ISSN: 1870-0195
rmcf@afmac.org.mx
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Mxico
Tavira Montalvn, Carlos Alberto; Ortega Garca, Anglica; Dvila Gonzlez, Idalia; Estrada Mondaca,
Sandino; Meneses Acosta, Anglica
Alcances y perspectivas del cultivo de clulas animales en la biotecnologa farmacutica
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, vol. 40, nm. 4, octubre-diciembre, 2009, pp. 35-46
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Distrito Federal, Mxico
Carlos Alberto Tavira Montalvn1, Anglica Ortega Garca1, Idalia Dvila Gonzlez1,
Sandino Estrada Mondaca 2, Anglica Meneses Acosta1
Resumen
En la actualidad, el cultivo de clulas animales es uno de los sistemas ms utilizados en la produccin de biofrmacos ya que
ha demostrado tener ventajas con respecto a la expresin de protenas recombinantes en bacterias u otros organismos eu-
cariotes, tales como levaduras o cultivos de clulas vegetales. Sin embargo, su utilidad no es conocida totalmente dentro del
mbito farmacutico ya que ha sido considerado como un sistema de produccin costoso, de bajo rendimiento y difcil de
manipular. Por ello, en esta revisin se presenta de manera general el desarrollo de los cultivos de clulas animales como sis-
temas productores de biofrmacos y se hace hincapi de sus ventajas y limitantes as como en las aplicaciones actuales y fu-
turas de este sistema dentro de la industria biofarmacutica.
Abstract
Animal cell culture is one of the most important systems used for the production of biopharmaceuticals. It has important ad-
vantages compared to bacterial, yeast and plant cell expression systems. However, it is not widely utilized in the pharmaceuti-
cal industry owing to the high cost, difficulties and low yield associated with its use. This review focuses on the use of animal
cell culture as an alternative producing system for biopharmaceuticals and highlights its advantages, restrictions and applica-
tions in the biopharmaceutical industry.
Palabras clave: cultivo de clulas animales, biotecnologa far- Keywords: animal cell culture, pharmaceutical biotechnolo-
macutica, protenas recombinantes. gy, recombinant proteins.
Correspondencia:
Dra. Anglica Meneses Acosta Fecha de recepcin: 6 de enero de 2009
Facultad de Farmacia Fecha de recepcin de modificaciones: 14 de febrero de 2010
Universidad Autnoma del Estado de Morelos Fecha de aceptacin: 15 de febrero de 2010
Av. Universidad 1001, Col. Chamilpa
CP 62010Cuernavaca, Morelos
Telfono: (52) (777) 329 7000. Ext 336
e- mail: angelica_meneses@uaem.mx
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En los aos 1960s se establecieron las dos lneas celulares ms de azcar en sitios especficos, producindose la O, la S la N
utilizadas para la produccin de biofrmacos en la actualidad, glicosilaciones, lo que brinda actividad a la protena, dirige a
las cuales son las clulas CHO (Chinese Hamster Ovarium) y sitios blanco y permite un mayor tiempo de vida media de sta
la lnea BHK21 (Baby Hamster Kidney), la cual proviene de en el torrente sanguneo), y, la secrecin del producto al me-
rin de cra de hmster15. Sin embargo, su uso para este fin fue dio de cultivo en la mayora de los casos (facilitando el proceso
explotado principalmente a partir de los aos 1980s. El desa- de purificacin posterior). As, el estudio de las condiciones,
rrollo de diferentes lneas celulares continuas de origen linfo- parmetros y medios de cultivo para lograr que el sistema de
blstico16 empez a reflejar los riesgos en el manejo de lneas expresin en clulas animales fuera competitivo impuls el co-
celulares dndose a conocer la posible contaminacin cruzada nocimiento en el rea de la bioingeniera, ayudando al diseo
con clulas HeLa en varios linajes celulares. A partir de los aos de nuevos tipos de reactores y modos de operacin que permi-
1970s y con los logros obtenidos manipulando el ADN, los m- tieron incrementar las productividades, con lo cual los cultivos
todos que posteriormente conformaran lo que hoy conocemos celulares se convirtieron en una alternativa para la industria
como tecnologa del ADN recombinante, se realizaron los pri- biofarmacutica. Asimismo, el uso de clulas de insecto como
meros ensayos de transferencia de ADN en clulas animales17. sistema de produccin de protenas recombinantes por medio de
En esta dcada, tambin se desarroll el primer linaje celular la infeccin con baculovirus es al da de hoy una realidad como
artificial proveniente de clulas murinas denominado hibrido- sistema de expresin recombinante21.
