Mtodos para disminuir la carga

Desinfectantes microbiana
Fundamentos y factores que afectan su
actividad Fsicos
Remocin mecnica, calor, irradacin

Qumicos
Desinfeccin, sanitizacin, antisepsis,
Silvana Vero esterilizacin
Ctedra de Microbiologa.
Facultad de Qumica

Desinfectante/ Sanitizante Desinfectante/ Sanitizante

Agentes qumicos empleados para reducir el nmero Segn EPA

de microorganismos a un nivel aceptable, en un Un buen sanitizante reduce la carga microbiana
ambiente inanimado un 99,999% (5 rdenes) en 30 segundos

Los productos utilizados sobre objetos o superficies 1 orden = 90% de la poblacin inicial
en contacto con alimentos se clasifican como (ej.de 106 a 105)
sanitizantes (EPA)
5 rdenes = 99.999% de la poblacin inicial
( ej. De 106 a 101)

Evaluaci
Evaluacin de la actividad de un agente Evaluaci
Evaluacin de la actividad de un agente
antimicrobiano antimicrobiano

Factor de inactivaci
inactivacin
Tiempo de muerte: tiempo en el cual muere
Definicin: Fraccin de sobrevivientes en un tiempo una determinada carga microbiana
determinado, para una muestra y un proceso
determinado

FI (%) = 100- N X 100 CT Concentracin x tiempo (min.mg/l)

No para reducir un determinado N de rdenes
Ej.: N= 100 m.o No= 106 m.o.
Factor de inactivacin = 99.99%
Baja 4 rdenes
Tiempo de reduccin decimal

1
 Evaluaci
Evaluacin de la actividad de un agente
antimicrobiano Tiempo de reducci
reduccin decimal (valor D)

Curva de muerte
Definicin: 8

log N sobrevivientes
7
Tiempo en el cual se 6
8 5
reduce en un 90%la
N sobrevivientes

7 4

log N sobrevivien
6 3
5 poblacin inicial 2
4 1
3
(disminuye un orden) 0
2 0 D20 40 60 80
1 Tiempo (min)
0
0 20 40 60 80
Tiempo Tiempo (min)
D = t - to
log No- log N D = -1
Nt = No e -kt
pend.

Tiempo de reduccin decimal

(D)
Carga inicial 106 conidias/cm2
Carga esperada 1 conidia/cm2
D = 10 segundos

Tiempo de contacto necesario = 60 segundos

Factores que afectan la accin de los

a) Naturaleza de microorganismos
agentes antimicrobianos
7 6.1 5.9 6 6
1) Factores que afectan la actividad 6
a) Naturaleza de los microorganismos a controlar
cfu/m

5
sob./ml

4
b) N
Nmero de microorganismos
3 2.1
log

c) Tiempo de exposici
exposicin 2
log

d) Concentraci
Concentracin o dosis del agente 1 0.3 <1 <1
0
e) Temperatura P.digitaum P.italicum Ecoli Salmonella
f) Matriz
Desinfectante: dixido de cloro 10 ppm
2) Factores que intervienen en el acceso del Condiciones: pH=6, Temp.25C, Tiempo 30 segundos
desinfectante a los microorganismos

2
 b) N
Nmero de microorganismos c) Tiempo de exposici
exposicin
(carga inicial)

6
8

log ns bre vivie nte s /m l

5
log N sobrevivientes

7 4,8
4
6
3
5 2,2
2
4
1 <0.6 <0,6 <0,6 <0,6
3
0
2
-1 0 30 60 90 120 150
1
t (seg)
0
0 20 40 60 80
Tiempo (min)
Desinfectante: dixido de cloro estabilizado 20 ppm
Condiciones: pH=6, Temp.25C, microorganismo: P.expansum

d) Concentraci
Concentracin o dosis Variaci
Variacin de la actividad con la
concentraci
concentracin
6
Dosis Velocidad de muerte 4,8 4,8 4,8 4,8
log n m.o. viables

log nsobrevivientes/ml

5
4 3,3
3,0
D 3 t=0
2 t = 2 min
1
< 0,6 <0,6
Dosis 2 0
-1 2,5 ppm 5 ppm 10 ppm 20 ppm

concentracin
Dosis 1
Desinfectante: dixido de cloro estabilizado
tiempo
Condiciones: pH=6, Temp.25C, microorganismo: P.expansum

e) Temperatura
Coeficiente de diluci
dilucin

Coeficiente de temperatura
=(log t de muerte a C2- log t de muerte a C1) Q
10 = tiempo de muerte a TC
Log C1 - Log C2
tiempo de muerte a (T+10)C
Perxido de hidrgeno 1.07
Significado de Q10
Fenol 6
Significado del coeficiente de Sustancia Q10 Para Q10= 4 :
Amonios cuaternarios 1 dilucin
Fenol 4 Si la temp. sube de 20C la
Si = 6 si la solucin se diluye
Hipoclorito 2 actividad aumenta 4 veces
el tiempo de muerte
aumenta 26 veces

3
 Ejemplo
f) Influencia de la matriz
7 6 6 6
log sobrevivientes/m l

5.7
6
4.9 Presencia de materia orgnica
5
3.7
4 25C pH
3 5-7C
2 Actividad de agua
1
0
Humedad ambiente
0 50 100
concentracin (ppm )

Desinfectante: cido peractico 80 ppm

Condiciones: pH=6, microorganismo: P.italicum

Valores D para Salmonella sp.

