DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA

MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA - CICLO LECTIVO 2017

TRABAJO PRÁCTICO 3

BUFFERS BIOLÓGICOS

OBJETIVOS

 A partir de la ecuación de Henderson-Hasselbach, calcular la concentración de

(H+), (Aceptor de H+) o (Dador de H+).

 Conocer cómo se mantiene el equilibrio ácido-base del metabolismo celular y

corporal.

 Analizar cómo funcionan los buffers biológicos más importantes del organismo.

 Reconocer diferentes patologías asociadas al equilibrio ácido-base corporal.

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SOLUCIONES AMORTIGUADORAS O BUFFERS

Las soluciones de ácidos débiles y sus bases conjugadas se comportan como "soluciones
amortiguadoras" o "buffers" ya que tienden a resistir los cambios de pH. El efecto amortiguador se
produce debido al equilibrio:

AH + H2O A- + H3O+

Si se agrega un ácido, aumentará la [H+], pero el equilibrio se desplazará hacia la izquierda

favoreciendo la formación del ácido, lo cual consumirá los protones añadidos. Si en cambio se
agrega una base, se producirá inicialmente una disminución de la [H+] y esto favorecerá la
disociación del ácido (el equilibrio se desplazará hacia la derecha) que repondrá los H+ gastados.
La eficacia del amortiguador o tampón depende de las [A-] y [AH], del pH del medio y es máxima
cuando este valor es próximo al pKa.

BUFFERS BIOLÓGICOS

El metabolismo celular genera permanentemente agua, calor y metabolitos ácidos. Estos

últimos comprenden:
1.- ácidos volátiles: el dióxido de carbono (CO2) es un importante producto final de la oxidación
de glúcidos, lípidos y aminoácidos. Se lo considera "ácido" en virtud de que reacciona con el agua
para formar ácido carbónico (H2CO3), el cual, por ser un ácido débil, se disocia en bicarbonato
(HCO3-) y H+.

CO2 + H2O H2CO3

H2CO3 + H2O HCO3- + H3O+

Se denomina "volátil" debido a que es un gas y puede ser eliminado por los pulmones.

Como el ácido carbónico tiene vida media muy corta, la ecuación se representa de la siguiente
manera:

CO2 + 2 H2O HCO3- + H3O+

2.- ácidos fijos: ácido sulfúrico (H2SO4) y ácido fosfórico (H3PO4) provenientes principalmente de
las proteínas de cuyo metabolismo procede alrededor del 65% del total; fundamentalmente de la
oxidación de los aminoácidos azufrados para dar H2SO4 y de las fosfoproteínas para dar H3PO4.
Este último también es producto del metabolismo de los ácidos nucleicos y de los fosfolípidos.
Estos ácidos deben ser neutralizados y posteriormente eliminados por los riñones. Por ejemplo,
las dietas de leche y carne generan unos 70 meq de H+ por día y los riñones tienen que excretar a
diario una cantidad semejante para mantener el pH sanguíneo.
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3.- ácidos orgánicos: la oxidación parcial de glúcidos, lípidos y aminoácidos da lugar a la

formación de ácidos orgánicos (lactato, piruvato, acetoacetato, β-hidroxibutirato) siendo todos
ellos ácidos débiles capaces de liberar H+.

Como se ve, la producción potencial de H+ en el organismo es enorme. Con un pH

plasmático normal de 7,4, la [H+] libres es sólo de unos 0,0000398 meq/l. Esta concentración se
debe mantener dentro de límites muy estrechos ya que de ella depende la acidez del medio que
es un determinante fundamental de las funciones celulares. Estos valores se conservan gracias a
la acción de dos mecanismos: los amortiguadores o buffers por un lado y los sistemas respiratorio
y renal como excretores de ácidos por el otro.
Los sistemas buffers pueden dividirse en:
1.- extracelulares: HCO3- / H2CO3
HPO42- / H2PO4-
proteinatos
2. – intracelulares: hemoglobina (HbO2 / HbH)

