Anda di halaman 1dari 10

PEMERIKSAAN MICROBIOLOGI PRODUK NONSTERILE: UJI ENUMERASI MICROBIAL

PENGANTAR

Tes yang dijelaskan selanjutnya akan memungkinkan penghitungan kuantitatif bakteri mesofilik dan
jamur yang dapat tumbuh dalam kondisi aerobik.

Tes dirancang terutama untuk menentukan apakah suatu zat atau persiapan sesuai dengan
spesifikasi yang ditetapkan untuk kualitas mikrobiologi. Bila digunakan untuk tujuan tersebut, ikuti
petunjuk yang diberikan di bawah ini, termasuk jumlah sampel yang akan diambil, dan tafsirkan
hasilnya seperti yang dinyatakan di bawah ini.

Metode ini tidak berlaku untuk produk yang mengandung mikroorganisme yang layak sebagai bahan
aktif.

Prosedur mikrobiologi alternatif, termasuk metode otomatis, dapat digunakan, asalkan kesetaraan
dengan metode Pharmacopeial telah ditunjukkan.

PROSEDUR UMUM

Lakukan penentuan berdasarkan kondisi yang dirancang untuk menghindari kontaminasi mikroba
ekstrinsik pada produk yang akan diperiksa. Tindakan pencegahan yang dilakukan untuk
menghindari kontaminasi harus sedemikian rupa sehingga tidak mempengaruhi mikroorganisme apa
pun yang akan dinyatakan dalam pengujian.

Jika produk yang akan diperiksa memiliki aktivitas antimikroba, hal ini, sejauh mungkin, dihapus atau
dinetralkan. Jika inaktivator digunakan untuk tujuan ini, keampuhannya dan tidak adanya toksisitas
mikroorganisme harus ditunjukkan.

Jika zat aktif permukaan digunakan untuk preparasi sampel, tidak adanya toksisitas mikroorganisme
dan kompatibilitasnya dengan inaktivator yang digunakan harus ditunjukkan.

METODE ENUMERASI

Gunakan metode Filtrasi Membran atau salah satu Metode Jumlah Plate-Count, sesuai petunjuk.
Metode Most-Probable-Number (MPN) umumnya metode yang paling tidak akurat untuk
menghitung mikroba; Namun, untuk kelompok produk tertentu dengan bioburden sangat rendah, ini
mungkin metode yang paling tepat.

Pilihan metode didasarkan pada faktor-faktor seperti sifat produk dan batas mikroorganisme yang
dipersyaratkan. Metode yang dipilih harus memungkinkan pengujian dengan ukuran sampel yang
cukup untuk menilai kepatuhan terhadap spesifikasi. Kesesuaian metode yang dipilih harus
ditetapkan.

PERTUMBUHAN PROMOSI PERTUMBUHAN DAN KESESUAIAN METODE COUNTING


Pertimbangan Umum

Kemampuan pengujian untuk mendeteksi mikroorganisme dengan adanya produk yang akan diuji
harus ditetapkan.

Kesesuaian harus dikonfirmasikan jika terjadi perubahan dalam kinerja pengujian atau perubahan
pada produk yang dapat mempengaruhi hasil pengujian, diperkenalkan.

Persiapan Uji Strain

Gunakan suspensi stabil terstruktur dari strain uji atau siapkan seperti yang dinyatakan di bawah ini.
Teknik pemeliharaan budaya benih (seed-lot system) digunakan agar mikroorganisme yang layak
digunakan untuk inokulasi tidak lebih dari 5 bagian dikeluarkan dari biji induk asli. Tumbuhkan
masing-masing strain uji bakteri dan jamur secara terpisah seperti yang dijelaskan pada Tabel 1.

