Anda di halaman 1dari 7

REKOMBINAN TEKNOLOGI DNA DAN TEKNIK GENETIKA:

MAKNA AMAN DAN EFEKTIF UNTUK PRODUKSI BERHARGA BIOLOGI

Abstraksi:
DNA rekombinan artifisial diciptakan dari dua atau lebih DNA dimasukkan ke dalam satu
molekul. Rekayasa genetika,rekombinan,
teknologi DNA genetik modifikasi / manipulasi dan splicing gen adalah istilah yang diterapkan
pada manipulasi langsung darisuatu
genorganisme. Perkembangan teknologi baru telah mengakibatkan dalam produksi sejumlah
besardidefinisikan biokimia
proteinsignifikansi medis dan menciptakan potensi besar untuk industri farmasi. Thebiokimia
berasal
terapiadalah protein ekstraseluler besar untuk digunakan dalam terapi penggantian baik kronis
atau untuk pengobatan mengancam kehidupan
indikasi.
Kata kunci: DNA rekombinan, Teknik genetik, ligase, terapi

PENDAHULUAN:
Genetika adalah ilmu gen, keturunan, dan
variasi organisme. Dalam penelitian modern, genetika
menyediakan alat penting dalam penyelidikan
fungsigen tertentu, misalnya analisis
interaksi genetik.Dalam organisme, informasi genetik
umumnya dilakukan dalam kromosom, di mana ia
diwakili dalam struktur kimiaDNA
molekultertentu.Gen menyandikan informasi yang diperlukan untuk
sintesis protein, yang, pada gilirannya memainkan peran besar dalam
mempengaruhi, meskipun, dalam banyak kasus, tidak
sepenuhnya menentukan, fenotip akhir dari
organisme.Biologi perkembangan mempelajari proses
dimanaorganisme tumbuh dan berkembang. Berasal di
embriologi, hari ini biologi perkembangan mempelajari
kontrol genetik pertumbuhan sel, diferensiasi dan
"morfogenesis," yang merupakan proses yang menimbulkan jaringan, organ dan anatomi.
Organisme model untuk
biologi perkembangan termasuk babakcacing
elegansCaenorhabditis, lalat buah Drosophila
melanogaster, yang Brachydanio rerio ikan zebra, yangtikus
musculusMus, dan thaliana gulma Arabidopsis.
DNA rekombinan adalah DNA yang telah diciptakan
secara artifisial. DNA dari dua atau lebih sumber dimasukkan
ke dalam molekul rekombinan tunggal. Perlakukan DNA dari kedua
sumber dengan endonuklease restriksi yang sama (BamHI dalam
hal ini). BamHI memotong situs yang sama pada kedua molekul 5'
GGATCC 3' 3' CCTAGG 5' . Ujung dipotong memiliki
sepotong menjorok dari DNA untai tunggal. Ini
disebut"ujung lengket" karena mereka mampu untuk mendasarkan memasangkan
denganmolekul DNA yang mengandung lengket saling
akhirmelengkapi.Dalam hal ini, baik persiapan DNA memiliki
ujung lengket melengkapi dan dengan demikian dapat memasangkan dengan satu sama
lain bila dicampur. DNA ligase kovalen menghubungkan dua menjadi molekul
DNArekombinan. Untuk menjadi berguna, rekombinan
molekulharus direplikasi berkali-kali untuk menyediakan
bahan untuk analisis, sequencing, dll Memproduksi banyak
salinan identik dari molekul rekombinan yang sama
disebutkloning. Kloning bisa dilakukan in vitro, dengan proses yang
disebut reaksi berantai polimerase (PCR). di sini
Namun,kita akan meneliti bagaimana kloning dilakukan dalam vivo1, 2. Kloning in vivo dapat
dilakukan dalam: mikroba uniseluler seperti
E. coli, uniseluler eukariota seperti ragi dan, Dalam
sel mamalia tumbuh dalam kultur jaringan. Dalam setiap kasus,
DNA rekombinan harus diambil oleh sel dalam
bentuk yang dapat direplikasi dan dinyatakan. Hal ini
dicapai dengan memasukkan DNA dalam vektor.
