CURSO
MICROBIOLOGIA PESQUERA
TEMA
2017
CICLO:
2017-II
ALUMNA
I. INTRODUCCION
Debido a su pequeo tamao y a su estilo de vida individual, las clulas
procariticas sufren los cambios ambientales de un modo mucho ms directo
e inmediato que las clulas de los organismos pluricelulares. A lo largo de
miles de millones de aos, las bacterias han estado sometidas a diversas
presiones ambientales, y han respondido evolutivamente creando numerosos
mecanismos de adaptacin. Actualmente, las nicas formas de vida
existentes en determinados ambientes extremos son exclusivamente
procariticas. Muchos de ellos viven a un pH muy cidos o muy alcalinos,
medrando en salmueras y salinas, o reproducindose a temperaturas de ms
de 100C y a grandes presiones.
La importancia de estos factores reside en la modificacin de la velocidad de
crecimiento, provocando cambios que, a determinados valores de dichos
factores pueden llegar a ocasionar la muerte de microorganismos. Adems
condicionan la distribucin de los microorganismos en sus ecosistemas y
hbitats naturales; tambin permiten a los humanos controlar el crecimiento
microbiano, por medio de la fijacin de parmetros para: la muta gnesis,
esterilizacin y desinfeccin, etc.
No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor
ambiental. As, unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una
especie bacteriana, y en cambio ser neutras o beneficiosas para otra.
En este laboratorio se conocer la influencia de agentes ambientales sobre la
viabilidad entre los efectos que un determinado agente puede tener sobre la
viabilidad y los efectos que pueden simplemente afectar al crecimiento, a la
capacidad de diferenciacin (si la hubiera) o de reproduccin.
II. OBJETIVOS
Conocer la influencia ambiental sobre los microorganismos para el
control de las actividades microbianas: Efecto de la Temperatura,
Potencial Redox, pH, Luz Ultravioleta
Potencial Redox
La cada del potencial redox durante el almacenamiento ha sido atribuida a la
liberacin de H2 gaseoso y de metabolitos reductores por las enzimas del
alimento o microorganismos en crecimiento activo.
El potencial redox puede reducirse rpidamente durante la germinacin y
crecimiento de los esporos puesto que, aunque inicialmente slo germina una
pequea proporcin de los esporos, los esporos que germinan y crecen
producen nicotinamida adenn di nucletido reducido (NADH) y otros reductores
que reducen la concentracin de oxgeno a un nivel no inhibidor para los esporos
remanentes. Esta reduccin del nivel de oxgeno y la mayor tensin de H 2
producida por el metabolismo celular se traduce en una gran cada del potencial
redox. Los ambientes creados en los alimentos pueden categorizarse a groso
modo como aquellos en los que el acceso de oxgeno est restringido y en los
que no est restringido. En los que el acceso de oxgeno es limitado los microbios
que se desarrollan producen CO2 + H2O como principales productos finales;
aunque la produccin de productos finales tales como cidos orgnicos no es
significativa, entre los metabolitos secundarlos pueden incluirse aminas, etc.
Cuando el acceso al oxgeno es restringido ocurre la fermentacin y pueden
impartirse cambios de aroma al alimento antes de que se altere. Antes de que
tales cambios sean detectables por el consumidor tiene que alcanzarse un alto
nmero de microorganismos (> 106 /gm).
Algunos microorganismos, como los aerobios estrictos y los anaerobios, slo
poseen un sistema metablico terminal para obtener energa y en consecuencia
solamente son activos dentro de un margen de potencial redox relativamente
estrecho. Otros, como los anaerobios facultativos, tienen sistemas alternativos
que pueden ser puestos en marcha o paro por el potencial redox o la presencia
o ausencia de oxgeno
A. Aerobios estrictos
Los aerobios estrictos en el hbitat de los alimentos (e. g., Bacillus subtilis, B.
megaterium, micrococos, pseudomonas, acinetobacter y moraxellas) usan el
oxgeno como el aceptor final de electrones en la respiracin. Aunque pueden
ser proteolticos o lipolticos entre sus metabolitos de desecho se incluyen el
agua y el dixido de carbono. Constituyen una fraccin importante de la
microflora solamente cuando el O2 se encuentra facilmente disponible como
ocurre en la superficie de las carnes y otros alimentos almacenados al aire. Por
ejemplo, en la superficie de la carne puede producirse limo por crecuniento de
las pseudomonas (Captulo 15) y el pan se hace filamentoso por crecimiento del
Bacillus subtilis (Captulo 23).
