Penggunaan vektor dengue ke ekstrak tumbuhan

dari keluarga Anacardiaceae

Metode: Daun dan bagian kulit tanaman studi dikumpulkan dari Taman Nageri,
Bukit Pancor dan Taman Nasional Teluk Bahang, Penang, Malaysia. Daun dan batang kayu
dipisahkan, dikeringkan dengan udara, digiling dan diekstraksi dengan metanol oleh peralatan
Soxhlet.
Hasil: Aktivitas larvisida tertinggi ditunjukkan oleh ekstrak kulit G. renghas terhadap Ae.
Tanaman ekstrak strain laboratorium albopictus pada 600 mg / L. G. renghas juga menunjukkan
aktivitas larvisida tertinggi untuk strain lainnya dibandingkan dengan ekstrak tanaman lainnya,
diikuti oleh Mangifera indica dan M. fasciculiflora dan Anacardium occidentale.
Kesimpulan: Ae. Albopictus telah ditemukan lebih rentan dibandingkan dengan Aedes aegypti
baik pada strain laboratorium maupun lapangan dalam penelitian ini. G. renghas dan M.
fasciculiflora diuji untuk pertama kalinya dan dipamerkan mendorong aktivitas larvisida
terhadap vektor dengue. Hasil ini menunjukkan bahwa semua tanaman terutama G. renghas dan
M. fasciculiflora memiliki aktivitas larvisida yang lebih tinggi dan dapat digunakan untuk
pengendalian vektor demam berdarah sebagai alternatif ramah lingkungan, target spesifik dan
biaya rendah fitokimia.

Bahan dan metode

2.1. Budaya nyamuk
Dua spesies dari dua strain digunakan dalam percobaan ini: Ae. Aegypti dan Ae. Albopictus strain
laboratorium dan lapangan Strain laboratorium diperoleh dari insektarium Unit Penelitian Pengendalian
Vektor, Universiti Sains Malaysia, dimana nyamuk telah dikultur dalam kondisi laboratorium sejak tahun
1960an selama lebih dari 600 generasi. Telur yang dikumpulkan pada kertas saring Whatman No. 1
direndam dalam baki plastik berisi 500 mL air musiman. Telurnya menetas setelah direndam dalam air
matang. Tahan medan Ae. Aegypti dan Ae. Albopictus diperoleh dari dua lokasi yang berada di
apartemen datar Hamna (520053.900 N, 10018002.800 E) danBukitJambul (520006.700 N,
10017026.000 E) dengan metode ovitrap. Lokasi dipilih karena tingginya populasi Aedes yang dikaitkan
dengan tingginya jumlah kasus demam berdarah di Penang. Ovitraps terbuat dari kaleng, dilukis dengan
warna hitam dan diisi 300 mL air matang dengan dayung kayu keras. Dayung hardboard digunakan
untuk melengkapi telur yang mengandung telur. Sebanyak 10 ovitraps ditempatkan di kedua lokasi
untuk mendapatkan strain liar telur Aedes. Pasir kayu dikumpulkan setiap minggu dan diganti dengan
yang baru. Koleksi ini dilakukan selama satu bulan untuk memiliki cukup banyak strain rumput lapangan
Ae.

Giring yang dikumpulkan dari laboratorium lapangan, biarkan mengering selama 48 jam, dan telur di
dayung dihitung di bawah mikroskop. Sawah kemudian direndam dalam air matang agar telurnya
menetas. Telur memakan waktu sekitar 24-48 jam untuk menetas. Kultur nyamuk dipertahankan pada
suhu (28 3) C, kelembaban relatif (70 10)% dan fotoperiod 12 jam dan 12 jam gelap. Telah dilepas
dengan larutan pembersih, biskuit amixtureofdog, ragi, hati sapi dan susu bubuk pada Rasio 2: 1: 1: 1
berat. Larva yang muncul dipelihara di bawah kondisi laboratorium sampai tahap dewasa. Selama tahap
dewasa nyamuk dipisahkan menurut spesiesnya. Ae. Aegypti dan Ae. Albopictus dipilih untuk penelitian
yang kemudian disimpan di kandang terpisah dengan larutan gula 10% pada kapas. Kedua spesies itu
diberi darah pada tikus. After24 h pemberian darah, substrat oviposisi yang terbuat dari kertas saring
Whatman No. 1 dalam bentuk kerucut ditempatkan pada cawan Petri. Sebanyak 5 mL air ditambahkan
untuk melembabkan kertas saring agar nyamuk bertelur di kandang. Telur yang diletakkan di atas kertas
saring dibiarkan mengering dan setelah 3 hari telur yang dikumpulkan dibenamkan ke dalam air
musiman untuk mendapatkan generasi F1. Generasi F1 ini digunakan untuk studi bioassay