Sejumlahvirus (baik bakteri dan sel mamalia) dapat
berfungsi sebagai vektor. Tapi di sini mari kita contoh
kloning menggunakan E. coli sebagai tuan rumah dan plasmid sebagai vektor. Rekayasa
genetika dasar (GE) mengambil DNA donor
dari satu organisme atau jenis sel dan menempatkannya ke dalam
DNA dari organisme lain atau jenis sel. Ini termasuk
langkah-langkah berikut:
1. Isolasi gen
2. Persiapan DNA target
3. Penyisipan DNA ke dalam plasmid
4. Penyisipan plasmid kembali ke dalam sel
5. Plasmid perkalian
6. sel target reproduksi
7. Sel menghasilkan protein
1. Isolasi Gene : gen untuk memproduksi protein yang
diisolasi dari sel. Gen adalah pada DNA dalam kromosom. DNA memotong protein khusus yang
digunakan untuk
memotongbagian tertentu dari DNA. Gen dapat terisolasi dan
kemudian disalin sehingga banyak gen yang tersedia untuk bekerja dengan.
2. Persiapan Target DNA: Pada tahun 1973, dua ilmuwan
bernama Boyer dan Cohen mengembangkan cara untuk menempatkan DNA
dari satu organisme ke dalam DNA bakteri. Proses ini
disebut teknologi DNA rekombinan. Pertama, melingkar
sepotongDNA yang disebut plasmid dihapus dari
sel bakteri.Protein khusus yang digunakan untuk memotong cincin plasmid untuk
membukanya UP3.
3. Penyisipan DNA ke dalam Plasmid: The DNA host yang
menghasilkan protein yang diinginkan dimasukkan ke dalamdibuka.
ring DNA plasmid Kemudian protein sel khusus membantu menutup
cincin plasmid.
4. Penyisipan Plasmid kembali ke dalam sel: Themelingkar
DNA plasmidyang sekarang berisi gen tuan dimasukkan
kembali ke dalam sel bakteri. Plasmid adalah bagian alami dari
sel bakteri. Sel bakteri sekarang memiliki gen di dalamnya
yaitudari organisme yang berbeda, bahkan dari manusia. Ini adalah
apa yang disebut teknologi DNA rekombinan.
5. Plasmid perkalian: The plasmid yang dimasukkan
ke dalam sel bakteri dapat berkembang biak untuk membuat beberapa salinan
dari gen yang diinginkan. Sekarang gen dapat diaktifkan dalam
seluntuk membuat protein.
6. Sasaran Sel Reproduksi: Banyakdigabungkan
plasmiddimasukkan ke dalam banyak sel bakteri. Sementara mereka
tinggal, proses sel bakteri mengaktifkan gen yang disisipkan
dan protein yang diproduksi di dalam sel. Ketika bakteri
sel-selberkembang biak dengan membagi, gen yang disisipkan juga
direproduksi dalam sel yang baru dibuat.
7. Sel Diproduksi Protein: Protein yang dihasilkan
dapat dimurnikan dan digunakan untuk obat, industri,
pertanian, atau penggunaan lainnya.
Gene Kloning: gen kloning adalah proses dimanabesar
jumlah tertentu, gen yang diinginkan atau bagian dari DNA
dapat dikloning atau disalin setelah DNA yang diinginkan telah
isolated4. Metode Gene Kloning:
1. Gen atau DNA yang diinginkan terisolasi menggunakan
enzim restriksi.
2. Kedua gen yang diinginkan dan plasmid diperlakukan denganyang
enzim restriksisama untuk menghasilkan ujung lengket identik.
3. DNA dari kedua sumber dicampur bersama-sama dan
diperlakukan dengan ligase DNA enzim untuk sambatan mereka
bersama-sama.
4. DNA rekombinan, dengan plasmid yang mengandung
DNA ditambahkan atau gen telah dibentuk.
5. plasmid rekombinan ditambahkan ke budaya
sel bakteri. Di bawah kondisi yang tepat, beberapa
bakteriakan mengambil dalam plasmid dari solusi selama
proses yang dikenal sebagai transformasi.
6. Sebagai bakteri sel yang mereproduksi (oleh mitosis),
plasmidrekombinan disalin. Segera, akan ada
jutaan bakteri yang mengandung plasmid rekombinan
dengan gen yang diperkenalkan.