Tabel 1. Persiapan dan Penggunaan Uji Mikroorganisme

Mikroorganisme Persiapan Uji Growth Kesesuaian


Ketegangan Promotion Metode
Menghitung
di Hadirnya
Produk
Total Aerobik Jumlah Ragi Total Aerobik Jumlah Ragi
Jumlah dan Cetakan Jumlah dan Cetakan
Mikroba Mikroba
Staphylococcus Kedelai Kacang
aureus seperti Kacang Kedelai Digest Kedelai Digest
ATCC 6538, Kedelai Agar dan Agar / MPN
NCIMB 9518, Digest Agar Kedelai Kaldu Kedelai
atau Kedelai
CIP 4.83, atau Kedelai Digest Kedelai
Kedelai
NBRC 13276 Digest Broth Kaldu ≤100 cfu
300-350 ≤100 cfu 30-35
18-24 jam 300-350 ≤ 3 hari
3 hari

Pseudomonas Kacang kedelai Kacang


aeruginosa Kedelai Digest Kedelai Digest Kedelai Digest
seperti ATCC Agar atau Agar dan Agar / MPN
9027, NCIMB Kedelai Kedelai Kaldu Kedelai
8626, CIP Kedelai Digest Kedelai Digest Kedelai
82.118, atau Broth Kaldu ≤100 cfu
NBRC 13275 300_350 100 cfu 300_350
18-24 jam 300_350 ≤3 hari
3 hari
Bacillus subtilis Kacang Soybean– Kacang
seperti ATCC Kedelai Digest Casein Digest Kedelai Digest
6633, NCIMB Agar atau Agar and Agar / MPN
8054, CIP 52.62, Kedelai Soybean– Kaldu Kedelai
atau NBRC 3134 Kedelai Digest Casein Digest Kedelai
Broth Broth 100 cfu
30-35 100 cfu 30-35
18-24 jam 3 hari
30 –35
3 days
Candida Sabouraud Kacang Sabouraud Kacang Sabouraud
albicans seperti Dextrose Agar Kedelai Digest Dextrose Kedelai Digest Dextrose
ATCC 10231, atau Agar Agar Agar Agar
NCPF 3179, IP Sabouraud ≤100 cfu ≤100 cfu ≤ 100 cfu ≤100 cfu
48.72, atau Dextrose 30-35 20-25 30-35 20-25
NBRC 1594 Broth ≤ 5 hari ≤5 hari ≤ 5 hari ≤ 5 hari
20-25 MPN: tidak
2-3 hari berlaku
Aspergillus Sabouraud Kacang Sabouraud Kacang Sabouraud
niger seperti Dextrose Agar Kedelai Digest Dextrose Kedelai Digest Dextrose
ATCC 16404, atau Potato- Agar Agar Agar Agar
IMI 149007, IP Dextrose Agar ≤ 100 cfu ≤ 100 cfu ≤100 cfu ≤100 cfu
1431.83, atau 20-25 30-35 20-25 30-35 20-25
NBRC 9455 5-7 hari, atau ≤ 5 hari ≤5 hari ≤5 hari ≤5 hari
sampai MPN: tidak
sporulasi yang berlaku
baik tercapai

Gunakan Solusi Sodium Chloride-Peptone Buffered pH 7.0 atau Fosphate Buffer Solution pH
7.2 untuk membuat suspensi uji; untuk menangguhkan spora A. niger, 0,05% polisorbat 80 dapat
ditambahkan ke buffer. Gunakan suspensi dalam waktu 2 jam, atau dalam 24 jam jika disimpan
antara 2 dan 8. Sebagai alternatif untuk mempersiapkan dan kemudian menipiskan suspensi segar
sel vegetatif A. niger atau B. subtilis, suspensi spora yang stabil disiapkan dan kemudian menjadi
Volume suspensi spora yang sesuai digunakan untuk inokulasi uji. Suspensi spora stabil dapat
dipertahankan pada 2 sampai 8 untuk jangka waktu yang divalidasi.

Kontrol negatif

Untuk memverifikasi kondisi pengujian, kontrol negatif dilakukan dengan menggunakan pengencer
yang dipilih sebagai pengganti sediaan uji. Tidak boleh ada pertumbuhan mikroorganisme.

