ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI POTENSIAL

PROBIOTIK PADA SALURAN PENCERNAAN

IKAN MAS (Cyprinus carpio)

Isolation and Identification Potential Probiotic Bacteria in Digestive

Tract of Goldfish (Cyprinus carpio)

Mikha Febryana Samosir(1), Dwi Suryanto(2), Desrita(2)

1)
Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Pertanian, Universitas
Sumatera Utara, (email : mikhapon@gmail.com)
2)
Staf Pengajar Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas
Pertanian, Universitas Sumatera Utara

ABSTRACT

Probiotics are beneficial microbes to improve microbial balance in the

digestive tract. The aims of this study was to isolate the potential probiotic
bacteria in Goldfish (Cyprinus carpio). This study was conducted from May to
October 2016 at the Fish Quarantine, Quality Control and Safety of Fishery Class
I Medan I, Kuala Namu Medan. The isolation and identification of bacteria was
carried out based on morphology and biochemistry tests. The result showed that
the potential probiotic bacteria in the digestive tract of C. carpio was Micrococcus
varians, Staphylococcus arlettae and Bacillus firmus.

Keywords : C. carpio, identification, isolation, probiotic.

PENDAHULUAN tingkat produksi pada usaha

Seiring dengan meningkatnya
jumlah penduduk yang diimbangi
dengan kesadaran pentingnya
kandungan protein yang terkandung
pada ikan, maka permintaan produk
akan perikanan semakin meningkat.
Salah satu produk perikanan air
tawar yang mempunyai permintaan
pasar yang luas adalah Ikan Mas
(Cyprinus carpio).
Dalam upaya memenuhi
permintaan pasar, maka perlu
dilakukan upaya budidaya secara
intensif, namun dalam budidaya
secara intensif sering dihadapkan
pada beberapa kendala seperti
terjadinya serangan bakteri patogen
terutama pada stadia larva yang
menimbulkan penurunan kualitas dan
pembenihan ikan, bahkan kematian
dan kegagalan panen dapat terjadi.
Hingga kini, metode yang
paling sering dilakukan dalam
penanggulangan penyakit patogenik
pada ikan adalah penggunaan bahan
kimia atau antibiotik. Metode ini
merupakan metode yang cukup
efektif untuk menghambat bahkan
membunuh mikroorganisme patogen,
akan tetapi metode ini sangat
beresiko karena beberapa bahan
kimia yang digunakan dapat
menimbulkan resistensi sehingga
dikategorikan tidak ramah
lingkungan dan residu antibiotik
dapat terakumulasi pada ikan yang
dapat membahayakan manusia yang
mengkonsumsinya.
 Salah satu alternatif
pemecahan untuk menanggulangi
permasalahan tersebut adalah
pengunaan bakteri probiotik sebagai
agen biokontrol pada perikanan.
Dasar pendekatan ini adalah
senyawa-senyawa racun yang
dihasilkan pada metabolisme bakteri
probiotik seperti asam laktat,
hidrogen peroksida, bakteriosin yang
bersifat antimikroba dan antibiotik
mampu menekan atau menghambat
pertumbuhan bakteri patogen melalui
produksi senyawa antimikroba,
memperbaiki keseimbangan mikroba
di dalam saluran pencernaan,
memberikan pengaruh positif
terhadap fisiologi dan kesehatan
inangnya, mestimulasi sistem imun
dan memperbaiki kualitas air
(Irianto, 2005).
Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui bakteri yang
berpotensi sebagai probiotik pada
saluran pencernaan Ikan Mas
(C. carpio).
2. Untuk mengetahui apakah bakteri
potensial probiotik yang berhasil
diidentifikasi bersifat antagonistik
terhadap bakteri uji patogen
Aeromonas hydrophila.
METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan
pada bulan Mei Oktober 2016,
Isolasi dan Identifikasi bakteri
dilakukan di Balai Karantina Ikan,
Pengendalian Mutu dan Keamanan
Hasil Perikanan (BKIPM) Kelas I
Medan I, Jalan Karantina Ikan,
Kualanamu Medan.
Alat yang digunakan pada
penelitian ini adalah inkubator,
laminar air flow, autoclave,
erlenmeyer, vortex stirrer,
aluminium foil, lampu bunsen,
2
cawan Petri, tabung reaksi, rak
tabung, jarum ose, pipet tetes,
mikroskop, cover glass, paper disk,
timbangan digital, mortal porselen,
kapas, gelas beaker, pisau, kamera
digital, sarung tangan, masker, kertas
label, dan alat tulis.
Bahan yang digunakan pada
penelitian ini yaitu Ikan Mas
(Cyprinus carpio), isolat bakteri
patogen Aeromonas hydrophila,
media Tryptone Soya Agar (TSA),
media de Mann Rose Agar (MRSA),
media Triple Sugar Iron Agar
(TSIA), media Lysine Iron Agar
(LIA), media Gelatin, media Urea,
kmedia Sulfid Indol Motility (SIM),
media Strach Agar, media Skim Milk
Agar (SMA), kertas Oxidase media
Methly Red, media Voges Proskaurt
(VP), media Simmons Citrate, media
gula-gulaan (glukosa, laktosa,
manitol, maltosa dan sukrosa), kertas
Oxidase Test Strip, reagen Kovac,
methyl red, kristal violet, iodine,
safranin, alkohol 95%, akuades,
hidrogen peroksida (H2O2) 3%,
alkohol, larutan fisiologis (NaCl 0,9
%) dan larutan Mc Farland.
Pelaksanaan Penelitian
Penelitian akan dilakukan
dengan isolasi lambung dan usus
Ikan Mas pada media MRSA,
kemudian dilakukan uji hidrolisis
kasein, hidrolisis pati dan uji
penghambatan bakteri uji patogen
Aeromonas hydrophila untuk
mendapatkan bakteri potensial
probiotik. Setelah itu dilakukan
identifikasi bakteri berdasarkan uji
pewarnaan Gram dan uji Biokimia.
Pengambilan Sampel
Ikan dibedah secara aseptis
untuk diambil organ pencernaannya
yaitu lambung dan usus, kemudian
dimasukkan kedalam larutan
fisiologis (NaCl 0.9%). Selanjutnya,
lambung dan usus dihancurkan atau
dihaluskan dengan menggunakan