2.2. Spesies tanaman

Daun dewasa dan bagian kulit batang A. occidentale, M. indica, M. fasciculiflora dan G. renghas dipilih
untuk penelitian ini.
Bagian tanaman ini dikumpulkan dari Taman Nasional Teluk Bahang, Penang (527038.5600 N,
10012018.6900 E) dan Taman Nageri, Bukit Pancor (510010.60700 N, 10032037.29100 E), Malaysia.
Sampel tanaman diverifikasi dan dikonfirmasi untuk spesies oleh staf herbarium School of Biological
Sciences, Universiti Sains Malaysia.

2.3. Sediaan ekstrak tanaman

Kulit dan daun dibiarkan di laboratorium hingga kering dalam kondisi lingkungan normal. Daun
memakan waktu 10-14 hari untuk dikeringkan sampai beratnya konstan. Kulit kayu memakan waktu
sekitar 20-25 hari sampai benar-benar kering. Daun kering digiling secara mekanis dengan menggunakan
blender stainless steel Panasonic sementara kulit kayu keringnya dihaluskan dengan menggunakan
pabrik palu tablet. Sampel bubuk kemudian diekstraksi menggunakan pelarut metanol pada peralatan
Soxhlet. Sebanyak 2000 mL metanol dan 50 g sampel bubuk digunakan dalam ekstraksi ini. Sampel
bubuk ditempatkan dalam bidik selulosa (Favorit selulosa ekstrion thimbles: 43 mm x 123 mm) dan
dimasukkan ke dalam tabung ekstraksi peralatan Soxhlet. Pelarut direbus pada titik didih metanol pada
suhu 66 C dengan menggunakan mantel pemanas. Proses diulang selama tiga siklus yang memakan
waktu sekitar 3 jam sampai warna pelarut menjadi semitransparan sebagai hasil ekstraksi lengkap dari
semua kandungan tanaman. Seluruh proses kambuh tiga kali untuk mendapatkan cukup ekstrak kasar
untuk studi bioassay larva. Untuk menghilangkan pelarut berlebih, ekstrak kasar dikenai proses
penguapan menggunakan mesin evaporator vakum rotary di bawah tekanan tereduksi sekitar 25-30
menit pada 66 C dengan kecepatan 100 r / menit. Kemudian sisa pelarut yang tersisa dikeluarkan
dengan menempatkan ekstrak kasarnya di oven pada suhu 40 C selama 24 jam. Ekstrak kasar yang
diperoleh setelah pelepasan pelarut berlebih disimpan di kulkas pada suhu 4 C sampai penggunaan lebih
lanjut. Prosedur ini dilakukan secara terpisah untuk setiap bagian tanaman dan spesies tanaman.

2.4. Persiapan konsentrasi berbeda

Untuk mendapatkan 10000 mg / L larutan stok, 1 g pasta dari ekstrak kasar ditimbang dan dilarutkan
dalam 100 mL metanol. Konsentrasi serial berurutan dibuat dari larutan stok dengan menggunakan air
suling. Konsentrasi berkisar antara 50 dan 1300 mg / L digunakan dalam penelitian ini.
2.5. Biosida Larvicidal
Akhir instar 3 dan larva instar 4 awal Ae. Aegypti dan Ae. Albopictus digunakan dalam percobaan ini
sesuai dengan bioassay larvaida Organisasi Kesehatan Dunia [23]. Sebanyak 20 larva ditempatkan dalam
cangkir kertas 250 mL yang mengandung 200 mL konsentrasi ekstrak seri yang berbeda. Kisaran
konsentrasi antara 50 dan 1300 mg / L disiapkan dan setiap konsentrasi direplikasi tiga kali untuk semua
perlakuan. Pengendalian terdiri dari 1 mL 10% metanol dalam 199 mL air suling. Larva tidak diberi
makanan selama percobaan. Pengamatan mortalitas dilakukan setelah pemaparan 24 jam untuk semua
perawatan. Larva dihitung mati saat mereka tidak bergerak setelah memeriksa jarum. Semua percobaan
dilakukan di bawah kondisi laboratorium pada suhu (28 3) C dan kelembaban relatif (70 10)%

