Universidad Autnoma de Ciudad Jurez

Instituto de Ciencias Biomdicas

Lic. En Qumico Farmacutico Bilogo
Laboratorio de Bioqumica I
Ramrez Islas, Luis Alberto
Prctica #13: Estudio del bombeo de protones por levaduras
Resumen
La energa celular se produce a travs de la cadena de transporte de electrones, el la cual, las
bombas de protones, protenas que atraviesan las membranas celulares, intercambian iones por
protones consumiendo energa pata poder producir ms. A fin de entender cuan afectado se puede
ver este proceso biolgico, se utiliz dos diferentes desacopladores para comparar su efecto en el
pH del medio, comparado con un grupo control.
Introduccin Durante los aos 90s, el estudio de la
tolerancia a la presin osmtica y la resistencia
Todos los hongos son eucariotas; sus clulas
a la salinidad en las plantas se ampli a las
contienen ncleos encerrados en membrana,
levaduras. Primero, se trabaj con
mitocondrias y otros organelos membranosos.
Schizosaccharomyces pombe, la cual posee el
Aunque varan notablemente en tamao y
gen sod2, con el cual la levadura es tolerante al
forma, los hongos comparten ciertos caracteres
litio. Por otra parte, con el nhaA en E. coli
clave, incluida su forma de obtener nutricin.
tambin muestra una tolerancia a los iones de
Los hongos ms simples son las levaduras, que
un metal alcalino, en este caso, el catin de
son unicelulares, con una forma redonda u oval.
sodio. (Ramrez & Pea, 2000)
Las levaduras estn ampliamente distribuidas
en el suelo; en hojas, frutos y carnes curtidas; y Metodologa
sobre y en los cuerpos humanos. Algunas
Se realizaron tres diferentes metodologas; uno
levaduras, como Saccharomyces cerevisiae,
para el grupo control y otras dos que fungan
poseen un papel importante en diversas reas
como el experimento real. Para el grupo control,
como: medicina, investigacin biolgica y en la
en un vaso de precipitados de 50 ml, se agreg
industria alimenticia. (Solomon, Berg, & Martin,
5 ml de levadura Saccharomyces cerevisiae de
2013)
200 mg/ml, despus, se agreg 40 ml de agua
Dentro de la gran complejidad de las destilada. Se mezclo perfectamente, se midi el
membranas celulares, las bombas de protones pH inmediatamente, despus, se realizaron dos
se encuentran en ella. Su naturaleza es 100% mediciones ms cada 3 min. Se agreg 5 ml de
proteica, la cual se dispone en forma de poro glucosa al 10%, se mezcl perfectamente y se
intermembranal, ya que penetra de inicio a fin a midi el pH inmediatamente. Durante 20 min se
la membrana. Las bombas se pueden ubicar en midi cada 5 min; despus, dos veces ms cada
la membrana celular, la mitocondria, los 10 min.
peroxisomas y los lisosomas. Su funcin es,
En cuanto al experimento con
como su nombre lo deja en evidencia,
dinitrofenol; tambin se agreg 5 ml de levadura
transportar iones hidrgeno, es decir, protones,
Saccharomyces cerevisiae de 200 mg/ml a un
a travs de la membrana en contra del gradiente
vaso de precipitados de 50 ml, adems de 40
de concentracin, por lo que el transporte es de
ml de agua destilada. Se agreg 0.2 ml de
tipo activo, consumiendo energa al
dinitrofenol a 40 mM. De midi el pH
transportarlo. (Horton, Moran, Scrimegeour,
inmediatamente despus de haber agregado el
Perry, & Rawn, 2008)
dinitrofenol; se realizaron dos mediciones ms
cada 3 min. Despus, se agreg 5 ml de
glucosa al 10% y se midi el pH tas incorporar transporte de electrones en la fosforilacin
homogneamente la disolucin de sacarosa. Se oxidativa. En el medio, como el dinitrofenol es
realizaron cuatro mediciones de pH con un desacoplador, lo hace reteniendo un protn
intervalos de 5 min; despus, un par ms de dentro de su estructura. Esto supondra un
mediciones, sin embargo, estas fueron cada 10 cambio en el pH del medio, el cual s se
min. present. Posiblemente la acidez del medio se
debe a que al estar protones fuera del medio
Se repiti la misma metodologa del
celular, acidifican el medio an estando
experimento con dinitrofenol para el
retenidos dentro de la estructura del
experimento con azida; solo que en lugar de
dinitrofenol. (Deviln, 2004)
agregar 0.2 ml de dinitrofeno al 40 mM, se
agreg 0.5 ml de azida de sodio al 400 mM. El azida de sodio es un desacoplador de
membrana de naturaleza reversible;
Resultados y discusin
normalmente es utilizado para disminuir el
Tabla 1 Datos obtenidos de las mediciones de pH en los contenido de cationes de potasio en el medio
tiempos indicados.
intracelular. Aunque tambin se utiliza para
pH inhibir la funcin de la ATPasa. Al analizar el pH,
Tiempo
Glucosa Dinitrofenol Azida de sodio se observa que no es congruente con los
0 5.49 5.93 5.72 resultados, ya que las bombas de APTasa no
5 5.51 4.97 5.54 reingresaran los protones al interior de la
10 5.48 4.69 5.46
mitocondria ni de la membrana, por lo que el
15 5.52 4.59 5.47
medio se acidificara, disminuyendo el pH
20 5.52 4.35 5.36
30 5.58 4.13 5.42
liegamente, aunque no se apreci ninguna
40 5.58 4.13 5.51 variacin notable respecto al control. (Riballo
Fernndez, 1995)
Conclusin
La inactivacin de las bombas de protones
afecta gravemente la capacidad de los seres
vivos para poder vivir, ya que la energa es la
base para poder defenderse contra los
estmulos externos negativos, al igual que
fundamental para poder seguir metabolizando.
El dinitrofenol se mostr como el ms fuerte, ya
que logr disminuir el pH, por lo que la levadura
posea menos protones para sus procesos
metablicos; por su parte, la disolucin de azida
Grfica 1 Comportamiento del pH en las tres condiciones
de sodio y el grupo control no presentaron
diferentes. diferencias notorias.

No se observ cambios significativos Bibliografa

entre el control y la solucin azida de sodio; sin
embargo, se observ una gran decreci en el
pH del medio con dinitrofenol, tal como se
muestra en la Grfica 1.
El dinitrofeno, al igual que la
carbonilcianuto-p-trifluorometoxi fenilhidrazona
posee un propiedad inhibidora del sistema de
Deviln, T. M. (2004). Bioqumica. Libro de texto
con aplicaciones clnicas. Espaa:
Editorial Revert.
Horton, H. R., Moran, L. A., Scrimegeour, K. G.,
Perry, M. D., & Rawn, J. D. (2008).
Principios de bioqumica. Estado de
Mxico: Pearson.
Ramrez, J., & Pea, A. (2000).
Intercambiadores catin/protn en
levaduras. Revista Latinoameticana de
Microbiologa, 181-187.
Riballo Fernndez, M. E. (1995). Mecanismo de
inactivacin catablica de las protenas
de membrana plasmtica de
Saccharomyces cerevisiae. Madrid:
Universidad Complutense de Madrid.
Solomon, E. P., Berg, L. R., & Martin, D. W.
(2013). Biologa. D.F.: Cengage
Learning.