Pili seks
6
2. Transformasi : pengambilan DNA oleh bakteri dari
lingkungan di sekelilingnya
DNA asing Kromosom bakteri
(DNA bakteri)
DNA fage
Kromosom bakteri
DNA yang masuk ke dalam sel bakter
1. dapat berintegrasi dengan DNA atau kromosom bakteri
sehingga terbentuk DNArekombinan atau kromosom
rekombinan
2. tidak dapat berintegrasi dengan DNA atau kromosom
bakteri
.
DNA asing Kromosom bakteri rekombinan
Bahan Untuk Rekayasa Genetika
DNA Insert ( Gene of Interest)
Vektor
Enzim Restriksi
Enzim Ligase
Inang
Tahapan Rekayasa Genetika
PENYEDIAAN DNA: SISIPAN DAN
VEKTOR
LIGASI: PENGGABUNGAN DNA
SISIPAN DAN VEKTOR
TRANSFORMASI: PERBANYAKAN DI
SEL INANG
SELEKSI: SEL MENGANDUNG
PLASMID
DETEKSI: KEBERADAAN DNA
SISIPAN, KEBENARAN DNA SISIPAN
(UKURAN DAN URUTAN NUKLEOTIDA)
DNA INSERT dan ENZIM RESTRIKSI
DNA INSERT
Produk PCR
DNA Genom
mRNA
ENZIM RESTRIKSI (RESTRICTION ENZYNMES)
ATAU ENDONUKLEASE
Enzim yang dapat memotong DNA dengan cara yang spesifik.
Enzim dihasilkan oleh bacteri yang secara alami berfungsi
sebagai mekanisme pertahanan melawan serangan virus. Bacteri
sendiri melindungi DNA-nya terhadap enzim restrksi melalui
proses metilisasi.
Genus: Escherichia
Species: coli
Strain: R
5.ACTGTACGGATCCGCTA.3
3.TGACATGCCTAGGCGAT.5
BamHI
5.ACTGTACGGATCCGCTA.3
3.TGACATGCCTAGGCGAT.5
5.ACTGTACG GATCCGCTA.3
3.TGACATGCCTAG GCGAT.5
sticky ends
EcoRV
5.ACTGTACGATATCGCTA.3
3.TGACATGCTATAGCGAT.5
5.ACTGTACGAT ATCGCTA.3
3.TGACATGCTA TAGCGAT.5
blunt ends
ENZIM DNA LIGASE
5.ACTGTACAGATCCGCTA.3
3.TGACATGTCTAGGCGAT.5
DNA ligase
5.ACTGTACAGATCCGCTA.3
3.TGACATGTCTAGGCGAT.5
DNA ligase
5.ACTGTACAGATCCGCTA.3
3.TGACATGTCTAGGCGAT.5
VEKTOR
Plasmid
Plasmid adalah molekul DNA kecil berbentuk sirkuler yg terdapat pada
bakteri
DNA kromosom
DNA plasmid
Pada plasmid terdapat sisi pemotongan enzim restriksi yang dapat disisipi
gen yang dikloning,
Plasmid essentials
Origin of replication (ori)
DNA polymerase and other proteins required
for DNA synthesis bind to the ori
Selectable marker (usually drug resistance)
Provides a way to select for bacteria that
contain your plasmid
Multiple cloning site (MCS)
Region with several restriction enzyme recognition sequences that provide
cloning sites for insertion of your gene of interest
Contoh plasmid
pBR322
Apabila gen ketahanan ini disisipkan gen lain, maka sifat ketahanannya
hilang.