mortar porselen. Sampel yang telah
dihaluskan, kemudian dilakukan
pengenceran berseri 10-1 sampai 10-5.
Metode seri pengenceran
yang dilakukan yaitu dengan
mengambil sebanyak 1 ml sampel,
dimasukkan ke dalam tabung reaksi
yang berisi 9 ml akuades steril lalu
dihomogenisasi menggunakan vortex
stirrer selama 2-4 menit sehingga
didapat pengenceran 10-1, untuk
mendapatkan pengenceran 10-2
dilakukan dengan mengambil 1 ml
dari pengenceran 10-1 dimasukkan ke
dalam tabung reaksi yang berisi 9 ml
akuades steril, demikian seterusnya
dilakukan seri pengenceran hingga
10-5. Pengenceran 10-5 diambil 1 ml
kemudian dimasukkan ke dalam
cawan Petri yang telah berisi
medium MRSA dengan
menggunakan metode cawan sebar
(spread plate), kemudian diinkubasi
pada suhu 35C selama 24 jam.
Setelah inkubasi selama 24
jam, koloni dengan penampakan
morfologi yang berbeda dari warna,
bentuk, tepian, dan elevasi pada
medium MRSA kemudian diambil
dan dimurnikan (diisolasi) pada
media baru MRSA dengan
menggunakan metode cawan gores
dengan beberapa tahap sampai
didapatkan koloni bakteri tunggal
sebagai isolat murni, kultur
diinkubasi pada suhu 35C selama 24
jam. Selanjutnya, dilakukan seleksi
sebagai kandidat probiotik dengan
melakukan serangkaian uji hidrolisis
pati (amilum) dan uji hidrolisis
kasein (protein) serta melakukan uji
penghambatan bakteri potensial
probiotik terhadap bakteri patogen
Aeromonas hydrophila.
3
Uji Hidrolisis Pati (Amilum)
Suspensi bakteri hasil biakan
murni diambil satu ose dan
digoreskan pada cawan yang berisi
media Strach Agar, dan diinkubasi
pada suhu 35C selama 24 jam.
Setelah inkubasi, dilakukan uji
iodine dengan cara meneteskan
iodine pada permukaan agar yang
berisi isolat. Uji hidrolisis pati positif
ditandai dengan adanya zona kuning
bening di sekeliling isolat.
Uji Hidrolisis Kasein (Protein)
Suspensi bakteri hasil biakan
murni diambil satu ose dan
digoreskan pada cawan yang berisi
media Skim Milk Agar (SMA), dan
diinkubasi pada suhu 35C selama 24
jam. Uji hidrolisis protein positif
ditandai dengan adanya zona bening
di sekeliling koloni (Fardiaz, 1992).
Uji Penghambatan Bakteri Uji
Patogen
Metode yang digunakan
adalah metode cawan sebar (spread
plate). Bakteri uji patogen dan
bakteri potensial probiotik
disuspensikan hingga kekeruhannya
sama dengan larutan suspensi Mc
Farland yaitu 108 CFU/ml. Bakteri
uji patogen diisolasi kedalam cawan
petri yang berisi media TSA dengan
teknik cawan sebar (spread plate),
kemudian paper disk yang telah
direndam ke dalam kultur cair isolat
bakteri potensial probiotik ditanam
dengan cara ditekan ke atas media
TSA. Selanjutnya inkubasi pada suhu
35C selama 24 jam. Setelah
inkubasi diamati adanya zona bening
pada media.
Identifikasi Spesies Bakteri
Potensial Probiotik
Karakterisasi Morfologi Isolat
Isolat bakteri murni
diidentifikasi morfologi selnya
dengan menggunakan uji pewarnaan
gram dan pengamatan bentuk bakteri
secara mikroskopik. Pewarnaan gram
dilakukan dengan membersihkan
kaca objek dengan alkohol dan
disterilkan pada nyala api bunsen,
kemudian diambil isolat bakteri
dengan jarum ose dan dioleskan pada
object glass. Isolat bakteri kemudian
ditetesi kristal violet dan dibiarkan
selama 1 menit, selanjutnya dicuci
dengan air mengalir dan dianginkan
hingga kering. Isolat bakteri
kemudian ditetesi kembali dengan
larutan iodine dan dibiarkan selama 1
menit, kemudian dicuci dengan air
mengalir dan dianginkan hingga
kering. Selanjutnya isolat bakteri
ditetesi alkohol 95% selama 30 detik,
kemudian dialiri air dan dianginkan
hingga kering. Isolat bakteri
kemudian ditetesi safranin selama 30
detik dan dicuci dengan air mengalir
dan dikering anginkan, kemudian
dilakukan pengamatan dengan
menggunakan mikroskop. Bakteri
gram positif ditandai dengan warna
ungu sedangkan bakteri gram negatif
ditandai dengan warna merah muda
Bakteri yang tumbuh kemudian
diamati bentuk selnya secara
mikroskopik pada kaca preparat
sehingga dapat diketahui bentuknya
(kokus, batang atau spiral).
Identifikasi Berdasarkan Uji
Biokimia
Uji Motilitas
Sebanyak satu ose isolat
bakteri ditusukkan ke medium uji
SIM dan diinkubasi selama 24 jam
pada suhu 29C.
4
Uji positif ditandai dengan
pertumbuhan bakteri yang menyebar,
maka bakteri tersebut bergerak
(motil) dan bila pertumbuhan bakteri
tidak menyebar, maka bakteri
tersebut tidak bergerak (non motil)
(Sudarsono, 2008).
Uji Katalase
Sebanyak 2 tetes H2O2 3%
diletakkan pada object glass steril.
Isolat bakteri diambil menggunakan
jarum ose steril, kemudian
dipindahkan ke atas kaca objek dan
dicampurkan.
Uji positif ditandai dengan
terbentuknya gelembung-gelembung
oksigen dan uji negatif ditandai
dengan tidak adanya perubahan atau
gelembung-gelembung oksigen pada
isolat bakteri (Hadioetomo, 1993).
Uji Oksidase
Sebanyak satu ose isolat
bakteri digoreskan pada kertas
Oxidase Test Strip. Tunggu selama 1
menit, lalu amati hasilnya.
Uji positif ditandai dengan
perubahan warna menjadi biru violet
dan uji negatif ditandai dengan tidak
adanya perubah warna pada kertas
oxidase test strip.
Uji TSIA
Sebanyak satu ose isolat
bakteri diinokulasi ke dalam media
TSIA dengan cara menusuk tegak
lurus pada bagian butt (tusuk) dan
cara zig zag pada bagian slant
(miring) dan diinkubasi selama 24
jam pada suhu 29C.
Perubahan warna kemudian
diamati, apabila bagian slant
berwarna merah dan butt berwarna
