Anda di halaman 1dari 6

Detarium microcarpum dikenal sebagai '' manis detar'' telah digunakan selama berabad-abad

di Nigeria sistem tradisional obat untuk pengobatan diabetes. Penelitian ini berkaitan dengan
evaluasi ilmiah amilase alpha fertilisasi in-vitro, alpha glukosidase dan potensi antioksidan
ekstrak daun tanaman dengan memeriksa radikal bebas yang mengais-ngais aktivitas di
DPPH menggunakan Rutin, asam galat dan Asam askorbat sebagai standar. Total fenolik
konten (TPC) dan Total Flavonoid konten (TFC) ekstrak daun juga ditentukan menggunakan
metode standar. Etil asetat, berair, dan daun mentah ekstrak D. microcarpum yang
menunjukkan jumlah yang signifikan fenolik konten 2014.22 mg, 933.33 mg dan 766.81 mg
GAE/g ekstrak masing-masing. Kandungan Total flavonoid di etil asetat, ekstrak daun berair
dan kasar ditemukan juga tinggi dengan nilai 132.90 mg, 30.50 mg dan 49.50 mg rutin setara
(RE) / g ekstrak masing-masing. Kegiatan scavenging radikal ekstrak secara signifikan lebih
tinggi di semua konsentrasi yang digunakan daripada senyawa standar. Setengah-maksimal
penghambatan konsentrasi (IC50) D. microcarpum kasar dan berair daun ekstrak pada α-
amilase dan α-glukosidase lebih rendah daripada fraksi ethylacetate tetapi semua yang lebih
tinggi dari Acarbose. Penelitian ini menyediakan bukti bahwa ekstrak daun D. microcarpum
kaya flavonoid dan polifenol lain senyawa dan juga memiliki ampuh alpha amilase, alpha
glukosidase dan aktivitas antioksidan dan ini mungkin membenarkan penggunaannya dalam
ethnomedicine Manajemen diabetes.

PENGENALAN
Diabetes mellitus (DM) adalah gangguan metabolik yang ditandai dengan kronis
hiperglikemia dengan gangguan metabolisme karbohidrat, lemak dan protein, dihasilkan dari
cacat dalam sekresi insulin, tindakan, atau keduanya (WHO, 1999). Penyakit adalah perhatian
utama kesehatan global dan hal ini diproyeksikan bahwa pada tahun 2030, jumlah pasien
diabetes akan meningkat menjadi sekitar 366 juta (Shaw et al., 2010), dengan tipe 2 diabetes
akuntansi untuk 90-95% dari kasus. Meskipun munculnya hypoglycemics lisan dan obat lain
sintetis, mencari agen-agen baru yang kurang beracun, lebih murah dan memiliki efektivitas
ini masih masalah prioritas besar. Produk alami merupakan sumber yang besar dan
bermanfaat obat-obatan untuk mengelola berbagai penyakit dan jumlah besar tanaman yang
digunakan untuk mengelola diabetes di berbagai negara di Afrika dapat menyediakan sumber
yang berguna untuk penemuan senyawa baru yang dapat digunakan sebagai menyebabkan
senyawa untuk pengembangan lebih lanjut obat atau sebagai tambahan berarti diet yang
sederhana yang ada terapi (Hostettmann et al., 2000; TraBi et al., 2008). Detarium
microcarpum (Fabaceae) merupakan tanaman obat polongan Afrika yang ditemukan di hutan
tropis (Mabberly, 1987).
Berbagai fitokimia telah terisolasi dari tanaman seperti diterpenes (Witting dan Guinko,
1998), polisakarida larut dalam air, protein dan coumarin (Neuwinger, 1996). Berbagai
bagian tanaman telah digunakan dalam etno-pengobatan sebagai phyto-terapi untuk
pengobatan dan manajemen berbagai kondisi. Telah dilaporkan memiliki kegiatan seperti
sifat antimikroba, anti rematik, sitotoksik (Abreu et al. 1998; Abreu et al., 1999), kegiatan
anti-plasmodial (Kouyate, 2005). Tanaman ini juga digunakan untuk mengelola penyakit
kusta dan impotensi (Baerts et al., 2002).

