Laporan Tetap Mirobiologi Umum Kelompok 14

LAPORAN TETAP
MIKROBIOLOGI UMUM
OLEH
KELOMPOK XIV
PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN

FAKULTAS TEKNOLOGI PANGAN DAN AGROINDUSTRI
UNIVERSITAS MATARAM
2016
HALAMAN PENGESAHAN
Laporan ini disusun sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan mata
kuliah Mikrobiologi Umum pada semester ganjil tahun 2016/2017 di Fakultas
Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram.
Mataram, 28 Desember 2016
Mengetahui,
Co. Assisten Praktikum Mikrobiologi Umum Praktikan,
Parman Salimudin Hasmi Nurkayati

NIM. J1A013099 NIM. J1A015032
Hasfi Yuliana Imam Adriansyah

NIM. J1A014038 NIM. J1A015038
Hidayatul Islam Indrian Wahyuningsih

NIM. J1A014039 NIM. J1A015040
Imam Budi Mulyawan Juanti Lusiningtyas

NIM. J1A014043 NIM. J1A015042
Lalu Noval Urbaya Zintha Dewi Meintari

NIM. J1A014051 NIM. J1A015044
Mirriyadhil Jannah
NIM. J1A014067
Nadawiatul Hardianti
NIM. J1A014071
Nifo Winona Al Gasyiya

NIM. J1A014079
Raudatul Yunita
NIM. J1A014102
Roni Kurnia Putra

NIM. J1A014109
Menyetujui,
Koordinator Praktikum Mikrobiologi Umum
i
Moegiratul Amaro, S.TP., MP., MSc.
NIP. 19870506 201504 2 004
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah
memberikan rahmat serta hidayahnya sehingga Laporan Tetap Praktikum
Mikrobiologi Umum ini dapat terselesaikan. Laporan ini disusun sebagai syarat
untuk menyelesaikan kuliah Mikrobiologi Umum. Laporan ini berisi kumpulan
dari laporan mingguan yang telah dibuat selama praktikum berlangsung sesuai
dengan urutan acaranya.
Kesempatan ini kami mengucapkan terima kasih kepada berbagai pihak
yang telah membantu dalam penyusunan laporan tetap ini diantaranya yaitu para
Co. Assisten yang telah mendampingi dan mengarahkan praktikum serta
penyusunan laporan. Tak lupa juga kepada teman-teman yang telah memberikan
bantuan dalam penyusunan laporan, serta berbagai pihak yang terlibat. Kami
menyadari bahwa dalam penyusunan laporan ini masih terdapat banyak
kekurangan. Oleh karena itu, kritik dan saran yang bersifat konstruktif sangat
diharapkan demi terciptanya karya yang lebih baik lagi di masa mendatang.
Demikian laporan ini disusun agar dapat diterima dan digunakan sebagai
acuan baik bagi penulis maupun bagi para pembaca.
Mataram, 23 Desember 2016
Kelompok XIV
iii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................. ii
KATA PENGANTAR .......................................................................................iii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... iv
DAFTAR TABEL ............................................................................................viii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... ix
ACARA I PENGENALAN ALAT-ALAT PRAKTIKUM
Pendahuluan ............................................................................. 1
Tinjauan Pustaka ....................................................................... 3
Pelaksanaan Praktikum ............................................................. 5
Hasil Pengamatan ..................................................................... 6
Pembahasan ............................................................................. 17
Kesimpulan ............................................................................. 19
ACARA II MEDIUM DAN CARA PEMBUATAN MEDIUM
Pendahuluan ........................................................................... 20
Tinjauan Pustaka ..................................................................... 22
Pelaksanaan Praktikum ........................................................... 25
Hasil Pengamatan ................................................................... 27
Pembahasan ............................................................................. 28
Kesimpulan ............................................................................. 32
ACARA III TEKNIK ISOLASI MIKROBA
Pendahuluan ........................................................................... 33
Pembahasan ............................................................................. 42
Kesimpulan ............................................................................. 47
ACARA IV MORFOLOGI KOLONI BAKTERI
Pendahuluan ........................................................................... 48
Pembahasan ............................................................................. 56
Kesimpulan ............................................................................. 59
ACARA V PERHITUNGAN JUMLAH KOLONI BAKTERI
Pendahuluan ........................................................................... 60
iv
Pembahasan ............................................................................. 73
Kesimpulan ............................................................................. 76
ACARA VI PENGECATAN GRAM
Pendahuluan ........................................................................... 77
Pembahasan ............................................................................. 85
Kesimpulan ............................................................................. 88
ACARA VII MORFOLOGI JAMUR BENANG
Pendahuluan ........................................................................... 89
Pembahasan ............................................................................. 94
Kesimpulan ............................................................................. 98
ACARA VIII MORFOLOGI KHAMIR
Pendahuluan ........................................................................... 99
Tinjauan Pustaka ................................................................... 100
Pelaksanaan Praktikum ......................................................... 102
Hasil Pengamatan ................................................................. 103
Pembahasan ........................................................................... 105
Kesimpulan ........................................................................... 108
ACARA IX PENGARUH FAKTOR LINGKUNGAN TERHADAP
PERTUMBUHAN
Pendahuluan ......................................................................... 109
Tinjauan Pustaka ................................................................... 111
Pelaksanaan Praktikum ......................................................... 113
Hasil Pengamatan ................................................................. 114
Pembahasan ........................................................................... 115
Kesimpulan ........................................................................... 117
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 118
v
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1.1 Hasil Pengamatan Pengenalan Alat-Alat Praktikum ..........................6
Tabel 2.1 Hasil Medium dan Cara Pembuatan Medium.....................................25
Tabel 3.1 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Gores Medium
NA. .....................................................................................................38
Tabel 3.2 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Gores Medium
NA Miring ..........................................................................................38
Tabel 3.3 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Sebar .................39
Tabel 3.4 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Sebar (Jamur) ....39
Tabel 3.5 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Tuang ................40
Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri .....................................54
Tabel 5.1 Hasil Pengamatan Perhitungan Jumlah Koloni Bakteri Bacillus
cereus Metode Sebar ..........................................................................66
Tabel 5.2 Hasil Pengamatan Perhitungan Jumlah Koloni Bakteri Bacillus
cereus Metode Tuang .........................................................................67
Tabel 6.1 Hasil Pengamatan Pengecatan Gram ..................................................83
Tabel 7.1 Hasil Pengamatan Morfologi Jamur Benang ......................................93
Tabel 8.1 Hasil Pengamatan Morfologi Khamir.................................................103
Tabel 9.1 Hasil Pengamatan Pengaruh Faktor Lingkungan Terhadap
Pertumbuhan Bakteri ..........................................................................114
vi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1 Alat-alat Praktikum ............................................................................6
Gambar 2 Pengecatan Gram................................................................................82
Gambar 3 Morfologi Jamur .................................................................................93
Gambar 4 Morfologi Khamir ..............................................................................103
vii
1
ACARA I
PENGENALAN ALAT-ALAT PRAKTIKUM
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Mikrobiologi adalah sebuah cabang ilmu pengetahuan yang mempelajari
tentang mikroorganisme. Mikrobiologi dimulai sejak ditemukannya mikroskop
dan menjadi bidang yang sangat penting dalam ilmu biologi setelah Louis Pasteur
dapat menjelaskan proses ferrmentasi anggur dan membuat serum rabies.
Mikroorganisme atau mikroba adalah mikroorganisme berukuran sangat kecil dan
hanya bisa diamati dengan mikroskop yang terdapat pada laboratorium.
Laboratorium mikrobiologi misalnya, memiliki alat-alat yang memiliki
bentuk, fungsi dan cara penggunaan yang berbeda-beda. Misalnya mikroskop
yang memiliki bentuk kompleks, berfungsi untuk mengamati objek yang kecil dan
cara penggunaan yang sedikit rumit. Selain mikroskop terdapat pula alat-alat yang
lain, seperti pipet tetes, oven, laminar flow, lampu bunsen dan erlnmeyer.
Biasanya peralatan dalam laboratorium dibagi menjadi dua yakni, peralatan gelas
(glassware) dan peralatan bukan gelas (non glassware).
Salah satu hal yang menunjang dalam pembelajaran mikrobiologi adalah
laboratorium. Laboratorium digunakan untuk melakukan percobaan-percobaan
yang dilakukan untuk memahami lebih dalam tentang hal-hal yang berkaitan
dengan jasad renik. Peralatan merupakan suatu bagaian yang mendasari dalam
pembentukan laboratorium, baik itu laboratorium yang sederhana (praktikum)
maupun untuk tujuan penelitian. Pengenalan alat-alat laboratorium merupakan hal
yang sangat penting sebelum melakukan percobaan karena dapat memperlancar
kegiatan praktikum, serta menghindari penyalahgunaan fungsi setiap alat akibat
ketidaktahuan seorang praktikan. Oleh karena itu, praktikum ini penting untuk
dilaksanakan agar praktikan dapat mengenali dan memahami alat-alat yang
terdapat di laboratorium.
2
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan-tujuan dilakukannya praktikum ini yaitu untuk mengetahui
nama, fungsi dan prinsip kerja dari alat-alat yang ada di laboratorium
mikrobiologi pangan.
3
TINJAUAN PUSTAKA
Pengenalan alat-alat ini meliputi macam-macam alat, mengetahui nama-

namanya, memahami fungsi dan cara kerja alat-alat tersebut. Setiap alat dirancang
dan dibuat dengan bahan-bahan yang berbeda satu sama lain dan mempunyai
fungsi yang spesifik. Kebanyakan peralatan untuk percobaan-percobaan di dalam
laboratorium dibuat dari gelas. Meskipun peralatan-peralatan tersebut telah siap
dipakai, tetapi di dalam pemasangan alat untuk suatu percobaan terkadang
diperlukan sambungan-sambungan dengan gelas atau membuat peralatan khusus
sesuai dengan kebutuhan (Imam, 2000).
Praktikan hendaknya memahami tata letak atau layout bangunan
laboratorium. Pembangunan suatu laboratorium tidak dipercayakan begitu saja
kepada seorang arsitektur bangunan. Bangunan laboratorium tidak sama dengan
bangunan kelas. Banyak faktor yang harus diperhatikan sebelum membangun
laboratorium (Hilmi, 2007). Fungsi setiap alat diberikan secara umum karena
tidak mungkin semua fungsi diutamakan dalam melakukan kegiatan di
laboratorium. Untuk memudahkan dalam memahami alat-alat laboratorium,
penulisan alat-alat diurutkan sesuai abjad. Agar alat-alat dapat digunakan dalam
waktu realtif lama dalam keadaan baik, perlu pemeliharaan dan penyimpanan
yang memadai (Koesmadja, 2006).
Melakukan suatu percobaan di laboratorium, kadang-kadang harus dipilih
bahan peralatan yang cocok, sehingga tidak keliru atau salah pengertian mengenai
sifat bahan peralatan tersebut. Peralatan gelas harus selalu bersih, yaitu dicuci
dengan larutan deterjen yang cukup hangat. Bila memungkinkan perlu dibilas
dengan basa atau asam, lalu dibilas sekali lagi dengan air bersih. Sebelum
digunakan, peralatan gelas tersebut dibilas sekali lagi dengan larutan yang akan
digunakan yang akan disimpan dalam peralatan tersebut. Peralatan gelas seperti
pipet, labu takar dan lain-lain, sangat teliti dan merupakan produksi kerajian dan
teknologi yang berkualitas tinggi. Namun demikian ketelitian tidak akan berarti
bila selama analisa, penggunaan alat dan prosedur tidak dikakukan dengan cermat
dan tepat (Volk, 1993).
4
Inkubator adalah alat untuk mengikubasi atau memeram mikroba pada suhu
yang terkontrol. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu dan pengatur waktu.
colony counter berguna untuk mempermudah perhitungan koloni yang tumbuh
setelah diinkubasi dalam cawan, karena adanya kaca pembesar. Selain itu alat ini
juga dilengkapi dengan skala yang sangat berguna untuk pengamatan koloni yang
sangat banyak (Sudarmadji, 2005).
5
PELAKSANAAN PRAKTIKUM
Waktu dan Tempat Praktikum

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 04 oktober 2016 di
laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri
Universitas Mataram.
Alat-alat paraktikum
Adapun alat-alat yang digunakan pada praktikum ini, yaitu mikroskop,
pipet, erlenmeyer, tabung reaksi, colony counter, beaker glass, pipet mikro,
laminar flow, oven, inkubator, jarum inokulum, L rod, water bath, pH meter,
neraca analitik, rubble bulb, petri disk, gelas ukur dan lampu bunsen.
Prosedur kerja
1) Disiapkan alat-alat praktikum
2) Diamati dan digambar
3) Diberi keterangan dan fungsi masing-masing alat.
6
HASIL PENGAMATAN
Tabel 1.1 Hasil Pengamatan Pengenalan Alat-Alat Praktikum.

No Nama Alat dan Gambar Fungsi Keterangan
1 Labu Ukur Membuatsuatu larutan
dengan volume yang
diketahui secara teliti,
mengencerkan larutan sampai
volume tertentu dengan
ketelitian yang tinggi.
2 Labu Erlenmeyer Mengukur bahan kimia cairan

dengan ketelitian rendah,
tempat menghomogenkan
larutan, digunakan untuk
menampung titran pada saat
titrasi, dan sebagai tempat
penampung bahan bakar
kimia untuk sementara.
3 Lampu Bunsen Untuk memanaskan larutan
dan digunakan juga untuk
sterilisasi lingkungan dan
alat-alat praktikum seperti
jarum ose, jarum preparat dan
jarum ent.
4 Jarum Preparat Digunakan untuk menipiskan

dan melepaskan gumpalan-
gumpalan objek diatas gelas
benda, terutama objek yang
berupa potongan media yang
mengandung miselium jamur
sebelum ditutup dengan gelas
penutup.
5 Jarum Ose Untuk mengambil biakan

yang berupa suspensi
misalnya suspensi bakteri
atau suspensi spora jamur dan
untuk diletakan di atas benda
7
6 Drigalski Untuk meratakan penyebaran

sel-sel bakteri maupun spora-
spora jamur di atas
permukaan media, terutama
jika penambahan dilakukan
dengan cara sebaran.
7 Gelas Beaker Untuk menampung sampel

atau bahan, menyimpan dan
membuat larutan, dapat juga
untuk mencampur dan
memanaskan cairan yang
biasanya digunakan dalam
laboratorium.
8 Cawan Petri Sebuah wadah berbentuk

bundar dan terbuat dari
pelastik atau kaca yang
digunakan untuk
membiakkan sel.
9 Pipet Tetes Untuk mengambil cairan

dalam jumlah kecil tanpa
harus mengetahui jumlahnya
dengan pasti.
10 Mortar dan Alu Untuk menghaluskan zat

yang masih bersifat padatan
atau kristal.
8
11 Mikroskop Untuk memperbesar Merek :

bayangan sebuah benda, OLYMPUS
terutama benda-benda yang CX21
sulit atau tidak dapat dilihat
dengan mata telanjang. Pencahayaan
Bagian-bagian : Sistem:
1. Lensa okuler berfungsi 6V/20W,
untuk membentuk 100-240 V,
bayangan maya, tegak 50/60 Hz
dan diperbesar dari lensa
objektif. Gerakan
2. Tubus berfungsi untuk Stroke kasar:
mengatur fokus dan 20 mm
menghubungkan lensa Pembagian
obyektif dengan lensa derajat : 2,5
okuler. m
3. Revolver untuk mengatur
perbesaran lensa
obyektif.
4. Lensa obyektif berada
dekat objek yang diamati,
berfungsi untuk
membentuk bayangan
nyata, terbalik dan
diperbesar.
5. Meja mikroskop
berfungsi sebagai tempat
meletakkan objek yang
akan diamati.
6. Penjepit kaca berfungsi
untuk menjepit kaca atau
gelas benda yang akan
diamati.
7. Kondensor berfungsi
untuk mengumpulkan
cahaya yang masuk.
8. Sumber cahaya berfungsi
sebagai sumber cahaya
untuk diarahkan ke
objek.
9. Sekrup kasar berfungsi
untuk menaik-turunkan
tubus secara cepat.
10. Sekrup halus berfungsi
untuk menaik-turunkan
tubus mikroskop secara
9
lambat dan bentuknya

lebih kecil dari pada
sekrup kasar.
12 Autoclave Berfungsi untuk mensterilkan Merk :
alat dan bahan dengan HIRAYAM
menggunakan uap air panas A
bertekanan tinggi. Bagian- HICLAVE
bagian : HVA-85
1. Penutup autoclave
berfungsi sebagai penutup Pressur unit
sehinga uap panas dari 0,1 Mpa = 1
dalam autoclave tidak bar = 1,02
keluar kgf/cm2 =
2. Klep pengaman berfungsi 14,5 psi
sebagai penahan atau
pengunci penutup
autoclave
3. Keranjang autoclave
digunakan untuk tempat
meletakkan alat dan
bahan yang akan
disterilisasikan
4. Lempengan sumber panas
berfungsi untuk
membantu perubahan
energi listrik menjadi
energi kalor
5. Pengukuran tekanan
berfungsi untuk
mengetahui besar tekanan
uap yang ada dalam
autoclave saat proses
sterilisasi berlangsung
6. Lock atau unlock.
Berfungsi untuk
mengunci dan membuka
kunci autoclave
13 Incubator Inkubator berfungsi untuk Merk :
menginkubasi atau memeram MEMMERT
mikroba pada suhu yang Temperatur :
terkontrol yang disertai 5oC-80oC
dengan pengaturan suhu dan Volume:
pengaturan waktu. 230V, 50/60
Bagian-bagian : Hz/approx.1
1. Tombol panel, terdiri dari 800 W
10
tombol power untuk

menghidupkan dan
mematikan inkubator.
2. Tombol suhu untuk
mengatur suhu yang
digunakan, dan tombol
timer berfungsi untuk
mengatur waktu
3. Pintu inkubator yang
digunakan untuk
membuka dan menutup
inkubator yang di
dalamnya terdapat rak
inkubator yang berfungsi
sebagai tempat
meletakkan bahan yang
akan diinkubasi
14 Timbangan analitik Digunakan untuk menimbang Merk: KERN
bahan berupa padatan atau ABJ
kristal yang akan digunakan
dalam praktikum dengan Suhu :
tinggkat ketelitian yang +10oC/+30oC
tinggi.
Bagain-bagiannya: T= -220g
1. Kaca timbangan,
berfungsi untuk menjaga D= 0,1 mg
agar berat sampel tetap Max : 220 g
2. Piringan timbngan, Min 10 mg
berfungsi sebagai tempat e = 1 mg
untuk meletakkan sampel
yang akan ditimbang
3. Layar, menunjukkan berat
sampel yang ditimbang
4. Tombol mode, berfungsi
sebagai suatu sistem
konversi satuan yang
digunakkan dalam
penimbangan
5. Tombol on/off, berfungsi
untuk menyalakan dan
mematikaan timbangan
6. Tombol rezero, untk
mengatur neraca pada
keadaan nol secara
mendadak
7. Tombol print, untuk
11
mencetak hasil dari

penimbangan.
15 Laminar Air Flow Digunakan sebagai tempat Merk :
atau alat sterilisasi yang ISOCIDE
menggunakan prinsip filtrasi
udara dan penggunaan radiasi Electric
ultraviolet, sehingga dapat supply : 110
meminimalisir terjadinya V, 60 Hz
kontaminasi pada produk, atau 220 V,
pengguna dan lingkungan. 50/60 Hz
Bagian-bagain :
1. Tombol blower speed,
berfungsi untuk mengatur
kecepatan penyaringan
aliran dari luar ke dalam
selama proses
berlangsung
2. HEPA filters, berfungsi
untuk memfilter atau
menyaring udara dari
lingkungan ke dalam
sehingga udara menjadi
steril
3. Rung kaca yang steril dan
dilengkapi dengan tutup
digunakan untuk
meletakkan alat-alat yang
akan disterilkan
16 Stomacher Berfungsi untuk Merk:
menghancurkan sampel BAGMIXER
dengan cara ditekan 500
menggunakan satu lempeng
yang dinamakan pedal. Electrical :
Bagian-bagian : 110-240 V,
1. Untuk membuka dan 50/60 Hz
menutupkan stomacher
2. Kantong plastik steril
(heavy duty), berfungsi
sebagai tempat sampel
yang akan dihancurkan
3. Pedal, sebuah lempengan
yang digunakan untuk
menghancurkan sampel
12
17 Hot Plate Digunakan untuk pproses Merk :

pemanasan sebagai pengganti Heidolph
dari pembakaran bunsen dan MR hei-
untuk membantu proses Standard
homogenitas larutan.
Bagian-bagian: Max power:
1. Pelat, berfungsi sebagai 0,820 Kw
tempat metetakkan wadah
(erlenmeyer atau gelas Max plate :
beker) sampel yang akan Temp :
di panaskan 300oC
2. Pengatur kecepatan,
untuk mengatur putaran Max speed :
pelat 1400 rpm
3. Pengaturan suhu, untuk Plate
mengatur tinggi atau diameter :
rendahnya suhu yang 145 mm
digunakan selama proses
berlangsungnya
4. Tombol power, untuk
menyalakan dan
mematikan alat
18 Vortex Untuk mengaduk dan Merk :
menghomogenkan sampel HeidolpH
yang ada di dalam tabung Reax Control
reaksi.
Bagian-bagian: Max speed:
1. Driver shaft, berupa 2000 rpm
dudukan berengsel yang
dapat berputar cepat
ketika tabungan
diletakkan dan ditekan
diatasnya.
2. Tombol power, untuk
menyalakan dan
mematikan alat
3. Pengatur kecepatan,
berfungsi untuk
menambah dan
mengurangi kecepatan
putaran driver shaft sesuai
keinginan
13
19 Digital orbital dan shaker Untuk menghomogenisasi Merk :

campuran larutan, Heiddolph
mempercepat proses Unimax
pendinginan suatu larutan, 1010
dan menjaga aerasi tetap
merata dan optimal dalam Tipe :
keperluan inkubasi sampel. Unimax
Bagian-bagian : 1010 DT
1. Layar, berfungsi untuk
menunjukkan waktu dan AC : 230/240
kecepatan saat proses V
berlanggsung 50/60 Hz,
2. Tombol start-stop, untuk 30-500.
memulai dan 1/mm
menghentikan proses
3. Tombol select, atas untuk
memilih waktu,
sedangkan bagian bawah
untuk memilih waktu
4. Tombol select time, untuk
memilih atau menentukan
beberapa lama proses
yang dilakukan
5. Pengaturan kecepatan,
untuk mengatur kecepatan
putaran
6. Tempat meletakkan
wadah seperti erlenmeyer
dan gelas beker
20 Shaking Incubator Untuk mengocok suatu Merk :
campuran bahan kimia yang Labnet
memerlukan temperatur dan
kecepatan (rpm) konstan, Poer :
biasanya digunkan untuk 220VAC/600
maserasi dan inkubasi Watt
mikroba.
Bagian-bagian : Speed : 20-
1. Pintu/penutup inkubator 300 rpm
sebagai penutup alat saat
proses berlangsung
2. Shaker, berfungsi sebagai
tempat meletakkan wadah
yang akan dikocok
3. Tombol panel, terdiri dari
tombol power untuk
menyalakan dan
14
mematikan alat, pengatur