kuning maka bakteri mampu
memfermentasi glukosa, sedangkan
apabila bagian slant dan butt
keduanya berwarna kuning maka
bakteri mampu memfermentasi
sukrosa dan laktosa (Yusuf, 2009).
Uji Gelatin
Sebanyak satu ose isolat
bakteri diinokulasikan pada media
cair Gelatin dan diinkubasi selama
24 jam pada suhu 29C.
Uji positif ditandai dengan
media cair tetap mencair apabila
telah diletakkan di dalam lemari es
selama beberapa menit dan uji
negatif ditandai dengan membekunya
media gelatin jika diletakkan di
dalam lemari es.
Uji Urea
Sebanyak satu ose isolat
bakteri diinokulasi secara zig-zag
pada permukaan agar miring media
Urea dan diinkubasi selama 24 jam
pada suhu 29C.
Uji positif ditandai dengan
berubahnya warna medium menjadi
biru dan uji negatif ditandai dengan
tidak terjadinya perubahan warna
pada media (Sudarsono, 2008).
Uji Citrat
Sebanyak satu ose isolat
bakteri diinokulasi secara zig-zag
pada permukaan agar miring media
Simmons Citrate dan diinkubasi
selama 24 jam pada suhu 29C.
Uji positif ditandai dengan
berubahnya warna medium menjadi
biru dan uji negatif ditandai dengan
tidak terjadinya perubahan warna
pada media (Sudarsono, 2008).
Uji MR
Sebanyak satu ose isolat
bakteri diinokulasi ke dalam media
MR-VP dan diinkubasi selama 24
jam pada suhu 29C. Setelah
inkubasi selama 24 jam, media
ditambahkan 3-4 tetes indikator metil
red.
5
Uji positif ditandai dengan
perubahan warna medium menjadi
merah, artinya terbentuk asam dan
uji negatif ditandai dengan tidak
adanya perubahan warna pada media
(Hadioetomo, 1993).
Uji LIA
Sebanyak satu ose isolat
bakteri diinokulasi secara tusuk lalu
zig-zag pada permukaan agar miring
media LIA dan diinkubasi selama 24
jam pada suhu 29C.
Uji positif ditandai dengan
berubahnya warna medium menjadi
ungu dan uji negatif ditandai dengan
tidak terjadinya perubahan warna
pada media (Sudarsono, 2008).
Uji Gula-Gulaan
Sebanyak satu ose isolat
bakteri diinokulasikan ke dalam
tabung-tabung reaksi yang berisi
medium fermentasi glukosa,
arabinosa, sorbitol, manitol, inositol
dan sukrosa, dan diinkubasi selama
24 jam pada suhu 29C.
Uji positif ditandai dengan
berubahnya warna medium menjadi
kuning dan apabila dalam tabung
terdapat gelembung, berarti
fermentasi tersebut menghasilkan gas
(CO2).
Analisis Data
Data yang telah diperoleh
dianalisis secara deskriptif dengan
mendeskripsikan secara sistematis
dan akurat secara ilmiah. Hasil uji
terhadap isolat-isolat yang diperoleh,
dilakukan upaya identifikasi bakteri
berdasarkan karakter biokimia sesuai
dengan tabel biokimia dengan
berpedoman pada buku Bergeys
Manual of Determinative
Bacteriology 8th Edition.
Hasil dan Pembahasan
Hasil
Bakteri Potensial Probiotik Pada
Lambung dan Usus Ikan Mas
Dari penelitian yang telah
dilakukan, diperoleh hasil bahwa
jumlah isolat bakteri potensial
probiotik dari isolasi lambung dan
usus Ikan Mas (Cyprinus carpio)
ditemukan sebanyak 4 isolat bakteri,
yaitu terdapat 2 isolat bakteri dari
hasil isolasi pada lambung dan 2
isolat bakteri dari hasil isolasi pada
usus. Hasil tersebut diperoleh setelah
dilakukan uji untuk menyeleksi
seluruh isolat yang ditemukan dari
lambung dan usus Ikan Mas
(C. carpio) sehingga diperoleh isolat
bakteri yang memang merupakan
potensial probiotik yaitu sebanyak 4
isolat murni.
Tabel 1. Morfologi Koloni Isolat Bakteri Potensial Probiotik Pada Ikan Mas
Kode Koloni
Isolat Tepian Elevasi
LIM-01 Licin Cembung Putih Kekuningan
LIM-02 Licin Cembung Putih Kekuningan
UIM-01 Licin Cembung
UIM-02 Licin Cembung
Pengamatan morfologi pada
sel isolat bakteri potensial probiotik
yang diperoleh dari Ikan Mas perlu
dilakukan dengan pewarnaan Gram
dan uji Biokimia untuk
mengidentifikasi bakteri potensial
probiotik pada Ikan Mas. Pewarnaan
gram dilakukan secara mikroskopik
dengan pembesaran 100x didapat
hasil pewarnaan Gram dari ke-4
Morfologi Koloni dan Sel Bakteri
Potensial Probiotik Pada Ikan Mas
Isolat-isolat bakteri potensial
probiotik yang ditemukan dari hasil
isolasi lambung dan usus Ikan Mas
(C. carpio) dapat dilihat dari
morfologi koloni meliputi tepian,
elevasi dan warna koloni. Adapun
ciri-ciri morfologi dari keempat
koloni yang berhasil diperoleh dapat
dilihat pada Tabel 1. Berdasarkan
Tabel 1 dapat dijelaskan bahwa ke-4
jenis bakteri memiliki kemiripan
pada tepian dan elevasi, yaitu bertepi
licin dan berelevasi cembung,
sedangkan pada warna dan bentuk
memiliki perbedaan yaitu ke-2 isolat
bakteri memiliki warna putih
kekuningan dan 2 isolat lainnya
memiliki warna putih.
Morfologi Sel
Warna Gram Bentuk
+ Kokus
+ Kokus
Putih + Kokus
Putih + Basil
isolat bakteri yaitu berwarna ungu
yang merupakan Gram positif karena
mampu mengikat kristal violet. 1 dari
3 isolat bakteri tersebut berbentuk
basil atau batang, sedangkan yang
lainnya berbentuk kokus atau bulat.
Hasil pewarnaan gram dari isolat
bakteri potensial probiotik dapat
dilihat pada Gambar 2.
6
 Gambar 2. Bentuk Sel dari Isolat (a) UIM-01 (b) UIM-02
Karakterisasi dan Identifikasi dapat dilihat pada Tabel 2. Hasil uji
Bakteri Potensial Probiotik Pada Biokimia dari ke-4 bakteri yang
Ikan Mas diperoleh diidentifikasi menurut
Hasil pengamatan morfologi buku Bergeys Manual of
sel baik pewarnaan Gram dan uji Determinative Bacteriology 8th
biokimia dari ke-4 isolat bakteri Edition oleh Holt dkk., (1994).
Tabel 2. Karakterisasi Isolat Bakteri Probiotik Potensial Pada Ikan Mas