El sistema HCO3- / H2CO3 constituye el sistema regulador fisiológico más importante del
plasma. El ácido carbónico con dos protones ionizables de constantes pKa1=3,89 y pKa2=10,22,
tendría una capacidad amortiguadora pequeña en los seres humanos si no fuera porque se
deshidrata a CO2 que puede ser espirado. Esta reacción está catalizada por la enzima anhidrasa
carbónica (AC).
AC
CO2 + H2O H2CO3 HCO3- + H+

El sistema acoplado tiene un pKa de 6,1 y es adecuado para mantener el pH sanguíneo

siempre que haya un exceso de bicarbonato con respecto al CO2. Si la relación HCO3-/CO2 =20, el
pH sería:

pH = pKa + log (HCO3-/CO2)

= 6,1 + log 20
= 6,1 + 1,3
= 7,4
Por lo tanto, con esta relación de HCO3-/CO2, este sistema es útil para mantener el pH en
valores cercanos a 7,4.

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Formación de NaCO3H por los riñones, que amortigua la producción ácida diaria e impide la
acumulación del H+ en el organismo.

La particularidad de este sistema buffer radica en que la concentración de cada uno de sus
componentes puede regularse: el CO2 es regulado por el sistema respiratorio y el bicarbonato, por
los riñones. Esta característica hace que el sistema HCO3-/CO2 sea de gran importancia biológica.

El buffer fosfato: es el principal sistema buffer de la orina y de los líquidos intracelulares

debido a que la concentración de fosfatos a este nivel es varias veces mayor que en los líquidos
extracelulares y también porque el pH de los líquidos intracelulares se halla generalmente más
cerca del pKa del buffer fosfato. Además, tiene importancia en los líquidos tubulares de los
riñones por dos motivos: en primer lugar, el fosfato suele concentrarse mucho en los túbulos, con
lo cual aumenta el poder amortiguador del sistema. En segundo lugar, el líquido tubular se vuelve
más ácido que los líquidos extracelulares acercándose al pKa del sistema. En el sistema fosfato el
par conjugado efectivo para mantener el pH fisiológico es:

H2PO4- HPO42- + H+ pKa= 6,8

En el plasma la relación HPO42- / H2PO4- es 4/1.

En la orina a pH 5,4 predomina la forma ácido conjugado.

Las proteínas pueden funcionar como uno de los sistemas buffers más importantes de la
sangre y los tejidos y su capacidad amortiguadora procede de los grupos disociables que poseen
los aminoácidos que las forman. Sin embargo, el pKa de los grupos carboxilos de los aminoácidos
es de alrededor de 2 y el pKa de los grupos amino es de alrededor de 9,5, lo cual se aleja del pH
de la mayoría de los líquidos biológicos.

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Debido a que el pKa del grupo imidazol tiene un valor de 6, la histidina es el único
aminoácido con capacidad reguladora importante del pH fisiológico. La hemoglobina es una
proteína buffer efectiva debido a su alta concentración y a sus residuos histidina. Contribuye
también a la efectividad el hecho de que la desoxihemoglobina tiene grupos imidazólicos con un
pKa ligeramente más alto que la oxihemoglobina. El CO2 producido en los tejidos entra al glóbulo
rojo en donde es hidratado en una reacción catalizada por la anhidrasa carbónica. El ácido
carbónico resultante se disocia rápidamente en bicarbonato y H+. Los H+ son aceptados por la
hemoglobina cuyo poder buffer evita que disminuya el pH.

