RESUMO MICROBIOLOGIA (TERICA)

1. CARACTERIZAO DOS PRINCIPAIS GRUPOS DE MICRORGANISMOS

PROTOZORIOS - Amplamente distribudos na natureza (principalmente em
ambientes aquosos);
- Microrganismos eucariotas unicelulares, sem parede
celular nem clorofila e que ingerem os nutrientes de que
necessitam
- Motilidade: clios; flagelos; pseudpode (amebas)

ALGAS - Maioria aqutica;

- Parede celular e clorofila (faz fotossntese)
- Forma/tamanho variados
- Eucariota

FUNGOS - Organismos eucariotas

- Parede celular
- Tamanho: microscpicos (caso dos unicelulares - leveduras)
ou maiores (multicelulares - bolores).
- No possuem clorofila (no realizam fotossntese) = nutrio
por absoro.
HIFAS = Filamentos de clulas cilndricas ligadas entre si
pelas extremidades.
MICLIO = conjunto de hifas.

BACTRIAS Organismos procariotas (sem membrana nuclear nem os

organelas definidas).
Archae Eubacteria: forma: cocos, bacilos, bastonetes e
espirilos; variam de 0,5 a 5 m de dimetro; flageladas.

VRUS - Parasita intracelular obrigatrio;

- Tamanho: de 20 a 300 nm de dimetro
- Estruturalmente mais simples (contm apenas um tipo de
cido nuclico (RNA ou DNA) circundado por um envelope
proteico)

2. CARACTERIZAO DE MICRORGANISMOS
Identificao de microrganismos: por tipo e por quantidade
Meio de cultura: Material nutritivo preparado em laboratrio que permitem o
crescimento (aumento em quantidade) de microrganismos.
Contm os nutrientes necessrios e indispensveis ao
crescimento microbiano.
Preparados em laboratrio ou adquiridos comercialmente.

OBS: INCULO = Microrganismos em cultura pura inseridos em um meio de cultura.

 CULTURA PURA = Cultura de microrganismos de clulas gentica e
morfologicamente idnticas.
COLNIA = agrupamento bacteriano visvel.

MEIOS DE CULTURA
Lquidos
Um meio lquido (ou caldo, em ingls broth) contm os nutrientes dissolvidos em
gua. Uma vez preparado e esterilizado, pode ser inoculado com microrganismos e
colocado a incubar para que ocorra crescimento. As culturas que crescem nestes meios
no esto individualizadas em colnias, por isso no so usados no isolamento, mas sim
para o crescimento de culturas ou para a identificao de culturas puras atravs de testes
bioqumicos. O crescimento pode ocorrer por todo o tubo de ensaio, pode-se formar um
depsito ou sedimento (pellet) ou uma pelcula superfcie.
Slidos
Um meio slido para alm dos nutrientes dissolvidos em gua, contm um agente
solidificante (gar) fornecendo desta forma uma superfcie firme onde pode ocorrer o
crescimento de colnias de forma individualizada. Os diferentes aspectos das colnias
podem originar pistas na identificao dos microrganismos. Estes meios podem ser
usados em placas de Petri ou em tubos de ensaio. Estes meios so usados para:
contagem de colnias; crescimento de microrganismos; isolamento (permitindo obter
culturas puras); e conservao de estirpes.
Semi-slidos
Obtidos pela adio de uma quantidade reduzida de agente solidificante. Este meio
utilizado em tubo de ensaio e serve sobretudo para estudar a mobilidade dos
microrganismos.
INOCULAES
OBS: Quando se pretende obter uma determinada espcie em cultura pura (apenas
um tipo de microrganismo) a partir de um material contendo uma cultura mista (mais de
um tipo de microrganismo) deve-se proceder ao isolamento das culturas por um mtodo
adequado: inoculao em placas contendo meio slido (inoculao por estrias;
espalhamento em superfcie; inoculao por incorporao).
INOCULAO EM MEIO SLIDO/PLACA = CRESCIMENTO DE COLNIAS
= ISOLAMENTO
ESTRIAS crescimento de microrganismos isolamento em cultura pura (reduz
o nmero de clulas gradativamente em cada zona).
ESPALHAMENTO transferncia do meio lquido para o slido ideal para a
contagem de colnias (diluio).
INCORPORAO/POUR PLATE transferncia do inculo no meio agarizado
(ainda lquido, mas a baixa temperatura). Neste mtodo obtm-se colnias superfcie e
no interior do gar.
 MEIO LQUIDO LQUIDO transferncia do inculo de um meio lquido para
outro meio lquido estril com a auxlio de um ansa de sementeira.
INOCULAO DE POR PICADA Consiste na inoculao com uma ansa de
picada no interior de um meio agarizado num tubo de ensaio. Utilizado para teste de
motilidade em semisslido ou incubao em microaerofilia/anaerobiose.
CONSERVAO DE CLULAS VIVEIS
Conservao por refrigerao frigorfico/geladeira 4 C. Conservao a curto
prazo at um mximo de alguns meses (dependendo da espcie).
Conservao por congelamento arca frigorfica/freezer -20 C com o auxlio de
uma substncia que impea a formao de cristais de gelo (ex: glicerol). Conservao a
mdio/longo prazo durante alguns anos.
Conservao em azoto lquido armazenamento da cultura num recipiente
contendo azoto lquido temperatura de -196 C com o auxlio de uma substncia que
impea a formao de cristais de gelo. Conservao a longo prazo virtualmente ad
eternum.
Liofilizao prvio congelamento das culturas e posterior desidratao das
mesmas sob vcuo onde sero mantidas em ampolas. Conservao a muito longo prazo
virtualmente ad eternum.

