Alternativa para la detección de Mycobacteria en sustratos celulares.

Mycoplasma es un microorganismo singular, debido a que posee características

metabólicas, moleculares y morfológicas que dificultan su identificación (Rivera-
Tapia, 2001). En el presente trabajo se exploran las posibles técnicas que pudiesen
ser aplicables como metodologías alternativas para la identificación de dicho agente
patógeno. Actualmente en la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos
(FEUM) en su undécima edición presenta como método de identificación la
inoculación de los bancos celular maestro y de trabajo, así como, de los cultivos
celulares primarios, diploides, células madre y líneas celulares murinas, la
inoculación de la muestra filtrada por membrana en medios de cultivo selectivos
para micobacterias como lo son Löwenstein-Jensen base agar y Middlebrook 7H10
base agar. De igual manera en un medio líquido.

Los medios anteriormente nombrados son un método lento en la identificación de

micobacterias, ya que su crecimiento se observa después de la primera semana
hasta las 8 semanas para el caso de agar (BritaniaLab, s.f.). Mientras que para
medio líquido la FEUM establece que se incube hasta por 56 días. Lo cual implica
un mayor tiempo de espera para poder determinar si existe la presencia o no de
este agente patógeno.

Por ello se sugiere el siguiente método para la identificación en mucho menor tiempo
de este tipo de microorganismos. Siendo la técnica de reacción en cadena de la
polimerasa cuantitativa (qPCR), la cual ha sido descrita como específica, rápido y
específico (Housman, 2016), por lo tanto, para su diagnóstico positivo se requieren
de menos células bacterianas además de que estás no necesitan ser viables (Sales,
2014).

Esta técnica consiste en (Cottrell & Waidner , 2008):

1) Preparación de un estándar de ADN plasmídico,

2) Eliminación de RNA de la muestra de ácido nucleico molde,

Por: Enrique Ademir Pineda Amaro

3) Medición de la concentración del ADN ambiental,

4) El ensayo de qPCR del estándar y la muestra

5) Cálculo de la eficiencia de amplificación qPCR y

6) Concentración del gen diana utilizando la curva estándar.

Referencias
BritaniaLab. (s.f.). Obtenido de
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/lowesteinjensen.htm

Cottrell, M., & Waidner , L. (Junio de 2008). University Of Delaware. Obtenido de

https://www.google.com.mx/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=3&cad=rja&ua
ct=8&ved=0ahUKEwjbzoKEnv_OAhWBbCYKHaTgCDEQFgg4MAI&url=https%3A%2F%2Fww
w.ceoe.udel.edu%2FFile%2520Library%2FOur%2520People%2FProfiles%2Fkirchman%2Fq
PCR-Protocol-ABI.doc&usg=AFQjCN

Housman, G. (2016). Validation of qPCR Methods for the Detection of Mycobacterium in New World
Animal Reservoirs. PLoS Neglected Tropical Diseases, 11. Obtenido de
http://doi.org/10.1371/journal.pntd.0004198

Rivera-Tapia, J. A. (2001). Micoplasmas y su importancia clínica. Revista Biomédica, 12, 262-271.

Obtenido de http://www.revbiomed.uady.mx/pdf/rb011247.pdf

Sales, M. L. (2014). Validation of a real-time PCR assay for the molecular identification of
Mycobacterium tuberculosis. Brazilian Journal of Microbiology, 1363-1369.

Por: Enrique Ademir Pineda Amaro