ALTERACIONES ACIDO-BASE

Muchas patologías están asociadas con alteraciones del equilibrio ácido-base. Teniendo
en cuenta al sistema bicarbonato/CO2 como principal sistema amortiguador del pH, el estudio del
estado ácido-base se basa en el análisis de los componentes de este sistema. Según los valores
de pH del plasma y el componente del sistema buffer originalmente afectado, las alteraciones
ácido-base se clasifican clásicamente en los siguientes grupos: acidosis respiratoria, acidosis
metabólica, alcalosis respiratoria y alcalosis metabólica. Las condiciones clínicas caracterizadas
como metabólicas se relacionan con las alteraciones en la concentración de HCO3- y las llamadas
respiratorias se relacionan con perturbaciones de la presión parcial de CO2 (pCO2).
Ante una alteración ácido-base, el organismo pone en marcha mecanismos
compensadores. Por ejemplo, en una acidosis metabólica se estimula el centro respiratorio lo cual
facilita la eliminación del CO2. En la alcalosis metabólica, la respuesta es inversa y tiende a
retener el CO2. Cuando el desequilibrio ácido-base tiene origen respiratorio, el riñón es el que
produce la respuesta compensadora. Esta respuesta no es instantánea y necesita varios días. En
una acidosis respiratoria aumenta la eliminación de protones por orina y la reabsorción de
bicarbonato. En una alcalosis respiratoria disminuye la excreción de protones y aumenta la

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eliminación de bicarbonato. Las causas de las alteraciones del equilibrio ácido-base pueden
superponerse originando condiciones mixtas que complican su identificación.

Evaluación del estado ácido-base

Es importante para el diagnóstico médico evaluar el estado ácido-base del paciente e

identificar el origen de las alteraciones observadas.

Acidemia: pH sanguíneo < 7,35

Alcalemia: pH sanguíneo > 7,45

Acidosis y alcalosis: estados patológicos que pueden llegar a la acidemia o alcalemia

respectivamente. En el siguiente cuadro se muestran los parámetros que caracterizan una
alteración ácido-base y las respuestas compensatorias de los sistemas renal y respiratorio para
corregir el desbalance.

Una vez identificado el trastorno (acidemia-alcalemia), es necesario identificar la alteración

que lo justifique. Por ejemplo, una acidemia puede ser producida por un aumento en los niveles de
pCO2 o una disminución en la concentración de HCO3- o por ambas alteraciones al mismo tiempo.
De la misma manera, una alcalemia, puede ser producida por una disminución en los niveles de
pCO2 o por un aumento en la concentración de HCO3- o por ambas alteraciones al mismo tiempo.
Para mantener la homeostasis, el cuerpo humano genera respuestas dirigidas a mantener el pH.
De esta manera, y a modo de ejemplo, en una acidosis metabólica la respuesta sería la
disminución de la pCO2, mediante la hiperventilación. Además, muchas veces los trastornos
ácido-base, no son únicos. Los pacientes pueden llegar a tener alteraciones asociadas, pudiendo
coexistir dos o más trastornos a la vez.
Teniendo en cuenta la ecuación de Henderson-Hasselbach, es mucho más fácil entender
las respuestas ante los distintos trastornos metabólicos:
pH = pKa + log BASE
ÁCIDO

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Entendiendo la ecuación, queda claro que, ante una disminución en los niveles de la base,
que en este caso sería HCO3-, la respuesta del organismo “para mantener el cociente” y así
mantener el pH, genera una disminución en los niveles del ácido, que en este caso sería la pCO2.

Acidosis metabólica
La acidosis metabólica se puede detectar por una disminución del bicarbonato plasmático.
Las causas de la pérdida de bicarbonato pueden ser:
1.- Una mayor producción de ácidos orgánicos que exceda la velocidad de eliminación. El
bicarbonato se pierde cuando se combina con los H+. Por ejemplo, la producción de cuerpos
cetónicos en la cetoacidosis diabética y la producción de ácido láctico en la acidosis láctica.
2.- Una reducción en la excreción de H+ como se observa en algunas alteraciones renales.
3.- Una excesiva pérdida de bicarbonato debido a una mayor excreción renal (disminución de la
reabsorción renal) o a una pérdida del fluido duodenal (diarrea).
Cuando se produce alguna de estas alteraciones, la relación bicarbonato/CO2 disminuye.
El descenso del pH estimula la hiperventilación como un mecanismo compensatorio a nivel
respiratorio que resulta en una mayor eliminación de CO2. Los riñones responden aumentando la
excreción de protones en forma de amonio y preservando la base con un aumento de la
reabsorción de bicarbonato.