3. CULTIVO DE MICRORGANISMOS
Necessidades nutricionais comuns a todos os organismos vivos: - fonte de carbono,
azoto e gua (absoro de nutrientes dissolvidos).
Cultivo de microrganismos meios contendo os nutrientes necessrios ao seu
crescimento
Factores que afectam o crescimento microbiano.
As condies principais que influenciam o meio fsico de um microrganismo so:
temperatura, presso osmtica/ hidrosttica, pH, atmosfera gasosa, potencial redox.
A taxa especfica de crescimento de um microrganismo () funo da concentrao de
nutrientes (ou substratos) presentes no meio de cultura, podendo ser expressa pela
equao de Monod (mantendo-se os outros parmetros fsicos invariveis):

=
+
taxa especfica de crescimento
mx valor de quando o microrganismo se encontra saturado de substrato (S)
KS constante de saturao (numericamente igual concentrao de substrato para a
qual a taxa de crescimento igual a metade da taxa de crescimento mxima ( =
Mx/2).
GRAFICAMENTE A TAXA DE CRESCIMENTO APRESENTADA COMO
FUNO DA CONCENTRAO DE SUBSTRATO.
OBS: Quando a concentrao de substrato atinge valores de saturao, a taxa
especfica de crescimento atinge o seu valor mximo (Mx). quando a concentrao
de substrato reduzida, os sistemas de permease das clulas no conseguem manter as
concentraes intracelulares de substrato saturantes, ou seja, a taxa especfica de
crescimento diminui.
Os microrganismos podem crescer numa determinada gama de temperaturas que pode
ser maior ou menor consoante o microrganismo.
A dependncia da velocidade de uma reaco enzimtica com a temperatura pode ser
dada pela equao de Arrenhius:

10 () = +
2,303

v velocidade da reao
Ea energia de activao da reao
R constante de gases ideais
T temperatura absoluta em Kelvin.
Temperatura ptima de crescimento: temperatura na qual uma espcie de
microrganismo cresce mais rapidamente; situa-se mais prxima do limite superior.
OBS: at um certo ponto, a velocidade das reaces enzimticas aumenta com o aumento
da temperatura; por outro lado, a composio fosfolipdica da membrana
citoplasmtica dos microrganismos pode alterar-se com a temperatura de
crescimento.

CLASSIFICAO SEGUNDO A GAMA DE TEMPERATURA PARA A QUAL UM

MICRORGANISMO APRESENTA UM MAIOR CRESCIMENTO:
Psicrfilos: crescem de 10 a 20C (temp. ptima ~15C); podem morrer temperatura
ambiente (25C) mesmo por um curto perodo de tempo (devido danificao de enzimas
e/ou da membrana citoplasmtica); encontrados em guas/solos frios tais como os
oceanos e regies polares. Ex: Pseudomonas, Flavobacterium e Alcaligenes (so capazes
de deteriorar os alimentos guardados por perodos prolongados a 4-10C).
Mesfilos: a maioria dos microrganismos mesfila; temperaturas ptimas de
crescimento variam de 25-40C; os microrganismos que crescem no limite inferior da
variao da temperatura mesofilica so principalmente as bactrias saprfitas;
microrganismos patognicos crescem no limite superior dessa variao (temperatura
corporal de 37 C )
Termfilos: crescem melhor entre 50-60C podendo no entanto crescer entre 40 a 85
C; explica-se em parte porque as suas enzimas so produzidas mais rapidamente do
que as enzimas dos mesfilos (quando danificadas so rapidamente substitudas e
adaptao de certas funes dos organelos a temperaturas mais elevadas); encontrados
em reas vulcnicas, nascentes quentes, etc; maioria procariota (clulas eucariticas no
crescem a temperaturas >60 C.
Hipertermfilos: crescem em temperaturas extremamente altas (maior que 100C)
termoflico termfilo termodrico