suhu untuk mengatur
tinggi rendahnya suhu
yang digunakan, dan
pengaturan kecepatan
untuk mengatur tinggi
rendahnya kecepatan
selama proses.
21 Mikropipet Untuk memindahkan cairan Merk :
yang bervolume cukup kecil, Socorex
biasanya kurang dari 1000
m. Tip style :
Bagian-bagian : 5L= ultra
1. Tombol penyemprot, 10 L
berfungsi untuk 10m =
mengambil dan ultara 10m
menyemprotkan kembali 25m=200
cairan dengan cara m
ditekan 100m=200
2. Tombol ejector tip, untuk m
melepaskan tip dari
mikropipet setelah selesai
dipakai
3. Knob pengatur volume,
untuk mengatur
banyaknya volume cairan
yang ingin dihisap
4. Skala volume,
menunjukkan skala
volume dari mikropipet
5. Nozzle, sebagai ujung dari
mikropipet yang akan
dihubungkan dengan tip
6. Tip, berfungsi sebagai
tempat menampung
cairan yang dihisap
22 pH Meter Digunakan untuk mengukur Merk :
pH suatu larutan. Palintest
Bagian-bagian : MICRO 500
1. Tombol on/off, untuk
menyalakan dan pH :
mematikan alat range (0,00-
2. Layar LCD, untuk 14,00)
menampilkan pH dalam resolution
larutan (0,01 pH)
3. Tombol timer kalibrasi, accuracy
15
untuk mengatur waktu (0,01 pH)

yang digunakan
4. Elektroda kaca, sebagai mV :
tempat pertukaran ion range
positif, sehingga terjadi (1000mV)
beda potensial pada kedua resolution
elektroda (1mV)
5. Elektroda referensi accuracy
berfungsi sebagai kutub (0,50C)
lain selain elektroda kaca
sehingga diantara
keduanya yang terendam
larutan tertentu terbentuk
rangkaian listrik
16
PEMBAHASAN
Praktikum mengenai pengenalan alat-alat praktikum ini akan dijelaskan

secara detail mengenai nama, fungsi dan kegunaan dari alat-alat laboratorium
khususnya laboratorium mikrobiologi pangan. Seorang praktikan harus memiliki
wawasan mengenai alat-alat yang digunakan ketika praktikum berlangsung,
dengan wawasan tersebut maka praktikan akan mampu bekerja secara baik, benar,
efektif dan aseptis. Selain itu pula, seorang praktikan akan mampu mengurangi
resiko kerusakan alat dan cidera bagi praktikan itu sendiri.
Teknik aseptis dilakukan dengan dua cara, yaitu sterilisasi basah untuk
media Nutrient Broth (NB) dan media Nutrient Agar (NA). Serilisasi kering untuk
cawan, pipet dan jarum inokulasi. Teknik ini bertujuan untuk terbebas dari
mikroorganisme jahat, mikroorganisme jahat ini dapat merugikan praktikan.
Selain itu, dengan bekerja secara aseptis dapat memperbesar peluang praktikan
untuk memperoleh hasil yang konkret.
Alat-alat praktikum glassware maupun non glassware dapat dijabarkan
secara detail mengenai nama, fungsi dan cara penggunaannya. Sebagai contoh
beberapa alat-alat ini. Mikroskop yaitu sebuah alat yang berfungsi memperbesar
penamapakan dari objek yang diamati. Mikroskop memiliki beberapa bagian
dengan fungsi setiap bagian yang berbeda-beda. Seperti lensa okuler yang
berfungsi membentuk bayangan maya, tegak dan diperbesar. Lensa objektif
berfungsi membentuk bayangan nyata. Makrometer berfungsi menaikan dan
menurunkan mikroskop dengan cepat. Mikrometer berfungi menaikan dan
menurunkan mikroskop dengan lambat. Revolver berfungsi untuk mengatur
pembesaran lensa objektif. Diafragma berfungsi mengatur cahaya yang masuk.
Meja mikroskop berfungsi sebagai tempat objek. Lengan mikroskop berfungsi
sebgai pegangan. Penjepit kaca berfungsi sebagi menjepit objek. Kaki mikroskop
berfungsi sebagai penompang. Sendi mikroskop berfungsi mengatur sudut.
Tabung mikroskop berfungsi menghubungkan lensa objektif dengan lensa okuler.
Gelas kimia terdapat dalam berbagai ukuran ada yang berukuran 25, 50, 100, dan
hingga 400 mL. Gelas kimia ini berfungsi untuk melarutkan zat yang tidak butuh
17
ketelitian tinggi. Misalnya reaksi reagen untuk analisis kimia kualitatif atau untuk
pembuatan larutan standar sekunder pada analisis volumetri. Pipet merupakan alat
praktikum yang umum digunakan, mempunyai ukuran yang kecil dan biasanya
terbuat dari plastik atau kaca dengan ujung atas ditutupi karet. Pipet ini berfungsi
untuk memindahkan cairan dengan volume yang tidak terlalu besar. Pipet sendiri
dibagi menjadi tiga jenis, yaitu tetes, ukur, dan volume. Neraca analitik atau
sering disebut dengan neraca laboratorium ialah jenis neraca yang dirancang
untuk mengukur masa kecil dalam rentang sub-miligram. Piringan pengukur
neraca analitik berada dalam kotak transparan berpintu sehingga tidak berdebu
dan angin di dalam ruangan tidak mempengaruhi oprasional pertimbangan. Water
bath adalah alat yang fungsi utamanya untuk menciptakan suhu yang konstan dan
digunakan untuk inkubasi pada analisis mikrobiologi. Alat ini menggunakan
heater kering. Heater ini dikontrol dengan menggunakan thermostat.Laminar flow
merupakan meja kerja steril untuk melakukan kegiatan inokulasi atau penanaman.
Laminar flow memiliki dua filter, yaitu pre-filter dan HEPA filter. Inkubator
merupakan alat yang digunakan tumbuh dan memelihara budaya mikrobiologi
atau kultur sel. Inkubator sederhana berbentuk kotak dengan pemanas
disesuaikan.
Penggunaan alat-alat praktikum harus selalu dalam keadaan steril, jika alat-
alat di laboratorium digunakan sebelum disterilkan, maka hasil yang diperoleh
dapat mengalami kegagalan. Kebersihan alat-alat juga harus selalu diperhatikan
sehingga alat-alat tersebut tidak akan cepat rusak apabila dilakukan pemliharaan
yang baik dan benar. Alat-alat praktikum yang terbuat dari kaca (glassware) harus
diperlakukan dengan lebih hati-hati karena mudah pecah dan sebagian besar alat
tersebut disterilisasi dengan lampu bunsen atau dimasukan ke oven. Sedangkan
alat-alat non glassware umumnya tidak mudah pecah dan umumnya tidak bisa
disterilkan dengan lampu bunsen.
18
KESMIPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat ditarik beberapa

kesimpulan sebagai berikut:
1. Alat-alat praktikum yang terdapat dilaboratorium mikrobiologi umum
digolongkan menjadi alat glassware dan non glassware.
2. Alat-alat glassware yang terdapat pada laboratorium mikrobiologi umum
berdasaarkan pengamatan terdiri dari pipet, cawan petri, jarum inokulum, L
rod, tabung reaksi, erlenmeyer, beaker glass, pipet mikro, dan lampu
bunsen.
3. Alat-alat praktikum nongalssware yang terdapat pada laboratorium
mikrobiologi umum berdasaarkan pengamatan terdiri dari rubble bulb,
autoclave, hot stirer, pH meter, inkubator, laminar flow, oven, dan water
bath.
4. Dalam pelaksanaan praktikum di laboratorium, maka praktikan dituntut
untuk memiliki wawasan mengenai alat-alat praktikum dan bekerja secara
aseptis.
5. Bekerja secara aseptis dapat meminimalisir kecelakaan kerja serta rusaknya
alat-alat praktikum.
19
ACARA II
MEDIUM DAN CARA PEMBUATAN MEDIUM
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang dipakai
untuk menumbuhkan mikroba. Selain untuk pembuatan mikroba, medium dapat
pula digunakan untuk melakukan isolasi, memperbanyak, pengujian sifat-sifat
fisiologi dan perhitungan mikroba. Sehingga pembuatan medium itu harus dengan
baik agar medium yang dihasilkan sesuai dengan yang diinginkan. Semua
makhluk hidup membutuhkan nutrient untuk pertumbuhan dan reproduksinya.
Nutrient merupakan bahan baku yang digunakan untuk membangun komponen-
komponen baru dan untuk menghasilkan energi yang dibutuhkan dalam proses
kehidupan sel (Khaeruni dan Satrah, 2016).
Menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroba dibutuhkan suatu substrat
yang disebut medium. Sedangkan medium itu sendiri sebelum digunakan harus
dalam keadaan steril. Artinya tidak ditumbuhi oleh mikroba lain yang tidak
diharapkan. Agar mikroba dapat tumbuh dan berkembang dengan baik di dalam
medium maka diperlukan persyaratan tertentu yaitu diantaranya bahwa di dalam
medium harus terkandung semua unsur hara yang diperlukan untuk pertumbuhan
dan perkembangan mikroba. Pada pembuatan media ini, haruslah dimengerti
jenis-jenis nutrient yang diperlukan oleh bakteri dan juga lingkunngan fisik yang
dapat menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya (Tjandra, 2013).
Media biakan merupakan suatu zat yang digunakan untuk menumbuhkan
jasad dan renik. Cara pembuatan medium merupakan salah satu hal yang penting
untuk diketahui. Hal tersebut disebabkan karena sebelum menumbuhkan
mikroorganisme dengan baik, langkah pertama yakni harus dapat memahami
kebutuhan dasar mikroorganisme lalu mencoba memformulasikan suatu medium
yang memberikan hasil terbaik. Oleh karena itu, praaktikum ini penting untuk
dilkanakan untuk mengetahui medium serta cara pembuatan medium.
20
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui jenis-jenis medium
pertumbuhan mikroorganisme, cara pembuatan medium serta fungsi dari masing-
masing medium.
21
TINJAUAN PUSTAKA
Medium adalah substrat dimana mikroorganisme dapat tumbuh dan sesuai

dengan lingkungannya. Kehidupan mikroorganisme tergantung pada nutrisi dalam
substrat atau medium dan faktor lingkungan yang baik. Mikroba dapat tumbuh
dengan baik jika dalam suatu medium tersebut memenuhi syarat-syarat. Syaratnya
yaitu harus mengandung nutrisi yang dibutuhkan oleh mikroba (Hafrah, 2009).
Pertumbuhan adalah pertambahan teratur semua komponen suatu
organisme. Dengan demikian pertambahan ukuran yang diakibatkan oleh
bertambahnya air atau karena deposit lipid bukan merupakan pertumbuhan sejati.
Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme dapat dibedakan
menjadi faktor fisik dan faktor kimia termasuk nutrisi dalam media kultur. Faktor
fisik meliputi temperatur, pH, tekanan osmotik dan cahaya. Faktor kimia meliputi
karbon, oksigen dan faktor-faktor pertumbuhan organik. Bahan nutrisi yang
digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisme di laboratorium disebut media
kultur (Tjahjadi, 2007).
Kelangsungan hidup dan pertumbuhan mikroorganisme tergantung pada
nutrisi yang tersedia dan lingkungan pertumbuhan yang menguntungkan. Di
dalam laboratorium, persiapan gizi yang digunakan untuk menumbuhkan
mikroorganisme disebut media tunggal. Tiga media yang digunakan yaitu media
cair, media setengah padat dan media padat. Perbedaan utama antara media-media
ini adalah media padat dan setengah padat berisi bahan pemadat (Tortora, 2007).
Berdasarkan konsistensinya, maka dikelompokkan menjadi dua macam
yaitu media cair (liquid media) dan media padat (solid media). Media cair
merupakan ekstrak kompleks material biologis. Media padat menggunakan bahan
pembeku misalnya agar. Agar merupakan suatu kompleks polisakarida yang
diperoleh dari alga merah. Agar memiliki komposisi kimia berupa D-galaktosa.
Agar sebagai bahan pembeku akan mencair saat dididihkan, kemudian
didinginkan pada suhu 80-90 0C (Dwyana, 2009).
Media yang umum untuk menganalisis kapang pada produk makanan
termasuk yang diacu dalam metode SNI 2332.7.2009 (BSN, 2009) adalah Potato
22
Dextrose Agar (PDA). Masalah yang dihadapi dalam penggunaan PDA sebagai
media untuk menghitung jumlah kapang adalah adanya pertumbuhan yang
melebar pada jenis kapang tertentu hingga cawan petri dan menghambat
pertumbuhan kapang lain. Akibatnya selain menyulitkan perhitungan koloni
jumlah yang terhitung juga tidak akurat karena tidak adanya koloni yang
terhambat pertumbuhannya. Hal ini terjadi terutama bila terdapat kapang-kapang
yang sifat koloninya mudah menyebar seperti Rhizopus sp dan Mucor sp. Kedua
jenis kapang ini sangat umum dijumpai pada produk-produk perikanan olahan
seperti ikan asap, pindang maupun ikan asin (Indriati, 2010).
23

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 11 Oktober 2016 di
Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri
Alat dan Bahan Praktikum
a. Alat-alat Praktikum
Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum antara lain
erlenmeyer,gelas beaker, batang pengaduk, stirrer, aluminium foil, kain saring,
pisau, talenan, hotplate, corong, botol uc, timbangan analitik dan kertas label.
b. Bahan-bahan Praktikum
Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum antara lain aquades,
kentang, agar, D-glukosa, pepton, ekstrak daging, Potato Dekstrose Agar
(PDA) instan, Nutrient Agar (NA) instan dan alkohol 70%.
Prosedur Kerja
a. Pembuatan medium Potato Dextrose Agar (PDA)
1) Disipkan alat dan bahan
2) Dibersihkan kentang
3) Dipotong dadu
4) Dihitung 40 gram kentang
5) Dipanaskan kentang dalam 200 mL aquades
6) Disaring hasil rebusan sebanyak 100 mL
7) Ditambahkan 4 gram D-glukosa sambil diaduk
8) Ditambahkan 3 gram agar sedikit demi sedikit dan diaduk
9) Diaduk hingga larut
10) Di masukkan ke dalam botol kaca
b. Pembuatan medium Nutrient Agar (NA)
1) Disiapkan alat dan bahan
24
2) Dipanaskan 200 mL aquades

3) Ditambahkan 1 gram pepton sambil diaduk
4) Ditambahkan 0,6 gram ekstrak daging sambil diaduk
5) Ditambahkan 3 gram agar sedikit demi sedikit diaduk
7) Dimasukkan kedalam botol kaca
c. Pembuatan medium Nutrient Broth (NB)
3) Ditambahkan 1 gram pepton sambil diaduk
5) Di masukkan kedalam botol kaca
d. Pembuatan medium Potato Dextrose Agar Instan (PDA instan)
2) Ditimbang 7,8 gram PDA instan
4) Ditambahkan 7,8 gram PDA instan sambil diaduk
6) Di masukkan ke dalam botol kaca
e. Pembuatan medium Nutrient Agar Instan (NA Instan)
2) Ditimbang 5,6 gram NA instan
4) Ditambahkan 5,6 NA Instan sambil diaduk
6) Di masukkan ke dalam botol kaca.
25
HASIL PENGAMATAN
Tabel 2.1 Hasil Pengamatan Medium dan Cara Pembuatan Medium

Perubahan Warna
No Medium Perlakuan Fungsi
Sebelum Sesudah
+ D-glukosa Putih Putih
Potato Untuk
4 gram jernih keruh
1 Dextrose Agar menumbuhkan
+ Agar 3
(PDA) Putih keruh Putih susu jamur
gram
+ Pepton 1 Kuning
Bening
gram bening
+ Ekstrak Untuk
Nutrient Agar Kuning Kuning
2 daging 0,6 menumbuhkan
(NA) bening pekat
gram bakteri
+ Agar 3 Kuning Kuning
gram pekat keruh
+ Pepton 1 Kuning
Bening
gram bening Untuk
Nutrient Broth
3 + Ekstrak menumbuhkan
(NB) Kuning Kuning
daging 0,6 bakteri
bening pekat
gram
+ Aquades
200 mL dan
Potato Potato Untuk
Kuning
4 Dextrose Agar Dextrose Bening menumbuhkan
pudar
(PDA) instan Agar (PDA) jamur
instan 7,8
gram
+ Aquades
200 mL
Untuk
Nutrient Agar & Nutrient Kuning
5 Bening menumbuhkan
(NA) instan Agar (NA) bening
bakteri
instan 5,6
gram
26
PEMBAHASAN
Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang dipakai
untuk menumbuhkan mikroba. Selain itu medium juga digunakan untuk isolasi,
perbanyakan, pengujian sifat-sifat fisiologis kehidupan mikroorganisme
tergantung pada nutrisi dalam substrat/medium dan faktor lingkungan yang baik.
Mikroba dapat tumbuh dengan baik jika dalam suatu medium tersebut memenuhi
syarat yaitu harus mengandung semua nutrisi yang dibutuhkan oleh mikroba,
harus mempunyai tekanan osmose, tegangan permukaan dan pH yang sesuai
dengan kebutuhan mikroba yang ditumbuhkan, tidak mengandung zat-zat
penghambat pertumbuhan mikroba dan harus berada dalam keadaan steril
(Tandra, 2013).
Medium dapat diklasifikasikan berdasarkan susunan kimia, berdasarkan
konsistensi dan berdasarkan fungsinya. Medium berdasarkan susunan kimia
dibagi menjadi 4 yaitu medium organik, anorganik, sintetik dan non sintetik.
Medium organik yaitu medium yang terdiri dari bahan-bahan organik, sedangkan
medium anorganik yaitu medium yang terdiri dari bahan anorganik. Medium
sintetik yaitu medium yang susunan kimianya dapat diketahui, biasanya tentang
mempelajari kebutuhan makanan mikroba, sedangkan non sintetik adalah medium
yang susunan kimianya tidak dapat diketahui dengan pasti. Medium berdasarkan
konsistensinya dibagi menjadi tiga macam yaitu medium cair (liquid medium)
yang berbentuk cair, medium padat (solid medium) yang berbentuk padat yang
dapat dicairkan (semi solid medium). Berdasarkan fungsinya dikenal berbagai
macam medium yaitu medium diperkaya, medium diferensial, medium penguji,
medium untuk perhitungan mikroba dan medium khusus (Dwyana, 2009).
Terdapat beberapa perlakuan penambahan yang digunakan pada saat
praktikum yaitu pepton, ekstrak daging, agar, aquades, D-glukosa. Fungsi dari
berbagai bahan baku pembuatan media adalah pepton. Pepton digunakan sebagai
sumber utama nitrogen organik dan sebagai sumber nutrisi. Ekstrak daging
sebagai sumber vitamin B, mengandung nitrogen organik dan senyawa karbon,
agar digunakan untuk memadatkan medium, aquades untuk melarutkan agar,
27
pepton dan daging. Sedangkan D-glukosa berfungsi sebagai penyusun

karbohidrat.
Medium Potato Dextrose Agar (PDA) adalah medium organik semi alamiah
atau semi sintesis karena terdiri dari senyawa kimia yang dicampur dengan bahan-
bahan alami. Medium PDA terdiri dari kentang sebagai sumber energi atau
sumber karbohidrat nitrogen organik, karbon dan sumber vitamin bagi mikroba.
Dextrose sebagai sumber karbon pula. Agar berfungsi sebagai pemadat dan
tempat tumbuh yang baik bagi biakan karena mengandung cukup air. Aquades
sebagai bahan pelarut dalam pembuatan medium dan sebagai sumber oksigen.
Proses pembuatan medium PDA adalah dengan ekstrak kentang dicampur dengan
bahan tambahan lain seperti agar dan D-glukosa. Setelah dilakukan pemanasan,
ditambah D-glukosa sebanyak 4 gram, warna yang awalnya putih jernih berubah
menjadi putih keruh, dan ketika ditambahkan agar sebanyak 3 gram warna yang
tadinya putih keruh berubah menjadi putih susu. Kentang yang dipakai yaitu
kentang putih. Selain perubahan warna juga terjadi pengentalan akibat
penambahan agar. Penggunaan medium PDA yaitu berfungsi untuk
menumbuhkan jamur. Perubahan warna yang terjadi disebabkan oleh penggunaan
bahan kentang yang dipakai.
Nutrient Agar (NA) merupakan suatu medium yang berbentuk padat yang
merupakan perpaduan antara bahan ilmiah dan senyawa kimia. Medium NA
terbuat dari campuran pepton dan ekstrak daging dengan menggunakan agar
sebagai pemadat. Dalam hal ini agar digunakan sebagai sumber karbohidrat yang
berupa galaktan sehingga tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Pepton
digunakan sebagai sumber protein, nitrogen dan vitamin. Ekstrak daging
digunakan sebagai sumber vitamin B, aquades berfungsi pelarut untuk
menghomogenkan larutan. Pada saat ditambahkan pepton 1 gram medium
berwarna bening dan setelahnya berwarna kuning bening berubah jadi kuning
pekat dan ketika ditambahkan agar 3 gram warna yang semula kuning pekat
berubah menjadi kuning keruh. Medium NA digunakan untuk menumbuhkan
bakteri.
28
Nutrient broth (NB) adalah medium yang berbentuk cair dengan bahan-
bahan dasar berupa ekstrak daging dan pepton. Ekstrak daging merupakan ramuan
dasar dalam media biakan yang larut dalam air dan berfungsi sebagai sumber
protein dan mineral, sedangkan pepton banyak mengandung nitrogen sehingga
baik digunakan sebagai bahan dalam pembuatan medium. Ketika medium
ditambahkan 1 gram pepton, warna yang semula bening berubah menjadi kuning
bening, dan ketika ditambahkan ekstrak daging sebanyak 0,6 gram warna kuning
bening berubah menjadi kuning pekat. Nutrient broth berfungsi untuk
menumbuhkan bakteri.
Potato Dextrose Agar instan (PDA instan) lebih mudah dan praktis
dibanding dengan pembuatan medium PDA racik. Komposisi bahan yang
digunakan untuk PDA instan hanya menggunakan aquades dan bubuk PDA
Instan. Pada saat ditambahkan aquades 200 mL warna yang sebelumnya bening
berubah menjadi kuning pudar. PDA Instan berfungsi untuk menumbuhkan jamur.
Perubahan warna karena campuran aquades + PDA Instan. Nutrient Agar instan
(NA instan) menggunakan campuran aquades dan NA instan. Ketika ditambahkan
aquades 200 mL warna yang sebelumnya bening berubah menjadi kuning bening.
Perubahan warna karena tercampurnya aquades dengan NA Instan hingga
homogen.
Berdasarkan pada literatur hasil yang diperoleh telah sesuai menurut
Tjahjadi (2007), yaitu medium sintetis lebih tahan lama di bandingkan dengan
medium racik, karena kandungan kimia yang terdapat pada medium tersebut.
Beberapa medium sintetis ada yang berbentuk padat dan cair layaknya medium
racik. Perubahan warna pada medium PotatoDextrose Agar (PDA) sama dengan
literatur yang digunakan sebagai pembanding yaitu perubahan dari warna putih
jernih ke putih keruh lalu putih keruh ke kuning keruh, hal tersebut dikarenakan
penambahan D-glukosa dan juga penambahan agar.
Media racik yaitu media yang disusun oleh bahan-bahan alami sedangkan
medium instan/medium sintetis adalah medium yang senyawa-senyawa kimia
yang komposisinya dan jumlahnya sudah ditentukan. Masing-masing jenis
medium mempunyai kelebihan dan kekurangan. Medium sintetis tahan lama
29
karena memiliki bentuk fasa padat jika dibandingkan dengan medium alami yang
mempunya fasa cair. Medium yang baik dan lebih bagus digunakan yaitu medium
instan, karena medium sudah tersedia atau sudah jadi sehingga tidak banyak
terkontaminasi dan kesterilannya terjaga, tidak seperti pada saat kita membuat
medium bisa saja medium terkontaminasi oleh mikroba yang tidak diinginkan
karena bisa saja alat yang kita gunakan untuk membuat tidak steril, ataupun
tindakan yang kurang hati-hati pada saat pengerjaan praktikum.
30
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat disimpulkan