Funcionamiento del sistema amortiguador bicarbonato-ácido carbónico ante una sobrecarga de H+.
La reacción se desvía hacia la izquierda, con gran producción de CO2 y consumo de HCO3-.

Acidosis respiratoria
Cualquier alteración que disminuya la eliminación del CO2 por los pulmones produce un
aumento de la pCO2 y una acidosis respiratoria. Las causas pueden ser factores que depriman el
centro respiratorio a nivel del sistema nervioso central (traumas, drogas o infecciones) o factores
que afecten al aparato respiratorio como por ejemplo una obstrucción de las vías aéreas. El

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aumento en la pC02 lleva a un aumento del ácido carbónico que se disocia liberando protones. La
compensación de la acidosis respiratoria se produce inmediatamente a través de otros sistemas
buffer, principalmente el sistema de la hemoglobina y otras proteínas. Los riñones responden, con
mayor tiempo, de la misma manera que en una acidosis metabólica aumentando la eliminación de
amonio y la reabsorción de bicarbonato.

Alcalosis metabólica
La alcalosis se produce cuando se agrega un exceso de base al sistema o se pierden
fluidos ácidos (vómitos gastrointestinales). Ante un déficit de sodio o de potasio, la reabsorción de
bicarbonato y la excreción de protones están aumentadas lo que también puede conducir a una
alcalosis. En la alcalosis metabólica el paciente hipoventila. Si el aumento del pH es importante,
aumenta la actividad neuromuscular y se produce tetania. La causa es una disminución de la
concentración de calcio libre debido a un aumento de la unión del calcio a proteínas u otros
aniones.

Alcalosis respiratoria
En la alcalosis respiratoria se produce una disminución de la pCO2 como resultado de un
aumento en la frecuencia de la respiración (hiperventilación). La excesiva pérdida de CO2
desplaza el sistema bicarbonato hacia la formación de ácido carbónico con la consiguiente
disminución de la concentración de protones y el aumento del pH. También se produce una
disminución de bicarbonato, lo cual atenúa el aumento del pH. Los mecanismos compensatorios
actúan a dos niveles. En primer lugar, otros sistemas buffer proveen protones y, en segundo lugar,
el riñón disminuye la reabsorción de bicarbonato.

Resumen de los cambios ocurridos en los distintos casos de alcalosis y acidosis y respuesta que se
genera como mecanismo compensatorio.

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¿Por qué es importante entender las alteraciones del estado ácido base?
Como veremos más adelante, tanto las enzimas como los canales iónicos funcionan a un
pH óptimo. Los canales iónicos son fundamentales para mantener la funcionalidad de los órganos,
entre otras cosas, generando y manteniendo potenciales de membrana, así como despolarizando
células. Las alteraciones del pH generan que estas proteínas (canales y enzimas) no funcionen
adecuadamente, alterando el estado neurológico del paciente, generando arritmias y alteraciones
hemodinámicas importantes que no responden al tratamiento con drogas y que pueden llevar a la
muerte. En estos casos es fundamental y urgente corregir el estado ácido-base hasta niveles
fisiológicos y así poder continuar con la terapéutica correspondiente.
Saber diagnosticar las alteraciones del estado ácido-base y reconocer su importancia para
la terapéutica, contribuye a instaurar el tratamiento adecuado.
Por otro lado, los trastornos ácido-base expresan una patología subyacente. Nunca estas
alteraciones son patologías primarias. Por lo tanto, un correcto análisis de estos trastornos,
muchas veces acerca al diagnóstico de alguna patología primaria o de la severidad de ésta. Un
ejemplo claro es la acidosis metabólica de la insuficiencia renal: El diagnóstico de insuficiencia
renal aguda se realiza mediante los niveles séricos de creatinina y diuresis. La acidosis
metabólica generada por la insuficiencia renal no sirve para el diagnóstico, pero si para evaluar la
severidad de la patología y la necesidad de realizar hemodiálisis aguda.