ma18, el cual fue diseado originalmente para la produccin de
anticuerpos monoclonales con aplicacin teraputica. Sin em- Por otra parte, el cultivo de rganos, la ingeniera de tejidos y
bargo, la presencia de virus murinos endgenos en el sistema el cultivo de clulas embrionarias eran ya actividades rutinarias
biolgico limitaron en aquella poca esta aplicacin, desarro- a finales del siglo pasado a nivel de ciencia bsica. Ya en el siglo
llndose primeramente su uso como herramienta diagnstica la XXI, con la genmica y el desarrollo del Proyecto del Genoma
cual es explotada ampliamente hasta nuestros das. Asimismo, Humano, se ha despertado el inters por otras micas: como
se inici el estudio de la totipotencialidad de las clulas madre son la protemica, metabolmica, farmacogenmica, transcrip-
embrionarias, cuyo desarrollo actual se ve de manifiesto en la tmica, glicmica, interactmica, etc. La necesidad de cultivos
Ingeniera de rganos y Tejidos19. de clulas animales como base ineludible de la ingeniera de
tejidos, de rganos y en terapia gnica, impulsa a una recon-
En los aos 1980s, el avance en investigacin bsica a lo largo de ceptualizacin de la medicina y de la farmacia actuales. Dado
dcadas de estudio se puso de manifiesto cuando se identificaron que este tema marca todo un novedoso desarrollo, se conside-
los mecanismos de regulacin de la expresin gentica, dndose ra que es materia de otro artculo por lo que no se desarrollar
a conocer la regulacin del ciclo celular, y desarrollndose lneas ampliamente aqu.
celulares especializadas as como los primeros cultivos para re-
constitucin de piel. En esta poca se llev a cabo, por primera Es necesario aclarar que an cuando en la actualidad el cultivo
vez, la produccin de la primer protena recombinante en clulas de clulas animales ha ofrecido las ventajas en la produccin de
de mamfero20, constituyndose en el primer biofrmaco produ- protenas glicosiladas complejas, tambin presenta limitantes
cido por ingeniera gentica en este tipo de sistemas. importantes al compararlo con otros sistemas de expresin de
biofrmacos, tales como bacterias y levaduras recombinantes.
A partir de la dcada de 1990, el incremento en la produccin Dichas limitantes son los largos tiempos de cultivo, ocasionados
de biofrmacos utilizando la tecnologa del cultivo de clulas por las bajas velocidades de crecimiento; el uso de suplementos
animales modificadas por medio de la tecnologa del ADN re- (tales como el suero de diferentes mamferos) y medios de cultivo
combinante aument de manera exponencial debido a que las costosos (principalmente aqullos que son definidos); la fragili-
protenas recombinantes generadas en sistemas bacterianos, de dad de las clulas a los esfuerzos de corte por lo que los reactores
levaduras por medio del cultivo de clulas vegetales no tenan utilizados tienen diseos especiales en los sistemas de agitacin
la calidad requerida por la industria biofarmacutica en com- y aireacin, los cuales estn en constante optimizacin. Si bien
paracin con el producto generado por medio del cultivo de la baja cantidad de producto obtenido por las bajas densidades
clulas animales. En esta dcada, se ponen de manifiesto las celulares alcanzadas al da de hoy es una limitante parcial debi-
ventajas fundamentales que ofrece la generacin de biofrmacos do a que con el uso de sistemas en perfusin se llegan a obtener
por medio de esta tecnologa sobre otros sistemas de produccin densidades celulares del orden de 1.5 X 107 cel/ml, todava la
para la produccin de protenas de inters farmacutico. Tales cantidad de protena recombinante sigue siendo menor a la ge-
ventajas son: el plegamiento correcto de la protena (la pro- nerada en bacterias recombinantes, aunque el sistema de clu-
tena traducida adquiere su estructura tridimensional correcta las de insecto-baculovirus es una buena alternativa cuando las
en el interior del retculo endoplsmico y en el citoplasma); la protenas a obtener no requiere glicosilaciones complejas. Otra
glicosilacin compleja (en el retculo endoplsmico y aparato limitante parcial es la potencial presencia de virus animales en
de Golgi de las clulas animales se agregan cadenas complejas los productos biofrmacuticos, los cuales son principalmente
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lneas de origen linfoblstico, como son los hibridomas, ofrecen En el caso del aislamiento y propagacin de virus silvestres, se
grandes ventajas dada su facilidad de crecer en suspensin, ya ha observado una mayor sensibilidad de los cultivos primarios
que la manipulacin de ellas es mucho ms sencilla. De hecho, que de las lneas celulares24. Anteriormente para la produccin
a nivel industrial, el uso de lneas modificadas genticamente de vacunas los cultivos primarios eran recomendables por tener
para subsanar el problema de la adherencia ha sido muy soco- una baja probabilidad de que se transformaran en malignos. Su
rrido en los ltimos aos permitiendo el desarrollo de lneas en principal desventaja resida en la probabilidad de presentar virus
suspensin con crecimiento a altas densidades celulares. adventicios o latentes, lo que implic el desarrollo de tecnologas
sensibles para el control de calidad12.