Pertumbuhan Promosi Media

Uji setiap batch media siap pakai dan setiap batch medium disiapkan dari media dehidrasi atau dari
bahan yang dijelaskan.

Inokulasi bagian / lempeng Kaldu Kedelai Kedelai dan Kincir Kedelai dengan jumlah kecil (tidak lebih
dari 100 cfu) mikroorganisme yang ditunjukkan pada Tabel 1, dengan menggunakan porsi / media
terpisah untuk masing-masing. Inokulasi piring Sabreaud Dextrose Agar dengan sejumlah kecil (tidak
lebih dari 100 cfu) mikroorganisme yang ditunjukkan pada Tabel 1, dengan menggunakan pelat
terpisah untuk masing-masing medium. Inkubasi sesuai dengan kondisi yang dijelaskan pada Tabel 1

Untuk media padat, pertumbuhan yang diperoleh tidak boleh berbeda dengan faktor yang lebih
besar dari 2 dari nilai yang dihitung untuk inokulum standar. Untuk inokulum yang baru disiapkan,
pertumbuhan mikroorganisme sebanding dengan yang sebelumnya diperoleh dengan batch medium
yang telah diuji sebelumnya dan yang disetujui. Media cair cocok jika pertumbuhan mikroorganisme
yang terlihat jelas sebanding dengan yang sebelumnya diperoleh dengan batch medium yang telah
diuji sebelumnya dan yang disetujui.

Kesesuaian Metode Penghitungan dalam Keberadaan Produk

persiapan sampel

Metode untuk preparasi sampel tergantung pada karakteristik fisik produk yang akan diuji. Jika tidak
satu pun prosedur yang diuraikan di bawah ini dapat ditunjukkan untuk memuaskan, prosedur
alternatif yang sesuai harus dikembangkan.

Produk Larut Air - Larutkan atau encerkan (biasanya diencerkan 1 dalam 10 disiapkan) produk yang
akan diperiksa dalam Larutan Sodium Chloride-Peptone yang Disangga pH 7.0, Larutan Penyangga
Fosfat pH 7.2, atau Kaldu Kedelai Kedelai. Jika perlu, sesuaikan dengan pH 6 sampai 8. Pengenceran
lebih lanjut, jika perlu, disiapkan dengan pengencer yang sama.

Produk Nonfatty Tidak larut dalam Air - Suspend produk yang akan diperiksa (biasanya pengenceran
1 dalam 10 disiapkan) pada Larutan Sodium Chloride-Peptone yang Disangga pH 7.0, Larutan
Penyangga Fosfat pH 7.2, atau Kaldu Digest Kedelai Kedelai. Bahan aktif permukaan seperti 1 g per L
polisorbat 80 dapat ditambahkan untuk membantu penangguhan zat yang tidak dapat dibasahi
dengan baik. Jika perlu, sesuaikan dengan pH 6 sampai 8. Pengenceran lebih lanjut, jika perlu,
disiapkan dengan pengencer yang sama.

Produk Lemak - Larutkan dalam isopropil miristat yang disterilisasi dengan penyaringan, atau
campurkan produk yang akan diperiksa dengan jumlah minimum polisorbat steril yang
direkomendasikan 80 atau pereaksi aktif permukaan bebas noninhibit yang dipanaskan, jika perlu,
tidak lebih dari 40 atau, dalam kasus luar biasa. , untuk tidak lebih dari 45. Campur dengan hati-hati
dan jika perlu pertahankan suhu di bak air. Tambahkan jumlah yang cukup dari pengencer terpilih
yang sudah dipakan untuk membuat 1 dari 10 pengenceran produk asli. Campur dengan hati-hati,
sambil menjaga suhu untuk waktu terpendek yang diperlukan untuk pembentukan emulsi.
Pengenceran 10 kali lipat lebih lanjut dapat dibuat dengan menggunakan pengencer yang dipilih
yang mengandung konsentrasi polisorbat steril yang sesuai 80 atau pereaksi aktif permukaan bebas
noninhibitory lainnya.