2.6. Analisis statistik

Nilai LC50 dan LC95 dihitung dengan menggunakan analisis probit. Analisis varians univariat dilakukan
dengan menggunakan SPSS versi 20 untuk mengetahui efek pada strain nyamuk yang berbeda, dan
pengaruh konsentrasi dan bagian tanaman ekstrak kasar terhadap mortalitas larva Aedes. Persentase
mortalitas larva dianggap sebagai variabel dependen sedangkan konsentrasi, spesies Aedes dan bagian
tanaman dianggap sebagai faktor tetap. Kematian larva dinyatakan dalam persentase dan diubah log
untuk memenuhi asumsi ANOVA. Tingkat signifikansi untuk analisis statistik ditetapkan pada P <0,05.

3. Hasil
Semua bagian tanaman yang diuji dalam percobaan ini untuk aktivitas larvisida mengkonfirmasi aktivitas
larvisida mereka terhadap Aedes spp. G. renghas menunjukkan aktivitas larvisida terkuat karena
menyebabkan mortalitas 100% oleh ekstrak kulit kayu pada 600 mg / L melawan Ae. Strain laboratorium
albopictus (Gambar 1A) diikuti oleh M. indica, M. fasciculiflora dan A. occidentale. Padahal, untuk
membunuh 100% Ae. Strain laboratorium aegypti, lebih banyak ekstrak kulit G. renghas yang diekstraksi
dengan 700mg / L (Gambar 1B). Hal ini diketahui bahwa strain laboratorium Ae. Albopictus lebih rentan
terhadap ekstrak kulit G. renghas dibandingkan dengan Ae. Aegypti Padahal, strain lapangan untuk
kedua Ae. Aegypti dan Ae. Albopictus membutuhkan konsentrasi tanaman yang lebih tinggi untuk
mortalitas 100% dibandingkan dengan strain laboratorium (Gambar 2A dan 2B). Dalam penelitian ini,
strain laboratorium untuk kedua spesies Aedes lebih rentan dibandingkan dengan strain lapangan (Tabel
1). Begitu pula di sisi lain Ae. Albopictus ditemukan sangat rentan terhadap semua ekstrak kasar
tanaman di kedua strain laboratorium dan lapangan dibandingkan dengan Ae. Aegypti (Tabel 1).
Perbedaan respon antara spesies pada kedua strain terhadap ekstrak tumbuhan juga signifikan (Tabel 2
dan 3).
Nilai LC50 dan LC95 terbaik diberikan oleh G. renghas dibandingkan dengan tiga tanaman lainnya untuk
ekstrak daun dan kulit kayu dan terhadap strain laboratorium dan lapangan (Tabel 1). Nilai LC50 dan
LC95 terendah masing-masing 240,17 dan 607,64 mg / L ditunjukkan oleh ekstrak kulit G. renghas
terhadap Ae. Strain laboratorium albopictus yang menyebabkan kematian larva nyamuk dengan dosis
rendah (Tabel 1), menjadikannya ekstrak tanaman yang paling efisien dalam penelitian ini untuk
membunuh nyamuk nyamuk. Sedangkan nilai LC50 dan LC95 tertinggi masing-masing 804,21 dan
1473,49 mg / L ditunjukkan oleh ekstrak daun A. occidentale terhadap Ae. Strain medan aegypti (Tabel
1) yang menyimpulkan bahwa ekstrak tanaman ini kurang efisien dalam membunuh larva nyamuk.
4. Diskusi
Studi saat ini menemukan sifat toksik dari semua 4
Tanaman dari keluarga Anacardiaceae yang mendemonstrasikan aktivitas larvisidal terhadap vektor
dengue Ae. Aegypti dan Ae. Albopictus G. renghas terbukti paling beracun dengan konsentrasi
mematikan terendah diikuti oleh M. indica, M. fasciculiflora dan A. occidentale. Telah diketahui bahwa
senyawa yang bertanggung jawab untuk efek toksik keluarga Anacardiaceae adalah antosianosida,
flavonon, koumarin, alkaloid, saponin, polifenol, fitosterol, asam lemak, hidrokarbon, tanin, steroid,
triterpenoid, asam diardis dan gula pereduksi [20,24 ]. Anacardiaceae telah dikenal karena penggunaan
obatnya untuk pencegahan, penyembuhan dan pengobatan penyakit sebagai praktik tertua yang
diketahui [25]. Senyawa ini juga dilaporkan untuk aktivitas antimikroba melawan bakteri, jamur dan
virus [26], efek antiinflamasi [27], aktivitas antifeedant terhadap beberapa hama lepidopteran [28], efek
pengusir dan larvisida terhadap beberapa nyamuk vektor [22] .