D. microcarpum dan lekat spesies Detarium untuk digunakan dalam pengobatan sifilis,
disentri, bronkitis, kusta, sakit tenggorokan, radang paru-paru, diabetes, diare, malaria dan
meningitis pada Afrika etno-obat (Ebi et al., 2011; Peter et al., 2012).
Ekstrak kulit batang juga menunjukkan baik penghambatan aktivitas terhadap virus Hepatitis
C (Olugbuyiro et al., 2009) dan juga menunjukkan aktivitas molluscidal signifikan terhadap
Lymnaea natalensis (Kouyate dan van Damme, 2006). Tanaman juga ditunjukkan untuk
menjadi efektif sebagai anti-epilepsi (Ngobum et al., 2011). Ekstrak akar tanaman telah
terbukti memiliki aktivitas antidiabetes (Okolo et al., 2012) tetapi tidak ada penyelidikan
ilmiah tentang potensi daun tanaman yang anti-diabetik. Studi ini karena itu bertujuan untuk
menyelidiki antioksidan dan anti-diabetik, sifat-sifat berbagai daun ekstrak D. microcarpum,
menggunakan pendekatan fertilisasi in-vitro dengan pandangan untuk lebih menguatkan
beberapa klaim terkait dengan ethnomedicinal yang menggunakan.
BAHAN DAN METODE
Semua reagen yang digunakan adalah analisis kelas dan produk Sigma Aldrich, USA. Mereka
termasuk: metanol, n-heksana, etil asetat, Butanol, Ammonia.All solusi disusun dalam air
suling. DPPH, Rutin, Galia asam, reagen Folin-Ciocalteau, natrium karbonat, natrium nitrit,
natrium hidroksida, Aluminium klorida, asam askorbat, babi pankreas α-amilase (EC3.2.1.1,
jenis VI), p-nitrophenyl-α-D glycopyranoside (pNPG), α-glukosidase juga Diperoleh dari
Sigma Aldrich Jerman. Pembacaan absorbansi sampel dilakukan menggunakan Shimadzu
UV-Vis spectrophotometer 1650 (Jepang).

Pengambilan sampel
D. microcarpum Guill dan Perr daun dikumpulkan di Juli 2015 dari Zaria, Utara-Barat
Nigeria. Otentikasi ini dilakukan dalam Departemen ilmu biologi, Universitas Ahmadu Bello,
Zaria, Nigeria, oleh Mallam Namadi Sunusi. Spesimen voucher dengan No. 901451 disimpan
di herbarium Department of Biological Sciences Universitas Ahmadu Bello, Zaria.

Persiapan ekstrak
Daun Detarium microcarpum tanaman itu udara kering pada suhu kamar selama tujuh hari.
Seribu gram (1000g) dari bagian bubuk diekstraksi secara mendalam oleh maserasi dengan
metanol 70% pada suhu kamar selama 48 jam. Rotavapor digunakan untuk menguap ekstrak
kekeringan pada 40 ° C untuk menghasilkan ekstrak kasar kering (CEDM) dengan hasil yang
160.3g (16,03%). Selanjutnya, bubur ekstrak minyak mentah ini dibuat oleh mencampurnya
dengan air suling dan bubur dipindahkan ke memisahkan saluran dan ekstraksi berurutan
berturut-turut; dilaksanakan untuk memberikan etil asetat dan sebagian kecil berair. Ekstrak
yang dikumpulkan pada setiap titik dan menguap kekeringan menggunakan rotavapor pada
40 ° C untuk menghasilkan kering etil asetat sebagian kecil (EAFDM) dengan hasil yang
48.55 g (4,85%) dan berair fraksi (AQFDM) dengan hasil yang 107.92 g (10.79%). Ekstrak
semua disimpan dalam desikator.

