Tcnicas de deteccin de

agentes de riesgo (qumicas,

microbiolgicas, bioqumicas,
moleculares).

4.1 Anlisis qumico cualitativo, 4.2 Unidades formadoras de

4.3 Deteccin, identificacin y 4.4 Deteccin e identificacin va
cuantitativo e instrumental en colonias y su identificacin
cuantificacin va ELISA. PCR.
alimentos. morfolgica.

Las UFC son el nmero mnimo

QUIMICA ANALITICA SE DIVIDE
EN DOS CAMPOS DE ACTUACION
Cualitativa
Para complementar cualquiera
de estos objetivos (cualitativos o
cuantitativos), el procedimiento Los reactivos se clasifican en
del cual se vale la qumica cuatro grandes grupos:
analtica se denomina mtodo
analtico.
El mtodo analtico: Conjunto de
operaciones fsicas y qumicas
que permite identificar y/o
cuantificar un componente
Cuantitativa
qumico, al cual se denomina
analito en el sistema material
que lo contiene, al cual se le
denomina matriz.
de clulas separables sobre la
En microbiologa, la unidad
superficie o dentro de un medio
formadora de colonias
de agar semislido, que da lugar
(abreviadamente, UFC) es una
al desarrollo de una colonia
unidad de medida empleada en
visible del orden de decenas de
la cuantificacin de
millones de clulas
microorganismos, es decir, el
descendientes. Muchas bacterias
nmero de bacterias o clulas
crecen en pares (diplococos),
fngicas (levaduras) viables en
cadena (estreptococos) o
una muestra lquida o slida.
racimos (estafilococos), as como
clulas individuales.
Reactivos crudos
El propsito del recuento de las
placas es estimar el nmero de
clulas presentes en funcin de
su capacidad para dar lugar a
colonias en condiciones
especficas de medio,
temperatura y tiempo nutriente.
ELISA: mtodo de deteccin
Tcnicas basado en la especificidad PCR
antgeno-anticuerpo (Ag-Ab)
Permite la deteccin de Ag
Es la reaccin en cadena de la
mediante la unin de Ab
polimerasa, es una tcnica de
especficos que directa o
biologa molecular descrita en
indirectamente producen una El PCR consiste en tres pasos
TCNICA DE VERTIDO EN PLACA 1986 por Kary Mullis, cuyo
reaccin (seal o color) cuyo esenciales
objetivo es obtener "in Vitro" un
producto es visible y puede ser
gran nmero de copias de un
medido
fragmento de ADN.
espectrofotomtricamente.

Desnaturalizacin: Sirve para

Anlisis cualitativo: Finalidad,
identificar cuales son los
componentes que estn
presentes en una muestra.
Anlisis cuantitativo:
Determinar cuanto hay de cada TCNICA DE EXTENSIN
Reactivos tcnicos CLASIFICACION DE ELISA
componente en la muestra SUPERFICIAL EN PLACA
evaluada.
ELISA COMPETITIVO: En este
mtodo, el anticuerpo de la
muestra va a competir con el
conjugado por un nmero
limitado de sitios de unin del
antgeno. Habr ausencia de
Mtodos de anlisis gravimtrico Reactivos analticos
color en una muestra positiva
debido a que el sustrato no
encontrar a la enzima porque el
conjugado ha sido desplazado
por el anticuerpo presente en la
muestra.
Mtodos de anlisis volumtrico Reactivos puros
separar mediante temperatura
(94) la molcula de ADN a
cadena sencilla, que servirn
como moldes para la sntesis de
los fragmento respectivos.
ELISA NO COMPETITIVO:
Consiste en enfrentar la muestra
con el antgeno o anticuerpo que Alineacin: La temperatura se
est en la fase slida. Si una reduce (65C) permitiendo el
muestra es positiva se formar el reconocimiento de las molculas
complejo antgeno-anticuerpo y iniciadoras a la secuencia blanco
al agregar el conjugado del ADN molde .
reaccionar con el respectivo
Alargamiento o extensin: La
sustrato desarrollando color.
molcula iniciadora mediante la
enzima ADN polimerasa a 72C
comienza a compiar la cadena
complementaria, lo mas
Clasificacin de ELISA recomendable es que el ADN
polimerasa seleccionada tolere
la temperatura de
desnaturalizacin y se mantenga
activa durante el No. de ciclos
que se requieran.

Directo Indirecto Sandwich ELISpot

emplea dos anticuerpos: uno

permite la deteccin del
antgeno con un anticuerpo
especfico conjugado con una
enzima como sistema de
marcaje.
primario contra el antgeno y
uno secundario marcado contra
el primario. La deteccin tiene
mayor sensibilidad por presentar
una amplificacin de seal
debida a la unin de dos o ms
anticuerpos secundarios por
cada primario
Las clulas qu se estimularon
en una placa de microtitulacin
Ensayo de captura de antgeno y perrecubierta con un anticuerpo
deteccin mediante especfico anti-analito; en
inmunocomplejos respuesta a la estimulacin, las
clulas liberan citocinas que se
unen al anticuerpo anti-analito.