Ekstrak tumbuhan dari berbagai bagian A. occidentale telah dilaporkan memiliki sifat larvisida terhadap
Ae. Aegypti Efektivitas CNSL yang diperoleh dari buah Anacardium dilaporkan untuk aktivitas larvicidal
terhadap Ae. Aegypti [20,29].
Ekstrak metanol dari daun A. occidentale digunakan bersamaan dengan akar Lantana camara oleh
Tripathy et al. Melawan An. Stephensi, Cx. Quinquefasciatus dan Ae. Aegypti dan ditemukan lebih efektif
melawan Ae. Aegypti [30]. Demikian pula, pemeriksaan komparatif dari kulit, kulit kayu dan daun A.
occidentale dilakukan di Nigeria, untuk sifat larvisidal menggunakan ekstrak berair melawan An.
Gambiae, menegaskan bahwa ekstrak kulit kayu jauh lebih baik dibandingkan dengan ekstrak bagian
lainnya [31].

Demikian pula, tanaman mangga juga dilaporkan beberapa kali karena aktivitasnya terhadap vektor
dengue [6,22,32]. Alwala dkk. Mengidentifikasi sifat penolak minyak dari daun M. indica karena senyawa
hidrokarbonnya melawan An. Gambiae [22]. Ekstrak metanol dari M. indica tidak menunjukkan
toksisitas sedangkan ekstrak air dan aseton menunjukkan bioaktivitasnya terhadap vektor dengue Ae.
Aegypti, mengungkapkan bahwa tanaman memiliki aktivitas toksik yang dapat berubah dengan
pemilihan pelarut [32]. Padahal, Adebajo dkk. Menganalisis ekstrak metanol dari daun M. indica
melawan Ae. Aegypti dan terbukti efektif melawan larva instar keempat, dan khasiatnya meningkat
dengan paparan yang diperpanjang [33]. Ekstrak batang batang kayu indica dianalisis dan adanya
flavonoid, alkaloid, fitosterol, saponin, tanin dan glikosida jantung terungkap [34], yang juga dilaporkan
untuk aktivitas mereka terhadap hama vektor dan patogen yang berbeda [6,35] .

Meskipun beberapa laporan tersedia pada sifat larvisidal keluarga Anacardiaceae, tidak ada pekerjaan
yang dilakukan pada potensi G. renghas dan M. fasciculiflora. Bagian tanaman G. renghas dan M.
fasciculiflora digunakan untuk pertama kalinya dalam penelitian ini untuk menilai aktivitas larvisidal
mereka terhadap vektor demam berdarah dan hasilnya menunjukkan hasil yang luar biasa. Daun G.
renghas serta ekstrak kulit menghasilkan nilai LC50 dan LC95 terendah untuk kedua Ae. Aegypti dan Ae.
Spesies albopictus baik strain laboratorium maupun lapangan diikuti oleh M. fasciculiflora. Resin
beracun yang ada di kedua tanaman dari keluarga Anacardiaceae dapat menjadi alasan keefektifannya
sebagai larvisida, yang mendukung pencarian senyawa aktif yang digunakan sebagai pestisida biologis
untuk meminimalkan efek berbahaya dari insektisida sintetis.