Karaterisasi Isolasi Bakteri

Bakteri LIM-01 LIM-02 UIM-01 UIM-02
Motilitas - - - -
Katalase + + + +
Oksidase + + - -
TSIA A/A A/A K/K K/K
Gelatin - - - -
Urea - - - -
Citrat - - - -
MR + + + +
LIA - - - -
Glukosa + + + +
Arabinosa - - - -
Sorbitol - - - -
Manitol + + + +
Inositol + + + +
Sukrosa - - + +
Spesies Micrococcus Micrococcus Staphylococcus
Bacillus firmus
Bakteri varians varians arlettae
Hasil karakterisasi dan identifikasi Identifikasi bakteri dilakukan
ke-4 isolat bakteri isolat dengan kode dengan teknik konvensional yaitu
LIM-01 dan LIM-02 merupakan dengan membandingkan bakteri yang
Micrococcus varians, isolat dengan sedang diidentifikasi dengan bakteri
kode UIM-01 merupakan yang telah teridentifikasi
Staphylococcus arlattae dan isolat sebelumnya. Bila tidak terdapat
dengan kode UIM-02 merupakan bakteri yang ciri-cirinya 100%
Bacillus firmus. mempunyai kemiripan ciri-ciri, maka
dilakukan pendekatan terhadap