sp. en funci
funcin de
diferentes par
parmetros Factores que afectan la accin de los
Tem p D C o n d ic io n e s desinfectantes: pH
(C ) (m in .) NaClO
H u e v o lq u id o
60 9 .5 p H = 5 .5 Actividad relativa pH
H u e v o lq u id o 1 7
60 4 .6 p H = 7 .4
H u e v o lq u id o 1.5 5
60 0 .3 6 p H = 8 .5 2 3
B u ffe r fo s fa to
60 0 .2 9 0 .1 M p H = 6 .5

5 7 .2 1 3 .5 a w = 0 .9 9

5 7 .2 3 1 .5 a w = 0 .9 0

Variaci
Variacin de la actividad con el pH Accin comparada de varios
desinfectantes
6
4,8 4,8 4,8 4,8 4,8
log nsobrevivientes/ml

5 4,3
4
3 2,4
t =0
2
t =2 min
1
<0,6 <0,6 <0,6
0
-1 inicial 8 7 6 4

pH

Desinfectante: dixido de cloro estabilizado

U.S. EPA. 2003. LT1ESWTR Disinfection Profiling and Benchmarking Technical Guidance Manual.
Condiciones: pH=6, Temp.25C, Tiempo: 2 minutos, EPA 816-R-03-004, http://www.epa.gov/safewater/mdbp/pdf/profile/lt1profiling.pdf
Microorganismo: P.expansum,

4
 Factores que impiden el acceso a los
Surfactantes
microorganismos

Inaccesibilidad
Formacin de biofilms

Eficiencia (reduccin decimal) de baos con H2O2 (50C, 1 min)

sobre manzana contaminada con E.coli (Annous et al., 2001)

2.83a
3
Reducen tensin superficial
reduccin decimal

2.34a
2.5
5%H2O2
2 1.62c
1.5
5%H2O2 +
Mejoran reduccin microbiana
1 0.58b surfactante
0.5
0 Remueven barreras naturales
Superficie Herida

Se evala el mtodo de
Eficiencia de un m
mtodo desinfectante
desinfeccin
Ensayos in vitro Formulacin
Cintica de muerte Patgeno
Espectro de accin Matriz Mtodo de
Dependencia con concentracin, pH, Temperatura desinfeccin
temperatura y materia orgnica Concentracin de uso
Tiempo de contacto
Ensayos in situ pH

Alternativas al hipoclorito de
NaClO sodio
Productos
Agua (caliente)
HClO Forma activa
Dixido de cloro
Actividad muy dependiente del pH
cido peractico
Reacciona con materia orgnica con Perxido de hidrgeno
liberacin de cloro Agua ozonizada
Forma trihalometanos txicos Amonio cuaternarios
cidos orgnicos
Methods to Reduce/Eliminate Pathogens from Fresh and
Fresh-Cut Produce
(http://www.cfsan.fda.gov/~comm/ift3-5.html)

5
 Desinfectantes sobre P. expansum
Actividad in situ
7
5.9
6
Tratamientos:
6
4.7
5 5 Bao en
4 3.3
Desinfeccin
4 2.9 desinfectante
3 3 superficial

log sob./ml
log sob./ml

2 1.3 2 agitacin 70 rpm

1 <0.6 <0.6 <0.6 1 <0.6 <0.6 Inoculacin Secado a temp.
0 0
superficial. Control: Bao
0 25 50
concentracin hipoclorito (ppm)
100 200 -1 0 2.5 5
Concentracin de dixido de cloro estabilizado (ppm)
10 20 ambiente en agua estril,
Suspensin de
conidias 70 rpm
7 5.9
106conidias/ml
8
log n conidia

6
viables/ml

5.9
5
6
4
3
3.0
4
3.6 Neutralizacin y recuento de sobrevivientes en
1.3 2.5
log sob./ml

2
agua de lavado y sobre fruta
log sob./ml

1 <0.6 <0.6 2
0 <1.0
0
0 1 2 3 5
0 0.5 1 3
Determinacin de la tasa de Determinacin de la tasa de
concentracin dixido de cloro (ppm)
concentracin perxido de hidrgeno (%) sobrevivencia de Penicillium expansum sobrevivencia de Penicillium
inoculado superficialmente en manzanas expansum removidos
mecnicamente en agua de lavado

Resultados Conclusiones
A gu a de l a v a d o m a n z a n a s

287
300
250
200
El rol predominante del bao desinfectante es
150
100
prevenir la introduccin y minimizar la
50
0
<2 <2 <1 <2
redistribucin de patgenos humanos o vegetales
Cont rol Dixido de cido Perxido de Hipoclorit o
cloro 5 ppm peract ico
80ppm
hidr geno
3%
de sodio 200
ppm
F l o r a r e si d u a l sup e r f i c i a l
en el producto y superficies de empaque
Tr a t a m i e nt o 7000
6000
5000
4000
4000
4667
La reduccin de la carga microbiana superficial es
3000
2000
2000 2000 2000
secundario
1000
0
Conclusin: El bao con Cont rol Dixido de cido Perxido de Hipoclorit o

desinfectantes impide la cloro 5 ppm peract ico hidrgeno de sodio 200

80ppm 3% ppm
Generalmente reduccin limitada a 1 o 2 log
contaminacin cruzada T r a t a m i e nt o

Muy importante para prevenir contaminacin

cruzada