Penentuan jumlah fenolik konten (TPC)


Jumlah fenolik konten ekstrak dievaluasi oleh metode colorimetric memanfaatkan reagen
Folin-Ciocalteu menurut metode sebelumnya dijelaskan dengan sedikit modifikasi (Adedapo
et al., 2008; Odumosu et al., 2015). Sampel yang mengandung polyphenol berkurang oleh
reagen Folin-Ciocalteu sehingga menghasilkan berwarna biru yang kompleks. Konsentrasi
fenolik ekstrak D. microcarpum dievaluasi dari kurva kalibrasi asam galat. Tentang 500μL
aliquots 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 μg/mL larutan asam galat metanol dicampur dengan 2,5 ml
Bupati Folin-Ciocalteu (diencerkan sepuluh kali lipat) dan 2,5 mL (75g/L) natrium karbonat.
Tabung yang vortexed selama 10 detik dan diperbolehkan untuk berdiri untuk 2hours pada 25
° C. Setelah inkubasi 250 c selama 2 jam, daya serap diukur di 765 nm terhadap reagen
kosong. Jumlah konten fenolik dinyatakan sebagai mg asam galat setara menggunakan
persamaan berikut berdasarkan kurva kalibrasi y = 0.0069 x + 0.0673, (korelasi koefisien; r2
= 0.9947), dimana x adalah absorbansi dan y adalah asam galat setara (mg/g). Prosedur yang
sama diadopsi untuk ekstrak seperti dijelaskan di atas dalam penyusunan kurva kalibrasi.
Penentuan semua dilakukan dalam rangkap tiga. Jumlah konten fenolik dinyatakan sebagai
miligram asam galat setara (GAE) per g ekstrak

Penentuan kandungan Total Flavonoid (TFC)


Kandungan total flavonoid D. microcarpum ekstrak diukur dengan menggunakan aluminium
klorida colorimetric assay sebagai melaporkan (Odumosu et al., 2015). Aliquot (1mL) ekstrak
(40mg) atau larutan standar rutin dengan konsentrasi berikut (10, 20, 40, 60,80 dan 100
μg/mL) telah ditambahkan ke labu Volumetrik 10 mL mengandung 4 mL air suling. Untuk
labu, 300 μL 5% NaNO2 dan 300μL 10% AlCl3 ditambahkan. Setelah 6 menit, 2 mL 1 M
NaOH ditambahkan dan total volume dibawa ke 10mL dengan penambahan 2.4 mL H2O.
Solusinya adalah vortexed untuk campuran mixtu.