CLASSIFICAO DOS MICRORGANISMO EM RELAO AO SEU

COMPORTAMENTO FACE PRESENA DE OXIGNIO MOLECULAR:
aerbios, microaerfilos, facultativos e anaerbios.
Aerbios: 21% O2 para o crescimento estes microrganismos conseguem produzir
energia a partir dos nutrientes disponveis e quando o oxignio limitado podem crescer
mais lentamente.Cuidados no cultivo: meio slido: O2 facilmente disponvel; em meio
lquido: o oxignio dissolvido na camada superficial do meio pode ser rapidamente
consumido (usar agitadores mecnicos).
Microaerfilos: podem utilizar oxignio nas reaes qumicas para a produo de
energia mas, ao contrrio dos aerbios, no conseguem resistir aos nveis de oxignio
(21%) presentes na atmosfera, crescendo melhor a concentraes entre 1 a 15% de O2
(susceptibilidade aos radicais hidroxilo e perxido de hidrognio formados). Necessitam
de bolsas de incubao especiais com meio gasoso apropriado para o seu cultivo como
no caso da bactria Campylobacter jejuni/Helicobacter pylor.
Facultativos: possuem a capacidade de crescerem tanto em presena de ar atmosfrico
como em condies de anaerobiose. Apesar de no requererem oxignio para o seu
crescimento, obtendo energia pelo processo metablico de fermentao ou respirao
anaerbia, podem, no entanto, utiliz-lo para a produo de energia por respirao
aerbia. Os principais microrganismos facultativos pertencem famlia de bactrias
Enterobacteriaceae (Escherichia coli, etc.), bem como muitas espcies de leveduras
(Saccharomyces cerevisiae, etc.).
Anaerbios: no crescem na presena de ar atmosfrico pois podem ser mortos pelo
oxignio, no o utilizando para obteno de energia. A toxicidade do oxignio para
anaerbios estritos deve-se a certas molculas produzidas durante as reaces
envolvendo oxignio, como as que resultam na adio de um eletrn molcula de
oxignio, formando um radical superxido.
OBS: Aerbios, facultativos e alguns anaerbios possuem vrios mecanismos
protectores contra estas molculas txicas: produo da enzima superxido dismutase
que elimina os radicais superxido convertendo-os rapidamente em perxido de
hidrognio; este pode ser metabolizado por duas outras enzimas: a catalase, que o
converte em oxignio molecular e gua; e a peroxidase que o converte em gua.
Cultivo de bactrias anaerbias: em cmara de anaerobiose ou glove box; utilizao
de catalizador paldio para efetuar a reao de possveis resduos de O2 com H.
CLASSIFICAO DOS MICRORGANISMO CONSOANTE O VALOR DE PH
PTIMO PARA O CRESCIMENTO:
Acidfilos: cescem a valores cidos (pH entre 1 a 5,5) como guas de escoamento de
solos vulcnicos e de minas com valores
Neutrfilos: crescem a valores neutros (pH entre 5,5 a 8) como os oceanos com um pH
volta de 8 e guas polares em torno de 6.
Alcalfilos: Crescem a valores bsicos (pH entre 8,5 a 11) como guas de nascentes
(pH prximo a 10), ou solos ricos em amnia (pH volta de 11).
OBS: A maioria das bactrias desenvolve-se melhor em valores de pH entre 4 e 9
Por norma, os bolores e as leveduras tm uma variao de pH mais extensa do que as
bactrias com um pH ptimo para o seu crescimento mais baixo, a valores de pH entre
5 a 6.
Cultivo de microrganismo = pH NO CONSTANTE devido s reaes bioqumicas
= adicionar uma substncia tampo ao meio, como fosfatos, de modo a prevenir uma
variao elevada do pH

4. EXIGNCIAS NUTRICIONAIS E MEIOS DE CULTIVO

Elementos qumicos essenciais para o crescimento das clulas:
Macronutrientes quantidades relativamente elevadas; desempenham um papel
fundamental na estrutura e metabolismo celular. Os principais macronutrientes so o
carbono, azoto, hidrognio, oxignio, enxofre e fsforo.
Micronutrientes menores quantidades mas com funo essencial para a clula tal
como co-factores na actividade enzimtica. Os principais micronutrientes so o
mangans, cobalto, cobre, molibdnio e zinco.
gua (uma vez que representa entre 80 a 90% do peso total da clula).
C : carbohidratos, lpidos e protenas;
N: aminocidos, pptidos e protenas;
H, O: aminocidos (cistena e metionina);
P: sntese de cidos nucleicos e de adenosina trifosfato (ATP);
Na+: permease que transporta o acar melibiose na Escherichia coli;
Na+ e K+ na bomba de sdio e potssio;
Fe2+: enzimas como citocromos, catalases e na fixao do O2 na hemoglobina.
Categoria Nutricional Fonte de Fonte de Organismos
carbono energia
Fotoautotrficos CO2 Luz Agas, bactrias
fotossintticas
Fotoheterotrficos Compostos Luz Bactrias fotossintticas,
orgnicos arquebactrias halfilas
 Quimiolitoautotrficos CO2 Inorgnica Eubactrias nitrificantes e
oxidantes do enxofre
Quimiolitoheterotrficos Compostos Inorgnica Algumas arquebactrias
orgnicos metanognicas
Quimiorganoautotrficos CO2 Orgnica Eubactrias metilotrficas
autotrficas
Quimiorganoheterotrficos Compostos Orgnica Fungos, protozorios,
orgnicos maior parte das eubactrias

Meios utilizados para o cultivo de microrganismos em geral

Na determinao das necessidades nutricionais de um microrganismo, so utilizados
meios quimicamente definidos, isto , com uma composio exatamente conhecida.
Retirando ou adicionando um constituinte ao meio definido, pode-se saber se aquele
constituinte essencial para o crescimento do microrganismo.
Exemplo: determinao das necessidades nutricionais de trs microrganismos em
termos do triptofano e seus percursores.
Substratos do meio mnimo cido antranlico Indol Triptofano
Para cultivos de rotina no laboratrio ou estudo de microrganismos heterotrficos, por
norma utilizam-se meios de cultura complexos quimicamente definidos que podem
estimular o crescimento de uma grande variedade de microrganismos heterotrficos. Ex:
meios obtidos a partir de substratos naturais (extractos de carne, peptonas, extracto de
levedura, sangue).
Para uma identificao rpida de microrganismos em laboratrio:
Teste API:

Ou placas de Petri dividida em vrios compartimentos, que contm diferentes meios

solidificados para inoculao da suspenso microbiana.