Por otra parte, el mantenimiento a corto plazo de un cultivo
celular se realiza por el subcultivo del mismo en cual puede El cultivo secundario se establece cuando se hace el subcultivo
conducir a modificaciones genticas que pueden repercutir en exitoso a partir de un cultivo primario. Las clulas dependien-
su fenotipo, sin embargo, esto no siempre sucede. Adems, estas tes de anclaje forman una monocapa que puede llegar a cubrir
modificaciones tambin pueden ser inducidas por medio de la el soporte en el que crecen, el grado de cobertura del soporte se
insercin de plsmidos especficos, lo que da origen a cultivos llama grado de confluencia. El subcultivo implica el despren-
con diferentes propiedades. Este cambio en el fenotipo puede dimiento de las clulas adheridas, la dilucin de la densidad
explotarse para un fin comn considerando la maquinaria bio- celular y su reinoculacin en medio fresco. Las clulas pueden
lgica de las clulas, abarcando desde el anlisis propio de la crecer a una velocidad constante en diversos subcultivos sucesi-
funcin biolgica, el estudio de enfermedades o el desarrollo vos, recibiendo cada uno de ellos el nombre relacionado con el
de plataformas biotecnolgicas para la produccin de protenas pase. Es necesario aclarar que en este tipo de pases, el nmero
recombinantes y vacunas. Los diferentes tipos de cultivos celu- de subcultivos no necesariamente corresponde al nmero de ge-
lares se muestran en la Figura 2. neraciones celulares por lo que siempre es importante considerar
el tiempo en el que cada una de las clulas tarda en replicarse5.
Cultivo Primario y subcultivo. Cuando el cultivo proviene de
clulas que han sido disgregadas de un tejido original tomado Cultivo Celular. . Un cultivo celular es aquel cultivo de clulas
de algn rgano de un animal reciben el nombre de Cultivo Pri- que tiene alta capacidad de multiplicarse in vitro, el cual es es-
mario. Es decir, representa el cultivo de clulas de un fragmento tablecido a partir del primer subcultivo de un cultivo primario
de tejido obtenido a partir de un organismo. Estas clulas son y que tiene las mismas caractersticas que el tejido de origen.
consideradas como cultivo primario hasta que se subcultiven con Su principal caracterstica es que tiene un nmero limitado de
xito (es decir, sean transferidas, con o sin dilucin, de un reci- posibles subcultivos, cuyo nmero generalmente se encuentra
piente de cultivo a otro). Los cultivos primarios se caracterizan entre 60 y 70 pases. Al da de hoy algunos cultivos ampliamente
por estar constituidos por diferentes tipos de clulas (por lo que utilizados son los de clulas 293HEK o Wi385.
a veces pueden recibir el nombre de cocultivos) cuya morfologa
es predominantemente la de las clulas del rgano del que fueron Lnea Celular Continua. Una lnea celular continua consiste de
aisladas, sus cromosomas tienen un nmero diploide, su creci- clulas que se diferencian gentica y morfolgicamente de las
miento in vitro es limitado y presentan inhibicin por contacto clulas de las cuales se originaron. Pueden provenir de tumores
generada por vas de sealizacin intra e intercelulares. o de un proceso de transformacin de un cultivo primario por
medio de una prdida de regulacin debido al subcultivo con-
tinuo o mediante transfeccin con oncogenes, o el tratamiento
con agentes carcinognicos. Las lneas celulares continuas son
aquellas que han demostrado posibilidades de ser subcultivadas
in vitro por lo menos 70 pases indefinidamente y que presentan
caractersticas genotpicas diferentes al tejido del cual fueron
originadas. Las lneas celulares continuas pueden ser trans-
fectadas con genes especficos para la produccin de protenas
de inters, se les conoce como lneas celulares transformadas
genticamente. En general, algunas de estas lneas se caracte-
rizan por no tener inhibicin por contacto y crecer de manera
indefinida e independiente del nmero de pases o subcultivos.
Las lneas celulares ms utilizadas en el mbito farmacutico se
enlistan en la Tabla 15.
Figura 2. Diferentes cultivos celulares de acuerdo a su origen y
modificacin gentica y fenotpica.
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Tabla 1. Lneas celulares ms utilizadas en el mbito que representan productos denominados no nativos, al derivarse
biofarmacutico directamente de tecnologas de ingeniera gentica aplicadas a
clulas en cultivo.
