Clase 3 Cinetica Microbiana

Bloque II : Cinética Enzimática y
Crecimiento Microbiano
TEMA 3: CINÉTICA MICROBIANA
METABOLISMO
• Son todos los procesos químicos que tienen lugar dentro de una célula
La célula incorpora
nutrientes que se convierten
en constituyentes celulares.
Va a necesitar también
energía que la célula obtiene
a partir de la degradación de
sustancias con la Conocer el metabolismo del
consiguiente producción de microorganismo de interés
desechos. es básico para “dirigir” el
proceso biotecnológico hacia
el producto deseado.
METABOLISMO
• Clasificación de los microorganismos por fuente de

energía y de carbono.
Clasificación Fuente de energía Fuente de carbono
Autótrofos
Fotoautótrofos Luz CO2
Quimioautótrofos Redox inorgánica CO2
Heterótrofos
Quimioheterótrofos Redox orgánica Carbono orgánico
Fotoheterótrofos Luz Carbono orgánico

METABOLISMO
• Tipos de metabolismos microbianos
Ambiente Aceptor de electrones Proceso
Aerobio oxígeno Aerobio
Nitrato Desnitrificación
Anaerobio
Sulfato Sulfatoreducción
Dióxido de carbono Metanogénesis
METABOLISMO
Las bacterias son microorganismos unicelulares, con movilidad propia gran diversidad en su forma:
Bacterias esferas, barras, hélices,...
Protistas multicelulares, no fotosintéticos y heterótrofos. Pueden crecer en condiciones de baja humedad
Hongos
y tolerar bajos pH.
Levaduras Hongos que no pueden formar micelio
Microorganismos con propiedades intermedias entre las bacterias y los hongos, importantes en la
Actinomicetos
descomposición de la materia orgánica en suelos.
Eucariotas móviles generalmente un orden de magnitud mayores a las bacterias. La mayoría heterótrofos
Protozoos
aerobios (consumen bacterias y materia orgánica)
Rotíferos Heterótrofos aerobios que actúan como purificadores de efluentes
Eucariotas unicelulares o pluricelulares fotosintéticos autótrofos. Función oxigenadora en procesos de
Algas
lagunaje
METABOLISMO
CRECIMIENTO MICROBIANO
• Estequiometría del crecimiento microbiano
El crecimiento microbiano se puede expresar en forma de reacción química:
Sustratos ‐‐‐‐ biomasa + productos
Por ejemplo para el crecimiento aerobio de S. cerevisiae:
biomasa
C6H12O6 + aO2 + bNH3 ‐‐‐‐ cCHxOyNz + dCO2 + eH2O
o Permite la aplicación de balances de materia y la determinación de los
coeficientes estequiométricos.
o Para el cálculo de estos valores, se plantea la reacción en función de los
componentes que actúan como nutrientes limitantes (sustrato cuyo consumo
controla la velocidad de producción de biomasa).
En este sentido es importante la relación C/N en torno a 20.
• Para relaciones C/N superiores el nitrógeno será el nutriente limitante
• Para relaciones inferiores será el carbóno. Otros importantes: S, P, K, Mg y Na.
• Estequiometría del crecimiento microbiano
En el transcurso de una fermentación se produce una gran variedad de
productos.
o Si el producto principal se produce como consecuencia del
metabolismo primario se obtiene:
metabolito
aCHmOn + bO2 + cNH3 ‐‐‐‐ dCHxOyNz + eCO2 + fH2O + gCHyOw
• Rendimientos
A partir de datos experimentales de la cantidad de sustrato consumido y de la
biomasa obtenida puede observarse que existe una relación entre ambos.
Se define el rendimiento biomasa‐sustrato como el cociente entre el incremento de
masa celular obtenida y el consumo de sustrato (normalmente fuente carbono).
X concentración de biomasa
S concentración de sustrato
Puede haber usos del sustrato que no están asociados a la producción de biomasa
(por ejemplo un quimiheterótrofo, que va a utilizar el sustrato como fuente de
energía y de carbono).
o Aspectos nutricionales
o Condiciones de operación
• Temperatura
• Oxigeno
• pH
• Presión Osmótica
• Rendimientos
De forma similar a la que se define el rendimiento Biomasa/Sustrato pueden
definirse rendimiento para otras parejas de parámetros del proceso.
Simbolo Definción
Yx/s g biomasa seca por g de sustrato consumido
Yx/o g de biomasa seca por g oxígeno consumido
Yp/s g o mol de producto por g o mol de sustrato consumido