Meios para o Cultivo de Fungos

Os fungos, tal como as bactrias, absorvem os nutrientes de que necessitam. A
absoro destes pelos fungos auxiliada por enzimas excretadas para o meio
(exoenzimas).
So organismos heterotrficos, podendo a maioria crescer em laboratrio numa
mistura simples contendo acar (fonte de carbono e energia), uma fonte de azoto
inorgnico ou orgnico e alguns minerais. Nota: alguns fungos necessitam de um
meio complexo com uma grande variedade de compostos orgnicos como
 vitaminas e que podem ser proporcionados por peptona, extracto de carne ou
extracto de levedura.
De um modo geral, os meios para cultivo de fungos possuem uma maior
concentrao de acar (4%) e um pH menor (3,8 a 5,6) do que os meios
bacterianos (por norma pH 6,5 a 7,5)

Meios com Finalidades Especiais (Meios Especiais)

Quando se pretende isolar, identificar ou enumerar microrganismos;

Meios gerais: permitem o crescimento de uma grande variedade de microrganismos (por
ex: caldo nutritivo, gua peptonada);

Meios enriquecidos: para alm dos componentes nutritivos contm factores de

crescimento especiais (ex: sangue ou soro); destinam-se ao cultivo de microrganismos
exigentes;

Meios selectivos: permitem o crescimento de apenas determinados microrganismos (o

crescimento de outros inibido); (por ex: meio de MacConkey);

Meios diferenciais: permitem evidenciar determinadas propriedades (geralmente

bioqumicas) de um microrganismo por forma a distingui-lo de outros que tambm
possam crescer no mesmo meio; (por ex: meios que contenham um determinado aucar
e um indicador de pH);

Meio de transporte ou de manuteno: usam-se para colheita, transporte e conservao de

amostras; devem manter viveis os microrganismos, mas no devem fornecer condies
para que estes se multipliquem.

Meios de Enriquecimento: quando se pretende obter em quantidade aprecivel uma

determinada espcie minoritria presente numa populao mista (favorece o crescimento
da espcie desejada em relao s outras espcies resultando num aumento considervel
da espcie inicialmente minoritria). Ex: caldo de selenito de sdio permite o
enriquecimento de fezes em Salmonella e Shigella (agentes causadores de toxinfeces
alimentares)

Meios para Ensaios Microbiolgicos

Permite determinar a concentrao mnima inibitria (MIC) do microrganismo em

relao a um antibitico, ou seja a menor concentrao do agente testado que inibe o
crescimento do microrganismo.

Mtodo de Kirby-Bauer: uma placa de Petri contendo meio slido inoculada com uma
amostra e, em seguida, o antibitico colocado no centro da placa impregnado num disco
de papel de filtro - amostras colocadas em cavidades feitas no meio solidificado em placa
previamente inoculado.
Os constituintes mais habituais dos meios de cultivos so:
gar: (polissacardeo obtidos de lagas marinhas; um agente gelificante usados nos
meios slidos e semi-slidos);
Peptonas: (ricas as pptidos e aminocidos; obtidas por digesto enzimtica de protenas
vegetais ou animais);
Extratos: (por ex: extracto de carne: contm bases orgnicas solveis, vitaminas e
minerais);
Sistema tampo: (utilizam-se para manter o pH do meio num determinado valor);
Indicador de Ph
Agentes redutores: (ex: cistena, tioglicolato; usam-se para o desenvolvimento de
microrganismos microaerfilos ou anaerbios)
Fluidos corporais: (ex: sangue ou plama; contm factores de crescimento e so usados
para microrganismos exigentes);
Substncias seletivas: (determinadas substncias so adicionadas com o propsito de
tornar o meio selectivo para determinados microrganismos; ex: determinados
antibiticos);
MORFOLOGIA BACTERIANA

MORFOFISIOLOGIA CELULAR BACTERIANA

Flagelos

Estruturas especiais de locomoo, constitudas pela protena flagelina, que formam

longos filamentos que partem do corpo da bactria e se estendem externamente
parede celular.
Um flagelo bacteriano divide-se em trs partes: corpo basal, uma estrutura curta em
forma de gancho e um filamento longo helicoidal;
Corpo basal: pequeno gancho central circundado por uma srie de anis. Gram(+) =
dois pares de anis (par externo ligado parede celular e interno ligado a membrana
cit.); Gram(-) = um par de anis (um anel ligado membrana e o outro ligado a parede
celular);
O flagelo propulsiona a bactria por movimento rotatrio dependente de energia
fornecida pela diferena de potencial de membrana (fluxo de ons H).
 Distribuio dos flagelos: atrquias (sem flagelo)

Fmbrias

Estruturas filamentosas mais curtas e delicadas que os flagelos, semelhantes a plos,

que se originam da membrana plasmtica, e so usados para fixao, e no para
motilidade.
So constitudas por uma protena denominada pilina.
Esto relacionadas com a aderncia s superfcies mucosas (fmbrias comuns)
colonizao. Pili F relacionado com a transferncia de material gentico durante a
conjugao bacteriana (fmbrias ou pili sexual codificadas pelo plasmdeo F).