Lnea Origen Caracterstica
celular
Produccin de vacunas virales
BHK21 Rin de cra Fibroblasto dependiente del Las primeras vacunas producidas en cultivos de clulas de ma-
hmster Sirio anclaje, pero puede inducirse en mfero fueron aquellas contra la viruela y la fiebre amarilla en los
suspensin aos 1930s. El aislamiento de virus solamente pudo ser posible
CHO Ovario de Clulas en suspensin semejantes gracias al descubrimiento de la posibilidad de propagar clulas
hmster Chino a las epiteliales humanas in vitro; al control de la contaminacin con antibiticos
HeLa Carcinoma Clulas en suspensin semejantes y al diseo y construccin de equipos de limpieza de aire. Altos
cervical Humano a las epiteliales ttulos virales son alcanzados cuando los virus son crecidos en
clulas susceptibles y, actualmente, son muchos los tipos celulares
IMR-90 Pulmn de Fibroblasto diploide con lapso de
embrin vida limitado que pueden ser cultivados, adicionalmente, es ms fcil inspec-
Humano cionar un cultivo celular al microscopio buscando evidencias de
proliferacin viral, que usar huevos o animales completos. En la
L Tejido conectivo Fibroblastos, clulas en
de ratn suspensin
Tabla 2 se enlistan vacunas virales comercializadas en Europa y
los Estados Unidos que se producen usando cultivos de clulas
McCoy Origen de ratn Fibroblastos dependientes de de mamfero. Actualmente, la disponibilidad de anticuerpos
similar a las anclaje
monoclonales y tcnicas moleculares para la deteccin de ADN
clulas L
y ARN viral, ha facilitado la identificacin de virus en proce-
MDCK Rin canino Semejantes a las epiteliales, sos infecciosos, evitando las etapas de incubacin en clulas en
dependientes de anclaje
cultivo y permitiendo adems la identificacin de virus que no
MRC-5 Pulmn de Fibroblastos diploides, vida proliferan en cultivos tradicionales25.
embrin Humano limitada
MPC-11 Mieloma de Clulas en suspensin semejante El desarrollo de una vacuna que poda prevenir la infeccin por
ratn a los linfoblastos el virus de la poliomielitis solamente pudo lograrse en cultivos,
Namalwa Linfoblastoide Clulas en suspensin semejantes primero, in vitro y segundo, en clulas que no pertenecen al sis-
humano a los linfoblastos tema nervioso central. Inicialmente, en 1908, se propagaba el
3T3 Tejido conectivo Fibroblastos dependientes de virus al infectar primates sensibles. En el ao 1913 se propagaba
del ratn anclaje el virus al infectar tejido nervioso de primate mantenido en cul-
tivo por 21 das26. En los aos que siguieron, no se haba obteni-
WI-38 Pulmn de Fibroblastos diploides, vida
do evidencia suficiente que permitiera pensar que el virus de la
embrin humano limitada
poliomielitis no se multiplicaba en tejido extraneural humano.
WISH Amnin Semejantes a las epiteliales, vida En 1949, Enders en conjunto con Tom Weller y Fred Robbins,
Humano limitada
reportaron el crecimiento de virus de la polio (cepa Lansing)
Vero Mono verde Fibroblastos dependientes de en cultivos extraneurales11. Posteriormente, en 1952, se publi-
africano anclaje c el uso de cultivos en suspensin de piel, msculo, intestino
y tejido nervioso embrinicos humanos para la propagacin del
virus27. Adicionalmente, con adelantos tecnolgicos se pudieron
El cultivo celular y sus productos obtener ttulos virales muchas veces superiores a los obtenidos
Una de las aplicaciones ms interesantes del cultivo celular ha en cultivos tradicionales. Uno de tales adelantos consisti en
consistido en la obtencin de productos de uso teraputico que el desarrollo de fermentadores de 300 y 1000 litros en los que
ya han alcanzado el mercado farmacutico. Los avances logrados clulas de rin de mono crecen sobre microacarreadores, con
en la tecnologa de cultivo celular han permitido que productos lo que la superficie de cultivo es incrementada 28. De este modo
cada vez ms complejos se pongan al alcance del pblico se consigui la produccin masiva de una vacuna que cambiara
usuario. En esta seccin se presentan los diferentes productos la historia de la salud pblica.
del cultivo celular en orden creciente de complejidad del proceso
involucrado. De este modo primero se abordar la produccin Una aplicacin actual del cultivo de virus en clulas de mam-
de virus, necesarios en la fabricacin de vacunas. En seguida se fero es el diagnstico de infecciones virales. Dicho diagnstico
presentar la produccin de anticuerpos monoclonales, usados es posible al buscar seales de cambios degenerativos conocidos
como herramienta tanto diagnstica como teraputica. Por colectivamente como efecto citoptico en cultivos en monoca-
ltimo, se presentar a las protenas recombinantes, mismas pa de diferentes lneas celulares. El observador experto puede
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Tabla 2. Vacunas virales producidas en cultivo celular y disponibles en los mercados
de Estados Unidos y Europa (www.Biopharma.com)
Virus Nombre comercial Caractersticas
Adenovirus Adenovirus vaccine Oral, tipo 4. Obtenidos por cultivos en fibroblastos diploides humanos WI-38
Adenovirus vaccine Oral, tipo 7. Obtenidos por cultivos en fibroblastos diploides humanos WI-38
Hepatitis A VAQTA Formulacin acuosa de virus completo inactivado proveniente de virus atenuado (con formaldehido)
cultivado en clulas MRC-5 (fibroblastos humanos diploides).