7
bakteri yang memiliki ciri-ciri yang
paling menyerupai. Oleh karena itu
teknik identifikasi dengan metode
konvensional akan selalu
menghasilkan suatu bakteri tertentu
yang sudah teridentifikasi
sebelumnya dan tidak akan dapat
menemukan spesies baru (Bergey,
1994).
Hidrolisis Pati (Amilum) dan
Kasein (Protein) Pada Isolat
Bakteri
Uji hidrolisis pati (amilum)
dan kasein (protein) terhadap isolat
bakteri dilakukan untuk mengetahui
Tabel 3. Kemampuan Isolat Kandidat Probiotik Menghidrolisis Pati dan Kasein
kemampuan bakteri dalam
menguraikan enzim amilase dan
protease yang merupakan tahap awal
dalam seleksi seluruh isolat bakteri
untuk mendapatkan kandidat bakteri
yang berpotensi probiotik pada Ikan
Mas. Uji hidrolisis dilakukan dengan
menggoreskan masing-masing koloni
bakteri pada media uji pati (amilum)
dan kasein (protein) kemudian
ditandai dengan terbentuknya zona
bening. Kemampuan isolat-isolat
bakteri dalam menghidrolisis pati
(amilum) dan kasein (protein) dapat
dilihat pada Tabel 3.

Hidrolisis
Kode Isolat
Kasein Pati
LIM-01 + -
LIM-02 + -
UIM-01 + -
UIM-02 + -

Gambar 3. Hidrolisis Kasein (a) UIM-01 (b) UIM-02

Indikasi Penghambatan Bakteri bertujuan untuk memastikan bahwa
Aeromonas hydrophila ke-4 isolat bakteri tersebut
Isolat-isolat bakteri yang merupakan isolat bakteri yang
mampu menghidrolisis pati (amilum) berpotensi probiotik pada Ikan Mas
dan kasein (protein) selanjutnya diuji (C. carpio). Indikasi penghambatan
tantang dengan bakteri Aeromonas isolat bakteri potensial probiotik
hydrophila untuk mengetahui adanya terhadap bakteri patogen A.
indikasi penghambatan terhadap hydrophila dapat dilihat pada
bakteri A. hydrophila. Uji tersebut Gambar 4.

