ELEKTROPORESIS

Elektroporesis merupakan metode analisis fisika berdasarkan migrasi partikel bermuatan

yang terarutatau terdispersi, dalam larutan elektrolit dibaah medan listrik. Mobilitas elektroforetik
adalah kecepatan gerak dalam meter per detik partike bermuatan dibaah pengaruh medan listrik
volt per meter dan dinyatakan dalam meter persegi per volt perdetik. Untuk alasan praktis
dinyatakan dalam sentimeter persegi per volt per detik. Mobilitas dapat ditetapkan hanya untuk
elektrolit tertentu di dalam kondisi percobaan operasional yang tepat.

Alat

1. Sumber tenaga yang sesuai yang dapat menyediakan arus searah dan dilengkapi dengan
peralatan yang menunjukkan dan mengatur tegangan atau arus yang digunakan; sirkuit
tambahan dapat digabungkan untuk menstabilkan tegangan.
2. Bejana elektroforesis yang biasanya berbentuk empat persegi panjang dan terbuat dari kaca
atau plastik kaku, dengan dua bak ganda yang terpisah, anode dan katode, berisis larutan
elektrolit.
Pada satu kompartemen dari tiap bak dicelupkan elektrode, sebagai contoh platina
atau grafit, yang dihubungkan dengan sirkuit terisolasi dan terminal yang sesuai dari
sumber tenaga membentuk anode dan katode. Permukaan cairan dalam kedua bak
dipertahankan sama tinggi untuk mencegah penyedotan. Kontak antara kompartemen
dalam dan luar dari tiap-tiap bak ganda dibuat dengan jembatan kertas elektroforesis atau
dengan melubangi bagian tengah dengan beberapa lubang dan metode lain yang sesuai.
Bejana elektroforesis dilengkapi dengan penutup kedap udara yang dapat mempertahankan
kelembaban udara jenuh selama percobaan dan mengurangi penguapan pelarut. Alat
pengaman dapat digunakan untuk memutuskan arus jika tutup dibuka. Jika daya listrik
yang diukur melebihi 10 W, sebaiknya dinginkan penyangga.
3. Alat pembawa penyangga

Elektroforesis bidang

Bidang penyangga, sebelumnya dibasahi dengan larutan penghantar yang sama dan
dicelupkan masing-masing ujungnya kedalam konfartemen tiap bak yang tidak berisi elektrode,
dilekatkan dengan kuat pada pembaa yang sesuai yang dirandcang untuk mencegah difusi
elektrolit penghantar, seperti bingkai horisontal, penyangga bentuk V yang terbalik atau
permukaan serba sama dengant titik kontak pada jarak antara yang sesuai.

Elektrooforesis gel

Alat terdiri dari sebuah lempeng kaca (misalnya kaca obyek) dengan suatu lapisan gel yang
dilapiskan di atas seluruh permukaan dengan ketebala serba sama. Hubungan antara gel dan larutan
penghantar dipengaruhi dalam berbagai cara tergantung pada tipe dari peralatan yang digunakan.
Harus diperhatikan untuk mencegah terjadinya kondensasi uap air atau pengeringan lapisan padat.

4. Alat pengukur atau pendeteksi

Peralatan untuk elektroforesis fel poliakrilamida terdiri dari dua wadah dapar terbuat dari
bahan yang sesuai seperti poli-(metil metakrilat) yang dipasang vertikal satu diatas lainnya.
Tiap adah dilengkapi dengan elektode platina. Elektrode dihubungkan dengan sumber
tenaga yang memungkinkan pengoperasian pada arus konstran atau pada tegangan konstan.
Untuk gel batang, bagian dasar adah sebelah atas memepunyai beberapa pegangan yang
sama jaraknya dari elektrode.

Metode

ELEKTROFORESIS AGAR-AGAR

Metode I letakkan sebuah bingkai logam atau plastik yang sesuai pada lempeng kaca, lekatkan
tepi bagian dalam pada lempeng dengan sejumah kecil Media A cair, letakkan lempeng di atas
permukaan yang datar dan tuang secukupnya Media A cair yang sebelumnya diinokulasi dengan
Inokulum organisme uji A 1% sehingga menghasilkan lapisan dengan ketebalan 1,2 mm HINGGA
1,6 mm. Biarkan media membeku, dangkat bingkai dan buat tidak kurang 32 lubang, dengan
diameter lebih kurang 1 mm, dalam media dengan cara sedemikian hingga larutan dapat
ditempatkan dalam bentum desain kuadrat latin atau blok teracak dan mempunyai jarak yang
cukup untuk pemsahan komponen.

Masukkan sejumlah 5l masing-masing dari 4 larutan yang tertera pada monografi dalam lubang
sesuai dengan desain yang dipilih. Pindahkan lempeng yang telah disiapkan kedalam alat
elektroforesis dan masukkan kedalam tiap bak sejumlah volume sama Media A cair , pastikan