Havrix Virus inactivado con formaldehido, cepa HM-175, cultivado en clulas MRC-5.
Epaxal Berna Formulacin virosomal (estructura fosfolipdica similar a membrana celular) de virus de hepatitis A de la
cepa RG-SB, inactivado con formaldehdo y crecido en clulas MRC-5, estas clulas son adsorbidas en
virosomas reconstituidos de influenza inmunopotenciadores con dos antgenos del virus de la influenza
anclados a la membrana del virosoma.
Avaxim Virus de la cepa GBM cultivado en clulas humanas diploides MRC-5, inactivado con formaldehido
Hepatitis B Hapacare-Hepagene ADN recombinante, triple antgeno (antgeno de superficie, pre S-1, pre S-2)
Influenza Flumist ADN recombinante, virus atenuado adaptado al fro, vacuna trivalente A y B producida en embriones de pollo.
CAIV-T ADN recombinante, lquido, vacuna trivalente A y B. Virus de influenza no patognico con protenas de
cubierta inmunognicas de cepas epidmicas, y con el ncleo del virus atenuado por mutaciones genticas.
Fluvirin Antgenos de superficie provenientes de virus cultivado en embriones de pollo, los virus se inactivan con
beta-propiolactona, los antgenos se recuperan usando Triton N-101.
Begrivac Contiene fragmentos inactivados de tres virus causantes de influenza.
Fluvax Antgenos de superficie provenientes de virus inactivados de tres cepas patognicas diferentes cultivado
en embriones de pollo.
Fluarix, Influsplit SSW, Virus completos cultivados en embrin de pollo, inactivados y fragmentados. Vacuna trivalente tipos A y B
Alpharix
Influenza FluLaval, Fluviral Vacuna trivalente, cultivos en embrin de pollo.
Fluogen Vacuna trivalente tipos A y B, antgenos de supeficie de virus cultivados en embrin de pollo, extrados con ter.
Flu-Immune Subviriones aislados a partir de virus cultivados en embrin de pollo.
Flushield Vacuna trivalente tipos A y B, antgeno del subvirin purificado por cromatografa y filtracin
Fluzone Vacuna trivalente tipos A y B, subviriones aislados a partir de virus cultivados en embrin de pollo.
Rotavirus RotaShield, Rotamune Atenuado naturalmente por recombinacin, administracin oral, vacuna tetravalente contra los 4
serotipos ms frecuentes en los EEUU, cultivado en clulas de rin de mono verde africano y una lnea
celular de mono rhesus fetal diploide.
Rotarix, RIX-4414 Formulacin de un rotavirus recombinante natural (89-12C2) cepa G1P[8], cultivado en clulas VERO.
RotaTeq, WC3 Vacuna generada a partir de un recombinante natural de cinco cepas de rotavirus. Cada uno de los
recombinantes consiste del esqueleto de ARN del rotavirus bovino G6 cepa WC-3 con una insercin gentica
de un rotavirus humano que codifica para una protena de superficie -ya sea VP7 de los rotavirus humanos G1,
G2, G3 o G4, o bien VP4 del rotavirus humano P1A. Los virus son cultivados en clulas Vero.
Encefalitis JE-VAX Virus inactivado con formaldehido (cepa Nakayama-NIH) cultivado in vivo en cerebros de ratn infectado.
japonesa
Sarampin Attenuvax Virus de la cepa Moraten propagado en cultivos de clulas de embrin de pollo.
Paperas Mumpsvax Virus de la cepa Jeryl Lynn (nivel B) cultivado en embriones de pollo.
Poliomielitis IPOL Virus de tres cepas (Mahoney, MEF-1 y Saukett) inactivados con formalina crecidos en clulas Vero.
Poliovax Virus de tres cepas (Mahoney, MEF-1 y Saukett) inactivados crecidos en clulas MRC-5.
IPV Virus de la poliomielitis inactivado cultivado en clulas Vero.