Cpsula (glicoclice organizado)

Camada que circunda a clula bacteriana externamente a parede celular, de

consistncia viscosa e de natureza polissacardica (polissacardeo extracelular) ou
polipeptdica. Pode ser evidenciada por mtodos especiais de colorao (tinta
nanquim).
Funes: proteo da clula bacteriana contra desidratao, permitir a fixao da
bactria em vrias superfcies, evitar a adsoro de bacterifagos na clula
bacteriana.
Relacionada virulncia da bactria, pois confere resistncia fagocitose pelas
clulas de defesa do corpo em uma mesma espcie, amostras encapsuladas so mais
virulentas que as no-encapsuladas AUMENTA A CHANCE DE INFECO.

Parede Celular

Estrutura rgida que recobre a membrana citoplasmtica e ajuda a manter a forma

das clulas, alm de proteo, mantendo a presso osmtica intrabacteriana e
prevenindo expanso e eventual rompimento da clula.
Composio: peptidioglicano (mucopeptdeo ou murena) estrutura rgida da
parede: N-acetilglicosamina (NAG) cido N-acetilmurmico (NAM) tetrapeptdeo
(4 aminocidos)

Composio do tetrapeptdio: contm L e D aminocidos, sempre ligado ao NAM =

ligaes cruzadas entre o COOH terminal do aminocido de um tetrapeptdeo e o grupo
NH2 do aminocido do tetrapeptdeo vizinho.
PAREDE DAS GRAM POSITIVAS

Possuem maior quantidade de peptidioglicano, o que torna a parede dessas bactrias

mais espessa e rgida.

Composta por peptidioglicano e cidos teicicos (cadeias de polifosfato com resduos

de ribitol e glicerol) ou cidos lipoteiccicos.

PAREDE DAS GRAM NEGATIVAS

Mais complexa - a quantidade de peptidioglicano menor, e possui uma

membrana externa envolvendo a fina camada de peptidioglicano, que se situa no
espao periplasmtico.
MEMBRANA EXTERNA: Serve como barreira seletiva que controla a
passagem de algumas substncias.

Estrutura: bicamada assimtrica, contendo fosfolipdios, semelhante

MP.

Internamente camada de fosfolipdeos e lipoprotena, que est

ancorada ao peptidioglicano.

Externamente camada impermevel de lipopolissacardeo (LPS)

molcula anfiptica.

A membrana externa das bactrias Gram negativas contm protenas

(OMP), que formam canais por onde penetram diversas substncias.
 Essas protenas presentes na membrana externa das Gram negativas
constituem aprox. 50% da membrana, no relacionadas com as protenas
da MP, e possuem diversas funes.

LPS: 3 segmentos ligados covalentemente: lipdio A,cerne do polissacardeo e

antgenos O. A poro lipdica do LPS tambm chamada de ENDOTOXINA. O
LPS pode ser txico, causando febre, diarria, destruio de hemcias e um
choque potencialmente fatal. Efeito protetor nas bactrias Gram negativas
intestinais (resistncia solubilizao pelas enzimas intestinais e bile). Obs: no
se pode usar antibitico que age na lise da parede celular de gram negativas =
choque anafiltico.

Membrana citoplasmtica: bicamada que se situa entre a parede celular e o interior da

clula (protoplasma); atividade enzimtica especfica e transporte de molculas para
dentro e fora da clula

Mesossomas: invaginaes da membrana artefatos de microscopia; ou tbulos

proeminentes em bactrias Gram(+) e podem localizar-se prximo da membrana
citoplasmtica ou penetrar no interior do citoplasma.

Mesossomas centrais ligados ao material nuclear replicao do DNA e diviso

celular.
 Mesossomas perifricos penetram pouco no citoplasma e no esto associados
com o material nuclear; envolvidos na secreo de certas enzimas, como
penicilinases que destroem a penicilina.

Estrutura e composio qumica da membrana celular:

Tem uma espessura de cerca de 7.5 nm sendo composta principalmente por fosfolpidos
(20 a 30%) e protenas (50 a 70%).

Ao contrrio dos eucariotas, no contm esteris sendo consequentemente menos rgidas

(excepo: Micoplasmas).

Os fosfolpidos formam uma bicamada cuja fluidez essencial para vrias funes da
membrana (protenas embebidas podem-se deslocar modelo de mosaico fludo).

Funo da membrana celular:

Alberga alguns dos processos essenciais para a clula

Barreira muito mais selectiva e eficaz para a maior parte das molculas hidrossolveis do
que a parede clula

Contm protenas especficas (permeases) que transportam pequenas molculas

especficas para dentro e fora da clula - contm enzimas envolvidas na produo de
energia e sntese da parede celular

Assiste na replicao do DNA

Difuso e osmose atravs da membrana citoplasmtica:

Movimento de solutos atravs membrana semipermevel, ou selectivamente permevel:

Processo passivo (sem gasto de energia) = difuso simples (transporte celular de algumas
molculas pequenas atravs da membrana citoplasmtica (O2 e CO2 dissolvidos)

As permeases so enzimas transportadoras que participam no processo de difuso a favor

do gradiente de concentrao, atuando sobre aminocidos e carboidratos, facilitando a
passagem de certas substncias que, por difuso simples, demorariam muito tempo para
atravessar a membrana de modo a igualar as concentraes. Esse processo
particularmente comum no movimento da glicose, de alguns aminocidos e vitaminas e
alguns ons.