sebagai berikut :
1. Medium merupakan bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang dipakai
untuk menumbuhkan mikroba dan makanan yang dibutukan
mikroorganisme untuk pertumbuhannya.
2. Nutrient Agar (NA) merupakan medium yang memiliki sumber nitrogen
yang cukup sehingga baik untuk pertumbuhan bakteri.
3. Medium Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan medium yang baik untuk
pertumbuhan jamur karena mengandung karbohidrat.
4. Ekstrak daging dan pepton merupakan sumber protein, nitrogen, vitamin
serta karbohidrat.
5. Agar berfungsi sebagai pemadat, karena sifatnya yang mudah membeku dan
mengandung karbohidrat.
31
ACARA III
TEKNIK ISOLASI MIKROBA
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Umumnya mikroba yang hidup di alam terdapat dalam bentuk populasi
campuran. Sangat jarang mikroba di alam dijumpai sebagai spesies yang tunggal.
Dengan demikian, agar mikroba tersebut dapat diidentifikasikan, sehingga mudah
dipelajari sifat pertumbuhan, morfologis dan fisiologis masing-masing mikroba
maka langkah pertama yang harus dilakukan yaitu spesies tersebut dipisahkan dari
organisme lain yang umum dijumpai dalam habitatnya, kemudian ditumbuhkan
menjadi biakan murni yaitu suatu biakan yang terdiri dari sel-sel dari satu spesies
(Puspitasari, 2012).
Mikroorganisme tersebar luas di dalam lingkungan baik di tanah, air
maupun udara. Keberadaan mikroorganisme baru dapat kita rasakan melewati
makanan yang kita konsumsi dan sebagai akibatnya produk pangan jarang sekali
yang steril dan umumnya tercemar oleh berbagai mikroorganisme. Bahan pangan
merupakan sumber gizi bagi manusia juga sebagai sumber makanan bagi
perkembangan mikroorganisme. Pertumbuhan atau perkembang mikroorganisme
dalam makanan sangat erat hubungannya dengan kehidupan manusia (Murniati,
2002)
Mikroorganisme merupakan makhluk hidup yang sangat banyak baik di
tanah, air, maupun udara. Untuk itu perlunya diisolasi maupun pemurnian untuk
mendapatkan mikroorganisme tersebut. Populasi yang besar dan kompleks dengan
berbagai mikroba terdapat dalam tubuh manusia termasuk di mulut, saluran
pencernaan dan kulit. Isolasi adalah cara untuk memisahkan atau memindahkan
mikroba tersebut dari lingkungannya sehingga diperoleh kultur murni atau biakan
murni. Kultur murni ialah kultur yang sel-sel mikrobia nya berasal dari
pembelahan satu sel tunggal. Kultur murni atau biakan murni diperlukan karena
semua metode mikrobiologi yang digunakan untuk penelaah dan mengidentifikasi
32
mikroorganisme, termasuk menelaaah ciri-ciri kultural, morfologis, fisiologis,

maupun serologis memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam
mikroorganisme saja. Oleh karena itu, praktikum ini dilaksanakan agar praktikan
dapat mengetahui dan menguasai teknik isolasi mikroba.
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui dan dapat
melakukan beberapa cara dalam mengisolasi mikrobia.
33
TINJAUAN PUSTAKA
Secara alami mikroba di alam ditemukan dalam populasi campuran. Untuk

memperoleh biakan murni dapat dilakukan isolasi yang diawali dengan
pengenceran bertingkat. Proses isolasi mikroba adalah memisahkan mikroba satu
dengan mikroba lain yang berasal dari campuran berbagai mikroba. Hal ini
dilakukan untuk dapat mempelajari sifat biakan, morfologi dan sifat mikroba
lainnya (Puspitasari, 2012).
Isolasi mikroba pada prinsipnya adalah memisahkan suatu jenis mikroba
dengan jenis mikroba lainnya dengan asal mikroba yang terdiri dari berbagai
macam spesies. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuh biakkan pada media
padat. Pada medium padat sel-sel akan membentuk suatu koloni sel yang tetap.
Jika sel-sel tersebut tertangkap oleh media pada beberapa tempat yang terpisah
maka setiap sel atau kumpulan sel yang hidup akan berkembang menjadi satu
koloni (Schlegel, 2007).
Pemindahan bakteri dari medium lama ke medium yang baru atau dikenal
dengan istilah inokulasi bakteri ini memerlukan banyak ketelitian. Terlebih dahulu
harus mengusahakan agar semua alat-alat yang akan digunakan untuk
mengerjakan medium dan pengerjaan inokulasi benar-benar steril. Hal ini untuk
menghindari terjadinya kontaminasi, yaitu masuknya mikroba lain yang tidak
diinginkan sehingga biakan yang tumbuh di dalam medium adalah benar-benar
biakan murni (Dwidjoseputro, 2010).
Dikenal beberapa metode untuk memperoleh biakan murni dari suatu biakan
campuran. Diantaranya yang paling sering digunakan adalah metode cawan tuang.
Metode cawan tuang didasarkan pada prinsip pengenceran dengan maksud untuk
memperoleh spesies individu dengan anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah
dari satu jenis sel yang dapat diamati. Kedua metode ini didasarkan pada prinsip
yang sama yaitu mengencerkan organisme sedemikian rupa sehingga individu
spesies dapat dipisahkan (Arifanto, 2009).
Di alam bebas, tidak ada mikroba yang hidup sendiri atau terlepas dari
spesies lain. Seringkali mikroba patogen kedapatan secara bersama-sama dengan
34
mikroba aerob (saprobakteri). Dalam biakan murni tidak saja diperlukan

bagaimana memperoleh suatu biakan murni, tetapi juga bagaimana memelihara
serta mencegah pencemaran dari luar. Medium untuk membiakkan mikroba
haruslah steril sebelum digunakan. Kontaminasi dari luar terutama berasal dari
udara yang mengandung banyak mikroorganisme. Teknik biakan murni untuk
suatu spesies dikenal dengan beberapa cara yaitu cara pengenceran, cara
penuangan, cara sebaran (Waluyo, 2007).
35

Praktikum ini dilakukan pada hari Selasa, 18 Oktober 2016 di Laboratorium
Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas
Mataram.

Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah pipet mikro,
cawan petri, jarum ose, drigalski, lampu bunsen, tisu, jarum preparat, rak
tabung reaksi, vortex, yellow tip dan incubator.
Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah biakan
Escherichia coli, Bacillus cereus, ekstrak roti, larutan buffer fosfat, medium
Potato Dextrose Agar (PDA) dan medium Nutrient Agar (NA).
Prosedur Kerja
a. Teknik isolasi mikroba metode gores medium Nutrient Agar (NA) Tegak
2) Divortex biakan
3) Diambil biakan dengan jarum preparat
4) Digoreskan pada permukaan medium Nutrient Agar (NA) dalam cawan
petri
5) Dilakukan secara duplo
6) Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 0C
7) Diamati
b. Teknik isolasi mikroba metode gores medium Nutrient Agar (NA) Miring
2) Divortex biakan
36
4) Digoreskan pada permukaan medium Nutrient Agar (NA) miring dalam

tabung reaksi
7) Diamati
c. Teknik isolasi mikroba metode sebar
2) Divortex biakan
3) Diambil biakan dengan mikropipet sebanyak 0,1 mL
4) Dimasukkan pada medium Nutrient Agar (NA) dalam cawan petri
5) Diratakan dengan drigalski
8) Diamati
d. Teknik isolasi jamur metodesSebar
2) Dihaluskan roti
3) Ditimbang seberat 3 gram
4) Dimasukkan larutan Buffer posfat 10-4
5) Di vortex
6) Diambil 0,1 mL larutan Buffer posfat 10-1
7) Dimasukkan pada medium Potato Dextrose Agar (PDA) dalam cawan
petri
8) Diratakan
11) Diamati
e. Teknik isolasi mikroba metode tuang
2) Di vortex biakan
3) Diambil sebanyak 1 mL
37
4) Dimasukkan kedalam cawan petri

5) Dituang medium Nutrent Agar (NA)
6) Diputar searah jarum jam
9) Diamati
38
HASIL PANGAMATAN
Tabel 3.1 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Bakteri Metode Gores Medium NA
Pola Pertumbuhan
Warna
No Sampel Dari atas Dari samping Topi kolom
U1 U2 U1 U2 U1 U2 U1 U2
Escherichia Timbul
1 Putih Putih Bulat Titik-titik Melengkung Utuh Utuh
coli datar
Escherichia Tak Tak
2 Putih susu Putih susu Rata Rata Berbenang Utuh
coli teratur teratur
Escherichia Tak Tak Timbul
3 Putih Putih Timbul datar Bergerigi Bergerigi
coli Teratur Teratur datar
Bacillus Tak Tak Timbul
4 Kuning keruh Putih bening Rata Berombak Berombak
cereus teratur teratur datar
Bacillus Putih Putih Tak Timbul
5 Bulat Mencembung Utuh Berombak
cereus kekuningan kekuningan teratur datar
Tabel 3.2 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Bakteri Metode Gores pada NA Miring
Warna Pola Pertumbuhan
No Sampel
U1 U2 U1 U2
1 Escherichia coli - - - -
2 Escherichia coli Putih kekuningan - Serupa tasbih -
3 Escherichia coli Putih kekuningan Putih kekuningan Serupa tasbih Serupa pedang
4 Bacillus cereus Putih - Serupa tasbih -
5 Bacillus cereus - - - -
39
Tabel 3.3 Hail Pengamatan Teknik Isolasi Bakteri Metode Sebar

Pola pertumbuhan
Warna
U1 U2 U1 U2 U1 U2 U1 U2
Putih Putih
1 Escherichia coli Bulat Bulat Timbul datar Timbul datar Utuh Utuh
susu susu
Putih Putih Serupa
2 Escherichia coli Titik-titik Bulat Melengkung Berombak Berombak
susu susu kawah
Putih Tak
3 Escherichia coli Putih Titik-titik Timbul datar Timbul datar Utuh Utuh
kebiruan Teratur
Putih Putih
4 Bacillus cereus Bulat Kumparan Melengkung Rata Utuh Bergerigi
kekuning bening
Putih
5 Bacillus cereus Putih Berbenang Bulat Mencembung Timbul datar Berbelah Berbelah
kebiruan
Tabel 3.4 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Bakteri Metode Sebar (Jamur)
Pola pertumbuhan
Warna
U1 U2 U1 U2 U1 U2 U1 U2
1 Kelompok 11 Kuning Kuning Berbenang Tak teratur Timbul datar Mencembung Berbenang Berbenang
2 Kelompok 12 - - - - - - - -
3 Kelompok 13 - - - - - - - -
Putih
4 Kelompok 14 - Berbenang - Melengkung - Utuh -
kekuningan
5 Kelompok 15 - - - - - - - -
40
Tabel 3.5 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Tuang

Pola pertumbuhan
Warna
U1 U2 U1 U2 U1 U2 U1 U2
1 Escherichia coli Putih Putih Berbenang Bulat Timbul datar Timbul datar Berbenang Utuh
Putih Putih
2 Escherichia coli Tak teratur Bulat Mencembung Melengkung Berombak Utuh
kekuningan kekuningan
Putih
3 Escherichia coli Putih Titik-titik Bulat Timbul datar Timbul datar Utuh Utuh
kekungan
4 Bacillus cereus Putih keruh Putih susu Bulat Titik-titik Timbul datar Melengkung Utuh Berbelah
5 Bacillus cereus Putih susu Putih Bulat Bulat Rata Timbul datar Utuh Utuh
41
PEMBAHASAN
Suatu mikroba yang hidup di alam terbuka jarang dijumpai tumbuh sebagai
biakan murni, tetapi pada umumnya dalam populasi campuran dengan mikrobia
lainnya. untuk mengidentifikasi mikrobia termasuk pengujian morfologi, fisiologi,
dan serologi sebelumnya perlu dilakukan isolasi dari habitatnya. isolasi mikroba
adalah memindahkan mikrobia tersebut dari lingkungannya di alam dan
menumbuhkan sebagai biakan murni dalam medium buatan (Dwidjoseputro,
2010).
Praktikum ini dilakukan untuk mengetahui dan melakukan beberapa cara
untuk mengisolasi mikroba. Dalam praktikum ini, yang digunakan adalah medium
padat yaitu agar. Agar digunakan sebagai media karena tidak dapat diuraikan oleh
mikroba. Media agar merupakan substrat yang sangat baik untuk memisahkan
campuran mikroorganisme sehingga masing-masing jenisnya menjadi terpisah-
pisah (Dwidjoseputro, 2010).
Metode-metode yang digunakan pada praktikum ini antara lain metode
goresan (streak plate method), metode gores miring (slant culture), metode
sebaran (spread plate method), metode tuang (pour plate) dan isolasi jamur
metode sebar. Metode goresan (streak plate method) adalah metode yang
dilakukan dengan menggoreskan suspensi bahan yang mengandung bakteri pada
permukaan medium agar dalam cawan petri. Metode gores miring yaitu metode
yang hampir sama dengan metode streak plate hanya saja metode slant culture ini
media nutrient agar disiapkan dalam tabung reaksi dengan keadaan miring.
Metode sebaran adalah metode yang dilakukan dengan cara menginkubasi
suspensi biakan pada medium secara merata dengan menggunakan drigalski.
Metode tuang adalah metode yang terdiri dari penginokulasian biakan murni
dalam hal ini digunakan bakteri dimana biakan murni dan nutrient agar dituang
dalam cawan petri kemudian diputar searah jarum jam dan diinkubasi. Isolasi
jamur metode sebar adalah metode yang digunakan untuk isolasi jamur dan pada
dasarnya hampir sama dengan isolasi bakteri dengan metode sebar hanya saja
biakan yang digunakan adalah biakan jamur.
42
Metode gores merupakan prinsip metode yang digunkan untuk mendapatkan

koloni yang benar-benar terpisah dari koloni yang lain sehingga mempermudah
proses isolasi. Teknik ini lebih menguntungkan jika ditinjau dari ekonomi dan
waktu, tetapi memerlukan keterampilan-keterampilan yang diperoleh dengan
penggoresan yang sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Hasil
pengamatan pada medium NA dengan kultur Escherichia coli yaitu, U1 berwarna
putih, pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas berbentuk bulat, dari samping
melengkung, dan dari tepi terlihat utuh. Sedangkan U2 berwarna putih susu, pola
pertumbuhan apabila dilihat dari atas tak teratur, dari samping rata dan dari tepi
utuh. Medium NA dengan kultur Escherichia coli yaitu U1 berwarna putih, pola
pertumbuhan apabila dilihat dari atas tak teratur, dari samping timbul datar, dan
dari tepi bergerigi. Medium NA dengan kultur Bacillus cereus yaitu U1 berwarna
kuning keruh, pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas tidak teratur, dari
samping rata dan dari tepi berombak. Sedangkan U2 berwarna putih jernih, pola
pertumbuhan apabila dilihat dari atas tidak teratur, dari samping timbul datar dan
dari tepi berombak. Medium NA dengan kultur Bacillus cereus, yaitu U1
berwarna putih kekuningan pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas bulat, dari
samping mencembung dari tepi utuh, sedangkan U2 berwarna putih kekuningan,
pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas tak teratur, dari samping timbul datar
dan dari tepi berombak.
Metode gores NA miring, pemindahan biakan ke agar miring, perlu
dilakukan penggoresan secara zig-zag, hal tersebut dilakukan agar penyebaran
bakteri pada NA lebih luas dan jumlah bakteri yang tumbuh akan lebih banyak.
Hasil pengamatan pada medium NA miring dengan kultur Escherichia coli yaitu
U1 dan U2 tidak menghasilkan warna apapun dan pola pertumbuhannya tidak
terbentuk. Medium NA miring dengan kultur Escherichia coli yaitu U1 berwarna
putih kekuningan, dengan pola pertumbuhan diambil hasil dilihat dari samping
serupa batang, sedangkan U2 tidak menghasilkan warna begitu pun dengan pola
pertumbuhannya. Medium NA miring dengan kultur Escherichia coli yaitu,
berwarna putih kekuningan, pola pertumbuhan apabila dilihat dari samping U1
serupa tasbih, sedangkan U2 berwarna putih kekuningan dan pola pertumbuhannya
43
serupa pedang. Medium NA miring dengan kultur Bacillus cereus U1 berwarna

putih, dengan pola pertumbuhan serupa batang, sedangkan U2 tidak menghasilkan
warna begitupun dengan pola pertumbuhannya U2. Yang terakhir medium NA
miring dengan kultur Bacillus cereus U1 dan U2 tidak menghasilkan warna apapun
dan pola pertumbuhan juga begitu.
Metode sebar pada bakteri merupakan prinsip metode pertumbuhan mikroba
yang terjadi pada permukaan medium sehingga memudahkan melihat
pertumbuhan mikroba, tetapi kekurangannya pada metode ini adalah pertumbuhan
bakteri yang dihasilkan menyebar atau spreading sehingga sulit untuk
mendapatkan koloni yang tunggal. Hasil pengamatan pada medium NA dengan
kultur Escherichia coli yaitu, U1 berwarna putih susu, pola pertumbuhan apabila
dilihat dari atas bulat, dari samping timbul datar dan dari tepi koloni utuh.
Sedangkan U2 berwarna putih susu, dengan pola pertumbuhan apabila dilihat dari
atas berbentuk bulat dari samping timbul datar dan dari tepi utuh. Medium NA
metode sebar dengan kultur Escherichia coli U1 berwarna putih susu, pola
pertumbuhan apabila dilihat dari atas terlihat seperti titik-titik dari samping serupa
kawat dan dari tepi koloni berombak, sedangkan U2 berwarna putih susu, pola
pertumbuhan dilihat dari atas bulat, dari samping melengkung dan dari tepi koloni
berombak. Medium NA metode sebar dengan kultur Escherichia coli yaitu, U1
berwarna putih kebiruan, pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas titik-titik, dari
samping timbul datar dari tepi koloni utuh. Medium NA metode sebar dengan
kultur Bacillus cereus U1 berwarna putih kekuningan, pola pertumbuhan apabila
dilihat dari atas bulat, dari samping melengkung dari tepi koloni utuh sedangkan
U2 berwarna kuning keruh pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas kumparan,
dari samping rata dari tepi koloni bergerigi. Medium NA metode sebar dengan
kulltur Bacillus cereus U1 berwarna putih, pola pertumbuhan apabila dilihat dari
atas berbenang, dari samping mencembung dari tepi koloni berbelah sedangkan
U2 berwarna putih kebiruan pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas bulat, dari
samping timbul datar dari tepi koloni berbelah.
Metode tuang merupakan prinsip metode yang digunakan untuk penurunan
jumlah mikroorganisme sehingga hanya dalam satu sel. Metode isolasi ini
44
dilakukan dengan cara mengambil sedikit sampel campuran bakteri yang telah
diencerkan dan sampel tersebut kemudian disebarkan atau dituang dari medium,
dari kaldu dan gelatin encer. Hasil pengamatan pada medium NA dilakukan
dengan dua kultur. Kultur yang pertama yaitu Escherichia coli U1 berwarna putih,
pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas berbenang, dari samping timbul datar
dari tepi koloni berbenang sedangkan U2 berwarna putih pola pertumbuhan
apabila dilihat dari atas bulat, dari samping rata dari tepi koloni utuh. Medium NA
dengan kultur Escherichia coli U1 berwarna kekuningan, pola pertumbuhan
apabila dilihat dari atas tak teratur, dari samping mencembung dari tepi koloni
berombak sedangkan U2 berwarna putih kekuningan pola pertumbuhan apabila
dilihat dari atas bulat, dari samping melengkung dari tepi koloni utuh. Medium
NA dengan kultur Escherichia coli U1 berwarna putih kekuningan, pola
pertumbuhan apabila dilihat dari atas titik-titik, dari samping timbul datar dari tepi
koloni utuh sedangkan U2 berwarna putih pola pertumbuhan apabila dilihat dari
atas bulat, dari samping timbul datar dari tepi koloni utuh. Medium NA dengan
kultur Bacillus cereus U1 berwarna putih keruh, pola pertumbuhan apabila dilihat
dari atas bulat, dari samping timbul datar dari tepi koloni utuh sedangkan U2
berwarna putih susu pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas titik-titik, dari
samping melengkung dari tepi koloni berbelah. Yang terakhir medium NA dengan
kultur Bacillus cereus U1 berwarna putih susu, pola pertumbuhan apabila dilihat
dari atas bulat, dari samping rata dari tepi koloni utuh, sedangkan U2 berwarna
putih pola pertumbuhan apabila dilihat dari atas bulat, dari samping timbul datar
dari tepi koloni utuh. Hasil pengamatan teknik isolasi mikroba metode sebar
jamur yaitu dengan kultur Escherichia coli U1 berwarna kuning pola pertumbuhan
apabila dilihat dari atas berbenang, dari samping timbul datar dari tepi koloni
berbenang, sedangkan U2 berwarna kuning pola pertumbuhan apabila dilihat dari
atas tak teratur, dari samping mencembung dari tepi koloni berbenang. Medium
PDA yang kedua dan yang ketiga dengan kultur Escherichia coli tidak ada
perubahahan warna dan pola pertumbuhan pun tidak ada, Medium PDA dengan
kultur Bacillus cereus U1 berwarna putih kekuningan pola pertumbuhan apabila
dilihat dari atas berbenang, dari samping melengkung dari tepi koloni utuh,
45
sedangkan U2 tidak menghasilkan warna dan pola pertumbuhannya tidak ada,