Anti-oksidan assay
DPPH radikal pemulungan aktivitas
Aktivitas antioksidan (radikal bebas pemulungan aktivitas) D. microcarpum ekstrak pada
stabil radikal 1, 1-difenil-2-picrylhydrazyl (DPPH) ditentukan menurut metode yang
dijelaskan sebelumnya (Odumosu et al., 2015; Brand-Williams et al., 1995). Konsentrasi
berikut ekstrak disusun dalam metanol; 500, 250, 125, 62.50, 31.25, 15.62, 7.8125, 3.91, 1,95
dan 0,98 μg/ml dan 2 ml konsentrasi setiap dicampur dengan 4ml 50μM DPPH solusi dalam
metanol dalam rangkap tiga. Campuran vortex campuran selama 10 detik dan tabung yang
diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar dalam gelap dan absorbansi diukur di 515 nm.
Membaca absorbansi lebih rendah dari campuran reaksi menunjukkan radikal bebas
pemulungan aktivitas yang lebih tinggi. Asam galat, asam askorbat, dan rutin digunakan
sebagai standar di μM konsentrasi 100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3.125, 1.563, 0.7812, 0.391, dan
0.195 berikut. Solusi kosong sudah siap dengan mencampurkan 2ml metanol dengan 4ml 50
μM DPPH solusi di metanol. Perbedaan absorbansi antara tes dan kontrol (DPPH dalam
metanol) dihitung dan dinyatakan sebagai % mengais-ngais DPPH radikal. Kapasitas untuk
mengais DPPH radikal dihitung dengan menggunakan persamaan berikut:
inhibisi % = 100 x (Abs kontrol-Abs sampel) / Abs kontrol
Akhirnya, nilai IC50 yang didefinisikan sebagai konsentrasi dihitung dari yang terpisah linear
regresi plot dari persentase berarti aktivitas antioksidan terhadap konsentrasi tes mengekstrak
(μg/ml).
 - assay penghambatan glukosidase
-glukosidase penghambatan aktivitas ekstrak ini diuji dengan menggunakan metode yang
sebelumnya dijelaskan dengan sedikit modifikasi (Worawalai et al., 2012; Damsud et al.,
2013). Secara singkat, 10 μL ekstrak dicampur dengan -glukosidase (0.1 U/ml, 40 μL)
dalam 1 mM buffer fosfat (pH 6.9) dan incubates 370 c selama 10 menit. Kemudian 40 μL
0.1 mM p-nitrophenyl- D glycopyranoside (pNPG) telah ditambahkan dan campuran ini
kemudian diinkubasi selama 30 menit sebelum boleh dipadamkan dengan penambahan 100
μL 0.1 M Na2CO3 hadir dalam. Aktivitas enzim ditentukan oleh pemantauan absorbansi di
415 nm. Penghambatan persen ditentukan menurut persamaan:
% penghambatan = (Ablank-Asample) / Ablank x 100; di mana Asample dan Ablank adalah
absorbansi larutan yang mengandung pNPG dan -glukosidase dengan dan tanpa contoh
masing-masing. IC50value ditentukan dari plot persentase inhibisi pada sumbu y terhadap
sampel konsentrasi pada sumbu-x. Acarbose digunakan sebagai kontrol positif.
-Amilase penghambatan aktivitas
-amilase inhibisi assay dilakukan menggunakan metode chromogenic (Ali, 2006). Babi
pankreas -amilase (EC3.2.1.1, jenis VI) dilarutkan dalam air suling dingin. Jagung Pati di
buffer fosfat digunakan sebagai solusi substrat. Menurut metode, 250μl tanaman ekstrak,
125μl buffer fosfat dan 250μl dari -amilase dicampur dalam tabung. Tabung yang
diinkubasi pada 37 ° C selama 5 menit. Setelah inkubasi, 500μl Pati solusi ditambahkan ke
tabung dan semua tabung yang diinkubasi c 370 selama 5 menit. Setelah itu, 500μl DNS
warna reagen solusi ini ditambahkan ke tabung di 1000C. Setelah 5 menit, 3000μl suling air
ditambahkan dan tabung yang didinginkan dan aktivitas -amilase ditentukan dengan
mengukur daya serap campuran di 540nm. Kontrol incubations dilakukan dalam mode
identik menggantikan ekstrak tumbuhan dengan air suling (250μl). Untuk incubations
kosong, solusi enzim yang digantikan dengan air suling dan prosedur yang sama dilakukan
seperti di atas. -amilase inhibisi assay dihitung dengan menggunakan formula:
(%) = [(A540 control – A540 extract)/A540 control] x 100

Analisis Statistik
Data numerik yang Diperoleh dari penelitian yang dinyatakan sebagai nilai rata ± deviasi
standar. Analisis Statistik mana yang berlaku yang dilakukan menggunakan analisis varians
(ANOVA) diikuti oleh Tukey's posting tes dengan bantuan IBM Statistik paket perangkat
lunak ilmuwan sosial (SPSS 20). Perbedaan dianggap signifikan ketika P < 0,05. Setengah-
maksimal penghambatan konsentrasi (IC50) dihitung dari penghambatan % dibandingkan
ekstrak konsentrasi regresi non-linear kurva ekstrak masing-masing.
HASIL
DPPH radikal pemulungan kegiatan dari D. microcarpum ekstrak daun dan standar
Kegiatan scavenging radikal ekstrak secara signifikan lebih tinggi bila dibandingkan dengan
standar asam galat dan rutin dan dekat dengan asam askorbat, menunjukkan bahwa ekstrak
lebih baik radikal pemulung (Tabel 2)
Penghambatan efek D. microcarpum ekstrak daun againstα-amilase dan α-glukosidase
Ekstrak juga dipamerkan tingkat tinggi α-amilase penghambatan aktivitas dengan %
penghambatan (IC50μg/ml) 63.10, 631.01 dan 63.50 untuk CEDM, EAFDM dan AQFDM
masing-masing bila dibandingkan dengan 6,38 untuk acarbose. Demikian pula, tinggi tingkat
aktivitas penghambatan α-glukosidase dengan % penghambatan (IC50μg/ml) 158.50, 398.10
dan 65.50 masing-masing bila dibandingkan dengan 12,60 untuk standar acarbose.