Cairan atau Padat dalam Form Aerosol - Aseptik mentransfer produk ke dalam peralatan penyaring
membran atau wadah steril untuk pengambilan sampel lebih lanjut. Gunakan isi total atau jumlah
dosis meteran yang ditetapkan dari masing-masing wadah yang diuji.

Patch Transdermal - Lepaskan penutup pelindung ("liner pelepasan") dari tambalan transdermal dan
letakkan di bawahnya, di atas kaca steril atau nampan plastik. Tutupi permukaan perekat dengan
bahan berpori steril yang sesuai (mis., Kasa steril) untuk mencegah agar tambalan menempel, dan
pindahkan tambalan ke volume yang sesuai dari pengencer pilihan yang mengandung inaktivator
seperti polisorbat 80 dan / atau lesitin. Kocok persiapan dengan kencang selama minimal 30 menit.

inokulasi dan pengenceran


Tambahkan ke sampel yang disiapkan seperti yang diarahkan di atas dan ke kontrol (tanpa bahan uji
yang disertakan) sejumlah kecil suspensi mikroba untuk mendapatkan inokulum tidak lebih dari dari
100 cfu. Volume suspensi inokulum tidak boleh melebihi 1% volume produk encer.

Untuk menunjukkan pemulihan mikroba yang dapat diterima dari produk, faktor pengenceran
serendah mungkin dari sampel yang disiapkan harus digunakan untuk pengujian. Bila hal ini tidak
memungkinkan karena aktivitas antimikroba atau kelarutan yang buruk, protokol yang sesuai harus
dikembangkan. Jika penghambatan pertumbuhan oleh sampel tidak dapat dihindari, alikuot suspensi
mikroba dapat ditambahkan setelah netralisasi, pengenceran, atau penyaringan.

netralisasi / penghilangan aktivitas antimikroba

Jumlah mikroorganisme yang diperoleh dari sampel yang telah disiapkan diencerkan seperti yang
dijelaskan dalam Inokulasi dan Pengenceran dan diinkubasi mengikuti prosedur yang dijelaskan
dalam Pemulihan Mikroorganisme dalam Keberadaan Produk, dibandingkan dengan jumlah
mikroorganisme yang diperoleh dari preparasi kontrol.

Jika pertumbuhan dihambat (pengurangan dengan faktor lebih besar dari 2), maka modifikasi
prosedur untuk uji enumerasi tertentu untuk memastikan keabsahan hasilnya. Modifikasi prosedur
dapat mencakup, misalnya

1. Peningkatan volume pengencer atau media kultur;


2. Penggabungan agen penetral tertentu atau umum ke dalam pengencer;
3. Filtrasi membran; atau
4. Kombinasi dari tindakan di atas

Agen Penetralisir - Agen penetralisir dapat digunakan untuk menetralkan aktivitas agen antimikroba
(lihat Tabel 2). Mereka dapat ditambahkan ke pengencer yang dipilih atau media yang lebih disukai
sebelum sterilisasi. Jika digunakan, khasiatnya dan tidak adanya toksisitas mikroorganisme harus
ditunjukkan dengan melakukan blank dengan penetralisir dan tanpa produk.