begitu pula pada medium PDA yang terakhir tidak menghasilkan warna dan tidak
adanya pola pertumbuhan baik U1 dan U2.
Berdasarkan hasil pengamatan yang diperoleh pada isolasi bakteri dengan
metode goresan, goresan miring, sebaran, dan tuang dapat diketahui bahwa kode
sampel A merupakan bakteri Escherichia coli kode sample B Merupakan bakteri
Escherichia coli kode sampel C merupakan bakteri Escherichia coli kode sampel
D Merupakan bakteri Bacillus cereus kode sampel E Merupakan bakteri Bacillus
cereus.
Pengerjaan teknik isolasi mikroba harus dilakukan dalam laminar flow
karena pada teknik isolasi mikroba harus dalam keadaan aseptik atau terbebas dari
infeksi mikroorganisme lain yang dapat mengganggu pertumbuhan biakan murni
yang ingin ditumbuhkan. Alat ini diberi nama laminar flow karena meniupkan
udara steril secara kontinyu melewati tempat kerja sehingga tempat kerja terbebas
dari debu dan spora-spora yang jatuh ke dalam media saat pelaksanaan isolasi atau
penanaman mikroba. Penggunaan laminar flow juga harus dilakukan untuk
mengurangi resiko infeksi pasca prosedur dan untuk meminimalkan paparan dari
mikroorganisme yang berpotensi menular. Penggunaan laminar flow dapat
menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang secara tidak sengaja terkena
kulit.
Mikroorganisme untuk pertumbuhannya memerlukan nutrisi dan faktor
lingkungan untuk kelangsungan hidupnya. Mikroorganisme memerlukan
komponen tertentu untuk pertumbuhannya. Syarat suatu Mikroorganisme dapat
tumbuh antara lain tersedianya semua unsur hara yang diperlukan untuk
pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme, medium yang digunakan untuk
menumbuhkan mikroorganisme mempunyai tekanan osmosis dan tegangan
permukaan yang sesuai dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba. Media
yang digunakan harus dalam keadaan steril. Dalam menumbuhkan mikroba
diperlukan bekerja secara aseptis yaitu menjaga kebersihan tempat kerja
menggunakan alat-alat dan bahan-bahan yang steril.
46
Setiap metode isolasi koloni mikroba dilakukan secara duplo. Yang

dimaksud secara duplo yaitu dilakukan dengan dua kali percobaan yang sama. Hal
ini dilakukan untuk membandingkan hasil biakan yang tumbuh pada metode
isolasi yang sama. Dari setiap metode isolasi akan menghasilkan morfologi yang
berbeda-beda walaupun bakteri yang digunakan sama. Hal ini disebabkan karena
adanya perlakuan yang berbeda-beda pada setiap metode. Inkubasi terbalik di
lakukan agar uap air yang berasal dari media tidak jatuh kembali ke atas media
sehingga dapat merusak media itu sendiri.
47
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat ditarik beberapa

kesimpulan antara lain :
1. Teknik isolasi digunakan untuk mendapatkan biakan murni atau kultur
murni.
2. Metode isolasi yang digunakan antara lain metode goresan, metode gores
miring, metode sebar dan metode tuang.
3. Inkubasi terbalik dilakukan agar uap air yang berasal dari media tidak jatuh
kembali ke atas media sehingga dapat merusak media itu sendiri.
4. Setiap metode isolasi dilakukan secara duplo agar dapat membandingkan
hasil biakan yang tumbuh pada metode isolasi yang sama.
5. Media agar merupakan substrat yang sangat baik untuk memisahkan
campuran mikroorganisme sehingga masing-masing jenisnya menjadi
terpisah-pisah.
48
ACARA IV
MORFOLOGI KOLONI BAKTERI
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi. Struktur dan
sifat-sifat yang khas, begitu pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak
berwarna dan kontras dengan air, dmana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan.
Salah satu cara untuk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk
diidentifikasi ialah dengan metode pengecatan atau pewarnaan. Hal tersebut juga
berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding
sel bakteri melalui serangkaian pengecatan (Jimmo, 2008).
Koloni bakteri setiap spesies berbeda, koloni bakteri sendiri merupakan
kumpulan bakteri sehingga terbentuk suatu kelompok. Dewasa ini, bakteri sering
di gunakan sehingga penting untuk mempelajari morfologi koloni bakteri, karena
bila bakteri diinokulasi dan ditumbuhkan pada suatu media maka bakteri itu akan
menunjukkan sifat-sifatnya. Sehingga bila sudah diketahui morfologi bakteri
maka sel-sel bakteri dapat dipisahkan sehingga sel tumbuh menjadi koloni pada
mediumnya masing-masing (Dwidjoseputro, 2006).
Menurut bentuk dan struktur selnya makhluk hidup dibedakan menjadi dua
yaitu makhluk hidup bersel banyak dan makhluk hidup bersel satu, makhluk ini
tidak dapat terlihat dengan mata, karena panca indra manusia memiliki
kemampuan daya pisah atau daya lihat yang sangat terbatas. Oleh karena itu,
banyak masalah mengenai benda atau organisme yang akan diamati dan
pengamatan itu hanya bisa dilakukan dengan menggunakan alat bantu. Morfologi
suatu mikroba dapat diperiksa dalam keadaan hidup maupun mati. Pemeriksaan
morfologi ini penting untuk mengenal nama bakteri, pengenalan sifat
fisiologisnya yang kebanyakan merupakan faktor penentu dalam mengenal nama
spesies. Bagian-bagian sel dapat dilihat dengan terlebih dahulu memberi warna
49
dimana warna bisa bersifat asam, netral maupun basa. Oleh karena itu, dilakukan
percobaan ini untuk mengetahui morfologi suatu koloni bakteri.
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui morfologi koloni
suatu bakteri.
50
TINJAUAN PUSTAKA
Koloni sel bakteri merupakan sekelompok masa sel yang dapat dilihat
dengan mata langsung. Semua sel dalam koloni itu sama dan dianggap semua sel
itu merupakan keturunan (progeny) satu mikroorganisme karena mewakili sebagai
biakan murni. Penampakan koloni bakteri dalam media lempeng agar
menunjukkan bentuk dan ukuran koloni yang khas, dapat dilihat dari bentuk
keseluruhan penampakan koloni, tepi dan permukaan koloni. Dapat juga dilihat
dari elevasi koloni bakteri yang bisa berupa datar, timbul, cembung, seperti
tetesan, seperti tombol, berbukit-bukit, tumbuh ke dalam medium dan seperti
kawah (Kusnadi, 2008).
Koloni bakteri mempunyai bermacam-macam bentuk, diantaranya adalah
berbentuk bundar, bundar dengan tepian kerang, bundar dengan tepian timbul,
keriput, konsentris, tak beraturan dan menyebar, berbenang-benang, bentuk L,
bundar dengan tepian menyebar, filliform, rhizoid dan kompleks. Tepian koloni
bakteri ada yang licin, berombak, berlekuk, tak beraturan, sikat, bercabang, seperti
wol, seperti benang dan seperti ikat rambut. Sedangkan elevasinya ada yang datar,
timbul, cembung, seperti tombol, berbukit-bukit, tumbuh ke dalam medium dan
seperti kawah (Hadioetomo, 2007).
Sel-sel individu bakteri dapat berbentuk seperti elips, bola, batang atau
spiral. Masing-masing ciri ini penting dalam mencirikan morfologi suatu spesies.
Sel bakteri yang berbentuk seperti bola atau elips dinamakan kokus. Kokus mucul
dalam beberapa penataan yang khas tergantung pada spesiesnya. Sel berbentuk
silindris atau batang dinamakan basilus. Ada banyak perbedaan dalam ukuran
panjang dan lebar di antara berbagai spesies basilus. Ujung beberapa basilus
tampak persegi, yang lain bundar, dan yang lain lagi meruncing atau lancip seperti
ujung cerutu. Kadang-kadang basilus tetap saling melekat satu sama lainnya,
ujung dengan ujung, sehingga memberikan penampilan rantai (Darkuni, 2007).
Populasi bakteri tumbuh sangat cepat ketika mereka disertakan dengan gizi
dan kondisi lingkungan yang memungkinkan mereka untuk berkembang. Melalui
pertumbuhan ini, berbagai jenis bakteri kadang-kadang akan menghasilkan koloni
51
yang khas dalam penampilan. Beberapa koloni mungkin akan berwarna, ada yang
berbentuk lingkaran, sementara yang lain tidak teratur. Karakteristik koloni
(bentuk, ukuran, warna, dan lain-lain) yang diistilahkan sebagai "koloni
morfologi" khas bagi tiap jenis bakteri (Waluyo, 2007).
Bakteri bereproduksi secara vegetatif dengan membelah diri secara biner.
Pada lingkungan yang baik bakteri dapat membelah diri tiap 20 menit. Pembuahan
seksual tidak dijumpai pada bakteri, tetapi terjadi pemindahan materi genetik dari
satu bakteri ke bakteri lain tanpa menghasilkan zigot. Peristiwa ini disebut proses
paraseksual. Ada tiga proses paraseksual yang telah diketahui, yaitu transformasi,
konjugasi dan transduksi (Dwidjoseputro, 2006).
52

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 25 Oktober 2016 di

Adapun alat-alat yang diperlukan dalam praktikum ini adalah vortex, tabung
reaksi, jarum ose, jarum preparat, incubator, lampu bunsen, cawan petri, pipet
mikro dan drigalski.
Adapun bahan-bahan yang diperlukan dalam praktikum ini adalah medium
NA (Nutrient Agar) tegak, medium NA miring, Nutrient Broth, aquades,
alkohol, bakteri Bacillus Cereus, Escherichia Coli, PCA (Plate Count Agar)
dan kertas label.
Prosedur Kerja
a. Metode tusuk pada Media NA (Nutrient Agar) tegak
2) Divortex biakan
3) Diambil biakan menggunakan jarum preparat
4) Ditusuk biakan pada medium
5) Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 0C dan diamati pertumbuhannya
b. Metode gores pada Medium NA (Nutrient Agar) miring
2) Divortex biakan
4) Digores biakan ke dalam medium secara zig-zag
53
c. Metode gores pada Medium PCA (Plate Count Agar)

2) Divortex biakan
3) Diambil biakan dengan jarum ose
4) Digores biakan ke dalam medium secara zig-zag
d. Metode sebar pada Media PCA (Plate Count Agar)
2) Divortex biakan
3) Diambil biakan menggunakan pipet mikro
4) Dimasukan biakan kedalam cawan petri
5) Diratakan biakan menggunakan drigalski
e. Medium NB (Nutrient Broth)
2) Divortex biakan
3) Diambil biakan dengan jarum ose
4) Digores biakan ke dalam medium NB (Nutrient Broth)
5) Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 0C dan diamati pertumbuhannya.
54
HASIL PENGAMATAN
Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri

Medium Pertumbuhan
Nama Medium Nutrient Agar Medium Nutrient Agar Medium PCA (Metode Medium PCA (Metode Medium NB (Nutrient
No
Bakteri Tegak (Metode tusuk) Miring (Metode gores) gores) Sebar) Broth)
U1 U2 U1 U2 U1 U2 U1 U2 U1 U2
1. Escherichia Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuha
Coli an : an : Diatas an : Diatas an : Diatas an : Diatas an : Diatas an : Diatas an : Di atas an : n : Endapan
Membentu permukaan permukaan permukaan permukaan permukaan permukaan permukaan Endapan Warna :
k koloni Bentuk Bentuk Bentuk Bentuk Bentuk Bentuk Bentuk Warna : Hijau muda
diatas koloni : koloni : koloni : koloni : koloni : koloni : koloni : Hijau Kekeruahn :
permukaan Berjonjot Titik-titik Titik-titik Keriting Keriting Titik-titik Titik-titik kebiruan Agak keruh
Bentuk Warna : Permukaan Permukaan Permukaan Permukaan Permukaan Permukaan Kekeruahn
koloni : Hijau : : : kasar : kasar : licin : licin : Agak
Berjonjot Membetuk Membentu Bentuk tepi Bentuk tepi Bentuk tepi Bentuk tepi keruh
Warna : lingkaran k lingkaran : keriting : keriting : Berbelah : Berombak
Hijau Bentuk tepi Bentuk tepi Warna : Warna : Warna : Warna :
: Utuh : Utuh Kuning putih Kehijauan Kehijauan
Warna : Warna : kekuningan
Hijau Hijau
2. Bacillus Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuh Pertumbuha
Cereus an : - an : an : Diatas an : Diatas an : Diatas an : Diatas an : diatas an : diatas an : n : Endapan
Bentuk Dibawah permukaan permukaan permukaan permukaan permukaan permukaan Endapan Warna :
koloni : - permukaan Bentuk Bentuk Bentuk Bentuk Bentuk Bentuk Warna : Putih keruh
55
Warna : Bentuk koloni : koloni : koloni : koloni : koloni : koloni : Putih keruh Kekeruahn :
Kuning koloni : Bulat Bulat Bulat Titik-titik Tidak Tidak Kekeruahn Agak keruh
keputihan Berjonjot Permukaan Permukaan Permukaan Permukaan teratur teratur : Agak
Warna : : : : : kasar Permukaan Permukaan keruh
Kuning Membetuk Membentu Membentu Warna : : licin : Kasar
keputihan lingkaran k lingkaran k lingkaran Putih susu Warna : Warna :
Bentuk tepi Bentuk tepi Warna : Putih Putih
: Utuh : Utuh putih susu
Warna : Warna :
Putih Putih
kekuningan kekuningan
56
PEMBAHASAN
Koloni sel bakteri merupakan sekelompok masa sel yang dapat dilihat
dengan mata langsung. Semua sel dalam koloni itu sama dan dianggap semua sel
itu merupakan keturunan (progeny) satu mikroorganisme karena mewakili sebagai
biakan murni. Penampakan koloni bakteri dalam media lempeng agar
menunjukkan bentuk dan ukuran koloni yang khas, dapat dilihat dari bentuk
keseluruhan penampakan koloni, tepi dan permukaan koloni. Dapat juga dilihat
dari elevasi koloni bakteri yang bisa berupa datar, timbul, cembung, seperti
tetesan, seperti tombol, berbukit-bukit, tumbuh ke dalam medium dan seperti
kawah (Kusnadi, 2008).
Media yang di gunakan adalah medium Nutrient Agar (NA) miring dan
tegak, medium Plate Count Agar (PCA), dan medium Nutrient Broth (NB).
Medium Nutrient Agar (NA) adalah medium padat yang digunakan untuk
menumbuhkan bakteri. Medium Plate Count Agar (PCA) adalah media
pertumbuhan mikroorganisme yang umum digunakan untuk menghitung jumlah
mikroorganisme total pada sampel. Medium Nutrient Broth (NB) adalah medium
yang serupa dengan NA tetapi berbentuk cair. Metode yang digunakan adalah
metode tusuk, metode gores, metode sebar. Metode tusuk dilakukan dengan
menusukkan jarum preparat yang terdapat biakan ke media. Metode gores
dilakukan dengan menggoreskan biakan ke media tumbuh. Metode sebar
dilakukan dengan menyebarkan atau meratakan biakan ke media dengan drigalski.
Bakteri ada yang bersifat anaerob obligat, anaerob fakultatif, aerob
fakultatif, dan aerob obligat. Anaerob obligat yaitu bakteri yang dapat hidup jika
tidak ada oksigen. Anaerob fakultatif yaitu dapat bertahan hidup baik tanpa
oksigen tetapi tetap dapat hidup dengan oksigen. Aerob fakultatif yaitu dapat
bertahan hidup baik dengan oksigen tetapi tetap dapat hidup tanpa oksigen. Aerob
obligat yaitu hanya dapat hidup jika ada oksigen. Bakteri yang digunakan adalah
Escherichia coli (gram negatif) dan Bacillus cereus (gram positif).
Berdasarkan hasil pengamatan, Escherichia coli pada medium NA tegak
dengan metode tusuk pertumbuhannya membentuk koloni di atas permukaan
57
media, bentuk koloninya berjonjot dan warnanya hijau. Escherichia coli pada
medium NA miring dengan metode gores pertumbuhannya membentuk koloni di
atas permukaan media, bentuk koloninya titik-titik, permukaannya membentuk
lingkaran, bentuk tepi utuh, dan warnanya hijau. Escherichia coli pada medium
PCA metode gores pertumbuhannya membentuk koloni di atas permukaan media,
bentuk koloninya keriting, permukaannya kasar, bentuk tepinya keriting,
warnanya adalah kuning pada U1 dan putih kekuningan pada U2. Escherichia coli
pada medium PCA metode sebar pertumbuhannya di bawah permukaan media,
bentuk koloni titik-titik, permukaannya licin, bentuk tepi pada U1 berbelah, pada
U2 berombak, warnanya kehijauan. Escherichia coli pada medium NB
pertumbuhannya membentuk endapan, warnanya putih keruh. Hasil pengamatan
Bacillus cereus pada medium NA tegak dengan metode tusuk adalah pada U1
tidak terjadi pertumbuhan hanya warnanya yang kuning keputihan, pada U2
pertumbuhannya terjadi di bawah permukaan, permukaan koloni berbentuk
lingkaran bentuk koloni berjonjot dan warnanya kuning keputihan. Bacillus
cereus pada medium NA miring dengan metode gores pertumbuhan koloni di atas
permukaan, bentuk koloni bulat, permukaan koloni membentuk lingkaran, bentuk
tepi utuh, warnanya putih kekuningan. Bacillus cereus pada medium PCA gores
pertumbuhan koloni di atas permukaan, bentuk kolni bulat pada U1, titik-titik pada
U2, permukaan U1 membenuk permukaan dan U2 permukaannya kasar, bentuk
tepi U1 utuh dan U2 keriting, warnanya putih susu. Bacillus cereus pada medium
PCA metode sebar pertumbuhannya di atas permukaan, bentuk koloni tak
beraturan, permukaan U1 licin permukaan U2 kasar, bentuk tepi U1 keriting bentuk
tepi U2 berbelah, warnanya putih. Bacillus cereus pada medium NB
pertumbuhannya membentuk endapan, warna putih keruh dan kekeruhannya agak
keruh.
Menurut Jimmo (2008), koloni Escherichia coli pada agar biasanya
berwarna putih, kadang kuning putih, bentuknya entire sampai endulate,
kelembaban homogen, tembus cahaya, bersifat aerobik sampai aerob fakultatif.
Koloni Bacillus cereus bersifat aerobik sampai aerob fakultatif berbentuk koloni
kasar, tidak dapat di tembus cahaya, pertumbuhan tidak merata, terjadi kekeruhan,
58
permukaan halus, lembut dan tipis, opaque, berwarna kuning sampai jingga
coklat. Dari hasil pengamatan morfologi bakteri, baik pada Escherichia coli
maupun pada Bacillus cereus ada beberapa perbedaan dengan literatur, hal ini di
sebabkan karena proses inokulasi yang tidak benar sehingga terjadi kontaminasi.
59
KESIMPULAN

sebagai berikut:
1. Koloni merupakan kumpulan dari bakteri yang membentuk suatu kelompok
bentuk koloni berbeda-beda tiap spesies merupakan ciri khas bagi suatu
spesies tertentu.
2. Morfologi koloni bakteri meliputi bentuk koloni, bentuk tepi, mengkilat atau
tidak, halus kasarnya permukaan dan warna koloni.
3. Media yang digunakan untuk pertumbuhan mikroba adalah Plate Count
Agar (PCA), Nutrient Agar (NA) dan Nutrient Broth (NB).
4. Bakteri Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif dan bersifat aerob,
bakteri Bacillus cereus adalah bakteri gram positif dan bersifat aerob.
5. Perbedaan hasil pengamatan dengan literatur bisa disebabkan karena proses
inokulasi yang tidak benar dan adanya kontaminan.
60
ACARA V
PERHITUNGAN JUMLAH DAN PENENTUAN UKURAN MIKROBA
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Mikroorganisme adalah mahluk yang sangat kecil yang hanya dapat dilihat
di bawah mikroskop. Salah satu jenis mikrooganisme adalah bakteri. Bakteri
adalah mikroorganisme uniseluler yang tumbuh dengan cara pembelahan biner
yaitu satu sel membelah secara simetris. Untuk mempermudah perhitungan koloni
diperlukan pengetahuan mengenai morfologi bakteri tersebut sehingga media
pertumbuhan yang akan digunakan sesuai dengan sifat bakteri tersebut. Kehadiran
mikroba ada yang menguntungkan dan ada juga yang merugikan (Brady, 2006).
Beberapa cara untuk mengukur dan menghitung mikroba yaitu dengan
perhitungan jumlah sel, perhitungan massa sel secara langsung dan pendugaan
massa sel secara tak langsung. Perhitungan jumlah sel dapat dilakukan dengan 3
metode yaitu dengan hitungan mikroskopik, MPN (Most Probable Number) dan
hitungan cawan. Dari ketiga metode tersebut metode cawan paling banyak
digunakan. Mikroorganisme yang membentuk koloni dapat diketahui penyebaran
bakteri yang ada pada bahan. Mikroorganisme yang membentuk koloni dapat
dianggap bahwa setiap koloni yang tumbuh berasal dari satu sel (Zaraswati,
2008).
Jumlah mikroba pada suatu bahan dapat dihitung dengan berbagai macam
cara tergantung pada jenis bahan dan jenis mikrobanya. Ada dua cara perhitungan
yaitu perhitungan secara langsung dan tidak langsung. Perhitungan secara
langsung yaitu jumlah mikroba dihitung secara keseluruhan baik yang mati
ataupun hidup atau hanya untuk menentukan jumlah mikroba yang hidup saja
tergantung cara yang digunakan. Jumlah penyebaran bakteri pada bahan sangat
bervariasi jumlahnya dan tergantung pada varietas, susunan kimia, suhu dan
penyimpanannya (Waluyo, 2007). Oleh karena itu, perlu dilakukan pengamatan
61
dan perhitungan mikroba sehingga penyebaran dan ukuran mikroba dapat