Rabia Imovax Virus de la cepa Pitman-Moore (PM 1503-3M) cultivados en clulas MRC-5 e inactivado con beta propiolactona
Rabie-Vax, Imovax Virus inactivado con beta propiolactona cultivado en fibroblastos humanos diploides MRC-5
RVA Virus inactivado cultivado en clulas pulmonares de mono rhesus fetal (FRhL-2)
RabAvert Virus de la cepa Flury LEP C25 propagado en cultivos primarios de fibroblastos de embrin de pollo
inactivado, inactivado con beta propiolactona.
Rubeola Meruvax II Virus atenuado de la rubola (cepa Wistar Institute RA 27/3) cultivado en fibroblastos humanos
diploides de pulmn WI-38
Viruela ACAM2000 Virus de la cepa Conn-Master 17633 crecido en clulas Vero
Imvamune, MVA 3000 Modificacin del virus no infeccioso de la cepa Ankara cultivados en fibroblastos de embrin de pollo
Varicela Varivax II Virus varicela zoster atenuado de la cepa OKA/Merck cultivado en fibroblastos humanos MRC-5
Zostavax Virus varicela zoster atenuado de la cepa OKA/Merck cultivado en fibroblastos humanos MRC-5
Fiebre amarilla Arilvax Virus atenuado de la cepa 17D cultivado en embriones de pollo
YF-VAX Virus atenuado de la cepa 17D en embriones de pollo.
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emitir un diagnstico preliminar basndose en la lnea celular mediante su uso, se pueden tambin conocer interacciones mo-
implicada, en el tiempo de incubacin y en la magnitud del efec- leculares y celulares. En la prctica clnica, los anticuerpos son
to citoptico, aunque pruebas adicionales son necesarias para la tiles en diagnstico y tratamiento de padecimientos29.
identificacin definitiva del virus (el lector interesado puede re-
mitirse a Leland y Ginocchio, 2007, para una completa revisin La produccin de anticuerpos monoclonales (provenientes de
de las diferentes tcnicas para la identificacin de virus). una sola clona de linfocitos B) surgi con la tecnologa creada por
Milstein y Khler en 197518 que permiti la fusin de linfocitos
Produccin de anticuerpos B, productores de inmunoglobulinas especficas, con clulas de
Los anticuerpos son molculas proteicas compuestas de cuatro mieloma tumoral que se encuentran permanentemente en creci-
cadenas, dos ligeras y dos pesadas unidas por puentes disulfuro, miento. Con esta fusin se obtienen los hibridomas que crecen de
los cuales tienen diversas funciones tales como reconocimiento y manera casi ilimitada produciendo anticuerpos especficos contra
neutralizacin de antgenos, opsonizacin, presentacin de ant- un antgeno particular. Con el advenimiento de las tcnicas de
genos a clulas efectoras y activacin del sistema de complemento. biologa molecular la produccin de hibridomas ha llegado ms
Desde el punto de vista funcional, los anticuerpos presentan una lejos y se han logrado reducir las respuestas de rechazo que se
fraccin que reconoce al antgeno y otra fraccin cristalizable que producen cuando los anticuerpos son producidos en ratn. Con
meda funciones efectoras como la respuesta citotxica dependiente el objeto de reducir el rechazo, se incluyen secuencias humanas
del anticuerpo y aquella que depende del complemento. La fraccin en los anticuerpos, en un proceso que se ha llamado quimeri-
que reconoce al antgeno tiene una regin variable y una regin zacin, a pesar del cual el 40% de los anticuerpos quimricos
constante, la primera de estas dos es muy diversa en virtud de la producen cierto tipo de rechazo29. El siguiente paso tecnolgico
variedad de antgenos, la segunda permite la estabilizacin de la ha consistido en la humanizacin de los anticuerpos, una etapa
fraccin variable. Los anticuerpos son producidos por clulas B del importante en este proceso fue el establecimiento en Cambridge
sistema inmune y responden a un solo determinante antignico. de una lnea de hibridoma totalmente humana30.
Los anticuerpos son herramientas muy importantes de la inves- La mayora de los anticuerpos comercializados (Tabla 3) son pro-
tigacin cientfica al poderse localizar, identificar y cuantificar ducidos por dos vas, usando tecnologa de ADN recombinante
niveles de expresin de productos gnicos, se han usado tam- en clulas de mamfero (como las CHO) o clulas linfoides mu-
bin en la caracterizacin y tipificacin de clulas particulares; rinas (como NSO, Sp2/0-Ag14), o bien en hibridomas31.