Analisis Statistik
Data numerik yang Diperoleh dari penelitian yang dinyatakan sebagai nilai rata ± deviasi
standar. Analisis Statistik mana yang berlaku yang dilakukan menggunakan analisis varians
(ANOVA) diikuti oleh Tukey's posting tes dengan bantuan IBM Statistik paket perangkat
lunak ilmuwan sosial (SPSS 20). Perbedaan dianggap signifikan ketika P < 0,05. Setengah-
maksimal penghambatan konsentrasi (IC50) dihitung dari penghambatan % dibandingkan
ekstrak konsentrasi regresi non-linear kurva ekstrak masing-masing.
HASIL
DPPH radikal pemulungan kegiatan dari D. microcarpum ekstrak daun dan standar
Kegiatan scavenging radikal ekstrak secara signifikan lebih tinggi bila dibandingkan dengan
standar asam galat dan rutin dan dekat dengan asam askorbat, menunjukkan bahwa ekstrak
lebih baik radikal pemulung (Tabel 2)
Penghambatan efek D. microcarpum ekstrak daun againstα-amilase dan α-glukosidase
Ekstrak juga dipamerkan tingkat tinggi α-amilase penghambatan aktivitas dengan %
penghambatan (IC50μg/ml) 63.10, 631.01 dan 63.50 untuk CEDM, EAFDM dan AQFDM
masing-masing bila dibandingkan dengan 6,38 untuk acarbose. Demikian pula, tinggi tingkat
aktivitas penghambatan α-glukosidase dengan % penghambatan (IC50μg/ml) 158.50, 398.10
dan 65.50 masing-masing bila dibandingkan dengan 12,60 untuk standar acarbose.

DISKUSI
Sintetis hypoglycemics memiliki segudang efek samping dan juga dibatasi oleh tantangan
lain seperti perkembangan resistensi, sikap pada beberapa populasi pasien untuk
menyebutkan beberapa. Hal ini menyebabkan minat yang besar dalam pengembangan
tanaman diturunkan hypoglycaemics yang berpotensi dapat mengatasi beberapa masalah ini.
Penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak D. microcarpum kaya sumber antioksidan seperti
yang ditunjukkan dalam tabel 1. Korelasi dari koefisien dari kurva kalibrasi asam galat
menunjukkan korelasi yang baik R2 = 0.9762 dengan persamaan y = 0.016 x + 0.0432. Isi
fenolik dalam ekstrak daun berbagai D. microcarpum dinyatakan sebagai mg asam galat
setara (GAE) /g ekstrak (Table1) menunjukkan sejumlah phenolic (2014.22 mg, 933.33 mg
dan 766.81 mg GAE/g ekstrak untuk EAFDM, AQFDM dan CEDM masing-masing). Selain
itu, kandungan total flavonoid di dalam ekstrak menunjukkan jumlah tinggi flavonoid
(132.90 mg, 30.50 mg dan 49.50 mg rutin setara (RE) /g ekstrak untuk EAFDM, AQFDM
dan CEDM masing-masing). Korelasi dari koefisien dari kurva kalibrasi rutin menunjukkan
korelasi yang baik R2 = 0.9681 dengan persamaan y = 0.0098 x + 0.0157. Oleh karena itu,
tingkat tinggi senyawa fenolik yang hadir dalam berbagai ekstrak paling mungkin
bertanggung jawab untuk aktivitas antioksidan yang kuat yang diamati pada Table2 serta
aktivitas penghambatan α-glukosidase dan α-amilase yang diamati dalam tabel 3. Korelasi
antara total fenolik konten, potensi dan enzim aktivitas antioksidan ini telah diamati pada
berbagai tanaman (Apostolidis et al., 2011).