Yc/s mol de CO2 producido por mol de sustrato consumido
• Rendimientos
Los valores de estos rendimientos dependen de la especie microbiana y del
sustrato consumido.
• INTRODUCCIÓN
El proceso de crecimiento celular a partir de unos determinados sustratos
que conlleva la formación de productos y energía puede llegar a ser muy
complejo.
En la tabla se recogen los aspectos más importantes a considerar cuando se
plantea el estudio cinético del crecimiento celular.
• INTRODUCCIÓN
El estudio cinético de los procesos fermentativos no es fácil.
La situación se complica por la heterogeneidad en la actividad catalítica de
las células y por los medios de cultivo.
La heterogeneidad relativa al material celular es evidente aunque se opte
por usar cepas puras, ya que se dividen continuamente dando lugar a células
nuevas.
Es habitual que en el cultivo haya células con distinta edad y evolución en el
ciclo de crecimiento que pueden tener un comportamiento distinto según
sea su entorno más inmediato.
Normalmente en los sistemas de fermentación se promociona la
uniformidad de propiedades (concentración de sustrato, pH, temperatura…)
pero un sistema de reacción perfecto no existe.
Un modelo cinético que contemple todos los aspectos citados sería muy
difícil de formular, siendo poco práctico por la información requerida.
• INTRODUCCIÓN
Por tanto a la hora de formular un modelo se puede considerar:
Modelo estructurado: considera que el sistema está constituido por
múltiples factores que interviene en la actividad de la célula.
Modelo no estructurado: globalizaría esos factores en uno solo
Modelo segregado: considera las características individuales de las
células.
Modelo no segregado: describe la células como un promedio.
La tendencia más simplista (modelo no estructurado y no segregado) es
considerar que el proceso fermentativo depende de un componente
individual que controla la velocidad, sustrato limitante, y que todas las
células son iguales en promedio.
• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR
Se puede definir la concentración celular en un cultivo como el número de
células por unidad de volumen.
Lo más habitual es expresarlo como concentración en masa de células por
unidad de volumen (Kg/L).
Dos tipos de métodos.
Métodos directos
Método indirectos
Se basan en la Estequiometría y termodinámica del crecimiento celular.
La concentración celular se mide indirectamente a través de medir evolución
en la concentración de nutrientes, productos, calor desprendido,…
Recuento en microscopio. Métodos directos
Se puede determinar el número de células por unidad de
volumen observando al microscopio una muestra
representativa del cultivo, en las denominadas cámaras de
recuento (UFC).
Están soportados sobre portaobjetos con una pequeña
depresión en la superficie, presentando una retícula graduada
grabada en el fondo.
Esta retícula permite focalizar con el microscopio parcelas
concretas para facilitar el recuento.
Ventaja: necesita un mínimo de equipos y los resultados son
inmediatos.
Inconveniente: puede no ser fácil discriminar entre células
muertas y viables y pierde precisión para bajas
concentraciones de células o si tienen capacidad de
movimiento.
Medida del peso seco de células. Métodos directos
Una alícuota de cultivo se centrifuga, y el pellet obtenido, una
vez lavado se seca en estufa y se pesa.
Ventaja: es muy sencillo y relativamente rápido.
Inconveniente: para obtener una medida fiable es necesario
asegurar que con el lavado del pellet se eliminan todos los
materiales que no son células.
Medida de la turbidez. Métodos directos
La concentración de células es proporcional a la cantidad de
luz que es capaz de absorber.
Se utiliza el espectrofotómetro, normalmente con medidas
entre 600‐700 nm.
Es un método rápido de manipulación sencilla.
El inconveniente es que solo es aplicable a cultivos
relativamente concentrados y cuyo medio sea transparente o
al menos “poco” coloreado.
• CINÉTICA DE CULTIVO MICROBIANO
DEFINICIÓN DE VELOCIDAD ESPECÍFICA DE CRECIMIENTO.
Productos extracelulares
yields

