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Normas
Sistema de calidad
Manejo sanitario
VIDA UTIL
Manejo sanitario
La Norma dice :
QU hay que hacer? (Requisito)
El laboratorio dice el
CMO? (cmo se implementa el requisito)
COMPETENCIA TECNICA
Equipamiento
MTODO
PERSONAL
Ambiente
Situacin del
laboratorio con Caso 1 Caso 2 Caso 3
respecto a:
Instalaciones y
condiciones Adecuados y Riesgo de Adecuados y
ambientales suficientes contaminacin suficientes
Equipos cruzada
Entrenamiento:
Actividad de ensear las habilidades que una persona
necesita para desarrollar su labor en un determinado
puesto de trabajo.
Tiene carcter eminentemente prctico .
Se relaciona directamente con la tecnologa, tiles,
equipos, etc. que se usan en el puesto de trabajo.
Formacin:
Actividades de incorporacin de conocimientos generales
y especficos necesarios para que el personal pueda
desarrollar su labor en un determinado puesto de trabajo.
Se hace referencia a la formacin acadmica del personal.
Requisitos:
Las instalaciones del laboratorio de ensayo
(incluye fuente de energa, luz y condiciones
ambientales) deben ser capaces de facilitar
la realizacin correcta de los ensayos.
No es aceptable que
el laboratorio de microbiologa
ocupe una sola sala polivalente.
Facilitar la limpieza:
Las paredes, techos suelos y superficies de trabajo del
laboratorio deben ser lisas.
Objetivo:
Organizar las tareas de limpieza y desinfeccin del laboratorio de
microbiologa.
Establecer la frecuencia de realizacin de las mismas
Se detallan las superficies a limpiar y/o desinfectar, el nivel de
limpieza requerido (trapeo hmedo, trapeo mojado, etc.), los
desinfectantes a preparar y su modo de uso.
El personal que realiza la limpieza.
Tipo de
Mtodo Recoleccin superficie Siembra
Caja de
contacto Contacto, presin y Incubacin
o Petrifilm tiempo estndar Plana directa
Normas de consulta: Mtodos para Control calidad de superficies: ISO 18593:2004 Microbiology
of food and animal feeding stuffs -- Horizontal methods for sampling techniques from surfaces
using contact plates and swabs
Equipamiento necesario
Limpieza y orden
Reglas de acceso
y utilizacin Plan de higiene
de las reas
LABORATORIO
Separacin de
reas donde Monitoreo ambiental
se realizan
actividades incompatibles
REQUISITO:
El laboratorio debe asegurarse que
la calidad de los medios de cultivo y reactivos
sea apropiada para los ensayos realizados.
Incubacin:
Depende del metabolismo del microorganismo a
cultivar.
La atmsfera empleada.(aerobio, microaeroflico,
anaerobio)
Tiempo.
Temperatura.
Bqca. Alicia Irene Cuesta 40
Clasificacin de medios de cultivo:
1.Segn su estado fsico: lquidos, semislidos y slidos.
En un medio de cultivo selectivo como por ejemplo Caldo Lauril sulfato (LST)
se evala el desarrollo de las cepas target y no target.
En este caso las cepas target que se usan son
E.coli ATCC 25922, C.freundii ATCC 43864
a)Pruebas cuantitativas
b) Pruebas semi-cuantitativas
c) Pruebas cualitativas
PR = Ns /No
donde
Ns: es el recuento total de colonias obtenido en el medio de
cultivo a probar (obtenido de uno o ms placas)
No: es el recuento total de colonias obtenido en el medio de
cultivo de referencia definido obtenido de uno o ms placas
que debe ser 100 ufc.
All figuran:
Los microorganismos
Tiempo y temperatura de incubacin
Criterios
Medio de referencia que debe usarse segn el medio a
evaluar.
PR debe ser mayor o igual a un valor lmite para que el
medio de cultivo sea conforme.
En general para que los medios no selectivos como el
PCA sea conforme, el PR debe ser a 0,7.
