Uji HOS didasarkan pada sifat semipermiable membrane ekor sperma.

Di
bawah kondisi larutan hiperosmotik, air akan masuk melalui membrane ekor sperma
yang utuh (tidak rusak), sehingga ekor sperma bertambah. Pertambahan volume
tersebut akan menyebabkan ekor sperma membengkok. Sebaliknya, jika membran
ekornya rusak, maka air yang masuk akan keluar lagi. Dalam hal ini, ekor tidak
mengalami perubahan volume, sehingga tidak membengkok.