Tabel 2. Agen / Metode Penetralan Umum untuk

Zat yang mengganggu

Substansi pengganggu Agen / Metode Penetapan Potensi


Glutaraldehida, lincah Sodium hydrogen sulfite (Sodium bisulfite)
Phenol, alcohol, aldehid, sorbat Dilusi
Aldehid Glycine
Senyawa amonium kuartener (QACs), Lecithin
parahydroxybenzoates (paraben), bis-
biguanides
QAC, yodium, paraben Polysorbate
Mercurial Polysorbate
Mercurials, halogens, aldehida Thiosulfate
EDTA (edetate) Mg atau ion ca
Jika tidak ada metode penetralisir yang sesuai, dapat diasumsikan bahwa kegagalan untuk
mengisolasi inokulasi organisme disebabkan oleh aktivitas mikrobisida produk. Informasi ini
berfungsi untuk menunjukkan bahwa artikel tersebut tidak mungkin terkontaminasi dengan spesies
mikroorganisme yang diberikan. Namun, ada kemungkinan produk tersebut hanya menghambat
beberapa mikroorganisme yang ditentukan di sini, namun tidak menghambat yang lain yang tidak
termasuk di antara strain uji atau yang tidak mewakili keduanya. Kemudian, lakukan pengujian
dengan faktor pengenceran tertinggi yang kompatibel dengan pertumbuhan mikroba dan kriteria
penerimaan khusus.

pemulihan mikroorganisme dengan adanya produk

Untuk masing-masing mikroorganisme yang tercantum, pengujian terpisah dilakukan. Hanya


mikroorganisme dari regangan uji tambahan yang dihitung.

Filtrasi Membran - Gunakan filter membran yang memiliki ukuran pori nominal tidak lebih dari 0,45
μm. Jenis bahan penyaring dipilih sedemikian rupa sehingga efisiensi penahanan bakteri tidak
terpengaruh oleh komponen sampel yang akan diselidiki. Untuk masing-masing mikroorganisme
yang tercantum, satu saringan membran digunakan.

Transfer jumlah yang sesuai dari sampel yang disiapkan seperti yang dijelaskan dalam Persiapan
Sampel, Inokulasi dan Pengenceran, dan Netralisasi / Penghapusan Aktivitas Antimikroba (sebaiknya
mewakili 1 g produk, atau kurang jika sejumlah besar cfu diharapkan) ke saringan membran , segera
saring, dan bilas filter membran dengan volume pengencer yang sesuai.

Untuk penentuan jumlah mikroba aerobik total (TAMC), transfer saringan membran ke permukaan
Digest Agar Kedelai. Untuk penentuan jumlah ragi gabungan dan jumlah cetakan (TYMC), transfer
membran ke permukaan Sabreaud Dextrose Agar. Inkubasi lempeng seperti ditunjukkan pada Tabel
1. Lakukan penghitungan.

Metode Penghitungan Piring - Lakukan metode hitungan piring setidaknya dalam rangkap dua untuk
setiap medium, dan gunakan jumlah rata-rata hasilnya.

Metode Tuangkan Piring - Untuk cawan Petri berdiameter 9 cm, tambahkan ke piringan 1 ml sampel
yang disiapkan seperti yang dijelaskan pada Preparasi Sampel, Inokulasi dan Pengenceran, dan
Netralisasi / Penghapusan Aktivitas Antimikroba dan 15 sampai 20 mL Kedelai- Agar Digest Kasein
atau Sabreaud Dextrose Agar, kedua media tetap dipertahankan tidak lebih dari 45. Jika cawan Petri
lebih besar digunakan, jumlah media agar meningkat. Untuk masing-masing mikroorganisme yang
tercantum dalam Tabel 1, setidaknya dua cawan Petri digunakan.

inkubasi lempeng seperti ditunjukkan pada Tabel 1. Ambillah mean aritmetik dari hitungan per
medium, dan hitung jumlah cfu dalam inokulum asli.