7. Gen diperkenalkan dapat mulai memproduksi protein yang melalui
transkripsi dan translasi.
Gene Kloning Tutorial:
Langkah 1: Dalam rangka untuk mengkloning gen langkah pertama adalah untuk mengisolasi
menggunakan enzim restriksi. Enzim ini mengakuitertentu
daerah-daerahpada molekul DNA. Wilayah DNA ditunjukkan di bawah adalah dari rhodobacter
sphaeroides. Gen dari bunga
terletak di wilayah kromosom ditunjukkan dengan warna biru. Urutan dasar adalah orang-orang
bahwa enzim restriksi EcoRI
mengakui. Perhatikan bahwa membaca dari kiri ke kanan dalam untai atas adalah sama
dengan membaca dari kanan ke kiri di bawah
untai. Gunakan EcoRI untuk memotong tulang punggung gula-fosfat pada titik-titik yang
ditunjukkan oleh panah merah.
Basa berpasangan terjadi ketika EcoRI memotong molekul DNA. Perhatikan bahwa gen dari
bunga dibatasi oleh fragmen DNA
yang mengandung basa berpasangan atau "lengket berakhir". Jika suhu diturunkan dan DNA
ligase ditambahkan ini basis berpasangan dapat
reanneal mengikuti aturan dasar pasangan. Ketika pK19 dipotong oleh EcoRI memiliki "lengket
ujung" yang melengkapi yang dibuat dengan memotong R. sphaeroides. Seperti R.
sphaeroides "ujung lengket" dapat reanneal jika DNA ligase ditambahkan. Ini akan kembali
plasmid untukcincin asli itu
struktur
Step2: Cooled, menambahkan ligase DNA dan molekul dapat reanneal. Menghasilkan berbagai
bentuk rekombinan.
Salah satu yang menarik adalah plasmid yang mengandung DNA R. sphaeroides. Tuan rumah
plasmid pK19 hanya memiliki sebuah situs EcoR1 tunggal. Memasukkan R. sphaeroides DNA
mengganggu urutan pasangan basa
diwilayah kromosom plasmid yang kode untuk peptide5 alpha, 6.
Mengkloning Gene (Polymerase Chain Reaction): Clone:
Membuat salinan genetik yang tepat dari organisme utuh, sel-sel atau
potongan DNA yang disebut klon. Clone merupakan salinan dari
tanaman,hewan atau mikro-organisme berasal daritunggal
sel nenek moyangatau organisme. Klon secara genetik
identik. Sebuah gen dikatakan kloning ketika urutannya
dikalikanberkali-kali dalam prosedur laboratorium umum
reaksi berantai yang disebut polimerase (PCR). PCR salinansel
kemampuan alami untuk mereplikasi DNA dan dapat menghasilkan
miliaran salinan dalam beberapa jam.
Ada empat tahap utama:
1. DNA yang akan disalin dipanaskan, yang menyebabkan
helai dipasangkan untuk memisahkan. Yang dihasilkan alur tunggal
sekarang dapat diakses untuk primer (panjang pendek dari DNA).
2. jumlah besar primer ditambahkan ke
untaian tunggalDNA. Primer mengikat cocok
urutan sepanjang urutan DNA, di depan
gen yang akan disalin. Campuran reaksi kemudian
didinginkan yang memungkinkan DNA untai ganda untuk membentuk
lagi. Karena jumlah besar primer,
duahelai akan selalu mengikat primer, bukan satu
sama lain.
3. DNA polimerase ditambahkan ke campuran. Ini adalah
enzimyang membuat untaian DNA. Hal ini dapat mensintesis untai dari semua kombinasi DNA
primer dan
secara dramatis meningkatkan jumlah DNA yang hadir.
Salah satu enzim yang digunakan dalam PCR disebut Taq polymerase
yang awalnya berasal dari bakteri yang hidup di
sumber air panas. Hal ini dapat menahan suhu tinggi
yang diperlukan untuk pemisahan DNA untai dan karena itu,
dapat dibiarkan dalam reaksi dan masih fungsi.
4. Langkah-langkah di atas diulang sampai cukup DNA
diperoleh.