8
 a b
c d
Gambar 4. Indikasi Penghambatan bakteri A.hydrophila (a) M. varians
(b) M. varians (c) S. arlattae (d) B. firmus
Indikasi penghambatan pada bakteri
patogen A. hydrophilla menunjukkan
bahwa empat isolat dari hasil isolasi
saluran pencernaan Ikan Mas
menghasilkan zona bening di sekitar
paperdisk yang menunjukkan bahwa
isolat bakteri yang berpotensi sebagai
probiotik tersebut mampu
menghambat pertumbuhan bakteri uji
patogen A. hydropilla.
Besarnya daerah zona bening
di sekitar paper disk yang dihasilkan
tiap-tiap isolat berbeda-beda
berdasarkan tingkat daya hambat
bakteri terhadap bakteri uji.
Berdasarkan Gambar 4, nilai indikasi
hambatan untuk bakteri M. varians
sebesar 2 mm, bakteri S. arlattae
sebesar 2 mm dan bakteri B. firmus
sebesar 3 mm.
9
Pembahasan
Bakteri Potensial Probiotik Pada
Lambung dan Usus Ikan Mas
Dari hasil isolasi yang
dilakukan pada lambung dan usus
Ikan Mas didapatkan isolat murni
sebanyak 4 isolat. Lambung dan usus
tersusun oleh mikroba yang bersifat
memberikan dampak bagi
peningkatan keseimbangan mikroba
dan mampu menghancurkan bakteri
patogen pengganggu sistem
pencernaan. Hal ini sesuai dengan
Lestari (2012) yang menyatakan
bahwa jenis bakteri yang dominan
dalam saluran pencernaan dapat
mempengaruhi pertumbuhan dan
perkembangan ikan sehingga dapat
meningkatkan kualitas ikan. Bakteri
yang terdapat di dalam saluran
pencernaan ikan menghasilkan enzim
yang mampu digunakan dalam
mendegradasi nutrisi dalam pakan.
Beberapa mikroflora dalam saluran
pencernaan dapat melindungi usus
dari serangan bakteri patogen dan
merangsang pembentukan imunitas.
Morfologi Koloni dan Sel Bakteri
Potensial Probiotik Pada Ikan
Gurami
Berdasarkan hasil
pengamatan koloni dari ke-4 isolat
bakteri potensial probiotik pada tabel
2 diketahui, bahwa morfologi pada
ke-4 isolat bakteri memiliki
kemiripan pada tepian dan elevasi,
dimana ke-4 isolat bakteri tersebut
memiliki tepian licin, dan elevasi
cembung sedangkan pada memiliki
sedikit perbedaan dimana pada isolat
pada lambung bewarna putih
kekuningan dan isolat pada usus
berwarna putih.
Hasil pengamatan morfologi
sel dari ke-4 isolat bakteri melalui
pewarnaan Gram menunjukkan
bahwa 3 isolat bakteri tersebut
memiliki bentuk sel kokus dan 1
isolat bakteri berbentuk basil.
Masing-masing bakteri merupakan
Gram positif yang mampu
mempertahankan kristal violet pada
pewarnaan Gram (Gambar 3).
Bakteri Gram positif merupakan
bakteri yang memiliki dinding sel
yang tebal dan membran sel selapis
sehingga pada saat bakteri
mengalami dehidrasi dengan
pemberian alkohol 96% pori-porinya
akan mengkerut yang menyebabkan
warna utama (kristal violet) tidak
bisa keluar.
10
Karakterisasi dan Identifikasi
Bakteri Potensial Probiotik Pada
Ikan Mas
Hasil uji biokimia pada kode
LIM-01 dan LIM-02 menunjukkan
hasil yang sama yaitu negatif untuk
uji gelatin, urea, citrat, LIA,
arabinosa, sorbitol dan sukrosa dan
positif untuk uji katalase, oksidase,
MR, manitol, dan inositol serta TSIA
bernilai acid. Dari hasil tersebut
selanjutnya dilakukan penentuan
spesies berdasarkan buku Bergeys
Manual of Determinative
Bacteriology 8th Edition yang
menyimpulkan bahwa bakteri
tersebut merupakan Micrococcus
varians. Hal ini sesuai dengan Holt
dkk., (1994) yang menyatakan bahwa
bakteri Micrococcus sp. memiliki
ciri-ciri yaitu koloni berwarna putih
dan berbentuk bulat dengan tepian
timbul. Sel berdiameter 0,5-2,0 m
dalam bentuk sepasang, empat
pasang, atau kelompok tidak tetap,
tidak membentuk rantai, Gram
positif, tidak motil, metil red positif,
katalase positif dan oksidase positif,
suhu optimum pertumbuhan pada 30-
37C dan tumbuh baik pada NaCl 1-
7%.
Hasil uji biokimia pada isolat
lainnya yaitu dengan kode UIM-01
ditemukan sedikit perbedaan hasil
pada uji biokimia kode LIM-01 dan
LIM-02 yaitu pada hasil uji oksidase
dan sukrosa yang bernilai positif, dan
TSIA yang bernilai alkali. Adapun
hasil uji biokimia pada kode isolat
UIM-01 yaitu positif untuk katalase,
MR, glukosa, manitol, inositol, dan
sukrosa, negatif untuk motilitas,
oksidase, gelatin, urea, citrat, LIA,
arabinosa dan sorbitol serta TSIA
yang bernilai alkali. Dari hasil
tersebut menyatakan bahwa isolat
tersebut merupakan Staphylococcus
arlettae. Hal ini sesuai dengan
Feliatra dkk., (2004) yang
menyatakan bahwa bakteri
Staphylococcus sp. merupakan
bakteri yang memiliki koloni
berwarna putih susu atau agak krem,
berbentuk bulat, tepian timbul, sel
bentuk bola, diameter 0,5-1,5 m,
berpasangan, dan dalam kelompok
tidak teratur, Gram positif, katalase
positif, oksidase negatif, metil red
positif, tumbuh optimum pada suhu
30-37C dan tumbuh baik pada NaCl
1-7%
Hasil uji biokimia pada kode
isolat UIM-02 memiliki hasil yang
sama pada kode isolat UIM-01
kecuali morfologi bentuk isolat yang
merupakan basil (batang). Adapun
hasil uji biokimia pada kode isolat
UIM-02 yaitu positif untuk katalase,
MR, glukosa, manitol, inositol, dan
sukrosa, negatif untuk motilitas,
oksidase, gelatin, urea, citrat, LIA,
arabinosa dan sorbitol serta TSIA
yang bernilai alkali. Dari hasil
tersebut dan dilakukan
pengidentifikasian spesies
berdasarkan buku Bergeys Manual
of Determinative Bacteriology 8th
Edition maka disimpulkan bahwa
bakteri tersebut merupakan Bacillus
firmus. Hal ini sesuai dengan Holt
dkk., (1994) yang menyatakan bahwa
bakteri Bacillus sp. memiliki ciri-ciri
yaitu koloni berwarna putih
kekuningan, motil dengan flagel
peritrik, endospora oval, kadang-
kadang bundar atau silinder dan
sangat resisten pada kondisi yang
tidak menguntungkan, Gram positif,
katalase positif, indol negatif dan
mampu memfermentasi glukosa dan
sukrosa. Tersebar luas pada
bermacam-macam habitat dan sedikit
spesies yang patogen. Suhu tumbuh
optimum pada 28C-35C.
Bacillus firmus merupakan
bakteri potensial probiotik yang
11
berhasil diisolasi dari usus Ikan Mas.
Bakteri B. firmus dapat dikatakan
sebagai probiotik karena bakteri ini
mampu hidup dan bertahan serta
berkembang biak di dalam saluran
pencernaan ikan dan dapat hidup dan
berkembang di dalam air wadah
pemeliharaan ikan. Hal ini sesuai
dengan Irianto (2005) yang
menyatakan bahwa probiotik B.
firmus merupakan bakteri fakultatif
aerob yang menyukai kondisi
lingkungan yang cukup oksigen
sehingga pertumbuhannya menjadi
lebih baik. Probiotik B. firmus
merupakan bakteri pelarut fosfat dan
dapat menghasilkan fitohormon
sehingga bakteri ini mampu
memanfaatkan pakan dan
menguraikannya menjadi bentuk
yang lebih sederhana, kemampuan
inilah sering dimanfaatkan untuk
penguraian substrat polimer organik,
memperbaiki kualitas air, mengurai
jumlah bakteri patogen melalui
penyeimbang populasi
mikrorganisme serta meningkatkan
kesehatan dan pertumbuhan ikan.
Hidrolisis Pati (Amilum) dan
Kasein (Protein) Pada Isolat
Bakteri
Uji hidrolisis protein
dilakukan untuk mengetahui
kemampuan bakteri dalam
menguraikan enzim protease. Uji ini
ditandai dengan terbentuknya zona
bening disekeliling bakteri yang
ditanam pada media Skim Milk Agar
yang mengandung kasein yang dapat
dipecah oleh mikroorganisme
proteolitik.
Uji hidrolisis pati (amilum)
dilakukan untuk mengetahui
kemampuan bakteri dalam
menguraika karbohidrat. Hidrolisis
dari pati dapat terjadi dengan
bantuan enzim amilase yang akan
mengubah amilum menjadi maltosa. populasi mikroba pada media
Uji hidrolisis pati ditandai dengan budidaya tidak dapat menyebabkan
terbentuknya zona bening setelah sakit bagi ikan. Penelitian yang
diteteskan iodine pada isolat bakteri. dilakukan oleh Osman dkk., (2010)
Hal ini terjadi karena molekul pati tentang penggunaan spesies
merupakan molekul yang larut dalam Micrococcus sp. sebagai antibakteri
air dan memberikan warna biru dan imunostimulan terhadap Ikan
apabila tercampur dengan larutan Nila (Oreochromis niloticus),
iodin dan akan membentuk zona menyatakan bahwa bakteri
bening apabila menghidrolisis pati. Micrococcus sp. merupakan bakteri
Dari hasil penelitian yang memiliki efek antagonis pada
diperoleh bahwa isolat bakteri bakteri patogen A. hydrophila secara
potensial probiotik yang diperoleh in vitro serta mendukung tingkat
berasal dari genus Bacillus, kelangsungan hidup ikan nila pada
Micrococcus dan Staphylococcus. uji in vivo.
melalui uji yang telah dilakukan. Staphylococcus arlettae
Isolat probiotik menghasilkan zona merupakan bakteri potensial
bening pada uji hidrolisis protein probiotik yang berhasil diisolasi pada
yang artinya isolat bakteri tersebut usus Ikan Mas (C. carpio). Pada uji
memiliki kemampuan dalam indikasi penghambatan terhadap
menguraikan protein di dalam bakteri patogen Aeromonas
saluran pencernaan. Hal ini sesuai hydrophilla, bakteri ini mampu
dengan Fardiaz (1992) yang menghambat pertumbuhan bakteri
menyatakan bahwa bakteri Bacillus patogen dengan terbentuknya zona
firmus merupakan bakteri potensial bening disekitar paper disk sebesar 2
probiotik yang mempunyai sifat mm. Bakteri S. arlettae belum dapat
fisiologis menarik karena dikatakan bakteri potensial probiotik
mempunyai kemampuan dalam karena menurut Austin (1999)
mendegradasi senyawa organik bakteri ini merupakan bakteri yang
seperti protein, selulosa, hidrokarbon bersifat patogen pada manusia dan
dan agar, serta mampu menghasilkan hewan. Akan tetapi pada penelitan
antibiotik. yang dilakukan Syabani dkk., (2015)
tentang frekuensi penambahan
Indikasi Penghambatan Bakteri bakteri Staphylococcus sp. pada
Aeromonas hydrophila media pemeliharaan benih Ikan Lele
Micrococcus varians Dumbo mampu menghasilkan
merupakan bakteri potensial kelangsungan hidup 93,33 % lebih
probiotik pada Ikan Mas baik dibandingkan dengan media
(C. carpio) karena mampu pemeliharaan yang tidak diberikan
menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus sp.
Aeromonas hydrophila yang Sebagaimana disebutkan oleh Gomes
merupakan bakteri patogen yang dkk., (2000) yang menyatakan bahwa
sering menyerang ikan dengan nilai bakteri probiotik tidak semestinya
indikasi penghambatan yaitu 2 mm. disebut sebagai agensia pengendali
Keberhasilan probiotik M. varians biologis karena probiotik tidak harus
dalam mengatasi dan mencegah menyerang agensia patogen tetapi
serangan A. hydrophila disebabkan dapat pula dalam perbaikan air. Oleh
oleh kemampuan menyeimbangkan sebab itu isolat bakteri S. arlettae

