadura C. albicans, a
diferencia de los datos obtenidos en la bibliografa del aceite esencial proveniente
de la planta zacate limn cubana que no inhibe el crecimiento de este
microorganismo.
- El porcentaje de rendimiento del aceite esencial del zacate limn vara entre los
meses de mayo (0.714%-1485%), debido a factores como condiciones climticas al
momento de la cosecha las cuales iban variando de templado-hmedo a clido-
hmedo, o viceversa, la cantidad de planta recolectada y el tiempo que transcurri
desde que la planta que cosechada hasta el momento de la destilacin. Siendo el
clima ms apto para cosechar la planta del zacate limn es el clido-hmedo (dato
obtenido de la bibliografa)
- Los datos obtenidos en el aceite esencial del zacate limn de: densidad relativa,
ndice de refraccin y pH concuerdan con los datos encontrados en la bibliografa.
- Las investigaciones del aceite esencial del zacate limn es muy importante para la
obtencin de productos 100% naturales como antimicrobiales.
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CAPITULO VII
7. RECOMENDACIONES
- Se debe destilar las hojas del zacate limn el mismo da que se las cosecho para
evitar disminucin en el rendimiento del aceite esencial
- Controlar la temperatura a la cual va a ser extrado el aceite esencial para evitar que
este pierda sus caractersticas organolpticas.
- No se aconseja el consumo (oral o cutneo) del aceite esencial puro, pues constituye
un producto de alta concentracin y puede ser perjudicial para la salud, debido a que
al estar tan concentrado puede producir quemaduras, manchas, entre otras molestias.
Razn por la cual se lo debe diluir en un aceite base.
- Para tener un estimado real del rendimiento de aceite esencial de la planta del
zacate limn, se debe realizar un estudio tomando en consideracin factores como la
fecha de cosecha (un mnimo de 6 cosechas variando de mes) cantidad de planta
recolectada, el clima, el cultivo, entre otros.
- Sera muy interesante continuar la investigacin del aceite del zacate limn y realizar
una comparacin de la actividad y rendimiento del aceite esencial de las tres regiones
del pas, haciendo un control de malezas, riego y abono para determinar los factores
temperatura y altura en la concentracin y actividad que estos pueden presentar.
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CAPITULO VIII
8. BIBLIOGRAFIA
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CAPITULO IX
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
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