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Antgeno Nombre Comercial Caractersticas
Receptor de Basiliximab-Simulect Anticuerpo monoclonal glicoproteico quimrico (humano-murino) especfico para la subunidad alfa del
interleucina 2 receptor de interleucina 2 de alta afinidad, expresado en clulas de mieloma murino. Usado como agente
inmunosupresor
Daclizumab-Zenapax Anticuerpo monoclonal glicoproteico quimrico (humano-murino) especfico para la subunidad alfa del
receptor de interleucina 2 de alta afinidad, expresado en clulas de mieloma murino. Usado como agente
inmunosupresor
LFA-3/IgG1 Alefacept-Amevive Protena de fusin conformada por el antgeno 3 asociado a la funcin leucocitaria y la inmunoglobulina
G humana. Selecciona como blanco a las clulas T con memoria. Tratamiento de psoriasis
Plaquetas Abciximab-ReoPro Fragmento de un anticuerpo monoclonal glicoproteico quimrico /humano-murino) producido por
la lnea ceular de mieloma murino Sp2/0. Especfico contra el receptor glicoproteico IIb/IIIa del
fibringeno en plaquetas humanas, inhibiendo agregacin de plaquetas
Respiratory Palivizumab Anticuerpo monoclonal glicoproteico recombinante humanizado especfico contra un eptope en el
sincitial virus sitio antognico A de la protena de fusin de RSV. Expresado en clulas de mieloma murino (NSO).
(RSV) Tratamiento de infecciones pulmonares causadas por RSV
Tumor Necrosis Infliximab-Remicade Anticuerpo monoclonal glicoproteico recombinante parcialmente humanizado, especfico contra TNF-
Factor alpha alpha humano Producido en la lnea celular c168A. Tratamiento de procesos inflamatorios en los que
(TNF-alpha) TNF est implicado
Adalimumab-Humira Anticuerpo monoclonal recombinante humano especfico contra TNF-alpha. Tratamiento de los
sntomas de artritis reumatoide, artritis psoritica, espondolitis anquilosante, enfermedad de Crohn
Tumor Necrosis Etanercept-Enbrel Protena de fusin dimrica recombinante similar a anticuerpo, consistente en dos cadenas unidas
Factor receptor covalentemente de una protena de fusin compuesta del dominio extracelular soluble del receptor 2 de
2/IgG1 TNF (TNFR2) con la inmunoglobulina humana G1. La protena de fusin se expresa en clulas CHO
Vascular Bevacizumab-Avastin Anticuerpo monoclonal recombinante humanizado especfico contra VEGF humano. Compite e inhibe
Endothelial la proliferacin de clulas endoteliales limitando la vascularizacin de tumores
Growth Factor
(VEGF)
CD3 Muromonab-CD3. Anticuerpo monoclonal murino especfico contra el receptor de CD3 en la superficie de clulas T
Orthoclone OKT 3 humanas. Uado para reducir la inmunidad natural en pacientes transplantados
CA125 Igovomab-Indimacis 125 Diagnstico de adenocarcinoma ovrico. Especfico contra el antgeno CA125 asociado a tumores
humanos. Anticuerpo quimrico
CD15 Fanolesomab Neutrospec Anticuerpo monoclonal IgM murino especfico para el antgeno CD15 en membranas de granulocitos/
neutrfilos humanos. Radioconjugado con tectenio 99 para diagnstico de apendicitis no convencional
CD20 Tositumomab-Bexxar Anticuerpo monoclonal especfico contra CD20 en la superficie de clulas B, conjugado con Yodo 131.
Tratamiento de linfoma tipo no-Hodgkin
Carcino Aratumomab-CEA-Scan Anticuerpo monoclonal con especificidad por el antgeno carcinoembrinico, expresado en mltiples
Embryonic tumores. Radioconjugado con tectenio 99m se usa en radio diagnstico detumores colorectales
Antigen (CEA)
Granulocitos Sulesomab-Leuko-Scan Anticuerpo monoclonal murino especfico contra el fragmento Fab de NCA-90 en granulocitos.
Diagnstico de apendicitis no clsica
Miosina Imcicromab Pentetate- Fragmento Fab derivado enzimticamente de anticuerpo monoclonal murino con especificidad por
Myoscint miosina. Radioconjugado con indio 111 se usa en diagnstico de tejido cardiaco muerto
NR-LU-10 Nofetumomab-Verluma NR-LU-10 fragmento Fab derivado enzimtico de un anticuerpo monoclonal murino especfico por la
glicoprotena CD20 expresada en la superficie de clulas tumorales. Conjugado con tectenio 99m para
el radio diagnstico de tumores
Antgeno Capromab Pendetide- El anticuerpo monoclonal 7E11-C5.3, especfico contra el antgeno prosttico de membrana conjugado
especfico ProstaScint con indio 111 es usado para el diagnstico de tumores prostticos y su metstasis
prosttico de
membrana
Tumor-associated Satumomab Pendetide- Inmunoconjugado formado por un anticuerpo monoclonal murino especfico por TAG72 unido a
glycoprotein 72 OncoScint molcula queladora. Conjugado con indio 111 es usado para radiodiagnstico de tumores que expresan
(TAG72) TAG72
CD34 Stem cell concentration Sistema automatizado para la seleccin de clulas troncales CD34+ usando perlas magnticas cubiertas
system-Isolex 300 con anticuerpos monoclonales murinos. Uso en transplante de clulas troncales de sangre perifrica
Una muy interesante perspectiva se abre para la produccin de hombre, sin embargo slo existen anticuerpos para un escaso
anticuerpos, como lo dice Nathan Blow32, los avances en ge- porcentaje de los productos de dichos genes.