B. Anaerobios facultativos
Los anaerobios facultativos, e.g., Lactobacillaceae, Enterobacteriaceae,
Corynebacteriaceae, pueden utilizar el oxgeno como aceptor final de electrones
pero en su ausencia tambin pueden utilizar una diversidad de aceptores de
electrones (e.g., NO3-, SO42-. Dichos organismos crecen en la superficie y en
el interior de los alimentos y algunos poseen actividad proteoltica o lipoltica.
Con frecuencia sus productos de deshecho son cidos orgnicos. Debido a su
profusa distribucin, su amplio rango de actividad enzimtica y su capacidad
para descomponer los compuestos orgnicos, dichos microorganismos pueden
competir en una amplia gama de ambientes y con frecuencia son responsables
de la alteracin de alimentos de bajo Eh. A esto se debe que sean importantes
microorganismos alterativos de los alimentos aunque algunos, como los
lactobacilos, puedan causar cambios beneficiosos. Algunos anaerobios
facultativos, como las enterobacterias, son organismos de relevancia en relacin
on la salud pblica.
C. Anaerobios obligados
Aquellos clostridios ms prevalentes en los alimentos slo pueden crecer a bajos
potenciales redox (aprox -300 mV) y algunos nicamente crecern en ausencia
de oxgeno molecular. Los valores Eh mximos a que crecen los anaerobios
oscilan desde +30 a -250 mV para los clostridios (Morris, 1976). En ausencia de
oxgeno algunos anaerobios pueden crecer a potenciales redox ms altos que
en presencia de oxgeno. Por ejemplo, el Clostridium acetobutylicum creci a
+370 mV en ausencia de O2 y no lo hizo a +100 mV en presencia de O2 (O'Brien
y Morris, 1971). Los anaerobios que no forman esporos, tales como Bacteroides,
con frecuencia no toleran altos potenciales redox, mientras que muchos
clostridios pueden sobrevivir durante largos periodos de tiempo a potenciales
relativamente altos (+116 mV) en presencia de oxgeno y a veces crecen a
potenciales similarmente altos (+370 mV) en ausencia de oxgeno. Los
anaerobios estrictos suelen crecer como contaminantes de la parte interna de
los alimentos no procesados en la que est limitado el acceso libre del oxgeno
y juntamente con los anaerobios facultativos constituyen los principales
microorganismos de la alteracin. Muchos anaerobios no pueden crecer por
debajo de aproximadamente 10C por lo que se utiliza el enfriamiento rpido para
inhibir su crecimiento en la carne en post-rigor. Los alimentos enlatados y los
alimentos empaquetados en envolturas impermeables a los gases corren
mayoritariamente el riesgo de ser contaminados despus del procesado por
estos microorganismos. La adicin de vitamina C (cido ascrbico) a los medios
de cultivo favorece el crecimiento de los anaerobios tales como el Clostridium
perfringens en presencia de aire aunque no altera la tensin de oxgeno .
Efecto del ph
El pH es otro de los factores determinantes para el crecimiento y la supervivencia
de los microorganismos. La tolerancia de las bacterias a los cambios de ph es
limitada, cambios bruscos producen la muerte.