Tabel 1

Meningkatkan jumlah radikal bebas dan spesies oksigen reaktif dalam tubuh tanpa yang
sesuai kuat sistem pertahanan anti-oksidan menyebabkan stres oksidatif dan ini telah
dikaitkan dengan patogenesis penyakit degeneratif seperti diabetes melitus) Halliwell dan
Gutteridge, 1999). Oleh karena itu kemampuan ekstrak untuk mengais DPPH dievaluasi
(Tabel 2). Hasilnya menunjukkan bahwa semua tiga ekstrak scavenged DPPH untuk berbagai
variasi. Ekstrak yang menunjukkan nilai-nilai IC50 baik 8.77 μg/ml, 15.90 μg/ml dan μg/ml
7,20 untuk AQFDM, CEDM dan EAFDM masing-masing dibandingkan dengan standar asam
galat, rutin dan asam askorbat dengan IC50 75.30, 47.40 dan 11.30 μg/ml masing-masing.
DPPH adalah radikal bebas yang stabil dan memiliki karakteristik warna ungu gelap dalam
solusi; antioksidan bereaksi dengan itu sehingga membuat kehilangan khas warna ungu,
menerima proton dari antioksidan, mengarah ke penurunan penyerapan (λmax: 515-517 nm).
Tingkat perubahan warna adalah indikasi kemampuan scavenging ekstrak antioksidan. Jelas,
etil asetat fraksi memiliki DPPH terkuat yang pemulungan kemampuan seperti yang
ditunjukkan oleh nilai IC50 yang sangat rendah. Hal ini diikuti oleh berair dan akhirnya
ekstrak minyak mentah.

Tabel 2

Senyawa fenolik yang biasanya diproduksi dalam tanaman sebagai Metabolit sekunder yang
dikenal untuk memiliki berbagai kegiatan biologis yang termasuk kemampuan untuk
memodulasi metabolisme glukosa oleh beberapa mekanisme termasuk penghambatan
karbohidrat mencerna enzim (Hanhineva et al., 2010). Kemampuan ekstrak untuk
menghambat α-amilase maupun α-glukosidase dengan demikian diuji. Hasil (Tabel 3) yang
diperoleh menunjukkan bahwa ekstrak daun berbagai D. microcarpum memiliki
penghambatan aktivitas signifikan terhadap α-glukosidase dengan IC50 65.50, 158.5 dan
398.1 μg/ml untuk AQFDM, CEDM dan EAFDM masing-masing dibandingkan 12.60μg / ml
untuk Acarbose. Angka-angka ini adalah semua sangat berbeda dibandingkan dengan
Acarbose. Juga, penghambatan aktivitas ekstrak terhadap α-amilase (Tabel 3) menunjukkan
kecenderungan yang sama. Ada perbedaan signifikan secara statistik antara kelompok-
kelompok seperti tes post hoc mengungkapkan bahwa IC50was secara statistik signifikan
lebih rendah untuk ekstrak kasar dan berair dibandingkan dengan ethylacetate ekstrak
sementara itu untuk Acarbose lebih rendah daripada Semua ekstrak. Ada namun tidak
signifikan secara statistik perbedaan antara nilai IC50 untuk berair dan ekstrak minyak
mentah. Inhibisi enzim seperti α-amilase dan α-glukosidase metabolisme karbohidrat
menghambat pemecahan karbohidrat dan penyerapan glukosa berikutnya yang mengarah ke
penurunan kadar glukosa darah postprandial (Hanhineva et al., 2010). Inhibisi enzim-enzim
ini telah terbukti menjadi salah satu pendekatan yang paling efektif untuk mengontrol
hiperglikemia pada penderita diabetes tipe 2 (Kim et al, 2005).

Tabel 3

Data disajikan sebagai berarti ± SD n = 3 dalam setiap grup. Nilai-nilai di kolom yang sama
dengan huruf yang berbeda secara signifikan berbeda (ANOVA diikuti oleh Tukey's post hoc
tes, p < 0,05).

KESIMPULAN
Penghambatan aktivitas α-amilase dan α-glukosidase oleh ekstrak daun D. microcarpum
diamati dalam studi ini bisa menjadi mekanisme kerja yang mendukung penggunaan mereka
untuk pengelolaan hiperglikemia mungkin. Efek penghambatan ini mungkin disebabkan oleh
tindakan mereka melekat polifenol dan flavonoid. Temuan dari studi ini karena itu
membenarkan penggunaan tradisional D. microcarpum sebagai antidiabetes tanaman.
Namun, sangat penting bahwa pekerjaan lebih lanjut dilakukan untuk mengisolasi dan ciri
principle(s) aktif dari ekstrak tumbuhan.