Requisitos:
PARA DEMOSTRAR
LA TRAZABLIDAD DEBEN OBTENERSE DIRECTAMENTE
DE UNA COLECCIN NACIONAL O INTERNACIONAL DE
CULTIVO DE REFERENCIA RECONOCIDO.
Son microorganismos definidos:
Por lo menos a nivel de gnero y especie.
catalogados.
muy caracterizados.
de origen conocido.
[ISO 11133-1:2000]
Se comercializan liofilizadas.
Identificacin de la cepa.
Gnero y especie del microorganismo
TIPO y N de coleccin.
REGISTRO DE N de lote.
CEPAS DE REFERENCIA: Fecha de recepcin.
Control de calidad de la cepa de
referencia Conforme (SI/NO).
Fecha de caducidad de la cepa.
Personal responsable.
CREF
REPIQUE UNICO
a)Tipo de cepa. Ejemplo las bacterias Gram positivas resisten mejor que las
Gram negativas.
Microorganismo Supervivencia en
meses
Enterobacter aerogenes 48
Pseudomona aeruginosa 18
Salmonella typhimurium 48
Staphylococcus aureus 48
Listeria monocytogenes 48
Listeria ivanovii 48
Rhodococcus equi 48
Bacillus cereus 24
Clostridium perfringes 48
Reconstitucin
Esquema de
Cultivada una sola vez cultivos de
referencia:
*
Obtencin de CEPAS DE RESERVA *Controles de
pureza y pruebas
bioqumicas de la
Conservacin por distintos mtodos cepa.
( liofilizacin y congelacin)
(especificar tiempo y condiciones de almacenamiento) Referencia:
* Gua ENAC-04
Descongelacin/reconstitucin
*
CEPAS DE TRABAJO
(especificar tiempo y condiciones de almacenamiento)
PROVEEDOR DE CEPA
REQUISITOS: EQUIPOS
El laboratorio debe estar provisto de todos los equipos
necesarios para la correcta ejecucin del ensayo.
Definicin: Conjunto
de operaciones que
PERMITEN ESTABLECER,
en condiciones especificadas,
LA RELACIN EXISTENTE ENTRE :
CALIBRACION
Elimina el error
CORRECCION Incertidumbre
Tx Tp
Bao de agua
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El bao se pone a Ti
Certificado de calibracin
de un termmetro
Ejemplo de resultados
Debe figurar:
Descripcin e identificacin del
instrumento que se calibr.
Fecha de calibracin.
Fecha de emisin del certificado de
calibracin nombre del cliente
Metodologa empleada para calibrar.
Rango de calibracin.
Resultados: correccin e incertidumbre
para cada temperatura.
VERIFICACIN
Asignar a la
tarea de medicin
Reparar/ ajustar
TOMO
DECISION Usarlo para otro equipo
Declararlo fuera de uso
Bqca. Alicia Irene Cuesta 92
REQUISITOS: EQUIPOS (cont)
Antes de poner en servicio un equipo se lo debe calibrar o
verificar con el fin de asegurar que responde a las exigencias
especificadas del laboratorio y est conforme a las
especificaciones normalizadas pertinentes.
El equipo debe ser verificado o calibrado antes de su uso.
El laboratorio debe documentar e implementar Programas
para calibracin y/o verificacin limpieza, mantenimiento y
esterilidad de los equipos cuando sea necesario. (Los que
tengan una influencia directa en los resultados de los ensayos).
REQUISITOS PROVEEDORES DE CALIBRACION DE
EQUIPOS:
La calibracin de los equipos debe ser llevada a cabo por
laboratorios de calibracin que demuestren su competencia y
su capacidad de medicin y trazabilidad (Laboratorio acreditado o
aceptado por el organismo de acreditacin).
Calibracin trazable o
Centrifuga verificacin con un Anualmente.
tacmetro independiente
Cronmetro Frente a la hora oficial Anualmente.
Contienen esporas
de gnero Bacillus.