Distintas causas de alcalosis y acidosis metabólica y respiratoria

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EJERCITACIÓN BUFFERS

1) Considerando que el ácido acético CH3-COOH tiene un pKa = 4,76 y que el dihidrógeno
fosfato H2PO4 tiene un pKa = 6,86, responda las siguientes preguntas.
a) ¿Cuál de los dos es el ácido más fuerte?
b) Si se dispone de soluciones de acético y de dihidrógeno fosfato de igual concentración,
¿cuál tendrá mayor pH?
c) Si se dispone de soluciones de ácido acético y de dihidrógeno fosfato de igual pH, ¿cuál
de ellas tiene mayor concentración?
d) ¿Qué especie química predomina en una solución de ácido acético de pH = 3? ¿Y a pH =
5,5 y a pH = 9?
e) ¿Qué pH tendrá una solución de ácido acético en la que hay igual concentración de anión
acetato y de acético?
f) ¿Qué especie química predomina en una solución de dihidrógeno fosfato de pH = 3? ¿Y a
pH = 5,5 y a pH = 9?
g) ¿Una solución de ácido acético puede ser un buffer de utilidad para regular el pH en el
rango fisiológico? ¿Y una solución de dihidrógeno fosfato? Justifique.

EJERCITACIÓN DE SOLUCIONES Y pH EN LA PRÀCTICA MÈDICA

2) La urea es el producto final del metabolismo de las proteínas en seres humanos. Con una
excreción diaria de 20 a 35 gramos, es la sustancia que los riñones eliminan en mayor
cantidad. Las concentraciones de urea y creatinina en orina de 24 h se determinan para
evaluar la función renal. Se desea calcular la eliminación urinaria diaria de urea (PM 60
g/mol) en una muestra de un paciente. El volumen de orina recolectado (24 hs) fue de 1250
ml y la concentración de urea arrojó un valor de 0,42 M. ¿Cuántos g urea eliminó el paciente
en 24 hs? (Rta: 31,5g)

3) Se prepara una solución conteniendo KCl (PM 149 g/mol) y glucosa (PM 180 g/mol), la cual
contiene en total 0,9 osmoles de soluto en 2,25 l de solución.
a) ¿Cuál es la Osmolaridad de la solución resultante?
b) Si en el volumen total de solución hay 0,2 osmoles de KCl, ¿qué cantidad (grs) de sal
recibe un paciente cuando se le suministra 1 litro de esa solución?
c) ¿y cuando recibe el volumen total (2,25 l) de la solución preparada?
d) ¿cuántos gramos de glucosa hay en 2,25 l de solución?
(Rta: a) 0,4 Osm; b) 6,62 gr; c) 15 gr; d)126 gr)

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4) Un paciente de 18 meses se presenta en la guardia con signos y síntomas propios de una
deshidratación moderada. El médico de guardia determina que se deben reponer 2,2 l de
líquido, 88 meq de Na+ y 44 meq de K+. El Na+ se administra como NaCl y es provisto como
solución 3,4 N. El K+ se administra como KCl y es provisto como solución 1 M. Calcular el
volumen de las soluciones comerciales de NaCl y KCl que se le deben suministrar al
paciente. (Rta: 26 ml NaCl 3,4 N y 44 ml KCl 1 M, en 2,2 l de solución de dextrosa 5%.). La
solución de re-hidratación se prepara en dextrosa 5%. Discuta por qué esta solución no se
reemplaza por agua.