Las variaciones del pH del medio causan alteraciones:
En la estabilidad de la membrana plasmtica y otras envueltas
En el intercambio de hidrogeniones
En la concentracin interna de los mismos (la bacterias muero si su ph
<5.5 )
Cambia la ionizacin de las molculas
Inhibe la actividad enzimtica y las protenas de transporte
CLASES DE MICROORGANISMOS EN RELACION AL PH
Segn el pH optimo: Rango aprox, (0-5-5)
Neutrfilos (5.5 8)
Alcalofilos (8.5 11.5)
Grafica N3 Escala de ph
Fuente: Propia
Fuente: Propia
Fuente: Propia
IVii.Metodologa
Efecto de la Temperatura
Operar similarmente
en los tubos
En el tubo N2 llevar
Mezclar y dejar restantes,
a bao Mara por 10
solidificar incrementando la
minutos a 45 C
temperatura del bao
Mara 10 C ms
Tomar una
Placa de
ACC y
dividirla en
dos partes
Sembrar en
cada
espacio, las
cepas
respectivas
Colocar las
placas en la
jarra
anaerbica
Incubar a 35-
37 C por 24
48 horas
Tomar 0.1 ml de la
Agregar 10 ml de Homogeneizar y
cepa y colocarlo en
Agar fundido (45C) enumerar las placas
3 placas esteriles
GRAFICA N4
0.40
0.30
0.20
0.10
0.00
35 45 55 65 75 85
Temperatura C
FUENTE: PROPIA
Efecto del poder redox
PLACA N1 PLACA N2
Caracterstica % de Inhibidos
Control Abundante Crecimiento 100%
Placa N1 (oscuridad) Moderado Crecimiento 75%
Placa N2 ( luz) Abundante Crecimiento 60%
VI. DISCUSIONES
En base a los resultados de la Tabla N1, para el efecto de la temperatura, se
tuvo que a medida que se incrementa la temperatura, el porcentaje del nmero
de sobrevivientes va disminuyendo .Tambin se observa que el rango de
crecimiento va de 37 a 40 C, lo cual Segn la Universidad de Granada se
clasificaran en mesofilos. Por ello, se puede explicar la influencia de la
temperatura, en funcin a tres picos (mnimo, mximo y ptimo).
La temperatura mnima se puede explicar en funcin de un descenso de la
fluidez de la membrana, de modo que se detienen los procesos de
transporte de nutrientes y el gradiente de protones. Por encima de la
temperatura mnima la tasa de crecimiento va aumentando proporcionalmente
hasta alcanzar la temperatura ptima, debido a que las reacciones
metablicas catalizadas por enzimas se van aproximando a su ptimo. En
dicha temperatura ptima las enzimas y reacciones se dan a su mxima tasa
posible. A partir de la temperatura ptima, si seguimos subiendo la
temperatura se produce un descenso acusado de la tasa de crecimiento hasta
alcanzar la temperatura mxima. Dicha temperatura refleja desnaturalizacin
e inactivacin de protenas enzimticas esenciales, colapsamiento de la
membrana citoplasma y a veces lisis trmica de la bacteria, de modo que el
N de sobrevivientes depender de la naturaleza de cada microorganismo.
En el caso del efecto del poder Redox, la cepa N52, tuvo el mayor crecimiento
y fue en toda la placa, lo cual indicara que es un tipo de bacteria que crece
sin O2, mejor dicho anaerobia. A diferencia de la cepa N39, que el desarrollo
fue moderado y no en toda la placa, lo que significara que es una bacteria
facultativa anaerbica.
Para los resultados del efecto del pH, se tuvo una rango de pH 4-9, la cepa
utilizada fue la N39 y de ello se obtuvo que el rango de crecimiento
abundante se apreciaba por la turbidez del caldo de cultivo. Segn la
Universidad de Granada, se clasificaran en bacterias Neutrfilos, debido a
que el opacamiento del medio se observ entre el rango de 8-9. En muchos
casos, la correlacin entre la concentracin de partculas y la turbidez,
tambin llamada calibracin, depende de la proporcionalidad entre la
intensidad de la luz incidente y la luz dispersada por el medio, el tamao y de
la forma de las clulas que se encuentren en el medio que se est analizando.
En el ltimo efecto de la luz ultravioleta, se tuvo que, la placa N1 que estuvo
sometida a la oscuridad, el porcentaje de inhibidos fue de 75 %, con respecto
a la placa N2 (60%), que estuvo a la luz del da. Esto significa que la
recuperacin del dao, a la cual estuvieron sometidas las bacterias, fue
reparada, gracias a la accin de las enzimas, el cual se denomina foto
reactivacin. Segn Leonor Carrillo, se debe a la actuacin de una enzima
denominada fotolisis o enzima fotorreactivante, que muchas bacterias
sintetizan de manera constitutiva. Las fotoliasas reparan directamente los
dmeros de pirimidina, en una reaccin que requiere luz visible de 300-500 nm
de longitud de onda (luz azul), lo cual permiti un mayor porcentaje de
deshinibidos en la placa N2.
VII. CONCLUSIONES
En el efecto de la temperatura, se obtuvo que el tipo de bacteria por su
crecimiento fue mesfita; En el caso del potencial Redox se tuvieron
bacterias anaerbicas y facultativas anaerbicas; En el caso del pH, se
clasificaron en alcalofilas; En el efecto de la luz Ultravioleta, las
bacterias posean enzimas reparadores que permitan la foto
reactivacin.