sustrato biomasa
El crecimiento microbiano es un ejemplo de reacción autocatalítica. La velocidad de
crecimiento está relacionada con la concentración de células.
Velocidad específica neta de crecimiento (h‐1)
X: concentración másica de células (g/L)
T: tiempo (h)
La velocidad especifica neta es la diferencia entre la velocidad de crecimiento y la de
desaparición de biomasa por muerte celular.
=
• CINÉTICA DE CULTIVO DISCONTINUO
Los microorganismos se suelen cultivar en medio líquido en un sistema discontinuo
(batch).
Sistemas cerrados de volumen fijo en el cual los sustratos se adicionan al inicio del
cultivo y se consumen durante el proceso, facilitando el crecimiento microbiano.
Se puede representar el crecimiento del microorganismo frente al tiempo de
incubación, obteniendo una curva que frecuentemente tiene cuatro fases:
• CINÉTICA DE CULTIVO DISCONTINUO (Batch)
ETAPAS:
LATENCIA: adaptación del inóculo al medio. Depende de la edad y de los nutrientes.
CRECIMIENTO EXPONENCIAL: rápida multiplicación de células. Crecimiento
balanceado (composición de células constante).
ESTACIONARIO: velocidad de crecimiento nula. Las células son activas y pueden
producir metabolitos secundarios.
MUERTE CELULAR: baja el número de células.
• CINÉTICA DE CRECIMIENTO: MODELOS CINÉTICOS
• CINÉTICA DE CRECIMIENTO: MODELO DE MONOD
No tiene en cuenta los
problemas de transferencia
Si se invierten los términos de la ecuación de Monod y se multiplica por X, se
obtiene una ecuación :
De donde se puede obtener:

La ecuación de Monod es muy simple y no siempre permite obtener una buena
representación de los datos de crecimiento del microorganismo. A modo de
ejemplo:
Además en muchos casos debe tenerse en cuenta que el crecimiento puede
venir afectado por inhibición por sustrato, producto…
A modo ilustrativo se muestran algunas de las ecuaciones utilizadas en estos
casos:
o La ecuación de Monod generalizada, propuesta por Han y Levenspiel intenta

cubrir la mayor parte de las situaciones, en particular la inhibición por el
sustrato y producto.
o Donde Ci es la concentración de inhibidor, Ci* es la concentración crítica del
inhibidor que para totalmente el proceso y n y m son constantes, relacionadas
con el poder tóxico del inhibidor. Sustituyendo Ci por S,P o X podremos tener la
inhibión por sustrato, producto o por las propias células.
Cuando Ci<<Ci* la ecuación se reduce a la de MONOD.
La ecuación de Monod generalizada, también se puede reorganizar y representar
segun Lineweaver‐Burk obteniendo la ecuación:

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• Clasificación de los microorganismos por fuente de

Clasificación Fuente de energía Fuente de carbono

Fotoautótrofos Luz CO2

Quimioautótrofos Redox inorgánica CO2

Quimioheterótrofos Redox orgánica Carbono orgánico

Fotoheterótrofos Luz Carbono orgánico

• Tipos de metabolismos microbianos

Ambiente Aceptor de electrones Proceso

Aerobio oxígeno Aerobio

• Estequiometría del crecimiento microbiano

• Estequiometría del crecimiento microbiano

• MÉTODOS DETERMINACIÓN CONCENTRACION CELULAR

De donde se puede obtener:

o La ecuación de Monod generalizada, propuesta por Han y Levenspiel intenta

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