5) Respecto de las alteraciones del equilibrio ácido base en el ser humano y sus mecanismos
compensatorios, complete en siguiente esquema, considerando el tipo de alteración
correspondiente (metabólica o respiratoria), valores de pH (alto o bajo) y pCO2 (alta o baja).
De un ejemplo de cuadro clínico en cada caso

ACIDOSIS: ALCALOSIS: ACIDOSIS: ALCALOSIS:

_______________ _______________ _______________ _______________

pH: _________ pH: _________ pH: _________ pH: _________

pCO2: _________ pCO2: _________ pCO2: _________ pCO2: _________

Principal compensación a nivel Principal compensación a nivel

RENAL RESPIRATORIO

6) Los valores normales de los parámetros que se determinan en la evaluación del estado ácido
base de un individuo son:
pH 7,35 - 7,45
pO2 38 - 42 mmHg
pCO2 32 - 39 mmHg
HCO3- 23 - 27 mM
CO2 = 1,2 mM
Un paciente con acidosis metabólica presenta valores de pH = 7,03 y [CO2] = 1,10 mM. Se
desea saber:
a) La concentración de protones en sangre (Rta: 9,3x10-8 M)
b) La concentración de HCO3- en sangre (Rta: 9,4 mM)
c) ¿Cuánto de la concentración normal de HCO3- se ha consumido? (Rta: 14,6 N)

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7) La señorita AM ingresa al hospital con contusión torácica. Los análisis de sangre arterial
arrojan los siguientes valores:
pH = 7,2
pO2 = 48 mmHg
pCO2 = 75 mmHg
[HCO 3 -] = 29 mmol/l
¿Qué indican estos resultados?

8) Un niño de 4 años llega a la guardia de un hospital presentando mareos, debilidad y vómitos

reiterados como consecuencia de una intoxicación alimentaria.
Los datos de laboratorio indican: pCO2 = 45 mmHg
HCO3-= 40 mM
Na+ = 140 meq/l
Glucemia = 3,3 mM
El tratamiento consiste en el tratamiento con antibióticos y rehidratación oral con solución
fisiológica (NaCl 0,9 %) y D-glucosa.
Valores normales:
pH 7,35 - 7,45
pCO2 32 - 39 mmHg
HCO3- 23 - 27 m
Na+ 135 - 150 meq/l
Glucosa 70 - 110 mg% PM NaCl 58,5
pKa HCO3- / H2CO3 = 6,1
PM Glucosa= 180

[CO2] (en mM) = 0,03 pCO2 (en mmHg)

Teniendo en cuenta los datos anteriores y considerando el momento de ingreso del paciente
al hospital, indique:
a) El pH de la sangre (Rta: 7,5)
b) ¿Cuál es el estado ácido/base del paciente y el origen de la alteración ácido/base que
presenta? (Rta: alcalosis metabólica)
c) ¿En qué sentido se encuentra desplazado el sistema bicarbonato/carbónico en el paciente en
estudio? (Rta: hacia la formación de bicarbonato)
d) El estado de ventilación que presenta el paciente. (Rta: Hipoventilación)
e) La participación del riñón para compensar el estado ácido/base del paciente. (Rta: Elimina
bicarbonato)
f) El estado glucémico del paciente. (Rta: Hipoglucemia)

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g) ¿Es posible tratar al paciente con solución de L-glucosa, en lugar de administrarle D-glucosa?
Justifique.

9) Se dispone de un antiinflamatorio que es electrolito débil (pKa = 9,5). Se busca preparar la

mejor formulación farmacéutica para esa droga de manera de obtener una rápida absorción.
Discuta la conveniencia de preparar comprimidos, teniendo en cuenta que el pH del jugo
gástrico es 1,5.

10) Teniendo en cuenta que sólo las formas no disociadas de los electrolitos débiles difunden a
través de las membranas, compare el grado de absorción de la aspirina (ácido acetil
salicílico, pKa 3,5) administrada por vía oral (comprimidos) y por vía anal (supositorios)
considerando que en el estómago el pH es 1,5 mientras que en el intestino el medio tiene un
pH = 7,4.

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