diketahui.
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan praktikum ini adalah mengetahui jumlah perhitungan dan
penentuan ukuran mikroba.
62
TINJAUAN PUSTAKA
Perhitungan bakteri adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung

jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada suatu media biakan. Secara mendasar
ada dua cara perhitungan bakteri yaitu secara langsung dan tidak langsung. Ada
beberapa cara perhitungan secara langsung antara lain adalah dengan membuat
preparat dari suatu bahan (diwarnai atau tidak diwarnai) dan penggunaan ruang
hitung (counting chamber). Sedangkan perhitungan secara tidak langsung hanya
mengetahui jumlah mikroorganisme pada suatu bahan yang masih hidup saja
(viable count). Dalam pelaksanaannya ada beberapa cara perhitungan yaitu
perhitungan pada cawan petri (total plate count/TPC), perhitungan melalui
pengenceran, perhitungan jumlah terkecil atau terdekat (MPN Metode) dan cara
kekeruhan atau turbidimetri (Waluyo, 2009).
Berdasarkan perhitungan bakteri ketepatan berkurang dengan meningkatnya
konsentrasi sel-sel. Begitu halnya bila jumlah yang dihitung terlalu kecil.
Pertumbuhan mikroorganisme yang membentuk koloni dapat dianggap bahwa
setiap koloni yang tumbuh berasal dari satu sel. Dengan menghitung koloni dapat
diketahui penyebaran bakteri yang ada pada bahan. Jumlah mikroba pada suatu
bahan tergantung pada jenis dan bahan pada mikrobanya (Stainer, 2007).
Perhitungan jumlah koloni atau mikroorganisme dengan cara Reable
Count atau disebut juga sebagai standar plate count. Hal ini didasarkan asumsi,
bahwa setiap sel mikrooganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh satu koloni.
Koloni akan tumbuh setelah diinkubasi dalam media biakan dan lingkungan yang
sesuai. Setelah masa inkubasi jumlah koloni yang tumbuh dihitung. Jumlah koloni
yang tumbuh merupakan perkiraan atau dugaan dari jumlah mikroorganisme
dalam suspensi tersebut (Bibiana, 2010).
Sebelum melakukan perhitungan mikroba, dilakukan pengenceran terlebih
dahulu. Pengenceran ini dilakukan agar konsentrasi dari suspensi menurun
sehingga akan mempermudah untuk melakukan perhitungan. Karena ukuran
mikroba sangat kecil, menghitung jumlah mikroba dalam sampel bisa sulit. Dalam
63
hal ini metode yang mudah digunakan adalah dengan menyebarkan mikroba dan
menghitung jumlah koloni yang tumbuh. Jika bakteri menyebar cukup, setiap sel
mikroba dalam sampel harus menghasilkan sel tunggal, biasanya sampel bakteri
harus diencerkan agar mendapat jumlah yang wajar (Eema, 2011).
Menurut Havis (1998), metode apapun yang dipakai untuk menghitung
jumlah mikroorganisme, terdapat dua aspek dari mikroorganisme yang tidak bisa
dicakup oleh perkiraan jumlahnya. Salah satu aspek tersebut adalah ukuran dari
mikroorganisme dan jumlah jaringan bermetabolisme yang mewakilinya,
walaupun semua organisme yang dibicarakan disini semuanya termasuk
mikroorganisme pada kenyataannya sebuah amoeba mempunyai paling sedikit
1000 kali lebih banyak protoplasma daripada rata-rata bakteri. Membandingkan
antara fungi dan bakteri sukar dilaksanakan karena perbedaan dalam ukuran dan
morfologi. Aspek kedua yaitu penetapan jumlah mikroorganisme tidak
menyampaikan apapun mengenai aktivitasnya (Staff Pengajar Jurusan Tanah
Fakultas Pertanian, 2003).
64

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 15 November 2016 di

Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum antara lain cawan petri,
vortex, lampu bunsen, tabung reaksi, pipet mikro, drigalski, colony counter,
blue tip dan yellow tip.
Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum antara lain Bacillus
cereus, alkohol, medium agar dan kertas label.
Prosedur Kerja
a. Perhitungan bakteri dengan metode sebar
2) Divortex biakan
3) Dilakukan pengenceran sebanyak 10-6
4) Diambil 0,1 mL pengenceran 10-4, 10-5 dan 10-6 dengan menggunakan pipet
mikro.
5) Dimasukkan biakan kedalam cawan petri
6) Diratakan biakan dengan menggunakan drigalski yang sudah disterilkan
7) Ditumbuhkan secara duplo
8) Diinkubasi terbalik pada suhu 37 0C selama 48 jam
9) Diamati pertumbuhannya dan dihitung jumlah koloninya
b. Perhitungan koloni bakteri dengan metode tuang
2) Divortex biakan
3) Dilakukan pengenenceran sebanyak 10-6
65
4) Diambil 0,1 mL pengenceran 10-4, 10-5 dan 10-6 dengan menggunakan pipet
mikro.
5) Dituang medium Nutrient Agar (NA) ke dalam cawan petri
6) Dimasukkan biakan ke dalam cawan petri
7) Diltumbuhkansecara duplo
8) Diinkubasi tebalik pada suhu 37 0C selama 48 jam
9) Diamati pertumbuhannya dan dihitung jumlah koloninya
66
HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN
Tabel 5.1 Hasil Pengamatan Perhitungan Jumlah Koloni Bakteri Bacillus cereus Metode Sebar
Pengenceran
-4 Koloni
Kelompok 10 10-5 10-6
(CFU/g)
U1 U2 U1 U2 U1 U2
11 27 (1 spreader) 51 (1 spreader) 12 (1 spreader) 4 2 (1 spreader) 5 4 x 105
12 36 (1 spreader) 84 (1 spreader) 36 (1 spreader) 32 55 (1 spreader) 37 (1 spreader) 6,1 x 105
13 56 (2 spreader) 16 (5 spreader) 8 (1 spreader) 13 (3 spreader) 6 (1 spreader) 4 (1 spreader) 5,8 x 105
14 7 (1 spreader) >250 (1 spreader) 30 (1 spreader) >250 (1 spreader) >250 (1 spreader) 2 (2 spreader) >2,5 x 107
15 >250 (1 spreader) 11 7 (2 spreader) 23 (1 spreader) 9 (1 spreader) 2 >2,5 x 106
16 1 (1 spreader) >250 (1 spreader) 5 >250 (1 spreader) 6 4 >2,5 x 106
17 41 (1 spreader) 41 (1 spreader) >250 11 46 (1 spreader) 53 (1 spreader) >2,5x 106
18 36 (1 spreader) >250 10 6 (1 spreader) 3 (1 spreader) 7 3,7 x 106
19 >250 (2 spreader) >250 (1 spreader) 188 (1 spreader) >250(1 spreader) >250 (1 spreader) >250 (1 spreader) >2,5 x 106
20 171 206 129 153 211 173 1,885 x 106
67
Tabel 5.2 Hasil Pengamatan Perhitungan Jumlah Koloni Bakteri Bacillus cereus Metode Tuang
Pengenceran
-4 Koloni
Kelompok 10 10-5 10-6
(CFU/g)
U1 U2 U1 U2 U1 U2
11 35 >250 17 27 ( 1 spreader) >250 (1 spreader) >250 >2,5 x 106
12 >250 (2 spreader) >250 (1 spreader) >250 10(1 spreader) >250 (1 spreader) >250 (1 spreader) >2,5x 106
13 >250 (2 spreader) >250 (1 spreader) >250 (1 spreader) >250 (1 spreader) 54 (3 spreader) 43 (3 spreader) >2,5x 106
14 25 (2 spreader) 47 (1 spreader) 14 (1 spreader) 22 1 (1 spreader) >250 3,75 x 105
15 70 60 9 (1 spreader) 10 (1 spreader) >250 >250 (1 spreader) >2,5 x 108
16 1 (1 spreader) 22 >250 >250 44 54 >2,5x 106
17 >250 >250 >250 >250 81 46 >2,5x 106
18 45 28 >250 >250 9 (1 spreader) 16 >2,5x 107
19 >250 54 (1 spreader) 38 >250 1 spreader 28 >2,5x 106
20 >250 >250 >250 >250 70 >250 7 x 107
Hasil Perhitungan
a. Hasil pengamatan jumlah koloni bakteri Bacillus cereus metode sebar
1. Kelompok 11
U1 + U2
Koloni = faktor pengenceran
2
28 + 52
= 104
2
68
= 40 104
= 4,0 105 CFU/gram
2. Kelompok 12
Koloni = U1 + U2 faktor pengenceran
2
= 37 + 85 104
2
= 122 104
2
= 61 104
= 6,1 105 CFU/gram
3. Kelompok 13
2
= 58 + 81 104
2
= 139 104
2
= < 39,5 104
= < 3,95 105 CFU/gram
4. Kelompok 14
2
= 7 + >250 104
2
= > 250 104
= >2,5 106 CFU/gram
5. Kelompok 15
2
69
= >250 + 11 104
2
= >250 104
= >2,5 106 CFU/gram
6. Kelompok 16
2
= 2 + >250 104
2
= >250 104
= >2,5 106 CFU/gram
7. Kelompok 17
2
= 42 + 42 104
2
= 84
104
2
= 42 104
= 4,2 105 CFU/gram
8. Kelompok 18
2
= 37 + >250 104
2
= >250 104
= >2,5 106 CFU/gram
9. Kelompok 19
2
= >250 + >250 104
2
70
= >250 104
= >2,5 106 CFU/gram
10. Kelompok 20
2
= 171 + 206 104
2
= 377 104
2
= 188,5 104
= 1,89 106 CFU/gram
b. Hasil Perhitungan Jumlah Koloni Bakteri Bacillus cereus Metode Tuang
1. Kelompok 11
2
= >250 + >250 106
2
= >250 106
= 2,5 108 CFU/gram
2. Kelompok 12
2
= >250 + >250 106
2
= >250 106
= 2,5 108 CFU/gram
3. Kelompok 13
2
= 57 + 46 106
2
71
= 103 106
2
= 5,15 107 CFU/gram
4. Kelompok 14
2
= 27 + 48 104
2
= 75 104
2
= 3,75 105 CFU/gram
5. Kelompok 15
2
= 70 + 60 106
2
= 130 106
2
= 6,5 107 CFU/gram
6. Kelompok 16
2
= 44 + 54 106
2
= 98 106
2
= 4,9 107 CFU/gram
7. Kelompok 17
2
= 81 + 46 106
2
72
= 127 106
2
= 6,35 107 CFU/gram
8. Kelompok 14
2
= >250 + >250 105
2
= >250 106
= >2,5 107 CFU/gram
9. Kelompok 19
2
= 30 + >250 105
2
= >250 105
= >2,5 107 CFU/gram
10. Kelompok 20
2
= 70 + >250 105
2
= >250 106
= >2,5 108 CFU/gram
73
PEMBAHASAN
Perhitungan koloni adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung

jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada suatu media. Secara mendasar ada dua
cara perhitungan bakteri, yaitu secara langsung dan tidak langsung. Ada beberapa
cara perhitungan secara langsung antara lain adalah dengan menggunakan
counting chamber menggunakan cara pengecetan dan pengamatan tidak langsung
antara lain menggunakan sentrifuge, berdasarkan kekeruhan, berdasarkan kering,
pengenceran, menggunakan cara Most Probable Number (MPN) dan berdasarkan
jumlah koloni (Plate Count) (Waluyo, 2009).
Metode yang digunakan pada saat praktikum yaitu metode sebar dan metode
tuang. Metode sebar adalah cara menginkubasi suspensi bukan pada medium di
dalam cawan petri secara merata dengan menggunakan drigalski. Hasil setelah
diinkubasi akan terlihat koloni-koloni yang tersebar merata dipermukaan medium,
sedangkan metode tuang adalah metode yang suspensi biakannya tidak diratakan
dengan drigalski. Metode yang digunakan pada praktikum ini adalah metode
cawan. Metode cawan didasarkan pada anggapan bahwa tiap sel dapat
berkembang menjadi koloni, jadi jumlah koloni yang muncul pada cawan adalah
indeks bagi jumlah mikrooganisme yang terkandung dalam sampel. Teknik dari
metode ini adalah mengencerkan sampel dan mencawankan hasil pengenceran,
setelah diinkubasi sejumlah koloni diamati untuk memenuhi persyaratan statistik.
Pengenceran dilakukan agar setelah inkubasi, koloni yang tebentuk pada cawan
tersebut dalam jumlah yang dapat dihitung.
Bakteri merupakan organisme yang paling banyak jumlahnya dan lebih
tersebar luas dibandingkan dengan mahluk hidup lain. Bakteri adalah kelompok
organisme yang tidak memiliki membran inti sel. Organisme ini termasuk dalam
prokariota dan berukuran sangat kecil. Bakteri dapat diklasifikasikan dalam dua
kelompok besar berdasarkan struktur dinding selnya. Yaitu bakteri gram positif
dan bakteri gram negatif. Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tersusun
lapisan peptidoglikan yang tebal sedangkan bakteri gran negatif memiliki lapisan
74
yang lebih tipis. Habitatnya sangat beragam baik dilingkungan perairan, tanah,
udara bahkan di dalam organisme hidup (Bibiana, 2010).
Rentang tumbuh bakteri dan jamur dapat dihitung yaitu 25-250 koloni
sedangkan pada jamur 15-150 koloni. Prinsip pengenceran adalah menurunkan
jumlah sehingga semakin banyak jumlah pengenceran yang dilakukan maka
jumlah mikrobanya semakin sedikit. Dimana suatu saat didapat hanya satu
mikroba pada satu tabung. Inkubasi dilakukan selama 2 x 24 jam karena jumlah
mikroba maksimal yang dapat dihitung optimal setelah masa tersebut diinkubasi.
Dimana jumlah terbaik antara 30-300 sel mikroba. Selama masa inkubasi, sel
yang masih hidup akan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung oleh mata.
Hasil perhitungan pada medium Bacillus Cereus dengan metode sebar
didapatkan bahwa kelompok 11 memenuhi syarat pada pengenceran 10-4
sehingga U1 sama dengan 36 dan U2 sama dengan 51 sehingga didapatkan
Koloni sebesar 3,9 x 105 CFU/gram. Pengenceran memenuhi syarat untuk
kelompok 12 adalah 10-4 dengan U1 sama dengan 36 dan U2 sama dengan 84
sehingga koloni sebesar 6 x 105 CFU/gram. Pada kelompok 13, 14, 15, 16, 18
dan 19 masing-masing hasil pengamatan tidak ada yang memenuhi syarat
pengenceran sehingga batas teratas yang diambil, dan didapatkan besar rata-rata
koloni pada masing-masing kelompok adalah 5,6 x 105 CFU/gram, 3 x 106
CFU/gram, 2,5 x 106 CFU/gram, >2,5 x 106 CFU/gram, 3,6 x 105 CFU/gram, dan
1,88 x 107 CFU/gram. Sedangkan untuk hasil pengamatan kelompok 17 dan 20
pada bakteri BacillusCereus metode tuang memenuhi syarat pada pengenceran
104 dengan nilai U1 masing 41 dan 71, dan nilai U2 masing-masing 41 dan 206
sehingga dihasilkan besar koloni pada masing-masing yaitu 4,1 x 105 CFU/gram
dan 1,88 x 106 CFU/gram. Pengenceran pada kelompok 11, 12, 19 dan 20 tidak
memenuhi syarat. Pada setiap pengenceran memiliki nilai rata-rata koloni masing-
masing sebesar 3,5 x 105 CFU/gram, >2,5 x 108 CFU/gram, 5,4 x 105 CFU/gram
dan 7 x 107 CFU/gram. Kelompok 13, 16 dan 17 memenuhi syarat pada
pengenceran 10-6 dengan nilai masing-masing U1 yaitu 54, 44, dan 81 dan nilai U2
masing-masing yaitu 43, 54, dan 46. Sehingga mendapatkan nilai rata-rata koloni
untuk masing-masing kelompok sebesar 4,85 x 107 CFU/gram, 4,9 x 107
75
CFU/gram dan 6,35 x 107 CFU/gram. Pada kelompok 14, 15 dan 18 memenuhi
syarat pada pengenceran 10-4 dengan nilai U1 masing-masing yaitu 25, 70 dan 45
sedangkan U2 masing-masing 47, 60 dan 28 sehingga didapatkan nilai rata-rata
koloni sebesar 8,6x105 CFU/gram, 6,5 x 105 CFU/gram dan 3,65 x 105 CFU/gram
pada masing-masing kelompok.
Setiap tahap pengenceran harus dilakukan dengan teliti agar didapatkan
hasil yang tepat. Cara pengenceran dilakukan untuk menentukan jumlah mikroba
yang hidup saja. Dasar perhitungannya adalah dengan mengencerkan volume
tertentu suatu suspensi bahan atau biakan mikroba secara bertingkat. Faktor-faktor
yang mempengaruhi jumlah mikroba yaitu kerapatan sel pada mikroba ditentukan
oleh bertambahnya ukuran sel, jumlah sel, bentuk sel pada masing-masing biakan,
jumlah dipengaruhi oleh pertumbuhan sel, sel menyangkut pertumbuhan volume
sel, sehingga semakin padat pertumbuhannya maka semakin rapat pula kerapatan
sel. Menurut Fardiaz (1992), jika pada semua pengenceran yang dilakukan terlalu
tinggi menghasilkan <30 koloni pada cawan petri sedangkan jika semua
pengenceran dihasilkan koloni bakteri >300 koloni pada cawan petri maka
pengenceran yang dilakukan terlalu rendah. Selain itu kondisi pertumbuhan
bakteri termasuk komposisi media yang digunakan waktu inkubasi, suhu, dan pH
sangat menentukan jenis bakteri yang dapat tumbuh dari seluruh populasi yang
ada.
Perhitungan bisa menghasilkan TBUD (Terlalu banyak untuk dihitung)
karena jumlah koloni bakterinya lebih dari 250, karena rentang tumbuh bagi
koloni bakteri adalah 25-250 dan pada jamur 15-150. CFU atau (Colony Forming
Units) adalah satuan rata-rata koloni selain itu penyebab kesalahan TBUD adalah
disebabkan oleh kesalahan yang terjadi saat praktikum baik saat melakukan
pengenceran maupun saat menghomogenkan suspensi dengan media di cawan
petri yang tidak steril atau karena adanya kontaminasi, selain itu pengaruh
lingkungan dan kesalahan saat praktikum yang dilakukan oleh praktikan.
76
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan, maka dapat ditarik

beberapa kesimpulan sebagai berikut :
1. Perhitungan bakteri adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung
jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada suatu media biakan.
2. Tingkat pengenceran mempengaruhi jumlah koloni yang tumbuh, semakin
tinggi pengenceran semakin sedikit koloni yang tumbuh, sebaliknya
semakin rendah pengenceran semakin banyak koloni yang akan tumbuh
3. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jumlah mikroba yaitu
kerapatan sel, kondisi pertumbuhan bakteri, waktu inkubasi, suhu dan pH.
4. Jumlah koloni rata-rata Bacillus Cereus metode sebar berturut-turut dari
kelompok 11 sampai 20 adalah 3,9 105 CFU/gram, 6 x 105 CFU/gram, 5,6
x 105 CFU/gram, 3 x 106 CFU/gram, 2,5 x 106 CFU/gram, 2,5 x 106
CFU/gram, 4,1 x 105 CFU/gram, 3,6 x 105 CFU/gram, 1,88 x 107
CFU/gram, dan 1,885 x 106 CFU/gram. Sedangkan koloni rata-rata metode
tuang berturut-turut dari kelompok 11 sampai 20 adalah 3,5 x 105
CFU/gram, >2,5 x 108 CFU/gram, 4,85 x 107 CFU/gram, 3,6 x 105
CFU/gram, 6,5x105 CFU/gram, 4,9x107 CFU/gram, 6,35x107 CFU/gram,
3,65 x 105 CFU/gram, 5,4 x 105 CFU/gram, dan 7 x 107 CFU/gram.
5. Pada perhitungan bisa menghasilkan TBUD (terlalu banyak untuk dihitung)
karena jumlah koloni bakterinya lebih dari 250 atau bisa terjadi karena
kesalahan praktikan pada saat praktikum.
77
ACARA VI
PENGECATAN GRAM
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Bakteri mempunyai morfologi struktur dan sifat-sifat yang khas. Bakteri
merupakan mikroorganisme yang berukuran mikroskopik. Selain mikroskopik,
bakteri yang hampir tidak berwarna atau transparan dan kontras dengan air
sehingga melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit. Untuk
mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri.
Hal ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian
mikrobiologi untuk mempermudah proses identifikasi bakteri (Sutedjo, 2007).
Mengidentifikasi suatu bakteri murni bakteri hasil isolasi mula-mula diamati
morfologi sel secara mikroskopik melalaui pengecatan dan pewarnaan salah
satunya adalah dengan pewarnaan gram. Pewarnaan gram merupakan salah satu
teknik pewarnaan atau pengecatan bakteri untuk mempermudah identifikasi
bakteri. Morfologi mikroskopik mikroorganisme yang diperiksa dan sifatnya yang
khas terhadap pengecatan tertentu (pengecatan gram) dapat digunakan untuk
identifikasi awal. Dengan metode pengecatan gram, bakteri dapat dikelompokkan
menjadi dua yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif berdasarkan reaksi
atau sifat bakteri terhadap cat tersebut. Reaksi atau sifat bakteri tersebut
ditentukan oleh komposisi dinding dinding selnya (Adisoenarto, 2006).
Mengamati bentuk atau ciri-ciri suatu mikroba menggunakan mikroskop
dapat digunakan dua cara yaitu mengamati sel mikroba yang masih hidup tanpa
diwarnai dan mengamati sel mikroba yang telah mati dengan diwarnai. Untuk
lebih mudah dilihat sebaiknya bakteri diwarnai dengan zat warna, beberapa zat
yang digunakan untuk mewarnai bakteri juga dapat digunakan untuk ,mengamati
struktur bagian sel. Dengan adanya pewarnaan terutama bakteri yang mempunyai
sel dengan ukuran yang relatif kecil akan mudah terlihat di bawah mikroskop
dengan menggunakan lensa objektif, minyak injeksi yang mempunyai perbesaran
78
relatif tinggi. Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sempat sulit,
karena selain bakteri itu tidak berwarna juga tranparan dan sangat kecil. Untuk
mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri
sehingga mudah diamati (Gozali, 2009). Oleh karena itu, perlu dilakukannya
praktikum ini adalah untuk mengetahui cara atau teknik pengecatan gram bakteri.
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui cara atau teknik
pengecatan gram.
79
TINJAUAN PUSTAKA
Pewarnaan gram atau metode gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang
paling penting dan luas yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri. Dalam
proses ini, olesan bakteri yang sudah terfiksasi dikenai larutan-larutan berikut
mulai dari zat warna kristal violet, larutan iodium, larutan alkohol (bahan
pemucat) dan zat peawarna tandingannya berupa zat safranin. Bakteri yang
diwarnai dengan metode ini dibagi menjadi dua kelompok yaitu bakteri gram
positif dan bakteri gram negatif. Bakteri gram positif akan mempertahankan zat
pewarna kristal violet dan karenanya akan tampak berwarna ungu tua di bawah
mikroskop. Adapun bakteri gram negatif kehilangan zat pewarna kristal violet
setelah dicuci dengan alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna tandingannya yaitu
dengan zat pewarna safranin akan tampak berwarna merah (Harley, 2007).
Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat
macam yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial,
dan pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad-jasad renik
yang lain dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis,
atau olesan yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur
pewarnaan yang menampilkan perbedaan diantara sel-sel mikroba atau bagian sel
mikroba disebut pengecatan diferensial. Sedangkan pengecatan struktural hanya
mewarnai satu bagian dari sel sehingga dapat membedakan bagian-bagian dari sel
(Waluyo, 2007).
Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit, karena
selain bakteri itu tidak bewarna juga transparan dan sangat kecil. Untuk mengatasi
hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewaarnaan sel bakteri sehingga sel
dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Oleh karena itu, teknik pewarnaan sel
bakteri ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-
penelitian mikrobiologi. Tujuan dari pewarnaan adalah untuk mempermudah
melihat bentuk jasad, meperjelas ukuran dan bentuk jasad, melihat stuktur luar
dan kalau memungkinkan struktur dalam jasad, melihat reaksi jasad terhadap
80
pewarna yang diberikan sehingga sifat-sifat fisik dan kimia dapat diketahui
(Ferdiaz, 2008).
Bakteri yang telah difiksasi dalam pengecatan gram akan membentuk noda
pada kaca objek diwarnai dengan pewarna basa yaitu kristal violet. Karena warna
ungu mewarnai seluruh sel, maka pewarna ini disebut pewarna primer.
Selanjutnya noda dicuci dan pada noda spesimen ditetesi iodin yang merupakan
Mordan. Selanjutnya iodin dicuci, baik bakteri gram positif maupun gram negatif
tampak berwarna ungu. Selanjutnya noda spesimen ditetesi dengan alkohol yang
merupakan decolorizing agent (senyawa peluntur warna) yang pada spesies
bakteri tertentu dapat menghilangkan warna ungu dari sel. Setelah alkohol dicuci,
noda spesimen diwarnai kembali dengan safranin yang berwarna merah. Bakteri
yang tetap berwarna ungu digolongkan kedalam gram positif, sedangkan bakteri
yang berwarna merah digolongkan kedalam bakteri gram negatif (Razali, 2006).
Perbedaan dasar antara bakteri gram positif dan gram negatif adalah pada
komponen dinding selnya. Kompleks zat iodin terperangkap antara dinding sel
dan membran sitoplasma organisme gram positif, sedangkan penyingkiran zat
lipida dari dinding sel organisme gram negatif dengan pencucian alkohol
memungkinkan hilang dari sel. Bakteri gram positif memiliki membran tunggal
yang dilapisi petidoglikan yang tebal (25-50 nm). Sedangkan bakteri gram negatif
lapisan peptidoglikannya tipis (1-3 nm) (Pelczar, 2008).
Bacillus cereus IFO 13690 adalah bakteri gram positif penghasil
polihidroksibutirat (PHB). Hal ini disebabkan karena bakteri gram positif tidak
memiliki membran LPS, sehingga PHB yang disintesis oleh bakteri gram positif
lebih potensial. Polyhidroxybutyrate (PHB) merupakan polyester yang paling
umum dikenal dan diproduksi oleh berbagai macam bakteri. Sebagian besar
anggota Bacillus cereus memiliki kemampuan amilolitik sehingga dapat
digunakan untuk produksi PHB dengan substrat pati (Margono, 2011).
81


Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah cawan petri,
gelas benda, gelas penutup, lampu bunsen, mikroskop binokuler, jarum ose,
vortex, tabung reaksi, kaca preparat, tissue, pipet tetes, wadah plastik dan
stopwatch.
Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah larutan
Kristal violet (Gram A), Mordan (Gram B), alkohol (Gram C), safranin (Gram
D), aquades dan biakan bakteri (Bacillus cereus dan Escherichia coli).
Prosedur Kerja
1) Disiapakan alat dan bahan
2) Divortex biakan
3) Diambil menggunakan jarum ose
4) Diletakan di atas kaca preparat dan difiksasi
5) Ditambahkan larutan kristal violet (Gram A)
6) Difiksasi selama 3 menit
7) Dibilas dengan aquades dan difiksasi kembali
8) Dibilas dengan aquades
9) Ditambahkan larutan Mordan (Gram B)
10) Difiksasi selama 2 menit
11) Dibilas dengan aquades
12) Ditambahkan alkohol 95% (Gram C)
13) Difiksasi selama 15 detik
82
14) Dibilas dengan aquades dan difiksasi kembali

15) Ditambahkan larutan Safranin (Gram D)
16) Difiksasi selama 30 detik
17) Dilakukan pengamatan pada mikroskop
83
HASIL PENGAMATAN
Tabel 6.1 Hasil Pengamatan Pengecatan Gram

kelompok Bakteri Gambar Keterangan
Hasil Pengamatan Literatur
11 Bacillus Gram positif
Cereus Warna ungu
Bentuk basil
( Perbesaran 40 x 10) Sumber:

http://ritapoltekes.blogs
pot.
Co.id/2012/06/pengeca
tan-gram
(Perbesaran 100 x 10)
Cereus Warna ungu
Bentuk basil
Sumber:
pot.
tan-gram
Cereus Warna ungu
Bentuk basil
Sumber:
pot.
tan-gram
84
14 Escherichia Gram negatif

Coli Warna merah
Bentuk basil
(Perbesaran 40 x 10) Sumber:

http://www,google.co.i
d/image
s/escherichia-coli.
(Perbesarann100 x 10)
15 Escherichia Gram negatif
Coli Warna merah
Bentuk basil
(Perbesaran 40 x 10) Sumber:

http://www,google.co.i
d/image
s/escherichia-coli.
(Perbesarann100 x 10)
85
PEMBAHASAN
Pewarnaan gram atau metode gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang
paling penting dan luas yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri. Bakteri
yang terwarnai dengan metode ini akan dibagi menjadi dua kelompok yaitu
bakteri gram positif dan gram neagtif. Bakteri gram positif akan mempertahankan
zat pewarna kristal violet dan karenanya akan tampak berwarna ungu tua atau biru
dibawah mikroskop. Adapun bakteri gram negatif akan kehilangan zat pewarna
kristal violet setelah dicuci dengan alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna
tandingannya akan tampak berwarna merah dibawah mikroskop. Perbedaan warna
ini disebabkan oleh perbedaan dalam struktur dinding selnya. Tujuan pengecatan
gram adalah untuk membedakan bakteri-bakteri gram positif dan bakteri gram
negatif (Ardy, 2013).
Cat gram A berwarna ungu karena mengandung kristal violet. Cat gram A
merupakan cat primer yang akan memberi warna mikroorganisme target. Pada
saat diberi cat ini, semua mikroorganisme akan berwarna ungu sesuai warna cat
gram A. Cat gram B berwarna coklat dan merupakan cat mordan yaitu cat atau
bahan kimia yang berfungsi memfiksasi cat primeryang diserap mikroorganisme
target. Akibat pemberian cat gram B, maka pengikatan warna oleh bakteri akan
lebih baik (lebih kuat).
Cat gram C tidak berwarna. Cat ini berfungsi untuk melunturkan cat
sebelumnya. Akibat pemberian cat gram C akan terjadi dua kemungkinan seperti
mikroorganisme (bakteri) akan tetap bewarna ungu karena tahan alkohol atau
bakteri akan tidak berwarna karena tidak tahan dengan alkohol. Cat gram D
berwarna merah dan merupakan cat sekunder atau kontras. Cat ini berfungsi untuk
memberikan warna mikroorganisme non target. Akibat pemberian cat gram D
akan terjadi dua kemungkinan yaitu bakteri gram positif akan tetap berwarna ungu
karena telah jenuh mengikat cat gram A sehingga tidak mampu lagi mengikat cat
gram D atau bakteri gram negatif berwarna merah karena cat sebelumnya telah
dilunturkan oleh cat gram C maka akan mampu mengikat cat gram D.
86
Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil
ungu sewaktu proses pewarnaan gram. Bakteri ini akan berwarna biru atau ungu
di bawah mkroskop. Baktei gram positif termasuk dalam Firmicutes yang
didalamnya terdapat kelompok-kelompok bakteri seperti Satphylococcus,
Streptococcus, Enterococcus, Bacillus, Corynebacteria, Nocardia, Clostridium,
Actinobacteria, dan Bisteria. Sedangkan bakteri gram negatif adalah bakteri yang
tidak mampu mempertahankan zat warna metil ungu pada pewarnaan gram dan
berwarna merah di bawah mikroskop. Bakteri gram negatif termasuk kedalam
divisi Gracillicutes, jenis-jenisnya seperti Escherichia coli, Salmonella, Sigella,
Pseudomonas, Moraxella, Helicobacter, Stenotrophomonas, Bdellovibrio, Bakteri
asam asetat, Lagionella, Alpha-Proteobacteria Wolbachia, Cyanobacteria,
Spirochaeta, green sulfur dan green non-sulfur bacteria (Irianto, 2007).
Praktikum kali ini menggunakan bakteri Bacillus cereus dan Escherichia
coli, Bacillus cereus merupakan bakteri yang berbentuk batang dan termasuk
kedalam bakteri gram positif, bakteri ini tersusun atas peptidoglikan yang
merupakan polimer dari substrat dan asam amino. Escherichia coli termasuk
dalam famili Enterobacteraceaeyang termasuk gram negatif dan berbentuk batang
yang fermentatif. Escherichia coli dapat melakukan fermentasi laktosa atau
glukosa serta menghasilkan gas.
Berdasarkan hasil pengamatan bakteri Bacillus cereus dipreparat berwarna
ungu. Hal ini membuktikan bahwa bakteri dipreparat merupakan bakteri gram
positif. Bakteri Escherichia coli di preparat menunjukan warna merah hal ini
membuktikan bahwa bakteri di preparat merupakan bakteri gram negatif. Hal ini
diperkuat oleh Pelczar (2008), beberapa perbedaan sifat dapat dijumpai antara
gram positif dan gram negatif yaitu gram positif adalah gram yang
mempertahankan warna ungu di bawah mikroskop dan gram negatif bakteri yang
akan berwarna merah. Perbedaan ini karena adanya perbedaan struktur dinding
sel.
Berdasarkan hasil pengamatan yang dilakukan kelompok 11, 12, dan 13
pada bakteri Bacillus cereus memiliki bakteri warna ungu. Bakteri termasuk
bakteri gram positif dan berbentuk basil atau batang. Perbesaran yang digunakan
87
yaitu perbesaran 40 x 10, sedangkan pada kelompok 14 dan 15 yang digunakan

yaitu bakteri Escherichia coli dan memiliki warna merah yang bertanda bakteri
gram negatif dengan berbentuk batang dan memakai perbesaran 40 x 10.
Faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri yaitu fiksasi,
pelunturan warna, substrat, identifikasi pewarna dan penggunaan zat warna
penutup. Fiksasi bertujuan untuk mencegah mengkerutnya glubola-glubola protein
sel, merubah afnitias (daya ikat) cat, dapat membunuh mikroba (bakteri) secara
cepat tanpa menyebabkan perubahan bentuk serta strukturnya dan melepas
granula protein. Pelunturan cat bertujuan untuk mendapatkan kontras yang baik
pada bayangan preparat. Cat penutup diberikan pada akhir pengecatan dengan
tujuan untuk memberikan warna kontras pada sel mikrobia yang tidak menyerap
warna/cat utama.
88
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat disimpulkan sebagai

berikut :
1. Pewarnaan gram atau metode gram adalah salah satu teknik pewarnaan
paling penting dan luas yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri
gram positif dan gram negatif.
2. Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil
ungu sewaktu proses pewarnaan gram.
3. Bakteri gram negatif adalah bakteri yang tidak mampu mempertahankan zat
warna metil ungu pada pengecatan gram dan berwarna merah dibawah
mikroskop.
4. Bacillus cereus termasuk golongan bakteri gram positif, sedangkan
Escherichia coli termasuk golongan bakteri gram negatif.
5. Faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan gram adalah fiksasi,
pelunturan warna, substrat, identifikasi pewarna dan penggunaan zat warna
penutup
89
ACARA VII
MORFOLOGI JAMUR BENANG
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Jamur adalah kelompok organisme eukariotik. Jamur pada umumnya
multiseluler atau bersel banyak. Jamur banyak ditemukan pada lingkungan sekitar
manusia. Jamur tumbuh subur terutama dimusim hujan karena jamur menyukai
habitat yang lembab. Kebanyakan jamur masuk dalam kelompok kapang. Tumbuh
vegetatif, kapang berbentuk filamen panjang bercabang seperti benang, yang biasa
disebut dengan hifa (Irianto, 2007).
Kumpulan hifa membentuk struktur yang bernama misellium dan bisa
dilihat dengan mata telanjang. Bentuknya yang seperti kumpulan benang-benang
membuat jamur memiliki nama lain yaitu jamur benang. Hifa memiliki fungsi
untuk menyerap makanan dari permukaan substrat (tempat hidup jamur).
Misellium terbentuk dari kumpulan hifa yang bercabang-cabang membentuk suatu
jalan. Hifa terdiri dari hifa yang bersepta dan hifa yang tidak bersepta (Lay, 2008).
Pengamatan morfologi jamur banang sangat penting untuk diidentifikasi dan
determinasi. Bahkan pengamatan morfologi ini lebih penting dari pada
pengamatan fisiologi. Terdapat beberapa cara atau metode pengamatan yaitu
dengan pembuatan slide cultur untuk pengamatan morfologi dapat dilakukan
pengamatan secara makrokopis dan mikrokopis (Subandi, 2010). Oleh karena itu,
dilakukan praktikum ini agar praktikan dapat mengetahui morfologi beberapa
jamur benang, baik secara makrokopis maupun mikrokopis dan dapat
membedakan jenis jamur benang satu dengan yang lainnya.
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui morfologi
beberapa jamur benang, baik secara makrokopis maupun mikrokopis dan
membedakan jenis jamur benang satu dengan yang lainnya.
90
TINJAUAN PUSTAKA
Jamur merupakan protista nonfotosintesis yang tumbuh dengan bercabang,

jalinan filamen atau hifa yang dikenal dengan sebutan misellium. Meskipun hifa
memiliki sekat-sekat, namun sekat-sekat ini berlubang sehingga inti dan
sitoplasma bisa leluasa melewatinya. Jadi secara utuh, organisme adalah
coenocytes atau bentukan berinti banyak dengan sitoplasma yang berhubungan
dalam deretan tabung yang bercabang. Tabung ini dibentuk dari polisakarida,
yang mirip dengan dinding sel. Bentuk miselia ini disebut mold, jenis lain seperti
ragi, tidak membentuk misellium tapi mudah dikenali sebagai fungi pada
umumnya (Palczar, 2008).
Rhizopus sp memiliki ciri-ciri yaitu koloni berwarna putih atau abu, rhizoid
berwarna putih, spora yang berbentuk bulat atau setengah bulat dan hifa tidak
bersekat. Rhizopus memiliki hifa yang senositik yaitu memiliki banyak inti,
sehingga hifanya tidak bersekat dan pada umumnya koloninya berwarna abu-abu,
hifa tidak bersepta dan mempunyai stolon serta rhizoid yang warnanya gelap jika
sudah tua. Jamur tempe sorgum termasuk genus Rhizopus sp karena memiliki ciri-
ciri terdapat rhizoid dan bentuk misellium seperti kapas, warna koloni jamur abu-
abu kecoklatan, bentuk sporanya bulat, warna sporangia abu-abu kecoklatan
mempunyai spora tunggal (Dewi, 2014).
Fungi dapat ditemukan pada area substrat, baik dilingkungan darat, perairan,
maupun udara. Vegetatif umumnya berupa misellium berwarna putih dan mudah
terlihat pada substrat yang membusuk. Konidia fungi atau tubuh buahnya dapat
mempunyai aneka warna (merah, hitam, jingga, kuning, krem, putih, abu-abu,
coklat, kebiru-biruan dan sebagainya) pada daun, batang, kertas, tekstil, kulit dan
lain-lain. Tubuh buah fungi lebih mencolok karena langsung dapat dilihat dengan
mata, sedangkan miselium vegetatif yang menyerap makanan hanya dapat dilihat
dengan menggunakan mikroskop (Waluyo, 2007).
Kebanyakan jamur masuk dalam kelompok kapang. Tubuh vegetatif
berbentuk filamen panjang bercabang yang seperti benang disebut hifa. Jamur
tidak mempunyai batang, daun dan akar serta tidak mempunyai sistem pembuluh
91
seperti pada tumbuhan tingkat tiggi. Jamur umumnya berbentuk seperti benang,
bersel banyak, semua dari jamur mempunyai potensi untuk tumbuh, karena tidak
mempunyai klorofil yang berarti tidak dapat memasak makanannya sendiri, maka
jamur memanfaatkan sisa-sisa bahan organik dari makhluk hidup dan selnya tidak
mengalami diferensiasi dalam jaringan (Pracaya, 2007).
Jamur benang yang berukuran kecil dan biasanya bersifat uniseluler dapat
diamati dengan mikroskop. Mikroskop merupakan alat bantu yang
memungkinkan kita dapat mengamati objek yang berukuran sangat kecil. Hal ini
membantu memcahkan persoalan manusia tentang organisme yang berukuran
kecil. Ada dua jenis mikroskop berdasarkan pada kenampakan objek yang dimati,
yaitu mikrsokop dua dimensi (mikroskop cahaya) dan mikroskop tiga dimensi
(mikroskop streo). Sedangkan berdasarkan sumber cahayanya miroskop
dibedakan menjadi mikroskop cahaya dan mikroskop elektron (Aqsha, 2013).
92
Waktu dan tempat praktikum

Alat dan bahan praktikum

a. Alat - alat praktikum
Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah pipet tetes,
cawan petri, lampu bunsen, tisu, gelas benda, gelas penutup, mikroskop cahaya
dan jarum enten.
b. Bahan - bahan praktikum
Adapun bahan - bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah aquades,
biakan roti warna hijau (Rhizopus stolonifer), warna kuning (Aspergilus sp.),
warna putih (Mucor sp.), Penicillium sp., Rhizopus sp. dan alkohol.
Prosedur kerja
2) Diteteskan aquades
3) Diambil biakan jamur roti menggunakan jarum ent
4) Diletakan diatas gelas benda
5) Ditutup dengan gelas penutup
6) Diamati morfologinya dengan mikroskop cahaya
7) Digambar dan diberi keterangan
93
HASIL PENGAMATAN
Tabel 7.1 Hasil Pengamatan Morfologi Jamur Benang

Gambar
Kelompok Sampel Keterangan
Hasil Pengamatan Literatur
1. Sporangiospora
2. Sporangium
3. Sporangium
Jamur roti 4. Sporangiospora
16 Warna hijau 5. Sporangiosfor
Sumber:
studydroid.com
1. Sporangium
2. Sporangiospor
Jamur roti 3. Sporangium
Warna kuning 4. Sporangiospor
17 (Aspergillus 5. Sporangiosfor
sp.)
Sumber:
(Perbesaran 40x10) studydroid.com
(Perbesaran 40x10)
1. Sporangium
2. Sporangiospor
3. Sporangium
Jamur roti 4. Sporangiospor
Warna putih 5. Sporangiosfor
18
(Mucor sp.)
(Perbesaran 40x10) Sumber: hindawi.com