Osmose: As molculas dos solventes como a gua, tambm podem atravessar livremente
a membrana semipermevel, fluindo de uma regio de elevada concentrao destas
molculas (maior diluio de soluto) para uma de baixa concentrao (maior
concentrao de soluto)

As clulas microbianas esto expostas a trs tipos de condies osmticas num ambiente
aquoso: isotnicas, hipotnicas e hipertnicas.
Isotnica
Concentrao total dos solutos similar de ambos os lados da membrana;
No existe fluxo da gua quer para dentro quer para fora da clula.

Hipotnica
Concentrao dos solutos no meio mais baixa do que no interior da clula;
A gua entra na clula (nota: muitas bactrias crescem neste tipo de meios sendo a parede
celular rgida a responsvel por evitar que a clula arrebente)

Hipertnica
Maior concentrao de solutos no exterior da clula;
Fluxo de gua do interior para o exterior;
Contraco da membrana citoplasmtica a partir da parede celular.

Extruturas celulares internas: rea citoplasmtica e nucleide

rea citoplasmtica:
Citoplasma: 80 % de gua, cidos nuclicos, protenas, carboidratos, compostos
de baixo peso molecular, lipdios, ons inorgnicos. Stio de reaes qumicas.
Ribossomos: ligados a uma molcula de mRNA, so chamados de
poliribossomos.
Presentes em grande nmero nas clulas bacterianas. So menores ribossomos
70S
Responsveis pela sntese proteica
Alvo de ao de antibiticos (ex: cloranfenicol e eritromicina)

Grnulos de reserva (incluses): os procariotas podem acumular no citoplasma

substncias sob a forma de grnulos, constitudos de polmeros insolveis (ex.: grnulos
de glicognio, amido, lipdios, polifosfato, enxofre e xido de ferro).

Nucleide: cromossomo bacteriano, constitudo por uma nica molcula dupla fita
circular de DNA no delimitado por membrana nuclear e sem a presena de histonas.
Contm as informaes necessrias sobrevivncia da clula e capaz de replicao.

Elementos extracromossomais
Plasmdeos:, molculas menores de DNA, dupla fita, circulares, cujos genes no
codificam caractersticas essenciais, mas podem conferir vantagens seletivas para as
bactrias que os possuem (ex.: genes de resistncia a antibiticos, metais
txicos,produo de toxinas, etc). Auto-duplicao independente do cromossomo
bacteriano, e podem existir vrias cpias dentro da clula.

Formas Latentes de Microrganismos Procariticos

Esporos e Cistos: formas latentes (em algumas bactrias) que podem sobreviver em
condies desfavorveis (ex: desidratao, condies extremas de calor).

Esporos
Tambm chamados de endosporos (porque se formam dentro da clula). Contm
pouca gua no citoplasma, possuem parede celular muito espessa, so altamente
resistentes a agentes fsicos e qumicos, devido a sua capa impermevel de
protena tipo queratina (associado ao clcio) e presena de cido dipicolnico.
 Tm pouca atividade metablica, pode permanecer latente por longos perodos -
forma de sobrevivncia, e no de reproduo. Ex. Bacillus e Clostridium.
Funo: proteo da clula vegetativa das adversidades do meio ambiente
(limitao de nutrientes, temperatura e dessecao). Sua formao leva em torno
de 6 horas.

MICROSCOPIA

Permite observaes fora do alcance do olho humano;

Microscpio ptico: sistema de lentes que dirige um feixe de luz para o objeto;
Microscpio electrnico: utiliza um campo magntico para encaminhar um feixe
de electres.
Microscopia ptica

Campo claro: luz direta que ilumina todo o campo da amostra; utilizao de corantes
(provoca a morte dos microrganismos)

Campo escuro: luz indireta microrganismo observado como uma estrutura brilhante sobre
um fundo escuro (estudo do movimento e forma de microrganismos vivos)

Contraste de fase: utiliza um condensador especial que direcciona a luz em todas as

direes (imagem com vrios graus de luminosidade = maior contraste entre os materiais
de diferentes densidades no interior da clula). Possibilita o estudo da estrutura interna da
clula sem recurso a corantes.

Fluorescencia: fonte de luz com um comprimento de onda especificamente escolhido de

modo a evidenciar um corante fluorescente. Tcnica mais rpida e efectiva no
reconhecimento de certos microrganismos que as clssicas tcnicas de cultivo de
microrganismos.

Microscopia electronica

Possibilidade de se visualizarem organismos muito pequenos ou a estrutura interna dos

microrganismos.