Metode Permukaan Permukaan - Untuk cawan Petri berdiameter 9 cm, tambahkan 15 sampai 20 mL
Kedelai Kedelai Digest Agar atau Sabreaud Dextrose Agar sekitar 45 untuk setiap cawan Petri, dan
biarkan mengeras. Jika cawan Petri lebih banyak digunakan, volume agar-agar meningkat sesuai
kebutuhan. Keringkan pelat, misalnya, dalam kabinet aliran udara laminar atau dalam inkubator.
Untuk masing-masing mikroorganisme yang tercantum dalam Tabel 1, setidaknya dua cawan Petri
digunakan. Sebarkan volume terukur tidak kurang dari 0,1 mL sampel, disiapkan sesuai arahan
Preparasi Sampel, Inokulasi dan Pengenceran, dan Netralisasi / Penghapusan Aktivitas Antimikroba
di atas permukaan medium. Inkubasi dan hitung sesuai dengan Metode Pour-Plate.

Metode Most-Probable-Number (MPN) - Ketepatan dan keakuratan Metode MPN kurang dari pada
metode Filtrasi Membran atau Metode Count-Plate. Hasil yang tidak dapat diandalkan diperoleh
terutama untuk pencacahan cetakan. Untuk alasan ini, Metode MPN dicadangkan untuk pencacahan
TAMC dalam situasi dimana tidak ada metode lain yang tersedia. Jika penggunaan metode ini
dibenarkan, lanjutkan sebagai berikut.

Siapkan rangkaian sekurang-kurangnya tiga pengenceran 10 kali lipat produk seperti yang dijelaskan
untuk Persiapan Sampel, Inokulasi dan Pengenceran, dan Netralisasi / Penghapusan Aktivitas
Antimikroba. Dari setiap tingkat pengenceran, tiga aliquot 1 g atau 1 mL digunakan untuk
menginokulasi tiga tabung dengan 9 sampai 10 mL Kaldu Kedelai Kedelai. Jika diperlukan, zat aktif
permukaan seperti polisorbat 80, atau inaktivator agen antimikroba dapat ditambahkan ke medium.
Jadi, jika tiga tingkat pengenceran disiapkan, sembilan tabung diinokulasi.

inkubasi semua tabung pada 30 sampai 35 selama tidak lebih dari 3 hari. Jika hasil pembacaannya
sulit atau tidak pasti karena sifat produk yang akan diperiksa, subkultur dalam kaldu yang sama atau
dalam Campuran Kedelai Kedelai selama 1 sampai 2 hari pada suhu yang sama, dan gunakan hasil
ini. Dari Tabel 3, tentukan jumlah mikroorganisme per g atau mL yang paling mungkin untuk
diperiksa.

Tabel 3. Nilai Kemungkinan Sebagian Besar Mikroorganisme

Kombinasi Teramati MPN per g atau Kepercayaan


Jumlah Tabung per mL dari Batas
Menampilkan Pertumbuhan di Produk 95%
Setiap Set
Jumlah g atau mL produk per
tabung
0,1 0,01 0,001

0 0 0 <3 0–9.4
0 0 1 3 0.1–9.5
0 1 0 3 0.1–10
0 1 1 6,1 1.2–17
0 2 0 6,2 1.2–17
0 3 0 9,4 3.5–35
1 0 0 3,6 0.2–17
1 0 1 7,2 1.2–17
1 0 2 11 4–35
1 1 0 7,4 1.3–20
1 1 1 11 4–35
1 2 0 11 4–35
1 2 1 15 5–38
1 3 0 16 5–38
2 0 0 9,2 1.5–35
2 0 1 14 4–35
2 0 2 20 5–38
2 1 0 15 4–38
2 1 1 20 5–38
2 1 2 27 9–94
2 2 0 21 5–40
2 2 2 28 9–94
2 2 0 35 9–94
2 3 1 29 9–94
2 3 2 36 9–94
3 0 0 23 5–94
3 0 1 38 9–104
3 0 2 64 16–181
3 1 0 43 9–181
3 1 1 75 17–199
3 1 2 120 30–360
3 1 3 160 30–380
3 2 0 93 18–360
3 2 1 150 30–380
3 2 2 210 30–400
3 2 3 290 90–990
3 3 0 240 40–990
3 3 1 460 90–1980
3 3 2 1100 200–4000
3 3 3 >1100

hasil dan interpretasi

Saat memverifikasi kesesuaian metode Filtrasi Membran atau Metode Penghitungan Piring, jumlah
rata-rata organisme uji yang tidak berbeda dengan faktor lebih besar dari 2 dari nilai kontrol yang
didefinisikan dalam Inokulasi dan Pengenceran tanpa adanya produk harus didapat. Saat
memverifikasi kesesuaian Metode MPN, nilai yang dihitung dari inokulum harus berada dalam batas
kepercayaan 95% dari hasil yang diperoleh dengan kontrol.