Potensi larva dari semua ekstrak tanaman yang diuji sangat menjanjikan terhadap spesies Aedes baik
strain laboratorium maupun strain di lapangan, namun strain laboratorium tampaknya lebih rentan
dibandingkan dengan strain di lapangan. Kenaikan tingkat resistensi ditemukan pada regangan lapangan
karena tingkat resistensi yang sudah ada sebelumnya pada regangan lapangan terhadap insektisida,
frekuensi gen dan mekanisme resistensi berkembang dalam warisan [36]. Chaiyasit dkk. Juga
melaporkan strain laboratorium Ae. Aegypti lebih rentan daripada strain di lapangan terhadap 5 minyak
esensial yang mengandung piretroid karena daerah penelitian diperkenalkan dengan organofosfat
sintetis yang menyebabkan peningkatan tingkat toleransi Ae. Strain medan aegypti [37].
Nilai LC50 dan LC95 yang ditunjukkan oleh keluarga Anacardiaceae dalam penelitian ini melawan vektor
demam berdarah telah membuat sketsa potensi aktivitas larvisidal yang signifikan. Studi saat ini
mengungkapkan bahwa Ae. Albopictus lebih rentan dibanding Ae. Aegypti baik pada strain laboratorium
maupun strain lapangan. Studi sebelumnya juga telah menunjukkan bahwa Ae. Albopictus tidak tahan
terhadap insektisida sintetis sedangkan Ae. Aegypti, yang dikumpulkan dari berbagai lokasi di Thailand,
menunjukkan ketahanan yang menjanjikan terhadap insektisida yang berbeda [38]. Ae. Albopictus juga
menunjukkan kerentanan lebih dari Ae. Aegypti untuk ekstrak kasar tanaman yang berbeda [39]. Ae.
Albopictus disebut lebih rentan sementara Ae. Aegypti menunjukkan beberapa hambatan saat diuji
dengan triflumuron pengatur pertumbuhan serangga, inhibitor sintesis kitin [40]. Ae. Aegypti ditemukan
memiliki tingkat resistensi yang lebih tinggi dibandingkan dengan Ae. Albopictus karena sifat
endofiliknya, di mana ia cenderung tinggal di dalam habitat manusia dan akibatnya mengalami paparan
yang lebih tinggi terhadap insektisida khususnya maniak nyamuk [41].

Pelarut polar seperti metanol, etanol, etil asetat dan aseton banyak digunakan untuk ekstraksi senyawa
fenolik dan antioksidan [42]. Metanol dipilih dalam penelitian ini untuk ekstraksi senyawa aktif dari
tanaman keluarga Anacardiaceae karena metanol ternyata merupakan ekstraksi yang lebih baik diikuti
oleh etanol dan air [43]. Keluarga Anacardiaceae dilaporkan menemukan adanya alkaloid, polifenol dan
saponin [44], asam asetat, kardanol dan kardus, yang sangat antioksidan dan memiliki aktivitas larvisida
efektif terhadap vektor dengue [19,29,45].
Bagian tanaman yang berbeda memiliki senyawa fitokimia yang berbeda yang memiliki toksisitas
berbeda dengan spesies sasaran [46]. Oleh karena itu, dalam penelitian saat ini, kedua bagian tanaman
telah menunjukkan aktivitas larvisida yang berbeda. Ekstrak kulit pohon induk dari tanaman telah
menunjukkan hasil yang lebih baik dalam penelitian ini daripada ekstrak daun. Hasil ini juga
menggambarkan bahwa semua bagian tanaman memiliki senyawa kimia aktif yang berbeda yang
bertanggung jawab atas beragam aktivitas terhadap berbagai organisme. Toksisitas senyawa fitokimia
bergantung pada faktor-faktor termasuk usia bagian tanaman, perkembangan organ, jenis bahan
tanaman, variasi musiman, cedera kimia atau mekanis, polusi, hama dan penyakit yang mungkin
menjadi penyebab perbedaan nilai LC50 dan LC95 terhadap perbedaan. Spesies hama [47].
Untuk menghindari efek merugikan yang disebabkan oleh bahan kimia untuk mengendalikan vektor
demam berdarah, senyawa bioaktif alami dan nontoksik dari tumbuhan dapat digunakan sebagai alat
kontrol alternatif [48]. Penelitian ini akhirnya mengusulkan potensi baru biopestisida alternatif dari flora
lokal, yang mudah didapat dengan teknologi rendah dan dapat dengan mudah diintegrasikan ke dalam
program pengelolaan nyamuk yang sedang berlangsung. Dengan ini, dapat mengurangi biaya
pengelolaan nyamuk daripada menggunakan kontrol kimia konvensional, yang lebih mahal daripada
pengendalian biologis yang terdiri dari ekstrak tumbuhan dan lebih efektif dan spesifik target [49].
Penelitian ini menyimpulkan bahwa G. renghas dan M. fasciculiflora dapat menjadi salah satu
biopestisida potensial baru. Hasil ini juga menekankan perlunya penelitian dan penyelidikan lebih lanjut
untuk mengetahui senyawa bioaktif G. renghas dan M. fasciculiflora dan aktivitas mereka terhadap
hama vektor lainnya. Hal ini dapat membantu dalam pengembangan bioaktivitas phytochemical dan
penggantian insektisida sintetis di masa depan.