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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIA, TECNOLOGA E INGENIERA

DE ALIMENTOS

INFORME N 08

EXTRACCIN DE ADN DEL TOMATE

ALUMNO : MONTENEGRO CLAUDIO, Juan Henry

PROFESOR : Dr. Pedro PELAEZ SANCHEZ

Tingo Maria Per

Octubre - 2017
I. INTRODUCCIN

Muchos estudios de Biologa Molecular comienzan con la extraccin

de cidos nucleicos. La lisis celular libera las molculas en una fase acuosa que

es separada de los restos celulares por centrifugacin. Las protenas son

removidas de la fase acuosa con solventes orgnicos (fenol, cloroformo). El

ADN, que permanece en la fase acuosa, precipita junto al etanol y

posteriormente es purificado y resuspendido en un buffer adecuado.

OBJETIVOS

- Aprender el mtodo para la extraccin de ADN

- Extraer ADN de una muestra de tomate.


II. MARCO TERICO

2.1. ADN

El ADN (cido desoxirribonucleico) es el lugar donde reside la

informacin gentica de un ser vivo, su estructura es una cadena larga de piezas

planas que se proyectan hacia afuera, denominadas bases. Esta escalera en

espiral tiene la capacidad de enrollarse y desenrollarse para que la cadena de

cido nucleico pueda duplicarse. Ese proceso de duplicacin, llamado

replicacin, sucede cada vez que una clula se divide (CORFIELD et al., 1992).

2.2. Extraccin de ADN

La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En

primer lugar, tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica

para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin, debe romperse

tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo, hay que

proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer

que precipite en alcohol (HAGELBERG et al., 1989).

2.2.1. Extraccin del ADN en las plantas

El ADN genmico de las plantas es ms difcil de extraer a causa de

la pared celular de la planta, que se elimina por homogeneizacin o mediante la

adicin de celulosa para degradar la celulosa que forma la pared celular

(ZAVALA 2005).
2.2.2. Extraccin de ADN animal

Los leucocitos de sangre perifricos son una fuente principal de ADN

genmico en animales, pero la recogida de muestras es difcil ya que la sangre

debe ser retirada del animal. La sangre contiene una serie de compuestos como

protenas, lpidos, glbulos blancos, glbulos rojos, plaquetas y plasma, que

pueden contaminar la muestra de ADN (ZAVALA 2005).

2.2.3. Diferencias

Las diferencias entre el ADN de las plantas y los animales se

encuentran en la secuencia de bases en la hlice. Los compuestos que se

encuentran en las clulas vegetales estn ausentes en las clulas animales y las

secuencias de bases de ADN reflejan esto, puesto que el ADN genmico de la

planta es a menudo mayor que el ADN de los animales. Estas diferencias afectan

los mtodos de extraccin, ya que impacta en el rendimiento y la pureza del ADN.

2.3. Mtodos de extraccin

2.3.1. Mtodo CTAB

Bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) de extraccin es un mtodo

de extraccin de ADN de plantas que elimina los polifenoles de las paredes

celulares de las plantas. Los polifenoles son compuestos con cadenas largas de

ADN que se asemejan y se precipitan de manera similar.

2.3.2. Mtodo de acetato de potasio SDS

El mtodo de acetato de potasio de dodecilsulfato de sodio (SDS) de

la extraccin de ADN es otra forma comn para extraer material gentico de la

planta. Este mtodo utiliza el alcohol para romper las paredes celulares.
III. MATERIALES Y MTODOS

3.1. Materiales y Reactivos

- Tomate maduro

- Cuchillo y Tabla para picar

- Vaso de precipitados

- Tela

- Detergente (Champ)

- Varilla

- Probeta

- Pipeta

- Etanol al 95% fro

- Cloruro de sodio 2M

3.2. Metodologa

- El etanol debe ser colocado en el congelador al menos un da

antes de la realizacin de la prctica. Tambin se debe enfriar en cloruro de

sodio.

- Cortar el tomate en trozos pequeos

- Licuar el tomate en trozos, filtrar en un vaso, sobre una tela para

separar el resto de tejido que haya quedado por romper.


- Medir el volumen del filtrado en una probeta, luego depositar en un

vaso.

- Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M frio.

- A continuacin, se aade 2 mL de detergente (Champ). Mezclar

bien. Y colocar la mezcla en una probeta.

- Por las paredes de la probeta agregar muy despacio 50 mL de

etanol 96% frio, de manera que se formen dos capas.

- Esperar 10 minutos sin mezclar las capas y observar el ADN que

precipita en la interfase de las dos capas y llega hasta la superficie.

- Introducir una varilla de vidrio y remover lentamente en una misma

direccin, se observar que sobre la varilla queda adherido el ADN, con aspecto

de pequeitos copos de algodn mojado.


IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

- Se pudo observar que se form en tres fases, en la fase 1 se

observ el agua y en la fase 2 partculas y en la 3 las protenas de ADN

suspendidas en otros compuestos.

- Segn MALAJOVICH (2012), esta separacin de fase se debe a

la diferencia de densidades
V. CONCLUSIONES

- Se aprendi el mtodo de acetato de potasio de dodecilsulfato de

sodio (SDS), para la extraccin de ADN.

- Se pudo extraer el ADN del tomate, la cual se le observo.


VI. REVISIN BIBLIOGRFICA

CORFIELD V, Y VANDENPLAS E. (1992). Ancient DNA genotyping: HLA

and CA repeats by PCR. Ancient DNA Newsletter 1: 31-34

HAGELBERG E. Y SYKES B. (1989). Ancient bone DNA amplified. Nature

342: 485.

MALAJOVICH (2012). Biotecnologa. Guas de actividades: enseanza y

divulgacin. 2a ed. Bernal Universidad Nacional de Quilmes.

http://www.bteduc.bio.br.

ZAVALA J. 2005. Manual de tcnicas bsicas de biologa celular. 1ra ed.

UADY. Mxico: 19,27-28,43-49