Jika kriteria di atas tidak dapat dipenuhi untuk satu dari lebih organisme yang diuji dengan metode
yang dijelaskan, metode dan kondisi uji yang paling mendekati kriteria digunakan untuk menguji
produk.

PENGUJIAN PRODUK

Jumlah yang Digunakan untuk Tes

Kecuali jika diperintahkan lain, gunakan 10 g atau 10 mL produk yang akan diperiksa dengan
tindakan pencegahan yang disebutkan di atas. Untuk cairan atau padatan dalam bentuk aerosol,
sampel 10 kontainer. Untuk tambalan transdermal, sampel 10 patch.

Jumlah yang akan diuji dapat dikurangi untuk bahan aktif yang akan diformulasikan dalam kondisi
berikut: jumlah per unit dosis (misalnya tablet, kapsul, injeksi) kurang dari atau sama dengan 1 mg,
atau jumlah per g atau mL (untuk persiapan yang tidak disajikan dalam satuan dosis) kurang dari 1
mg. Dalam kasus ini, jumlah sampel yang akan diuji tidak kurang dari jumlah yang ada dalam 10 unit
dosis atau 10 g atau 10 mL produk.

Untuk bahan yang digunakan sebagai bahan aktif dimana jumlah sampel terbatas atau ukuran bets
sangat kecil (yaitu kurang dari 1000 mL atau 1000 g), jumlah yang diuji harus 1% dari bets kecuali
jumlah yang lebih rendah yang ditentukan atau dibenarkan dan diotorisasi. .

Untuk produk yang jumlah total entitas dalam kelompok kurang dari 200 (mis., Sampel yang
digunakan dalam uji klinis), ukuran sampel dapat dikurangi menjadi dua unit, atau satu unit jika
ukurannya kurang dari 100.
Pilih sampel secara acak dari bahan curah atau dari wadah sediaan yang tersedia. Untuk
mendapatkan jumlah yang dibutuhkan, campurkan isi sejumlah kontainer untuk menyediakan
sampel.

Pemeriksaan Produk

filtrasi membran

Gunakan alat filtrasi yang dirancang untuk memungkinkan pengalihan saringan ke media. Siapkan
sampel dengan menggunakan metode yang telah terbukti sesuai seperti yang dijelaskan dalam Uji
Promosi Pertumbuhan dan Kesesuaian Metode Penghitungan, transferkan jumlah yang sesuai ke
masing-masing dua saringan membran, dan saring segera. Cuci setiap saringan mengikuti prosedur
yang ditunjukkan agar sesuai.

Untuk penentuan TAMC, transfer salah satu filter membran ke permukaan Kedelai-Casein Digest
Agar. Untuk penentuan TYMC, transfer membran lainnya ke permukaan Sabreaud Dextrose Agar.
Inkubasi piring Kedelai Digitin Kedelai pada 30 sampai 35 selama 3 sampai 5 hari dan lempeng
Sabreaud Dextrose Agar pada 20 sampai 25 selama 5 sampai 7 hari. Hitung jumlah cfu per g atau per
mL produk.