Registro de control de
Se realiza un monitoreo temperatura:
continuo de las
temperaturas de las estufas,
heladeras, congeladores -Equipo.
usados para la realizacin -N de inventario.
del ensayo. -Instrumento:
Correccin e
La temperatura del bao incertidumbre del
termosttico se registra termmetro.
antes de su uso. -Rango de aceptacin.
-Tolerancia.
La recepcin
La proteccin, el almacenamiento.
La manipulacin
Requisitos:
MUY IMPORTANTE: El laboratorio debe tener un sistema
para la identificacin unvoca de las muestras a ensayar.
Tiempos lmites de
(1) Si no se puede procesar Tipos de Productos
almacenamiento (horas)
en ese tiempo, las muestras Tan rpido como sea
se pueden congelar por posible y
Estables
debajo -18 C. antes de su fecha de
Esto debe ser mencionado en vencimiento
el informe de ensayo. dentro de 24 horas de la
Fresco o refrigerados
recepcin la muestra (1)
Precaucin: En algunos Tan rpido como sea
productos el congelamiento Pasteurizados y posible y
produce un cambio de la productos similares antes de su fecha de
composicin de la flora. vencimiento
Tan rpido como sea
Unidades estables
posible y dentro de 48
daadas
horas
ENSAYOS CUANTITATIVOS
Control de la precisin: muestras naturales sin inocular y/o
muestras naturales inoculadas con materiales de referencia.
Control de recuperacin: muestras inoculadas con materiales de
referencia.
ENSAYOS CUALITATIVOS
El Control de la calidad interno debe incluir actividades que
garanticen un adecuado control del lmite de deteccin.
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Bqca. Alicia Irene Cuesta 111
Registro Ensayos de Aptitud Interlaboratorio
Ensayo: Ensayos cualitativos (Proficiency Testing) :
Matriz:
Fecha de Clasificacin
Proveedor del Identificacin Metodologa Resultado
anlisis obtenida
Ensayo de las usada por el obtenido Valor Firma del
de las Analista Satisfactorio
Interlaboratorio Muestras laboratorio por el asignado responsable
muestras /Insatisfactorio
laboratorio
Qu es validar un mtodo?
Por qu y para qu valido un mtodo?
Cmo valido un mtodo?
Cundo valido un mtodo?
Definiciones:
Validacin: Confirmacin, mediante el aporte de pruebas objetivas, de que
se han cumplidos los requisitos para el uso pretendido o una aplicacin
especfica.[ISO 9000: 2000]
LMITE DE DETECCIN
SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD
DESVIACIN POSITIVA Y DESVIACIN NEGATIVA
EFECTO MATRICIAL EXACTITUD RELATIVA
REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD
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Validacin
Mtodos de ensayo microbiolgicos
CUANTITATIVOS
ESPECIFICIDAD:
Definicin: Fraccin del nmero total de cultivos o colonias
NEGATIVOS que son correctamente asignados con el mtodo
utilizado. [ISO 13843:2000]
Especificidad %= NV/(DPc + NV) x100
Capacidad del mtodo de dar negativo cuando las muestras no tienen el
analito
Resultado del caso ejemplo: Especificidad %= 4/5x100= 80%
LMITE DE CUANTIFICACIN.
Definicin: Nmero mnimo de microorganismos dentro
de una variabilidad definida que puede determinarse en
las condiciones experimentales del mtodo evaluado.
Tengo en cuenta la incertidumbre del mtodo para valores
bajos.
(Aplicado a anlisis microbiolgicos cuantitativos)
A B C D
DISEO Y
METODO A VALIDAR EJECUCION DATOS
DE ENSAYOS
METODO VALIDADO
ANALISIS
COMPARACION ESTADISTICO
CON
REQUISITOS
DE USO Bqca. Alicia Irene Cuesta 136
PREVISTO
Definicin de mtodo alternativo:
Ensayos Interlaboratorios.
Interlaboratorios
RESULTADOS OBTENIDOS.
Establecer el rango de validacin (es la parte del
intervalo de concentracin de un mtodo de anlisis
que ha sido validado). Todo esto debe ser
documentado y archivado.
PROCEDIMIENTOS USADOS.