12
perlu penanganan selanjutnya bila probiotik pada media air ikan dan
dijadikan probiotik baik skala pembaharuan menjadi pakan ikan.
labortaorium dan lapangan.
Bacillus firmus merupakan DAFTAR PUSTAKA
bakteri potensial probiotik yang Austin, D. 1999. Pengaruh
berhasil ditemukan pada usus Ikan Perbedaan Dosis Aplikasi
Mas (C. carpio) karena menunjukkan Probiotik Terhadap Respon
adanya zona bening pada uji Imun Non Spesifik Ikan Mas
penghambatan pertumbuhan bakteri (Cyprinus carpio) dengan Uji
patogen Aeromonas hydrophila Tantang Bakteri Aeromonas
dengan nilai indikasi penghambatan salmonicida. Universitas
yaitu 3 mm. Hal ini sesuai dengan Lampung. Lampung.
penelitian yang dilakukan oleh
Harjuno dkk., (2016) tentang studi B. Fardiaz, D. 1992. Mikrobiologi
firmus dalam menghadapi A. Pangan I. Gramedia. Jakarta.
hydrophila pada media budidaya
Gomez, G. B., A. Roque and J. F.
menyatakan bahwa daya uji zona
Turnbull. 2000. The Use and
hambat pada bakteri B. firmus
Selection of Probiotic
terbukti mampu untuk menghambat
Bacteria for Use in the
pertumbuhan A. hydrophila secara in
Culture of Larval Aquatic
vitro dengan jarak 3 mm.
Organisme. Journal
Aquaculture 191: 259-270.
Kesimpulan dan Saran
Kesimpulan Hadioetomo, R. S. 1993.
1. Bakteri potensial probiotik yang Mikrobiologi Dasar dalam
didapatkan pada saluran
Praktek Teknilk dan Prosedur
pencernaan Ikan Mas (Cyprinus
carpio) yaitu Micrococcus Dasar Laboratorium. Penerbit
varians, Staphylococcus arlettae Gramedia. Jakarta.
dan Bacillus firmus.
2. Isolat bakteri potensial yang Harjuno, I. P., Z. Sucitra dan A. M.
berhasil diidentifikasi Lusisastuti. 2016. Pengaruh
menunjukkan indikasi Penambahan Bakteri
penghambatan terhadap bakteri Probiotik (Bacillus firmus)
patogen A. hydrophila dengan pada Media Pemeliharaan
nilai hambatan yaitu 2 mm dan 3 Terhadap Ketahanan Benih
mm. Lele Dumbo (Clarias
gariepinus) yang Diinfeksi
Saran Bakteri A. hydrophila.
Identifikasi isolat bakteri Program Sarjana, Univeristas
potensial probiotik masih Padjajaran. Bandung.
berdasarkan karakterisasi secara Holt, J. G., N. R. Krieg., P. H. A.
manual, sehingga seharusnya perlu Sneath dan S. T. William.
dilakukan karakterisasi secara 1994. Bergeys Manual of
molekuler dan perlu dilakukan lebih Determinative Bacteriology.
lanjut terhadap ikan dalam uji daya Lippicolt William and
hambat secara in vivo dengan Wilkins. New York.
pemberian isolat bakteri potensial