Saat memeriksa tambalan transdermal, saring secara terpisah 10% volume sediaan yang dijelaskan
untuk Persiapan Sampel melalui masing-masing dua membran penyaring steril. Transfer satu
membran ke Kedelai-Casein Digest Agar untuk TAMC dan membran lainnya ke Sabouraud Dextrose
Agar untuk TYMC.

metode lempeng-hitungan

Metode Pour-Plate- Siapkan sampel dengan menggunakan metode yang telah terbukti sesuai seperti
yang dijelaskan dalam Uji Promosi Pertumbuhan dan Kesesuaian Metode Penghitungan. Siapkan
masing-masing medium setidaknya dua cawan Petri untuk setiap tingkat pengenceran. Inkubasi
lempeng Kedelai Digitin Kedelai pada 30 sampai 35 selama 3 sampai 5 hari dan lempeng Sabreaud
Dextrose Agar pada 20 sampai 25 selama 5 sampai 7 hari. Pilih pelat yang sesuai dengan
pengenceran tertentu dan tunjukkan jumlah koloni tertinggi kurang dari 250 untuk TAMC dan 50
untuk TYMC. Ambillah mean aritmetika per medium kultur hitungan, dan hitung jumlah cfu per g
atau per mL produk.

Metode Penyebaran Permukaan - Siapkan sampel dengan menggunakan metode yang telah terbukti
sesuai seperti yang dijelaskan dalam Uji Promosi Pertumbuhan dan Kesesuaian Metode
Penghitungan. Siapkan setidaknya dua cawan Petri untuk masing-masing medium dan setiap tingkat
pengenceran. Untuk inkubasi dan perhitungan jumlah cfu, lanjutkan sesuai dengan Metode Pour-
Plate.

metode yang paling mungkin digunakan

Siapkan dan encerkan sampel dengan menggunakan metode yang telah terbukti sesuai seperti yang
tercantum dalam Uji Promosi Pertumbuhan dan Kesesuaian Metode Penghitungan. Inkubasi semua
tabung selama 3 sampai 5 hari pada 30 sampai 35. Subkultur jika perlu, dengan menggunakan
prosedur yang ditunjukkan agar sesuai. Catat setiap tingkat pengenceran jumlah tabung yang
menunjukkan pertumbuhan mikroba. Tentukan jumlah mikroorganisme per g atau mL yang paling
mungkin untuk diperiksa dari Tabel 3.

Interpretasi Hasil
Jumlah mikroba aerobik total (TAMC) dianggap sama dengan jumlah cfu yang ditemukan dengan
menggunakan Kedelai Kedelai Digest Agar; Jika koloni jamur terdeteksi pada media ini, mereka
dihitung sebagai bagian dari TAMC. Ragi gabungan total dan jumlah cetakan (TYMC) dianggap sama
dengan jumlah cfu yang ditemukan dengan Sabouraud Dextrose Agar; Jika koloni bakteri terdeteksi
pada media ini, mereka dihitung sebagai bagian dari TYMC. Bila TYMC diharapkan melebihi kriteria
penerimaan karena pertumbuhan bakteri, Sabouraud Dextrose Agar mengandung antibiotik dapat
digunakan. Jika dihitung dengan metode MPN, nilai yang dihitung adalah TAMC.

Bila kriteria penerimaan untuk kualitas mikrobiologi diresepkan, maka ditafsirkan sebagai berikut:

1. 101 cfu: hitung maksimum yang dapat diterima = 20;


2. 102 cfu: hitung maksimum yang dapat diterima = 200;
3. 103 cfu: jumlah maksimum yang dapat diterima = 2000;

Dan seterusnya.

Solusi dan media yang direkomendasikan dijelaskan dalam Pengujian untuk Mikroorganisme
Tertentu 62

(Resmi 1 Mei 2009)

Informasi Tambahan - Silakan periksa pertanyaan Anda di FAQ sebelum menghubungi USP

Topik / Pertanyaan kontak Komite Pakar


Kapitel Umum Ilmuwan senior (MSA05) Mikrobiologi dan
1-301-816-8339 Jaminan Sterilitas
USP32-NF27 Page 71

Forum Pharmacopeial: Volume No. 29 (5) Halaman 1714