Aceites esenciales y compuestos fototxicos en Clibadium surinamense

L. y Montanoa grandiflora D.C (Asteraceae)

INTRODUCCIN
Varias especies de la familia de las Asteraceae contienen compuestos poliacetilnicos
y tiofnicos que son fototxicos y actan como defensa de las plantas. Por otra parte,
estos compuestos tambin podran utilizarse como marcadores taxonmicos de la
familia o de algunos de sus gneros. Hemos estado estudiando compuestos fototxicos
con el objetivo de observar la frecuencia de su presencia en las especies. En la
continuacin de este estudio, en este artculo presentamos el anlisis de Clibadium
surinamense y Montanoa grandiflora dos especies no estudiadas a este respecto en
Mxico.

Los dos gneros, Clibadium y Montanoa, se encuentran en el sureste de Mxico,

Amrica y parte norte de Sudamrica, y comprenden aproximadamente 20 y 25
especies, respectivamente (Arriagada, 1995, Funk, 1982, Mc Vaugh, 1948). Algunas
especies sudamericanas contienen compuesto poliacetilnico, ictiotereol, un veneno de
pescado (Czerson et al., 1979). El objetivo principal de este estudio es buscar este
compuesto en nuestras plantas mexicanas.

Las plantas fueron recogidas en Cuetzalan, Puebla, Mxico. Se depositaron muestras

de especmenes en el Herbario Nacional, Instituto de Biologa, UNAM (MEXU).

METODOLOGA

Aceite esencial.- El material vegetal se dividi en tres partes, inflorescencia, tallo y

hojas. El aceite esencial de las tres partes se obtuvo por destilacin con vapor de agua,
despus se extrajo con ter, se sec con sulfato sdico anhidro y el disolvente se elimin
a presin reducida. El aceite residual se analiz por cromatografa de gases; el aceite
de Clibadium surinamense en una columna AT Aquawax, 30 m x 0,25 mm y el aceite de
Montanoa grandiflora en una columna de Metil Siloxan 25 m x 0,2 mm. Debido a la
diferente composicin de los aceites esenciales, se utilizaron las dos columnas
mencionadas para tener una mejor resolucin de los componentes menos voltiles de
Montanoa grandiflora. Se emple un cromatgrafo Agilent 6890 y las condiciones de
funcionamiento fueron: para la columna de metil siloxano: gas portador: helio; detector:
FID; Temperatura: 290C; flujo: 1 ml / min. Para la columna AT Aquawax las condiciones
fueron las mismas, excepto que se utiliz una temperatura ms baja (260C).
Para las identificaciones de los compuestos se utiliz una referencia de los aceites
originales, que funcionan en las mismas condiciones.

Compuestos fototxicos. Las 3 partes de las plantas se extrajeron con hexano (3 x 24

h) a temperatura ambiente en la oscuridad y el disolvente se elimin a presin reducida.
A partir de los extractos secos se determinaron los perfiles de TLC y se realiz la prueba
biolgica.

Perfiles cromatogrficos. Los perfiles de TLC se hicieron pasar sobre placas de gel
de slice utilizando como fase mvil hexano-AcOEt 85:15 y deteccin por radiacin UV
(365 nm).
Bioensayo. El ensayo se llev a cabo con Bacillus subtilis ATCC-6051 utilizando el
mtodo de Daniel (1965), de disco de papel con el extracto (0,1, 0,25 y 0,5 mg / ml) en
una placa de Petri con agar que contena una concentracin bacteriana de 107 UFC y
incubadas a 37C durante 24h. Se realizaron dos series de experimentos, a modo de
comparacin, uno en la oscuridad y el otro expuesto a U.V. luz (365 nm).

Aislamiento compuesto. El extracto de inflorescencia de Clibadium surinamense, que

present el punto ms intenso en la TLC, indicando la mayor concentracin de
compuestos de las tres partes de la planta, se cromatografi en una columna Merck G-
60 de gel de slice eluida primero con hexano y despus con hexano: acetato de etilo
(90:10), (85:15) y acetato de etilo. A partir de las fracciones eluidas con hexano: acetato
de etilo (90:10) se obtuvieron dos compuestos que se analizaron por 1H, RMN 13C, IR,
MS y espectroscopia UV.

RESULTADOS

Essential oils. The essential oil composition in species that grow in the same place is
characteristic and may serve to differentiate them acting as interspecific marker (Prez-
Amador et al., 1994).
En este trabajo los resultados indican diferentes composiciones de aceites esenciales
para cada especie, siendo esta diferencia un marcador interespecfico. Adems, como
la planta en ambas especies se dividi en 3 partes, hojas, tallo e inflorescencia, con el
fin de analizar la distribucin diferente de los compuestos, los resultados tambin
muestran diferencias intraspecficas para los aceites esenciales (Cuadro 1]

Compuestos fototxicos. Una de las propiedades de los compuestos fototxicos es

producir, a la luz del sol, dermatitis cutnea al tocar la planta, hecho que atrajo la
atencin de varias investigaciones, entre ellas Bohlmann (1962) y Towers (1977). Torres
y su grupo analizaron varias especies de Tagetes donde encontraron compuestos
fototxicos que podran servir como marcadores del gnero.
En nuestro estudio de especies de Asteraceae en busca de compuestos fototxicos, se
analizaron varias especies mexicanas de Tagetes (Garca Jimnez et al, 1990; Prez-
Amador et al., 1994), Simsia amplexicaulis (Prez-Amador et al., 2000), Dyssodia
(Prez-Amador et al., 2004) y ahora en nuestra bsqueda de compuestos fototxicos
elegimos Clibadium surinamense y Montanoa grandiflora del estado de Puebla.
C. surinamense ha sido estudiado en Centro y Sudamrica (Arriagada, 1995) y el
propsito de este estudio es determinar la influencia de la regin y el clima en la
produccin de ictiotereol y otros compuestos similares; M. grandiflora no ha sido
estudiado y no se ha descrito en la literatura.

Perfiles cromatogrficos. Los perfiles cromatogrficos de M. grandiflora no mostraron

manchas de compuestos fototxicos. La falta de ellos fue confirmada por la ausencia en
la U.V. espectro de los mximos caractersticos a 200 y 300 nm y por la prueba
bacteriolgica negativa. Esta es la primera especie de las Asteraceae que hemos
analizado que no tiene estos compuestos.
Los perfiles cromatogrficos de C. surinamense en su lugar mostraron 2 puntos con la
fluorescencia azul caracterstica de los compuestos fototxicos con Rfs 3,7 y 2, y dieron
tambin una prueba bacteriolgica positiva.

Bioensayo. Clibadium surinamense, tras irradiacin con luz UV (365 nm), mostr
actividad fototxica contra Bacillus subtilis en todos los extractos. La inflorescencia fue
ms activa que las hojas y tallos (85, 64 y 40% de inhibicin del crecimiento bacteriano,
respectivamente), ya que contiene una mayor cantidad de los compuestos fototxicos.
Montanoa grandiflora no present ninguna actividad.
Aislamiento compuesto. El extracto de hexano de inflorescencia, que es el que
muestra una mayor cantidad de estos compuestos, se cromatografi en una columna
de gel de slice y se eluy con hexano; hexano: acetato de etilo (90:10), (85:15) y acetato
de etilo, se aislaron 2 compuestos de inters. Estos compuestos se identificaron por 1H,
RMN 13C, IR, MS y espectroscopia UV, como el ster cprico de ictiotereol (Tabla 2) y
el ster mirstico 7'-en de tetrahidrotioterearol (Tabla 3), ambos compuestos nuevos
aislados de Clibadium surinamense.