13
Irianto, A. 2005. Probiotik
Akuakultur. Gadjah Mada
University Press. Yogyakarta.
Lestari, N. W. 2012. Isolasi dan
Karakterisasi Bakteri Dari
Saluran Pencernaan Ikan
Sidat (Anguilla nicolor
bicolor) dan Potensi Sebagai
Probiotik. Universitas Sebelas
Maret. Surakarta.
Osman, M. K., S. Sumawidjaja dan
A. S. L. Hardjosworo. 2010.
Studi Karakterisasi dan
Patologi Aeromonas
hydrophila pada Ikan Lele
Dumbo (Clarias gariepinus).
Makalah Falsafah Sains.
Program Pasca Sarjana,
Institiut Pertanian Bogor.
Bogor.
Sudarsono, A. 2008. Isolasi dan
Karakterisasi Bakteri pada
Ikan Laut dalam Spesies Ikan
Gindara (Lepidocibium
flavobronneum). Institut
Pertanian Bogor. Bogor.

Syabani, N., Y. Ayi., R. Ike., dan M.

L. Angela. 2015. Frekuensi
Penambahan Probiotik
Bacillus sp. dan
Staphylococcus sp. pada
Media Pemeliharaan Benih
Ikan Lele Dumbo (Clarias
gariepinus) Untuk Ketahanan
Terhadap Aeromonas
hydrophila. Jurnal Perikanan
dan Kelautan 6 (2): 130-140

Yusuf. A. 2009. Analisis Risiko

Agens Hayati untuk
Pengendalian Patogen pada
Tanaman. Universitas
Indonesia. Jakarta.

14