Microscopia electrnica de transmisso (TEM) Nesta tcnica o espcime cortado em

seces ultra-finas e de seguida atravessado por um feixe de electres formando uma
imagem do corte do microrganismo.
Microscopia electrnica de varrimento (SEM) Esta tcnica utiliza um feixe de electres
extremamente fino de modo a varrer a superfcie de uma preparao coberta com um
filme de metal obtendo deste modo uma imagem tridimensional dos microrganismos. A
imagem fornece dados importantes sobre certos aspectos fsicos dos microrganismos tais
como a aderncia a superfcies.

A populao total final (N) de uma cultura microbiana a partir de uma clula de 2n:

A determinao do nmero de geraes (n) pode ser facilmente obtida por:

Tempo de gerao (g): tempo para uma populao duplicar

AVALIAO QUANTITATIVA DO CRESCIMENTO MICROBIANO

De modo a se poder seguir o crescimento de uma qualquer populao microbiana

necessrio proceder a uma avaliao quantitativa dessa populao.
Para esse efeito existe uma larga variedade de tcnicas envolvendo equipamentos que
podem variar de uma simples cmara de contagem at aparelhos electrnicos que
determinam o nmero de clulas numa suspenso. Dois dos mtodos mais comuns
baseiam-se na determinao do nmero de clulas e da massa celular.

Contagem directa ao microscpio

Deposio de volume especfico em cmara de Neubauer e contagem directa dos
microrganismos ao microscpio.

Contagem em placa
Efectuadas diluies para obter 30< UFC <300.
UFC < 30 Sobrestimao do nmero real.
UFC > 300 Subestimao (sobreposicionamento).
Filtrao em membrana
Reteno de microrganismos existentes numa suspenso na superfcie da membrana
filtrante e deposio em agar diferencial/selectivo para microrganismos especficos.
Especialmente til para volumes elevados de lquidos com baixas concentraes de
microrganismos.

Mtodos de determinao da massa celular

1. Mtodos directos: envolvem a pesagem da biomassa;
2. Mtodos indirectos: baseiam-se em parmetros relacionados com a concentrao
da massa celular como a turbidimetria.

Os mtodos directos envolvem, por norma, a determinao do peso seco das clulas
presentes num determinado volume de cultura. Neste mtodo as clulas so
primeiramente separadas (filtrao ou centrifugao), lavadas e secas a uma dada
temperatura at um peso constante sendo, contudo, um processo moroso.
Quando se pretende apenas determinar rendimentos em biomassa podem-se utilizar
processo mais rpidos como os mtodos pticos (turbidimtricos), que permitem estimar
a concentrao celular de uma dada cultura. Estes mtodos baseiam-se na absorvncia.
Sabe-se que dentro de uma determinada gama de valores de absorvncia (at ~0,7) a
relao entre esta e a concentrao celular linear (fazer diluies para concentraes
superiores). necessrio proceder-se a uma calibrao (para cada espcie e comprimento
de onda.

Curva de crescimento de microrganismos unicelulares em sistema fechado.

O crescimento celular microbiano num recipiente com meio lquido em sistema fechado
implica que no haja adio suplementar de nutrientes nem remoo de produtos
metablicos excretados ao longo do tempo de cultura.
Neste tipo de sistema, a partir do tempo zero as clulas comeam a multiplicar-se - o
nmero de clulas aumenta at ao momento em que existe depleo de nutrientes ou uma
acumulao significativa de produtos metablicos nocivos at paragem do crescimento.
A anlise da curva de crescimento em sistema fechado demonstra a existncia de 4 fases
distintas:
1. Fase de latncia ou adaptao (Lag): Perodo inicial de adaptao sem crescimento em
termos do nmero de clulas, mas sendo metabolicamente activas, reparando os danos
celulares e sintetizando enzimas.
2. Fase de crescimento balanceado ou exponencial (Log): Perodo de rpido crescimento
balanceado com aumento dos constituintes celulares e do nmero de clulas.
3. Fase estacionria: Perodo de crescimento global nulo derivado da equivalncia entre
o nmero de clulas produzido por clulas viveis e o suprimido por fenmenos de
depleo de nutrientes ou acumulao de produtos txicos.
4. Fase de morte celular: Perodo de declnio da populao vivel at morte de todas as
clulas microbianas pela depleo de nutrientes e acumulao de produtos txicos.

FUNDAMENTOS DO CONTROLO MICROBIANO

Agentes antimicrobianos: matam os microrganismos ou previnem o seu crescimento

Microbicidas: agentes antimicrobianos que matam os microrganismos (bactericida,

viricida ou fungicida, segundo o tipo de microrganismo destrudo).
Nota: a destruio de todos os microrganismos presentes num material, incluindo os
esporos, designa-se por esterilizao.
Microbiostticos: agentes antimicrobianos que apenas inibem o crescimento dos
microrganismos (como os fungistticos e bacteriostticos).

Padro de morte numa populao microbiolgica

Em microbiologia o critrio de aferio da morte de um microrganismo baseia-se na

capacidade de se reproduzir. Os microrganismos quando expostos a um agente
antimicrobiano no so mortos instantaneamente, mas a uma taxa constante ao longo de
um determinado tempo de contacto. Este padro caracterstico denominado de morte
exponencial.