(Perbesaran 40x10)
1. Sporangium
2. Sporangiospor
3. Sporangium
Jamur roti 4. Sporangiospor
Warna 5. Sporangiosfor
19 (Penicillium
sp.)
Sumber:
(Perbesaran 40x10) abisjatuhbangunlag
.com
(Perbesaran 1000 x)
94
PEMBAHASAN
Jamur adalah mikroorganisme yang sel-selnya berinti sejati atau eukariotik,

berbentuk benang, tidak berklorofil, dinding selnya mengandung kitin atau
selulosa atau keduanya, hetetrof, absortif dan sebagian besar tubuhnya terdiri dari
bagian vegetatif berupa hifa dan fertil yaitu spora. Jamur pada umumnya
multiseluler (bersel banyak). Ciri-ciri jamur berbeda dari komponen dengan
organisme lainnya dalam hal cara makan. Struktur tubuh pertumbuhan dan
reproduksinya. Jamur benang adalah jamur yang berbentuk benang, tidak
berklorofil dan hidupnya bersifat seprofit atau parasit (Suriawiria, 2005).
Jamur benang adalah jamur yang berbentuk benang. Jamur benang terdiri
atas massa benang yang bercabang-cabang disebut misellium. Misellium tersusun
dari hifa (filamen) yang merupakan benang-benang tunggal. Badan vegetatif
jamur yang tersusun dari filamen-filamen disebut thallus. Berdasarkan fungsinya
jamur dibedakan menjadi dua macam hifa, yaitu hifa fertil dan hifa vegetatif. Hifa
fertil adalah hifa yang dapat membentuk sel-sel reproduksi atau spora-spora. Hifa
vegetatif adalah hifa yang berfungsi untuk menyerap makanan dari substrat.
Pengamatan morfologi jamur sangat penting dilakukan guna membedakan jenis
jamur benang satu dengan yang lain secara mikroskopis maupun makroskopis
sehingga dapat mengetahui bentuk, bagian-bagian sel, fungsi, dan setiap bagian
jamur benang (Ardhy, 2013).
Perkembangan jamur berawal dari spora mikrokopis yang terbawa angin.
Jamur akan tumbuh dan berkembang saat spora hinggap didaerah dengan suhu
dan kelembaban yang sesuai. Selanjutnya sel-sel yang serupa dengan benang
(hifa) akan terbentuk dan bergerombol hingga tempat gumpalan kusut seperti
kapas (misellium). Terkadang jamur juga dapat tempat seperti kotoran atau noda.
Seperti pada roti, jamur biasanya tumbuh dan terlihat bintik-bintik hitam
berukuran sangat kecil, dimana bintik-bintik tersebut berfungsi sebagai penghasil
spora (sporangium). Jamur yang sering tumbuh pada roti disebut jamur Rhizopus
stolonifer. Dalam satu bintik hitam dapat terkandung 50.000 spora atau bahkan
sampai ratusan juta spora yang tumbuh dalam waktu singkat (Harley, 2007).
95
Rhizopus adalah genus jamur benang yang terbentuk filum Zygomycota,

ordo Mucarales. Rhizopus mempunyai ciri khas yaitu memiliki hifa yang
membentuk rhizoid untuk menempel pada substrat. Ciri lainnya adalah memiliki
hifa yang coenositik, sehingga tidak bersepta atau bersekat. Misellium dari
Rhizopus yang juga disebut stolon menyebar diatas substratnya, karena aktivitas
dari hifa vegetatif. Rhizopus berproduksi secara aseksual dengan memproduksi
banyak sporangiofor yang bertangkai. Sporangiofor ini tumbuh kearah atas dan
mengandung ratusan spora. Sporangiofor ini biasanya dipisahkan dari hifa lainnya
oleh sebuah dinding seperti septa. Salah satu contoh spesies Rhizopus adalah
Rhizopus stolonifer yang biasanya tumbuh pada roti dan buah. Habitat Rhizopus
yaitu tempat lembab dan hidup sebagai saprofit pada organisme mati (Razali,
2006).
Rhizopus stolonifer merupakan salah satu dari jenis jamur Zygomycota.
Jenis jamur ini memiliki hifa pendek bercabang-cabang dan berfungi sebagai
rhizoid (akar) untuk melekatkan diri serta menyerap zat-zat yang diperlukan dari
substrat. Selain itu terdapat pula sporangiofor dan stolon. Pada praktikum ini,
bagaian-bagian dari Rhizopus stolonifer yang hanya dapat terlihat dengan
mikroskop adalah sporangium, sporangiofor, sporangiospora dan stolon (Purwa,
2013).
Rhizopus stolonifer mempunyai beberapa karakteristik yaitu dapat tumbuh
pada suhu 5 0C - 37 0C, tetapi pertumbuhan optimum pada suhu 25 CAw berkisar
pada 0,93 dan dapat tumbuh pada dibawah kondisi anaerobik. Rhizopus stolonifer
dapat hidup atau tumbuh pada roti atau buah-buahan lunak. Dalam hal ini,
Rhizopus stolonifer teurtama banyak dijumpai pada roti dan menyebabkan
kerusakan pda roti tersebut. Hal ini dikarenakan spora tersebut berada pada udara,
tanah, maupun dari manusia. Yang kemudian apabila jatuh pada roti maka spora
tersebut akan tumbuh dengan sangat cepat (Irianto, 2007).
Rhizopus oryzae adalah genus jamur benang termasuk filum Zygomycota
ordo Mucorales. Rhizopus oryzae mempunyai ciri-ciri yaitu memiliki hifa yang
membentuk rhizoid untuk menempel ke substrat. Ciri lainnya adalah memiliki
hifa senositik, sehingga tidak bersepta atau bersekat. Misellium dari Rhizopus
96
oryzae yang juga disebut stolon menyebar diatas substratnya karena aktivitas dari
hifa vegetatif. Rhizopus oryzae berproduksi secara aseksual dengan memproduksi
banyak sporangiofor ini biasanya dipisahkan dari hifa lainnya oleh sebuah dinding
seperti septa (Purwa, 2013).
Roti dan tempe mengandung karbohidrat. Protein, lemak, mineral dan
vitamin yang merupakan substrat bagi pertumbuhan mikroorganisme.
Pertumbuhan jamur Aspergillus sp dan Rhizopus oryzae disebabkan oleh suhu,
udara, kelembaban maupun lama penyimpanan. Temperatur suhu ini juga
berhubungan dengan kelembaban relatif (RH) karena semakin tinggi suhu maka
RH semakin rendah. Bahan pangan yang disimpan pada RH rendah dapat
mengalami kerusakan pada permukaan karena jamur yeast. Oleh karena itu, roti
atau tempe yang disimpan pada kulkas akan lebih tahan lama. Sedangkan
penyimpanan roti atau tempe pada kamar dan ruangan bebas lebih cepat berjamur
diakibatkan udara karena udara juga mempengaruhi pertumbuhan jamur
(Karmana, 2007).
Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan diperoleh hasil jamur
roti warna hijau yang ditumbuhi oleh Rhizopus stolonifer dengan morfologi
struktur sporangium, sporangiospora, dan sporangiosfor begitu juga dengan jamur
roti warna putih yang ditumbuhi oleh Mucor sp dan jamur roti warna abu yang
ditumbuhi oleh Penicillium sp memiliki morfologi struktur yang serupa yaitu
sporangium, sporangiospora dan sporangiosfor. Menurut Nurikmal (2015),
struktur dari Rhizopus stolonifer terdiri dari sporangium, sporangiospora,
sporangiofor, kulamela dan stolon. Perbedaan dari hasil pengamatan dengan
literatur adalah tidak ditemukan bentuk dari kulamela dan stolon dari Rhizopus
stolonifer pada pengamatan mikroskopis. Hal ini dapat disebabkan karena kurang
hati-hati dalam mengambil hifa pada biakan dapat membuat sel mati atau saat
dilakukannya fiksasi terlalu panas.
Berdasarkan hasil pengamatan dari jamur tempe ditumbuhi oleh Rhizopus
oryzaedengan morfologi berupa sporangium, sporangiospora dan sporangiosfor.
Dimana hal ini berbanding terbalik dengan literatur menurut Soetrisno (1996) sifat
jamur Rhizopus oryzae yaitu koloni warna putih berangsur-angsur menjadi warna
97
abu, stolon halus sedikit kasar dan tidak berwarna, sporangiosfor tumbuh dari
stolon mengarah ke udara, rhizoid tumbuh berlawanan, sporangia globus, atau sub
globus dengan dinding berspinulosa (duri-duri pendek), kolumela oval hingga
bulat. Spora bulat, oval, elips atau silinder.
Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jamur adalah faktor
substrat, kelembaban, suhu, derajat keasaman substrat (pH) dan senyawa-senyawa
kimia dilingkungannya. Substrat merupakan sumber utama nutrient bagi jamur.
Kelembaban dari jamur merupakan faktor yang diperlukan oleh jamur, tergantung
oleh jenisnya yang berbeda-beda. Suhu lingkungan juga berperan penting dalam
pertumbuhan. Berdasarkan suhu pertumbuhan, maka mikroorgaanisme dapat
dikelompokkan menjadi psikrofilik, mesofilik dan termofilik. pH substrat sangat
penting karena enzim-enzim tertentu hanya akan mengurai substrat sesuai dengan
aktivitasnya pada pH tertentu. Senyawa-senyawa kimia yang tidak diperlukan lagi
akan dikeluarkan kelingkungan sebagai bentuk dari pengamanan terhadap
organisme lain.
Faktor-faktor yang mempengaruhi pengamatan berupa kelembaban, suhu
lingkungan dan adanya kandungan kandungan karbohidrat, vitamin dan mineral.
Dimana kelembaban akan sangat membantu dalam pertumbuhan jamur,
berdasarkan suhu dikelompokan menjadi psikrofilik, mesofilikdan termofilik.pH
substrat sangat penting karena enzim-enzim tertentu hanya akan mengurai substrat
sesuai dengan aktivitasnya pada pH tertentu.
98
KESIMPULAN

sebagai berikut :
1. Jamur benang adalah jamur-jamur berbentuk benang multiseluler (bersel
banyak), dengan tidak berklorofil, selnya tidak mengalami diferensiasi
dalam jaringan.
2. Berdasarkan fungsinya jamur dibedakan menjadi dua macam hifa, yaitu hifa
fertil dan hifa vegetatif.
3. Berdasarkan hasil pengamatan dari jamur tempe ditumbuhi oleh Rhizopus
oryzae dengan morfologi berupa sporangium, sporangiospora dan
sporangiosfor.
4. Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan diperoleh hasil jamur
roti warna hijau yang ditumbuhi oleh Rhizopus stolonifer, jamur roti warna
putih yang ditumbuhi oleh Mucor sp dan jamur roti warna abu yang
ditumbuhi oleh Penicillium sp.
5. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jamur adalah faktor
substrat, suhu, pH, kelembaban dan senyawa-senyawa kimia
dilingkungannya.
99
ACARA VIII
MORFOLOGI KHAMIR
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Khamir merupakan fungi sama seperti jamur benang. Khamir dibedakan
dari jamur benang karena khamir merupakan fungi bersel tunggal (uniseluler).
Seperti halnya mikroorganisme-mikroorganisme lainnya khamir juga memiliki
morfologi. Morfologi merupakan ilmu yang mempelajari tentang bentuk luar
tubuh atau fisik dari suatu makhluk hidup termasuk juga warna yang tampak
(Gandjar, 2003).
Morfologi-morfologi yang biasanya diperhatikan pada khamir adalah bentuk
dan ukuran sel khamir.Pengamatan morfologi pada sel khamir meliputi ukuran
dan bentuk spora khamir, jumlah spora khamir, bagaimana persebarannya dan
sebagainya. Masing-masing morfologi atau sifat fisik yang terdapat pada khamir
menentukan klasifikasi khamir tersebut.
Morfologi khamir dan spora khamir sangat penting untuk dipelajari atau
dipraktekkan. Hal ini karena setiap spesies khamir memiliki ciri morfologinya
sendiri dan setiap bentuk khamir juga menentukan jenis khamir tersebut.Misalnya
yang berbentuk bulat itu berarti khamir apa atau berbentuk topi, bola, seperti
jamur, dan sebagainya. Jadi pengetahuan tentang morfologi khamir dan spora
khamir sangat penting untuk kepentingan identifikasi serta determinasi jenis
khamir. Oleh karena itu, praktikum morfologi khamir dan spora khamir ini sangat
penting dilakukan oleh praktikan.
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui tentang
morfologi ataupun bentuk fisik dari khamir serta spora khamir.
100
TINJAUAN PUSTAKA
Khamir adalah kategori non-takson yang mencakup semua fungi uniseluler

yang berasal dari kingdom Zygomycota, Ascomycota dan Basidiomycota. Khamir
umumnya berkembang biak baik secara seksual maupun aseksual. Cara aseksual
yaitu dengan bertunas dan fisi (pembelahan) menjadi dua sel secara mitosis.
Secara seksual yaitu dengan fusi (penggabungan) dua sel dengan tipe perkawinan
yang berbeda. Zigot hasil fusi ini kemudian akan membentuk 4 hingga 8 spora
yang akan menyebar (Purves, 2003).
Khamir hidup secara luas di alam terutama pada bahan-bahan yang
mengandung gula, tanah, kebun buah-buahan, dalam tubuh serangga dan juga
terdapat dalam getah pohon. Bentuk dan ukuran selnya bervariasi tergantung pada
jenisnya. Pada umumnya sel khamir berbentuk oval, silinder, bulat dan batang.
Khamir tidak dapat bergerak aktif karena tidak mempunyai flagella (Gandjar,
2003).
Khamir pada umumnya diklasifikasi berdasarkan sifat-sifat fisiologinya dan
tidak atas perbedaan morfologinya seperti pada kapang. Khamir dapat dibedakan
atas dua kelompok berdasarkan sifat metabolismenya yaitu bersifat fermentatif
dan oksidatif. Jenis fermentatif dapat melakukan fermentasi alkohol yaitu
memecah gula (glukosa) menjadi alkohol contohnya pada produk roti. Sedangkan
oksidatif (respirasi) akan menghasilkan CO2 dan H2O keduanya bagi khamir
digunakan untuk energi walaupun energi yang dihasilkan melalui respirasi lebih
tinggi dari yang melalui fermentasi (Natsir, 2003).
Berdasarkan pengamatan di bawah mikroskop dengan perbesaran 1000x
terlihat bentuk morfologi Saccaromices cerevisiae sebagai berikut sel berbentuk
oval, berbau roti dan koloninya agak berlendir, pertumbuhannya membutuhkan
oksigen sangat kecil, dipengaruhi oleh perubahan pH, suhu optimum untuk
tumbuh antara 22 0C - 30 0C dan toleran hingga 37 0C (Kusmiati, 2011).
Khamir seringkali tidak kelihatan karena tidak kontras dengan medium di
mana mereka hidup. Oleh karena itu, perlu dilakukan pewarnaan agar khamir
tampak jelas bila diamati dengan mikroskop. Pewarnaan ini ada yang bersifat non
101
diferensial dan diferensial. Pewarnaan diferensial hanya bertujuan agar khamir

yang diamati tampak jelas atau kontras dengan latar belakangnya. Pewarnaan
diferensial bertujuan agar dapat membedakan antara jenis khamir yang berbeda
(Harley dan Prescott, 2002)
102
Waktu dan tempat praktikum

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 06 Desember 2016 di
Alat dan bahan praktikum

a. Alat - alat praktikum
Adapun alat alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah pipet tetes,
cawan petri, lampu bunsen, tisu, gelas benda, gelas penutup, mikroskop
binokuler dan jarum ose.
b. Bahan - bahan praktikum
Adapun bahan - bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah
aquades, methylene blue, dan biakan Saccharomyces cerevisiae umur 24, 48,
72 jam.
Prosedur kerja
2) Diteteskan Methylene blue pada kaca preparat
3) Diambil sampel yang berumur 24 , 48 dan 72 jam menggunakan ose
4) Diletakan diatas kaca preparat
5) Ditutup dengan gelas penutup
6) Diamati dengan mikroskop cahaya
7) Digambar morfologi khamir
103
HASIL PENGAMATAN
Tabel 8.1.Hasil Pengamatan Morfologi Khamir

Gambar
Kelompok Sampel Keterangan
Hasil Pegamatan Literatur
11 Khamir Saccharomyces cerevisia
48 jam Bentuk : bulat
1. Sel khamir hidup = 11
2. Sel khamir mati = 8
sel khamir = 19
8
Perbesaran 1000 x % mati = x 100%
Perbesaran: 400 x 19
Sumber:
http://journal.unnes.
ac.id
sel khamir = 21
13
% mati= x 100%
Perbesaran 1000x 21
Perbesaran: 400 x Sumber:
ac.id
sel khamir = 17
11
% mati = x 100%
Perbesaran: 400 x Perbesaran 1000x 17
Sumber:
ac.id
sel khamir = 23
15
Perbesaran 1000x % mati = x 100%
23
Perbesaran: 400 x Sumber:
http://journal.unnes
ac.id
104

selkhamir = 28
11
Perbesaran: 400 x Perbesaran 1000x % mati = x 100%
28
Sumber:
ac.id
2. Sel khamir mati =26
selkhamir = 81
26
Perbesaran: 400 x Perbesaran 1000x % mati = x 100%
81
Sumber:
ac.id
2. Sel khamir mati =30
selkhamir = 42
30
Perbesaran 1000x % mati = x 100%
Perbesaran: 400 x 42
Sumber: :
ac.id
105
PEMBAHASAN
Khamir merupakan kelompok fungi uniseluler bersel satu, mikroskopik dan

tidak membentuk percabangan permanen. Bentuk kamir bermacam-macam
misalnya bulat, oval, batang, silindris dan lain-lain. Ukuran rata-rata khamir
adalah 3-4 nm. Beberapa jenis khamir umumnya digunakan untuk membuat roti,
fermentasi minuman alkohol, dan bahkan sebagai bahan bakar sel. Khamir dapat
tumbuh dalam larutan yang pekat misalnya larutan gula atau garam. Khamir lebih
menyukai suasana asam dan lebih menyukai adanya oksigen (Purves, 2003).
Pengamatan morfologi khamir menggunakan jenis khamir Saccharomyces
cerevisiae. Saccharomyces cerevisiae adalah mikroorganisme eukariotik dengan
diameter 5-10 nm. Khamir jenis ini merupakan spesies dari ragi sel
Saccharomyces cerevisiae. Berbentuk bulat teratur dan memiliki 1 inti sel tiap
selnya atau uniseluler. Khamir ini merupakan jenis khamir atau ragi yang
memiliki kemampuan mengubah glukosa menjadi alkohol dan CO2 (Kusmiati,
2011).
Saccharomyces cerevisiae dapat tumbuh dalam media cair dan padat.
Pembelahan sel terjadi secara aseksual dengan pembentukan tunas. Proses yang
merupakan sifat khas dari khamir mula-mula timbul suatu gelembung kecil dari
permukaan sel induk gelembung ini secara bertahap membesar dan setelah
mencapai ukuran yang sama dengan induknya terjadi pengerutan yang
melepaskan tunas dari induknya. Sel yang baru terbentuk selanjutnya akan
memasuki tahap pertunasan kembali. Tunas dari khamir ini dapat berkembang
dari setiap bagian permukaan sel induk (pertunasan multipolar) (Kusmiati, 2011).
Pengamatan sel khamir Saccharomyces cerevisiae menggunakan mikroskop
dengan perbesaran 400 x. Saat berlangsungnya pengamatan dapat diamati dengan
jelas sel-sel khamir pada gelas benda terlihat sel-sel khamir berbentuk bulat
dengan satu inti sel pada tiap-tiap sel kemudian sel-sel tersebut ada yang
berdempetan dan ada juga yang menyebar luas ada pula sel kami yang berwarna
biru pertanda bahwa sel khamir mati dan berwarna transparan bertanda khamir
hidup. Bentuk sel khamir ini sebenarnya tidak bulat sempurna melainkan agak
106
melonjong sedikit. Hal ini sesuai dengan pernyataan Kusmiati (2011), bahwa
morfologi Saccharomyces cerevisiae adalah sebagai berikut sel berbentuk oval,
berbau roti, dan koloninya agak berlendir. Secara umum pengamatan khamir
biasanya menggunakan methylen blue pada gelas benda untuk lebih memberikan
kontras perbedaan antara sel yang hidup serta mati. Sel khamir yang mati akan
berwarna biru sedangkan yang hidup tidak berwarna atau transparan. Hal ini
disebabkan oleh khamir bersifat gram positif.
Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan khamir adalah nutrisi, pH,
suhu lingkungan, oksigen, serta komponen penghambat. Nutrisi pada substrat
harus lengkap dan mencakupi untuk pertumbuhan khamir. Saccharomyces
cerevisiae terutama suka terhadap gula, suhu yang optimum bagi kamir ini adalah
2530 0C sama seperti jamur benang dan suhu maksimumnya 3547 0C. Khamir
dapat hidup pada lingkungan Anaerob (tanpa oksigen) tetapi pertumbuhannya
lambat pertumbuhan khamir dapat terjadi lebih cepat di lingkungan aerob
(tersedia oksigen) dan yang terakhir khamir dapat tumbuh lebih baik apabila tidak
ada komponen penghambat seperti mikroorganisme lain yang berebut nutrisi atau
makanan yang sama.
Berdasarkan hasil pengamatan morfologi Saccharomyces cerevisiae yang
diperoleh berbentuk bulat dalam pengamatan dilakukan dengan pengecatan
sederhana menggunakan methylen blue. Penggunaan methylen blue pada
pengecatan sederhana dimaksudkan untuk dapat membedakan sel khamir yang
mati dan sel yang hidup dengan perbedaan atau perubahan mana yang
ditimbulkan. Pengecatan sederhana yaitu pengecatan yang dilakukan untuk
membedakan antara mikroba yang hidup dengan mikroba yang mati. Sel khamir
yang mati akan berwarna biru sedangkan sel khamir yang hidup tidak berwarna
atau transparan. Terbentuknya warna biru pada sel khamir yang telah mati
disebabkan karena sifat semipermeabel membran dari sel khamir yang mati
tersebut tidak berfungsi lagi sehingga sel khamir yang mati menyerap warna biru
dan larutan methylen blue. Sel khamir yang hidup berwarna transparan disebabkan
sel membran nya yang masih selektif permeabel sehingga methylene blue tidak
dapat masuk ke dalam sel.
107
Berdasarkan hasil pengamatan bagian-bagian yang terlihat adalah sel yang

hidup dan sel yang mati untuk sampel 24 jam pada kelompok 17 dan 19 memiliki
persen kematian masing-masing adalah 32,09% dan 71,4% untuk sample 48 jam
kelompok 11 13 dan 15 masing-masing persen kematiannya adalah 42% 65% dan
40% dan untuk sampel 72 jam kelompok 12 dan 14 prosentase kematian sel
khamir adalah 62% dan 66%. Pengamatan digunakan tiga sampel yang berbeda
dari umurnya yaitu khamir dengan usia 48 jam, 24 jam, dan 72 jam. Penggunaan
umur yang berbeda dalam praktikum bertujuan untuk mengetahui persen kematian
dan persen hidup pada masing-masing usia khamir. Selain itu kecepatan
pertumbuhan sel khamir pada jam ke-0 sampai jam ke-24 lebih rendah
dibandingkan dengan jam-jam berikutnya disebabkan karena mikroba masih
dalam fase adaptasi. Menurut (Waluyo, 2007) seharusnya khamir yang berumur
48 jam memiliki jumlah kematian yang lebih tinggi dibandingkan dengan umur 24
jam karena waktu penyimpanan untuk 48 jam lebih lama sehingga khamir yang
dihasilkan lebih banyak.
108
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat disimpulkan sebagai