Seluruh proses ini otomatis dan terjadi sangat
cepat. Reaksi terjadi dalam tabung kecil yang
ditempatkan di dalam sebuah mesin khusus yang bisa membuat
penyesuaian suhu yang besar dengan cepat.
Prinsip PCR: Tujuan dari PCR (Polymerase
Chain Reaction) adalah untuk membuat sejumlah besar salinan
gen.Hal ini diperlukan untuk memiliki template yang awal cukup
untuk sequencing.
Reaksi bersepeda: Ada tiga langkah utama dalam
PCR, yang diulang selama 30 atau 40 siklus. Hal ini dilakukan
pada cycler7 otomatis, 8, yang bisa memanaskan dan mendinginkan
tabung dengan campuran reaksi dalam waktu yang sangat singkat.
Denaturasi pada 94C, Anil di 54C, Ekstensi di
72C. Karena kedua untai disalin selama PCR, ada
peningkataneksponensial dari jumlah salinan gen.
Mari kita misalkan hanya ada satu salinan gen yang diinginkan
sebelum bersepeda dimulai, setelah satu siklus, akan ada 2
eksemplar, setelah dua siklus, akan ada 4 eksemplar, dan tiga
siklus akan menghasilkan 8 eksemplar dan On3.
Untuk memeriksa apakah gen disalin selama PCR dan untuk
memeriksa ukuran yang tepat nya: Sebelum produk PCR digunakan dalam
aplikasi lebih lanjut, itu harus diperiksa jika: Ada
produkterbentuk, produk adalah ukuran yang tepat, hanya satu band yang
terbentuk .
Prinsip sequencing: Tujuan sequencing adalah untuk
menentukan urutan nukleotida gen. Untuk
sequencing, kita tidak mulai dari gDNA (seperti di PCR) tapi
kebanyakan dari fragmen PCR atau kloning genes9.
Reaksi sequencing: Ada tiga langkah utama dalam
reaksisekuensing (seperti di PCR), yang diulang selama
30 atau 40 siklus.
Denaturasi pada 94 C: Selama denaturasi itu,
untaiganda meleleh terbuka untuk DNA beruntai tunggal, semua
reaksi enzimatik berhenti (misalnya: perpanjangan
darisiklus sebelumnya).
Annealing pada 50 C: Dalam reaksi sekuensing, hanya satu
primer digunakan, sehingga hanya ada satu untai disalin (di PCR:
dua primer yang digunakan, sehingga dua helai disalin).yang
Primer bergoyang sekitar, yang disebabkan oleh gerak Brown. Ikatan ion terus-menerus
terbentuk dan rusak antara
primer terdampar tunggal dan template terdampar tunggal.
Obligasi lebih stabil bertahan sedikit lebih lama (primer yang
pas) dan sepotong kecil DNA double stranded
(template dan primer), polimerase dapat melampirkan dan mulai
menyalin template. Setelah ada beberapa basis yang dibangun di,
ikatan ionik begitu kuat antara template dan
primer,yang tidak pecah lagi.
Ekstensi pada 60 C: ini adalah suhu kerja ideal
untuk polimerase (biasanya itu adalah 72 C, tetapi karena memiliki
untuk menggabungkan ddNTP ini yang dimodifikasi secara kimia
dengan label fluorescent, suhu diturunkan sehingga
memiliki waktu untuk menggabungkan 'aneh' molecules10, 11.
Mekanisme primer, di mana ada
beberapapangkalan dibangun, sudah memiliki daya tarik ionik lebih kuat
perpanjangan:.untuk template dari pasukan melanggar wisata ini
primer yang ada di posisi tanpa sama persis, datang
longgar lagi dan tidak memberikan perpanjangan fragmen.
dasar (melengkapi template) yang digabungkan untuk
primer pada 3'side yang (menambahkan dNTP atau ddNTP ini dari
5' ke 3' , membaca dari template dari 3' untuk 5' sisi, basa
ditambahkan melengkapi template). Ketika ddNTP
dimasukkan, reaksi ekstensi berhenti karena
ddNTP mengandung H-atom pada atom karbon ke-3
(dNTP ini mengandung OH-atom pada posisi itu). Sejak
ddNTPini fluorescent berlabel, adalah mungkin untuk mendeteksi
warna dasar terakhir dari fragmen ini padaotomatis.
sequencer Pemisahan molekul: Setelahsekuensing,
reaksi campuran helai, semua panjang yang berbeda
dan semua berakhir pada ddNTP fluorescently berlabel
harusdipisahkan; Hal ini dilakukan pada gel akrilamida, yang
mampumemisahkan molekul dari 30 basis dari salah satu
31 basis, tetapi juga sebuah molekul 750 basis dari salah satu dari
751 basis. Semua ini dilakukan dengan electrophoresis12 gel, 13.
DNA memiliki muatan negatif dan berpindah ke
sisi positif.Fragmen yang lebih kecil bermigrasi lebih cepat, sehingga DNA
molekuldipisahkan pada ukuran mereka.
Deteksi sebuah sequencer otomatis:
Fragmenfluorescently berlabel yang bermigrasi palung
gel,melewati sinar laser di bagian bawah gel.
Laser keluar molekul neon, yang mengirim
cahaya dari warna yang berbeda. Cahaya yang dikumpulkan dan difokuskan oleh lensa ke
dalam spektrograf. Berdasarkan
panjanggelombang, spektograf memisahkan cahaya di
kameraCCD (charge coupled device). Setiap basis memilikitersendiri,
warna sehingga sequencer dapat mendeteksi urutan
basa pada gen sequencing.
Perakitan bagian sequencing gen: Untuk
tujuan publikasi, setiap urutan gen harus
dikonfirmasi di kedua arah. Untuk mencapai hal ini,tersebut
genharus diurutkan dengan maju dan mundur
primer. Karena hanya mungkin untuk urutan bagian dari
750 sampai 800 pangkalan di satu run, gen, misalnya
1800 basa, telah harus diurutkan dengan primer internal.
Ketika semua fragmen ini diurutkan, komputer
programmencoba untuk menyesuaikan bagian yang berbeda bersama-sama dan
merakit total urutan gen. Aplikasi dari PCR: PCR telah menggantikan kloning untuk
berbagai tujuan: Terutama sekuensing DNA. Hal
ini lebih cepat dan tidak memerlukan vektor, yang dapat bermutasi karena
mereka bereproduksi. Hal ini dapat digunakan forensik, untuk memperkuat
sejumlah kecil DNA dari bukti pidana; atau
secara klinis, untuk mendeteksi urutan DNA terkait denganmewarisi,
disorders14 15.
Keterbatasan PCR: Hanya urutan relatif singkat
dapat diperkuat andal. Sesuatu yang lebih dari 10.000
pasang basa tampaknya tidak akan diperkuat. Anda perlu
tahu urutan primer hak untuk menggunakan, di kedua ujung
urutan Anda ingin memperkuat. Jika dua gen yang terkait
memiliki akhir sequences16 yang sama, Anda mungkin memperkuat
genyang salah. Anda hanya mendapatkan fragmen DNA. Untuk melihat DNA ini di tempat kerja
dalam organisme hidup, beberapa jenis
kloning harus dilakukan.
KESIMPULAN
kemajuan teknologi DNA rekombinan telah
terjadi secara paralel dengan perkembangangenetik
prosesdan variasi biologis. DNA rekombinan
artifisial diciptakan dari dua atau lebih DNA
dimasukkan ke dalam satu molekul.genetika,
Rekayasa teknologi DNA rekombinan, genetik
modifikasi / manipulasi dan splicing gen adalah istilah
yang diterapkan pada manipulasi langsung darisuatu
genorganisme. Perkembangan baru
teknologitelah mengakibatkan dalam produksibesar
sejumlah protein didefinisikan biokimia signifikansi medis dan menciptakan potensi besar untuk
industri farmasi. Thebiokimia berasal
terapiadalah protein ekstraseluler besar untuk digunakan dalam
terapi penggantian baik kronis atau untuk
pengobatanmengancam kehidupan indikasi.DNA rekombinan
Teknologijuga memiliki peran penting dalam ilmu forensik
dalam identifikasi penjahat, profiling DNA untuk mempelajari
analisis kekerabatan dan dalam pengujian paternitas.