Condies que influenciam a actividade antimicrobiana

Tamanho da populao Populaes maiores de um microrganismo resistem mais

tempo aos agentes microbianos do que populaes menores.
Intensidade ou concentrao do agente antimicrobiano
Tempo de exposio
Temperatura de exposio De um modo geral, quanto maior a temperatura de
exposio ao agente antimicrobiano maior ser o nmero de microrganismos mortos.
Natureza do meio ou material Diversas propriedades podem afectar a eficcia do
agente antimicrobiano, tais como a viscosidade e pH, entre outros.
Tipo de microrganismos variao da resistncia aos antimicrobianos devido s suas
diferentes caractersticas estruturais (constituio da parede celular, etc).
Ex: maior resistncia ao calor das bactrias Gram(+) em relao s Gram(-) mas menor
resistncia a algumas substncias qumicas.

Agentes utilizados no controlo microbiano

Agentes fsicos: temperatura, radiao, filtrao, desidratao.
Agentes qumicos: compostos fenlicos, lcoois, halgenios, metais pesados, outros.

Agentes qumicos de controlo de microrganismos

Calor mido:
mais eficiente na destruio de microrganismos do que o calor seco porque causa a
coagulao e desnaturao das protenas ao passo que o calor seco causa a oxidao dos
constituintes orgnicos das clulas (a desnaturao das protenas ocorre a temperaturas e
tempos de exposio menores que os requeridos para a oxidao).
Os esporos so as formas de vida mais resistentes ao calor hmido sendo os endsporos
bacterianos os mais resistentes de todos (para a sua destruio: 121 C durante 15 a 20
minutos). As clulas vegetativas, na sua maioria, podem ser destrudas por calor hmido
a 60-70 C durante 5 a 10 minutos.
Diferentes mtodos: Vapor de gua, autoclavagem, gua em ebulio, pasteurizao.

Calor Seco:
Dependendo da temperatura utilizada pode permitir a destruio dos microrganismos.
Como no to eficiente quanto o calor hmido, temperaturas e tempos de exposio
mais elevados devem ser utilizados.
Por norma, valores de 160-180 C durante cerca de duas horas so utilizados para a
esterilizao de materiais de vidro em laboratrio ou de outros materiais que no possam
ser expostos humidade.

Agentes qumicos de controlo de microrganismos

Agente qumico antimicrobiano: agentes que matam os microrganismos ou previnem o
seu crescimento;
Esterilizante: agente qumico que realiza uma esterilizao, isto , destri todos os
microrganismos (forma vegetativa e esporos);
Desinfectante: agente qumico que elimina as formas vegetativas dos microrganismos
patognicos, mas no as formas esporuladas. Este termo normalmente associado a
substncias utilizadas em objectos inanimados sendo que, o termo desinfeco designa o
processo que se destina a destruir microrganismos infecciosos;
Germicida: agente qumico que elimina as formas vegetativas, mas no as esporuladas
(difere do desinfectante no facto de os microrganismos eliminados no serem
necessariamente patognicos).
Anti-sptico: agente qumico normalmente aplicado na superfcie do corpo humano que
tem por objectivo prevenir o crescimento dos microrganismos. Actuam provocando quer
a morte dos microrganismos quer a inibio da sua actividade metablica.

CLASSIFICAO DE ANTIBITICOS
Espectro antimicrobiano
Mecanismos de aco
 Estirpe produtora
Forma de biossntese
Estrutura qumica

Lactmicos
Inibidores da sntese da parede celular (peptideoglicano)
Incluem as penicilinas, cefalosporinas, cefamicinas, carbapenemos e monobactamos.

Penicilina (principal)
As penicilinas naturais (Penicilina G e Penicilina V) so produzidas por fungos
(Penicillium)
Penicilina G: administrao parentrica (destruda pelo cido estomacal) - streptococos,
meningococos, pneumococos, espiroquetas, clostrdios, bacilos aerbios Gram +,
estafilicocos no resistentes
.
OBS: Os antibiticos antiparietais actuam nas diferentes fases da biossntese do
peptideoglicano: nas fases citoplasmticas (ex: fosfomicina), na fase membranar
(vancomicina e teicoplatina) e na fase parietal (-lactmicos). Independentemente do seu
local de aco, todos eles afectam a integridade da parede celular, sendo por isso
bactericidas. Estes antB no afectam as clulas dos animais.

RESISTNCIA A ANTIBITICOS
Pode ser natural (ex: micoplasmas) ou adquirida; esta ltima ocorre numa proporo
varivel de isolados de uma mesma espcie ou gnero, podendo ser varivel ao longo do
tempo;
A variabilidade na susceptibilidade bacteriana justifica a realizao do antibiograma, de
forma a permitir uma escolha teraputica adequada.
Mecanismos de resistncia adquirida: mutaes em genes especficos ou a aquisio
horizontal de genes de resistncia localizados em DNA mvel (transposes e plasmdeos.

Mecanismos de resistncia adquirida mais frequentemente observados:

Reduo na quantidade de antB que atinge o alvo (impermeabilidade ou efluxo);
exemplo: a resistncia de P. aeruginosa ao imipenemo pode dever-se deficincia na
porina OprD;
Modificao do alvo: exemplo: mutao nos genes que codificam a girase podem
condicionar a actividade das fluorquinolonas;
Inactivao do antibitico; exemplo: beta-lactamases;
Hiperproduo do alvo ou aparecimento de uma alternativa ao alvo.