Pendahuluan
pencemaran. Secara mikrobiologis, sasaran penting analisis air adalah menentukan apakah air
mengandung organisme fecal yang merupakan indicator polusi air dari kotoran manusia atau
hewan. Kelompok organisme indikator yang digunakan adalah bakteri coliform, yang meliputi
semua bakteri Gram negative aerobic dan fakultatif aerobic, batang lurus pendek,tidak berspora
Analisis standard air dengan mendeteksi keberadaan bakteri coliform dibagi menjadi
tiga tahap pengujian, yaitu uji praduga (presumptive test), uji penguat (confirmed test) dan uji
penyempurna (completed test). Pada uji praduga kita mencari mikroorganisme yang mampu
memfermentasi lactosa dengan memproduksi gas, yaitu bakteri coliform. Uji ini juga
disebut dengan MPN (Most Probable Number) atau JPT (Jumlah Perkiraan Terkecil). MPN
diperkirakan dengan menentukan jumlah tabung dari masing-masing seri yang menunjukkan
adanya bakteri coliform yang salah satu cirinya adalah memproduksi gas setelah diinkubasi.
Pada uji penguat kita menanam bakteri yang diduga coliform pada media yg bersifat selektif
dan diferensial untuk kelompok bakteri coliform. Pada uji penyempurnakita mengisolasi dan
menumbuhkan bakteri coliform dalam kultur murni untuk meyakinkan bahwa morfologi dan
piring, dll)
Media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA) atau Endo Agar dalam cawan petri
Pipet volumetri/serological 10 ml
Pembakar spiritus
Inkubator
Cara Kerja
1. Inokulasikan sampel air ke dalam 3 seri 3 tabung berisi 10 ml media LB yaitu seri pertama
masing-masing 10 ml sampel air, seri kedua 1 ml, seri ketiga 0,1 ml. Aduk dengan vortex.
Hasil positif: terbentuk gas (10%) pada tabung durham setelah 24 jam.
Hasil negatif: tidak terbentuk gas pada tabung durham setelah 48 jam.
4. Catat dan tentukan nilai MPN dengan menggunakan tabel Determinasi MPN pada Lampiran
II.
Contoh:
Jika hasil positif (terbentuk gas) pada ketiga tabung seri pertama, dua tabung seri kedua dan
satu tabung seri ketiga, hasil ini dibaca 3-2-1. Dari table Determinasi MPN pembacaan
tersebut menunjukkan terdapat kira-kira 150 mikroorganisme per 100 ml sampel, dan
1. Dari tabung dengan hasil positif atau meragukan pada uji praduga dengan inoculum sampel
air terkecil, ambil 1 ose kultur dan goreskan pada media EMBA dalam cawan petri.
1. Ambil koloni bakteri yang diduga sebagai E. coli yang tumbuh pada media EMBA dan tanam
Hasil positif: sel batang lurus, pendek, Gram negative, tidak berspora, membentuk gas dari
lactose.
Gambar
Hasil Pengamatan
Pewarnaan Kesimpulan
Jenis sampel Asam dan Gas (+ atau -)
Gram Spora (Tercemar/tidak)