nmica han revelado poco ms de 20 mil genes tan slo en el
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Produccin de protenas recombinantes cientes con VIH. Un problema nada reciente pero al que la tecnologa
El uso de la tecnologa recombinante para la produccin de del ADN recombinante ha podido atender de manera precisa, es la
protenas tiene cerca de 20 aos33 y, hoy en da, cerca del 70% infertilidad, misma que a travs de la produccin de la hormona esti-
de aquellas usadas con fines teraputicos (Tabla 4) provienen de mulante de folculos ha podido responder a las necesidades de parejas
cultivos de clulas de mamfero34 en virtud de que son las nicas con problemas reproductivos. En la Tabla 5 se enlistan algunas de las
clulas que pueden realizar una serie de modificaciones complejas hormonas que se comercializan en Europa y en los Estados Unidos
que las protenas de inters teraputico requieren. que son producidas en cultivos de clulas de mamfero.
Algunas protenas glicosiladas, producidas por cultivo de clulas Una de las principales inquietudes que derivan de la produccin
animales han constituido conos de la tecnologa recombinante, tal en gran escala y grandes concentraciones de polipptidos re-
es el caso de los factores de coagulacin, de gran importancia en pa- combinantes tiene que ver con la posibilidad de agregacin y de
cientes hemoflicos. La eritropoyetina (EPO), la cual es ampliamente desnaturalizacin. Morozova-Roche y Malizauskas35 llaman la
glicosilada ha tenido un gran xito comercial al ser la citocina de atencin sobre una estructura altamente ordenada, caracterizada
mayor uso en el mundo para el tratamiento de anemias y las clulas por un ncleo de hojas beta cruzadas, adoptada por diversos po-
CHO son las empleadas a nivel industrial. Como potenciador de la lipptidos y que comprometera la actividad de macromolculas
respuesta inmune, la interleucina 2 es ampliamente utilizada en pa- teraputicas, es la estructura amiloide. Entre los productos far-
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Tabla 5. Hormonas producidas en cultivos de clulas de mamfero y comercializadas en EE UU y Europa (www.Biopharma.com)
Hormona Nombre comercial Caractersticas
macuticos que adoptan estructura amiloide in vitro se encuentran clulas un sistema competitivo a nivel productivo en los pases
la insulina, amilina, glucagon, GLP-1, calcitonina y hormona de desarrollados ya que por medio de l es posible obtener vacunas,
crecimiento. Es entonces imperativo que el proceso de produc- anticuerpos monoclonales y protenas recombinantes cuyo valor
cin provea las condiciones que eviten la formacin de amiloides, agregado es considerable. En Mxico, debido a la apertura por
puede ser desde el diseo de la protena misma o bien cambian- parte de las empresas farmacuticas para la generacin de pro-
do las condiciones de produccin, almacenamiento y aplicacin. ductos de origen biotecnolgico es necesario brindar informacin
Como ejemplo del diseo de la protena se puede mencionar la bsica a la comunidad farmacutica del desarrollo de este tipo
introduccin de aminocidos hidrofbicos, de puentes disulfuro de cultivos a lo largo de la historia as como de su clasificacin y
o de sal, iones metlicos coordinados o ligandos en las reas don- usos ms importantes, para facilitar la comprensin de procesos
de es posible que haya uniones intermoleculares estabilizantes o farmacuticos que utilicen este tipo de sistemas.
bien evitando las interacciones desestabilizantes35. En el medio
de produccin es posible agregar sales o azcares que aumentan
la solubilidad de los polipptidos. Agradecimientos
A.Meneses-Acosta agradece el apoyo otorgado por PROMEP-
Conclusiones SEP para la realizacin de este artculo. Asimismo, agradecemos
la participacin de la estudiante Anel Prez Rodrguez (UPE-
La aplicacin del cultivo de clulas animales dentro de la biotec- Mor) en la bsqueda de informacin.
nologa farmacutica se ha incrementado en los ltimos aos ya
que las ventajas ofrecidas por ste son permitir el plegamiento
correcto, brindar una glicosilacin compleja adecuada y total- Referencias
mente relacionada con la actividad farmacolgica y en el caso
de su produccin, secretar los productos al medio de cultivo. 1. Mazzarello, P. 1999. A unifying concept: the history of cell
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