VIII. RECOMENDACIONES
Tener en cuenta el tipo de cepa que se eta utilizando y seguir todos las
pasos anunciados en la metodologa para obtener buenos resultados.
IX. BIBLIOGRAFIA
Carrillo Leonor. Microbiologa Agrcola. 2Edicion, Universidad de Salta,
2003, [en lnea] [fecha de consulta: 2 octubre 2017], ISBN 987-9381-16-
5. Disponible en:
http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/aura/vida_y_muerte_microbiana
.pdf
Len Salgado. Tcnicas Microbiolgicas. Factores ambientales que
afectan el crecimiento bacteriano [en lnea]. Universidad Pblica de
Navarra [ Consultado 2 octubre 2017]. Disponible en:
https://es.slideshare.net/leo-canis-lupus/factore-que-afectan-lo-
microorganismos
In Food Quality.Microorganismos y Alimentos [en lnea] [fecha de
consulta: 3 octubre 2017]. Disponible en:
http://www.epralima.com/infoodquality/materiais_espanhol/Manuais/3.Mi
croorganismos_y_alimentos
Universidad de Granada. Efectos Ambientales en medios de cultivo [en
lnea] [fecha de consulta: 3 octubre 2017]. Disponible en:
https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/13agfisicos.htm#_Toc5945164
2
Universidad de Granada. Crecimiento y metabolismo Microbiano [en
lnea] [fecha de consulta: 1 octubre 2017]. Disponible en:
http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?option=com_content&vi
ew=article&id=458&Itemid=532
Universidad de Granada. Nutricin Microbiana [en lnea] [fecha de
consulta: 4 octubre 2017]. Disponible
en:https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/11nutrientes.htm
Universidad Nacional del Nordeste. ACCIN DE LOS AGENTES
FSICOS SOBRE LAS BACTERIAS [en lnea] [fecha de consulta: 4 de
octubre 2017]. Disponible en:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/17_micro.htm
X. ARTICULO CIENTIFICO
INFLUENCIA DE LA ACTIVIDAD DEL AGUA, pH y TEMPERATURA EN EL
CRECIMIENTO DE Aspergillus penicillioides Y A. terreus AISLADOS DE LA
CARNE SECA Y SALADA DE ATN LISTADO (Katsuwonus pelamis).
Resumen
La carne del atn seca y salada es consumida comnmente en el este de
Venezuela., siendo procesada artesanalmente a una concentracin de
19% de NaCl y almacenada por largos perodos. Durante el
almacenamiento, los hongos xerfilos pueden invadir diferentes sustratos,
no siendo la excepcin el pescado seco-salado. En este estudio es
evaluado el efecto combinado de la actividad de agua (a), pH y
temperatura en el crecimiento de Aspergillus penicillioides y A.terreus. La
relacin de estos parmetros sobre la fase lag ( FL) y velocidad radial de
crecimiento(VRC) fue determinada usando un medio de cultivo
suplementado preparado a partir del Agar Extracto de Malta (MEA, Merck)
con adicin de NaCl a las concentraciones de 10; 15; 20 y 30%. El medio
se ajust a valores de pH 6,7 y 7,3 y se incub a dos temperaturas (25 y
30C) por un perodo de 210 horas. Los resultados indican que A.
penicillioides disminuy su VRC a medida que aument la concentracin
de NaCl en el medio. A la concentracin de 10% de NaCl, la VRC fue de
0,24 mm/h, mientras que a la concentracin de 30% alcanz un valor de
0,069 mm/h. Los lags fueron de 18 a 70 horas respectivamente. La VRC
de A.terreus fluctu de 0,23 mm/h al 10% de NaCl, a 0,077 mm/h al 30%.
A las respectivas concentraciones los lags extremos fueron de 16 a 68 h.
A los valores de pH y temperaturas del ensayo no se obtuvieron diferencias
significativas con respecto a FL y VRC. Se concluye que A. penicillioides
y A. terreus desarrollaron mecanismos de adaptabilidad en condiciones
estresantes cuando son expuestos a aw reducidas, incrementando la fase
lag, reduciendo la tasa de crecimiento y la produccin de biomasa fungal.
Referencia Bibliogrfica: