ANALISIS KUALITATIF STANDARD DENGAN METODE MPN

Pendahuluan

Kualitas air perlu dikontrol dengan melakukan berbagai prosedur pendeteksian

pencemaran. Secara mikrobiologis, sasaran penting analisis air adalah menentukan apakah air

mengandung organisme fecal yang merupakan indicator polusi air dari kotoran manusia atau

hewan. Kelompok organisme indikator yang digunakan adalah bakteri coliform, yang meliputi

semua bakteri Gram negative aerobic dan fakultatif aerobic, batang lurus pendek,tidak berspora

dan memfermentasi lactose dengan memproduksi gas.

Analisis standard air dengan mendeteksi keberadaan bakteri coliform dibagi menjadi

tiga tahap pengujian, yaitu uji praduga (presumptive test), uji penguat (confirmed test) dan uji

penyempurna (completed test). Pada uji praduga kita mencari mikroorganisme yang mampu

memfermentasi lactosa dengan memproduksi gas, yaitu bakteri coliform. Uji ini juga

memungkinkan perhitungan jumlah mikroorganisme yang terdapat di dalam sampel, yang

disebut dengan MPN (Most Probable Number) atau JPT (Jumlah Perkiraan Terkecil). MPN

diperkirakan dengan menentukan jumlah tabung dari masing-masing seri yang menunjukkan

adanya bakteri coliform yang salah satu cirinya adalah memproduksi gas setelah diinkubasi.

Pada uji penguat kita menanam bakteri yang diduga coliform pada media yg bersifat selektif

dan diferensial untuk kelompok bakteri coliform. Pada uji penyempurnakita mengisolasi dan

menumbuhkan bakteri coliform dalam kultur murni untuk meyakinkan bahwa morfologi dan

kemampuan mempfermentasi lactose dengan memproduksi gas adalah benar-benar

karakteristik bakteri coliform.

Bahan dan Alat

 Sampel air (air minum dalam kemasan, air dari es batu, air dari selokan, air bekas cucian

piring, dll)

Media Lactose Broth (LB) dalam tabung reaksi + tabung durham

Media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA) atau Endo Agar dalam cawan petri

Media NA miring dalam tabung reaksi

Zat-zat warna dan perangkat pewarnaan gram dan spora

Pipet volumetri/serological 10 ml

Pipet volumetri/serological 1 ml atau mikropipet 1000 l

Pipet volumetri/serological 0,1 ml atau mikropipet 100 l

Jarum inokulasi (ose)

Pembakar spiritus

Inkubator

Cara Kerja

Uji Praduga (Persumtive Test)

1. Inokulasikan sampel air ke dalam 3 seri 3 tabung berisi 10 ml media LB yaitu seri pertama

masing-masing 10 ml sampel air, seri kedua 1 ml, seri ketiga 0,1 ml. Aduk dengan vortex.

2. Inkubasikan pada 37C selama 24 jam.

3. Amati setelah 24 dan 48 jam.

Hasil positif: terbentuk gas (10%) pada tabung durham setelah 24 jam.

Hasil negatif: tidak terbentuk gas pada tabung durham setelah 48 jam.

Hasil meragukan: terbentuk gas pada tabung durham setelah 48 jam.

4. Catat dan tentukan nilai MPN dengan menggunakan tabel Determinasi MPN pada Lampiran

II.

Contoh:
 Jika hasil positif (terbentuk gas) pada ketiga tabung seri pertama, dua tabung seri kedua dan

satu tabung seri ketiga, hasil ini dibaca 3-2-1. Dari table Determinasi MPN pembacaan

tersebut menunjukkan terdapat kira-kira 150 mikroorganisme per 100 ml sampel, dan

dengan batas kepercayaan 95% terdapat antara 30 sampai 440 mikroorgansime.

Uji Penguat (Confirmed Test)

1. Dari tabung dengan hasil positif atau meragukan pada uji praduga dengan inoculum sampel

air terkecil, ambil 1 ose kultur dan goreskan pada media EMBA dalam cawan petri.

2. Inkubasikan pada temperatur 37C selama 24 jam.

3. Amati setelah 24 jam

Hasil positif: tumbuh bakteri E. coli dengan karakteristik sebagai berikut:

No Karakteristik E. coli pada media EMBA

1 Ukuran diameter 2-3 mm

2 Kekompakan koloni Koloni-koloni yang berdekatan memiliki sedikit

kecenderungan untuk bergabung

3 Elevasi Permukaan sedikit naik, datar atau agak cekung

4 Penampakan dengan Warna gelap, hijau metalik, hitam pada bagian

cahaya yang ditransmisi tengah hingga ke tiga perempat diameter koloni

5 Penampakan dengan Warna gelap, seperti kancing

cahaya yang direfleksikan

Uji Penyempurnaan (Completed Test)

1. Ambil koloni bakteri yang diduga sebagai E. coli yang tumbuh pada media EMBA dan tanam

pada media LB dan NA miring.

2. Inkubasikan pada temperature 37C selama 48 jam.

3. Buatlah pewarnaan Gram dan pewarnaan spora dari koloni yang tumbuh pada agar miring.

4. Amati morfologi sel dan pertumbuhan pada media LB

Hasil positif: sel batang lurus, pendek, Gram negative, tidak berspora, membentuk gas dari

lactose.

Hasil negatif: organism dengan karakterisk lain.

Analisis Kualitatif Standard Air

Gambar

Hasil Pengamatan

Uji Praduga (Persumtive Test)

Tabung dengan hasil positif

Kisaran dengan
Jenis 3 tabung 3 tabung 3 tabung
Pembacaan MPN batas kepercayaan
sampel seri-1 seri-2 seri-3
95%
1 2 3 1 2 3 1 2 3
Uji Penguat (Confirmed Test)

Jenis Sampel Karakteristik Koloni E. coli pada EMBA Hasil (+ atau -)

Uji Penyempurna (Completed Test)

Pewarnaan Kesimpulan
Jenis sampel Asam dan Gas (+ atau -)
Gram Spora (Tercemar/tidak)