berikut :
1. Khamir merupakan kelompok fungi uniseluler bersel tunggal, mikroskopik,
dan tidak membentuk percabangan permanen.
2. Penggunaan methylen blue pada pengecatan sederhana dimaksudkan untuk
membedakan sel yang mati dan sel yang hidup.
3. Berdasarkan hasil pengamatan bagian-bagian yang terlihat adalah sel yang
hidup dan sel yang mati untuk sampel 24 jam untuk kelompok 17 dan 19
memiliki persen kematian masing-masing adalah 32,0 9% dan 71,4% untuk
sampel 48jam kelompok 11 12 dan 15 masing-masing persen kematiannya
adalah 42% 65% dan 40% dan untuk sampel 72 jam kelompok 12 dan 14
persentase kematian sel khamir nya adalah 62% dan 66% .
4. Kecepatan pertumbuhan sel khamir pada jam ke-0 sampai jam ke-24 lebih
rendah dibandingkan dengan jam jam berikutnya disebabkan karena
mikroba masih dalam fase adaptasi.
5. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan khamir adalah nutrisi pH
suhu lingkungan oksigen serta komponen penghambat.
109
ACARA IX
PENGARUH FAKTOR LINGKUNGAN TERHADAP PERTUMBUHAN
BAKTERI
PENDAHULUAN
Latar belakang
Pertumbuhan merupakan suatu proses irreversible, artinya tidak dapat
dibalik kejadiannya. Selain itu pertumbuhan juga merupakan proses
bertambahnya ukuran atau substansi atau massa suatu zat organisme, misalnya
manusia sebagai makhluk hidup dikatakan tumbuh ketika bertambah tinggi,
bertambah besar atau bertambah berat. Pada organism bersel satu pertumbuhan
lebih diartikan sebagai pertumbuhan koloni, yaitu bertambahnya jumlah koloni,
ukuran koloni yang semakin besar atau substansi atau massa mikroba dalam
koloni tersebut semakin banyak. Sebagai hasil dari pertambahan ukuran dan
pembelahan sel atau pertambahan jumlah sel maka terjadi pertumbuhan mikroba.
Makhluk hidup pada umumnya, pertumbuhan mikroba tentunya tidak lepas
dari pengaruh faktor lingkungan. Kehidupan semua makhluk hidup tergantung
pada lingkungan sekitar, baik lingkungan biotik maupun lingkungan abiotik.
Mikroorganisme ini tidak dapat menguasai faktor-faktor luar sepenuhnya
sehingga hidupnya sama sekali tergantung pada keadaan sekelilingny. Satu-
satunya cara untuk mempertahankan hidupnya ialah menyesuaikan diri atau
beradaptasi dengan lingkungannya. Penyesuaian diri dapat terjadi secara cepat
serta bersifat sementara waktu, akan tetapi dapat pula terjadi perubahan itu
bersifat permanen sehingga mempengaruhi bentuk dan morfologi serta sifat-sifat
fisiologi yang turun temurun. Bakteri dapat pula mempengaruhi pH medium
tempat ia hidup.
Kehidupan bakteri tidak hanya dipengaruhi oleh faktor-faktor lingkungan,
akan tetapi juga mempengaruhi keadaan lingkungan. Bakteri dapat mengubah pH
dan medium tempat ia hidup, perubahan ini disebut perubahan secara kimia.
Adapun faktor-faktor lingkungan dapat dibagi atas faktor-faktor biotik dan faktor-
110
faktor abiotik. Dimana faktor biotik terdiri atas mahkluk-makhluk hidup, yaitu
menckup adanya asosiasi atau kehidupan bersama antara mikroorganisme, dapat
dalam bentuk simbiosis, sinergisme, antibiose, kompetisi. Sedangkan faktor
abiotik terdiri atas faktor fisika misalnya suhu, atmosfer, gas, pH, tekanan
osmotik, kelembaban, sinar gelombang pendek dan pengeringan dan faktor
kimianya berupa adanya senyawa toksik atau senyawa lain (Soesanto, 2006). Oleh
karena itu, perlu dilakukan praktikum ini untuk mengetahui faktor suhu yang
mempengaruhi pertumbuhan mikroba.
Tujuan Praktikum
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui pengaruh faktor
lingkungan baik faktor biotik maupun abiotik terhadap pertumbuhan mikroba.
111
TINJAUAN PUSTAKA
Pertumbuhan mikroba pada umumnya sangat tergantung dan dipengaruhi

oleh faktor lingkungan, perubahan faktor lingkungan dapat mengakibatkan
perubahan sifat fisiologi dan morfologi. Hal ini dikarenakan, mikroba selain
menyediakan nutrient yang sesuai untuk kultivasinya, juga diperlukan faktor
lingkungan yang memungkinkan pertumbuhan mikroba secara optimum. Mikroba
tidak hanya bervariasi dalam persyaratan nutrisinya, tetapi menunjukkan respon
yang berbeda-beda. Untuk berhasilnya kultivasi berbagai tipe mikroba diperlukan
suatu kombinasi nutrient serta faktor lingkungan yang sesuai (sutardi, 2010).
Suhu merupakan faktor penting dalam pertumbuhan mikroba. Pada
umumnya batas suhu pertumbuhan mikroba terletak antara 0 0C sampai 90 0C,
sehingga dikenal dengan suhu minimum, optimum dan maksimum. Berdasarkan
kisaran suhunya, mikroba dibagi menjadi 3 kelompok yaitu psikrofilik, mesofilik,
dan termofilik. Psikrofilik adalah kelompok mikroba yang hidup pada daerah
dengan suhu 0 0C sampai 30 0C dengan temperatur optimumnya adalah 15 0C.
Mesofilik adalah kelompok mikroba yang dapat hidup dan tumbuh pada keadaan
suhu optimum antara 25 0C sampai 37 0C dengan suhu minimumnya yaitu 15 0C
dan maksimumnya 55 0C. Sedangkan termofilik adalah kelompok mikroba yang
dapat hidup dan tumbuh pada suhu tinggi. Suhu optimumnya yaitu 55 0C sampai
60 0C dengan suhu minimumnya 40 0C dan maksimumnya 75 0C. Bakteri ini
biasanya terdapat pada sumber air panas dan tempat dengan keadaan suhu tinggi
(Zurhalki, 2015).
Kebutuhan mikroorganisme untuk pertumbuhan dapat dibedakan menjadi
dua katagori, yaitu kebutuhan fisik dan kebutuhan kimiawi. Aspek-aspek fisik
dapat mencakup suhu, pH, dan tekanan osmotik. Sedangkan kebutuhan kimiawi
meliputi air, sumber karbon, nitrogen, oksigen, mineral-mineral, dan faktor
penumbuh. Kondisi lingkungan juga dapat memicu pertumbuhan dan reproduksi
bakteri. Faktor-faktor yang berpengaruh terhadap pertumbuhan dan reproduksinya
yaitu suhu, kelembaban, dan cahaya (Jeneng, 2010).
112
Salah satu faktor penting dalam pertumbuhan bakteri adalah nilai pH.
Bakteri memerlukan suatu pH optimum (6,5-7,5). Untuk tumbuh optimal nilai pH
minimum dan maksimum untuk pertumbuhan kebanyakan spesies bakteri adalah
4 dan 9. Pengaruh pH terhadap pertumbuhan bakteri ini berkaitan dengan aktivitas
enzim. Enzim dibutuhkan oleh beberapa bakteri untuk mengkatalis reaksi-reaksi
yang berhubungan dengan pertumbuhan bakteri. Apabila pH dalam suatu medium
atau lingkungan tidak optimal maka akan mengganggu kerja enzim tersebut dan
akhirnya mengganggu pertumbuhan bakteri itu sendiri. Selain itu, perubahan
kondisi lingkungan akan mempengaruhi pertumbuhan dan kehidupan bakteri
awal, sehingga bakteri yang tidak mampu beradaptasi pada kondisi tersebut
mengalami kematian karena kondisi lingkungan yang tidak mendukung proses
metabolisme bakteri tersebut (Samad, 2006).
113

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Rabu, 14 Desember 2016 di

Adapun alat-alat yang digunakan pada praktikum ini adalah tisu, tabung reaksi,
rak tabung, jarum ose, vortex, kertas label, lampu bunsen, dan incubator.
Adapun bahan-bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah medium agar,
biakan Escherichia coli, biakan Bacillus cereus dan alkohol 70%.
Prosedur Kerja
1) Disiapkan alat dan bahan yang sudah disterilkan
2) Divortex biakan Bacillus cereus
3) Diambil biakan dengan menggunakan jarum ose
4) Dimasukkan biakan ke dalam medium agar yang belum memadat di dalam
tabung reaksi
5) Divortex kembali biakan bersama medium agar
6) Diulangi langkah 1 sampai 5 hingga enam kali
7) Di inkubasi keenam tabung reaksi pada keadaan suhu beku, dingin, suhu 28
0
C, suhu 37 0C, dan suhu 55 0C selama 48 jam
8) Diamati pertumbuhannya
9) Diulangi langkah 1 sampai 8 dengan menggunakan biakan Escherichia coli
114
HASIL PENGAMATAN
Tabel 9.1 Hasil Pengamatan Pengaruh Faktor Lingkungan Terhadap Pertumbuhan

Bakteri
Pertumbuhan
Kelompok Nama Bakteri Suhu Inkubator
U1 U2
Suhu beku - -
Suhu dingin - -
11 Escherichia coli Suhu 28 C 0
+++ ++
Suhu 37 0C + +
Suhu 55 C 0
- -
Suhu beku - -
Suhu dingin ++ +
12 Bacillus cereus Suhu 28 0C + +++
Suhu 37 0C ++ ++
Suhu 55 C 0
+ +
Suhu beku - -
Suhu dingin - +
13 Escherichia coli Suhu 28 0C +++ +++
Suhu 37 C 0
++ +++
Suhu 55 C 0
- +
Suhu beku - -
Suhu dingin - ++
14 Bacillus cereus Suhu 28 C 0
++ +
Suhu 37 C 0
+ +
Suhu 55 0C - +
Suhu beku - -
Suhu dingin - -
15 Escherichia coli Suhu 28 C 0
- +
Suhu 37 0C + +
Suhu 55 C 0
+ +
Keterangan :
_ : Tidak ada pertumbuhan
+ : Tumbuh sedikit
++ : Tumbuh cukup banyak
+++ : Tumbuh banyak
115
PEMBAHASAN
Pertumbuhan mikroba umumnya sangat tergantung dan dipengaruhi oleh

faktor lingkungan. Pertumbuhan faktor lingkungan dapat menyebabkan perubahan
sifat morfologi dan fisiologi. Banyak faktor yang mempengaruhi pertumbuhan
mikroorganisme yaitu faktor abiotik, meliputi pengaruh suhu, pH dan pengaruh
senyawa desinfektan. Selain itu juga pengaruh biotik yaitu antibiose. Dalam
pertumbuhan bakteri memiliki suhu optimum dimana pada suhu tersebut
pertumbuhan bakteri menjadi maksimal. Dengan membuat grafik pertumbuhan
suatu mikroorganisme, maka dapat dilihat bahwa suhu optimum biasanya dekat
puncak range suhu. Diatas suhu ini kecepatan tumbuh mikkroorganisme akan
berkurang diperlukan suatu metode. Metode pengukuran pertumbuhan yang
sering digunakan adalah dengan menentukan jumlah sel yang hidup dengan jalan
menghiutng koloni pada pelat agar dan menentukan jumlah total sel dan jumlah
masa sel. Dalam menentukan jumlah sel yang hidup dapat dilakukan perhitungan
langsung sel secara mikroskopik melalui 3 jenis metode yaitu pelat sebar, pelat
tuang dan most probable number (MDN).
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan digunakan lima sampel yang
terdiri dari dua bakteri yaitu Escherichia coli dan Bacillus cereus. Sampel
pertama, kelompok 11suhu beku dan suhu dingin pada U1, U2 suhu 55 0C tidak
ditumbuhi bakteri, sedangkan pada suhu 28 0C dan 37 0C bakteri tumbuh baik dan
tumbuh luar biasa. Sampel kedua, kelompok 12 bakter Bacillus cereus, U2 dan U1
pada suhu beku tidak ditumbuhi bakteri, pada suhu 55 0C bakterinya tumbuh
sedikit, suhu 37 0C tumbuh baik, dan pada suhu 28 0C tumbuh luar biasa/ sampel
ketiga, kelompok 13, pada suhu beku dan suhu 28 0C bakteri Escherichia coli
tumbuh baik, pada suhu dingin dan suhu 37 0C tumbuh sedikit dan pada U2 suhu
55 0C tidak ditumbuhi bakteri. sampel keempat, kelompok 14 dengan bikan
bakteri Bacillus cereus, pada suhu beku, suhu dingin dan suhu 37 0C bakteri
tumbuh baik dan pada suhu 28 dan 55 0C hanya sedikit bakteri yang tumbuh. dan
sampel terakhir, sampel kelima kelompok 15 dengan biakan bakteri Escherichia
coli, pada suhu beku dan suhu dingin tidak ada bakteri yang tumbuh, pada suhu 28
116
0
C dan U1 suhu 55 0C ditumbuhi sedikit bakteri, dan pada suhu 37 0C bakteri
tmbuh baik.
Faktor lingkungan abiotik meliputi faktor fisik dan kimia. Faktor-faktor
tersebut adalah suhu, kelembaban, pH, tekanan osmosis, sinar gelombang pendek,
daya oligodinamik. Pada suhu dibagi menjadi suhu minimum, optimum, dan
maksimum yang diperlukan oleh masing-masing jenis mikroba. Untuk
kelembaban, ada mikroba yang membutuhkan tingkat kelembaban diatas 80% dan
dibawah 80% tergantung dari jenis mikrobanya. PH untuk bakteri pada suhu yang
baik sekitar netral (6,5-7,5), tekanan osmosis yang mempengaruhi pertumbuhan
mikroba karena akan terhambat didalam larutan hipertonis, karena sel-sel miroba
tersebut mengalami plasmolisis. Pada sinar gelombang pendek seperti sinar X ,
sinar ultraviolet, dan sinar gamma mempunyai gaya germisidal yang cukup besar,
sehingga menyebabkan kematian mikroba. Untuk faktor biotik adalah faktor yang
mencakup adanya asosiasi atau kehidupan bersama antara mikroba. Asosiasi atau
kehidupan bersama dalam bentuk simbisis, sinergisme, antibiose, atau sintropisme
(Nazaruddin, 2015).
117
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat ditarik beberapa

kesimpulan sebagai berikut :
1. Bakteri merupakan makhluk hidup prokariotik yang paling sederhana.
Bakteri kebanyakan hidup bebas dan terdapat dimana-mana dan memiliki
peran penting dalam kehidupan manusia.
2. Faktor abiotik antara lain yaitu temperatur, kelembaban, tekanan osmosis,
pengaruh pH, pengaruh logam berat serta pengaruh zat kimia. Sedangkan
faktor biotik antara lain yaitu bebas hama serta asosiasi.
3. Hasil pengamatan untuk medium NA pada bakteri Escherichia coli
pertumbuhan abkteri sangat banyak pada suhu 37 0C dibandingkan bakteri
Bacillus cereus tumbuh sedikit.
4. Berdasarkan suhu hidup atau suhu pertumbuhannya, bakteri digolongkan
menjadi tiga kelompok yaitu bakteri psikrofilik, bakteri mesofilik dan
bakteri termofilik.
5. Bacillus cereus dan Escherichia coli merupakan jenis bakteri mesofilik
yaitu bakteri yang dapat hidup dan tumbuh baik pada suhu ruang.
118
DAFTAR PUSTAKA
Aqsha, 2013. Laporan Brhyophyta. http:aqshabiogger2010.blogspot.com.html.

(Diakses pada tanggal 4 Desember 2016).
Ardhy, 2013. Laporan Pengamatan Morfologi Jamur. http://www.blogspot.com.
(Diakses pada tanggal 4 Desember 2016).
Arifanto, 2008. Menghitung Mikroba Pada Bahan Makanan. Bandung: Farmasi
Bibiana, 2010. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta : PT. Raya Grafindo.
Darkuni, Noviar., 2007. Mikrobiologi (Bakteriologi, Virologi dan
Mikologi). Jakarta : PT. Raya Grafindo.
Dewi, A.K., Utama,C.S., dan Mukadiningsih, S., 2014. Kandungan Total Fungi.
Jakarta: Djambatan.
Dwidjoseputro, D., 2006. Dasar Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.
Dwidjoseputro., 2010. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Penerbit Djambatan.
Dwiyana, 2009. Penuntut Praktikum Mikrobiologi Pangan, Makassar :
Universitas Hasanudin.
Eema, 2011. Mikrobiologi Dasar. Banjarbaru : Universitas Lambung Mangkurat
Fakultas Farmasi Universitas Mataram.
Ferdiaz, S. 2008. Mikrobiologi Pangan. Jakarta : Gramedia Pustaka Utama.
FMIPA ITB.
Gandjar, I. 2003. Tapai from cassava. Bangkok: Kasetsart University.
Hadietomo, Ratna S. 2007. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktik. Jakarta:
Gramedia.
Hafrah, 2009. Mikrobiologi Umum. Makasar : UIN Alauddin.
Harley, Prescott. 2002. Laboratory Exercise In Microbiology You. USA:
Harley, 2007. Pengertian Pewarnaan Gram. Jakarta : Gramedia.
Hilmi, yusuf., 2007. Biologi Umum. Sinar wijaya: Surabaya.
Indriati, N., dkk., 2010. Penggunaan Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol.
Irianti, K., 2007. Mikrobiologi. Bandung: Yrama Widya.
Jimmo, 2008. Pembuatan Preparat dan Pengecatan. Jakarta: Erlangga.
Karmana, 2007. Biologi. Jakarta : PT Grafindo Media Pratama. Kelemahan dan
Keunggulannya. Vol.5. No.1. Institut Pertanian Bogor.
Khaeruni dan Satra., 2016. Mikrobiologi Dasar. Jakarta: Erlangga.
Khasan, imam. 2005. Nutrisi dan Metabolisme. UI Press: Jakarta.
Koesmadja, 2006. Kimia Dasar. Erlangga: Jakarta.
119
Kusmiati, Tontowi A., Nusvvantara S. 2011.Efek Sumber Karbon Berbeda

Terhadap Produksi Alfa Glukosa Oleh Saccharomyces Cerevisiae Pada
Fermentator Airlift. Jurnal Nature Indonesia. Vol 13 (2): 135-145.
Kusnadi. 2008. Mikrobiologi. Bandung: FMIPA UPI.
Margono, dkk. 2011. Pengaruh Umpan Tambahan pada Akumulasi MC graw.
Murniati, Ani., 2002. Buku Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Bogor :IPB Press.
Natsir., 2003. Mikrobiologi Farmasi Dasar. Makassar: Universitas Hasanuddin.
Pelczar, C., 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : UI Press.
Pracaya., 2007. Hama dan Penyakit Tanaman. Jakarta : Penebar swadaya.
Purves, B. dan Sadava D.2003. Life The Science Of Biology 7 Edition. New
York: Sinaver Association inc.
Purwa, N.Herawati., 2013. Mikrobiologi Umum. Jember : Universitas Jember.
Puspitasari, Fajar Diah dkk., 2012. Isolasi dan Karakteristik Bakteri Preteolitik
dari
Razali, 2006. Mikrobiologi Dasar. Jatinegara: Erlangga.
Samad, 2006. Analisa mikrobiologi Pangan. Gramedia: Jakarta
Shclegel, Hans G. 2007. Mikrobiologi Umum. Yogyakarta: Universitas Gadjah
Soesanto, 2006. Mikrobiologi Kedokteran Edisi 2. Penerbit buku Kedokteran
EGC:
Soetrisno., 1996. Taksonomi Spermatophyta Untuk Farmasi Edisi I. Jakarta:
Staff Pengajar Jurusan Tanah Fakultas Pertanian, 2003. Metode-metode
Penetapan
Stainer, 2007.Dunia Mikroba 1. Jakarta : Biantara Aksara.
Sudarmadji., 2000. Penuntun Dasar-Dasar Kimia. Leedikbud: Jakarta.
Suharjono, 2006, Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambaran: Jakarta.
Suriawiria., 2005. Mikrobiologi Dasar. Jakarta : Papas Sinar Sinanti.
Sutardi, 2010. Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium Mikrobiologi.
Gramedia: Jakarta.
Tjahjadi, 2007. Mikrobiologi. Bandung : Yrama Widya.
Tjandra., 2013.Mikrobiologi Dasar. Bandung:IPB Press.
Tortora, 2007. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta : Airlangga.
Volk, wesley., 1993. Mikrobiologi Dasar. Erlangga: Jakarta.
Waluyo, 2009. Mikrobiologi Umum. Bandung : UPT Penerbitan Umum.
Waluyo, L. 2007. Mikrobiologi Umum. Makassar : UMM Press.
120
Waluyo, L. 2007. Mikrobiologi Umum. Malang: Universitas Muhamadiah Malang

Press.
Waluyo, L. 2007. Mikrobiologi Umum. Malang: UPT Penerbita UMM.
Zurhalki, 2015. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI-Press: Jakarta.

Laporan Tetap Mirobiologi Umum Kelompok 14

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan Tetap Mirobiologi Umum Kelompok 14

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN TETAP

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN

Parman Salimudin Hasmi Nurkayati

Hasfi Yuliana Imam Adriansyah

Hidayatul Islam Indrian Wahyuningsih

Imam Budi Mulyawan Juanti Lusiningtyas

Lalu Noval Urbaya Zintha Dewi Meintari

Nifo Winona Al Gasyiya

Roni Kurnia Putra

Mataram, 23 Desember 2016

Pengenalan alat-alat ini meliputi macam-macam alat, mengetahui nama-

Waktu dan Tempat Praktikum

Tabel 1.1 Hasil Pengamatan Pengenalan Alat-Alat Praktikum.

2 Labu Erlenmeyer Mengukur bahan kimia cairan

4 Jarum Preparat Digunakan untuk menipiskan

5 Jarum Ose Untuk mengambil biakan

6 Drigalski Untuk meratakan penyebaran

7 Gelas Beaker Untuk menampung sampel

8 Cawan Petri Sebuah wadah berbentuk

9 Pipet Tetes Untuk mengambil cairan

10 Mortar dan Alu Untuk menghaluskan zat

11 Mikroskop Untuk memperbesar Merek :

lambat dan bentuknya

tombol power untuk

mencetak hasil dari

17 Hot Plate Digunakan untuk pproses Merk :

19 Digital orbital dan shaker Untuk menghomogenisasi Merk :

mematikan alat, pengatur

untuk mengatur waktu (0,01 pH)

Praktikum mengenai pengenalan alat-alat praktikum ini akan dijelaskan

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat ditarik beberapa

Medium adalah substrat dimana mikroorganisme dapat tumbuh dan sesuai

Waktu dan Tempat Praktikum

Alat dan Bahan Praktikum

2) Dipanaskan 200 mL aquades

Tabel 2.1 Hasil Pengamatan Medium dan Cara Pembuatan Medium

pepton dan daging. Sedangkan D-glukosa berfungsi sebagai penyusun

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat disimpulkan

mikroorganisme, termasuk menelaaah ciri-ciri kultural, morfologis, fisiologis,

Secara alami mikroba di alam ditemukan dalam populasi campuran. Untuk

mikroba aerob (saprobakteri). Dalam biakan murni tidak saja diperlukan

Waktu dan Tempat Praktikum

Alat dan Bahan Praktikum

4) Digoreskan pada permukaan medium Nutrient Agar (NA) miring dalam

4) Dimasukkan kedalam cawan petri

Tabel 3.3 Hail Pengamatan Teknik Isolasi Bakteri Metode Sebar

Tabel 3.5 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Tuang

Metode gores merupakan prinsip metode yang digunkan untuk mendapatkan

serupa pedang. Medium NA miring dengan kultur Bacillus cereus U1 berwarna

sedangkan U2 tidak menghasilkan warna dan pola pertumbuhannya tidak ada,

Setiap metode isolasi koloni mikroba dilakukan secara duplo. Yang

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat ditarik beberapa

Waktu dan Tempat Praktikum

Alat dan Bahan Praktikum

c. Metode gores pada Medium PCA (Plate Count Agar)

Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat disimpulkan

dan perhitungan mikroba sehingga penyebaran dan ukuran mikroba dapat

Perhitungan bakteri adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung

Waktu dan Tempat Praktikum

Alat dan Bahan Praktikum

HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN

= 4,0 105 CFU/gram

Perhitungan koloni adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung