Vin Flu Nine
Vin Flu Nine
praklinis
Abstrak
1. Pendahuluan
Senyawa yang mengganggu fungsi mikrotubulus merupakan kelas agen antikanker yang penting,
banyak digunakan dalam rejimen kemoterapi kombinasi untuk mengobati banyak tumor padat dan
juga leukemia [1]. Salah satu kelas yang paling terkenal dari agen ini adalah alkaloid Vinca yang
dimer. Interaksi mereka dengan tubulin, komponen utama mikrotubulus pada gelendong mitosis, dan
penangkapan sel di mitosis pada umumnya diterima sebagai peristiwa penting dalam mekanisme
aksi mereka [2,3]. Vinblastine, alkaloid alami pertama dengan aktivitas antiproliferatif ditemukan
pada ekstrak daun tanaman Vinca rosea, di University of Western Ontario pada tahun 1958 [4] dan,
secara terpisah, di Laboratorium Penelitian Lilly di Amerika Serikat [5]. Penemuan ini dengan cepat
diikuti oleh vincristine [6]. Meskipun kedua alkaloid ini berbeda secara struktural hanya pada
kelompok fungsional pada nitrogen dihydroindole, perbedaan kecil ini tampaknya bertanggung jawab
atas perbedaan substansial dalam aktivitas dan toksisitasnya [7,8] dan memberikan dorongan untuk
mencari analog baru dengan tujuan untuk mengidentifikasi lebih banyak aktivitas aktif. dan kurang
beracun
senyawa yang menunjukkan spektrum khasiat antikanker yang lebih luas. Upaya ini, yang banyak
dipusatkan pada penggunaan vinblastine sebagai molekul awal, karena merupakan satu-satunya
bahan yang tersedia dalam jumlah yang cukup, menghasilkan identifikasi alkaloid Vinca yang aktif
secara klinis, vindesine, turunan desasetil karboksibida dari vinblastine [9]. Sementara itu, metode
baru menggabungkan dua prekursor tersebut
alkaloid catharanthine dan vindoline diaktifkan ahli kimia
untuk mendapatkan sejumlah besar zat antara 3, 4? -anydrovinblastine,
memungkinkan sintesis turunan baru, berbeda dari senyawa alami dengan memiliki cincin delapan-
bukan sembilan anggota di
bagian velbenamine [10,11]. Di antara turunan ini, vinorelin dipilih untuk pengembangan dan
molekul ini telah menunjukkan peningkatan kemanjuran klinis yang nyata dan toksisitas yang
berkurang [12]. Terbaru ini secara klinis disetujui
Vinca alkaloid sekarang banyak digunakan dan dilisensikan untuk pengobatan kanker paru-paru sel
non-kecil, kanker payudara metastatik dan kanker ovarium [13]. Oleh karena itu, terlepas dari
banyaknya usaha di bidang kimia dan biologi, sejak awal 1970an hanya dua derivat alkaloid Vinca
semisintetik, vindesinedan vinorelbine telah mencapai peringkat obat antikanker yang disetujui.
Dalam konteks ini dan didorong oleh kegunaan klinis vinorelin dalam kanker
kemoterapi, Pierre Fabre Group Prancis terus mencari senyawa tipe alkaloid Vinca yang lebih aktif
dengan rentang aktivitas yang berbeda / berbeda terhadap tipe tumor lain dan / atau dengan
spektrum efek samping beracun yang lebih rendah / berbeda. Program gabungan penelitian kimia
dan farmakologi telah menghasilkan identifikasi vinflunine, alkaloid Vincus semisintetik baru, yang
sekarang dalam pengembangan klinis. turunan adalah pengenalan selektif dua atom fluor pada 20?
posisi, bagian dari molekul
sebelumnya tidak dapat diakses oleh kimia klasik. Selama
Tentu saja reaksi, ikatan rangkap antara karbon
C3? dan C4? juga berkurang (Gambar 1).
Vinflunine telah ditunjukkan untuk menunjukkan sifat pengikatan tubulin yang berbeda relatif
terhadap alkaloid Vinca lainnya. Dengan menggunakan metode filtrasi gel sentrifugal, Kruczynski dkk.
[30] menunjukkan bahwa vinflunine mengganggu dengan cara yang berbeda dengan pengikatan
alkaloid Vinca yang diinduksi ke tubulin, yaitu dengan tidak menghambat pengikatan vincristine [3H]
dan hanya berkompetisi lemah dengan vinoklerin vinblastin atau [3H] vinorelbine, bila digunakan.
pada konsentrasi tinggi (? 100? M). Selanjutnya, di bawah kondisi eksperimental ini, pengikatan
khusus
[3H] vinflunina ke tubulin tidak terdeteksi, sedangkan [3H] vinorelin, [3H] vinblastine dan [3H]
vincristine semuanya menunjukkan ikatan jenuh dan spesifik [30]. Secara keseluruhan, dalam
mempertimbangkan kapasitas molekul ini untuk mengikat
tubulin atau untuk mengganggu pengikatan alkaloid Vinca lain [3H] ke tubulin dalam kondisi
percobaan ini, berbagai alkaloid Vinca yang diuji dapat diklasifikasikan sebagai berikut: vincristine?
vinblastine? vinorelbine
? vinflunine [30]. Penulis mengemukakan hipotesis bahwa perbedaan ini mungkin disebabkan oleh
konstanta disosiasi yang lebih tinggi untuk vinflunine daripada untuk
alkaloid Vinca lainnya, sehingga memungkinkan keseimbangan antara vinflunine terikat dan bebas
mudah dipindahkan karena obat bebas selama percobaan berdasarkan teknik filtrasi gel sentrifugal.
Dengan menggunakan spektroskopi NMR, Fabre et al. juga menunjukkan bahwa jumlah molekul
vinorelin yang lebih tinggi berikatan dengan tubulin dibandingkan dengan vinflunine [34]. Tidak ada
ikatan vinflunina yang signifikan terhadap tubulin yang terdeteksi pada suhu 30 ° C, dalam kondisi
percobaannya. Selanjutnya, studi pelengkap, berdasarkan pengukuran
dari tubulin self-association, memberikan bukti langsung bahwa vinflunine mengikat tubulin [35].
Memang, karena asosiasi mandiri tubular dikaitkan dengan pengikatan obat, ini adalah ukuran sejauh
mana keseluruhan pengikatan obat, yang mana
dapat ditentukan dengan kecepatan sedimentasi [35]. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa
vinflunine terikat pada tubulin dengan afinitas jauh lebih lemah (didefinisikan oleh K1K2, menurut
Lobert dkk.) Dari pada vinorelbine, yang sebelumnya telah ditunjukkan sebelumnya menunjukkan
afinitas keseluruhan yang lebih rendah untuk tubulin daripada baik vinblastine atau vincristine
(Gambar 2) [36,35].
Lebih khusus lagi, urutan yang diamati pada keseluruhan afinitas dari berbagai alkaloid Vinca untuk
tubulin (K1K2) adalah vincristine vinblastine vinorelbine vinflunine sesuai dengan kesimpulan dari
penelitian
Kruczynski dkk. [30]. Pengikatan vinflunina yang lebih lemah ke tubulin telah ditunjukkan agar tidak
tercermin dalam pengikatan obat ke heterodimer tubulin (K1 menurut Lobert et al. [35]) melainkan
pada afinitas ligand
heterodimer untuk polimer spiral (K2) dan dalam pengikatan obat ke polimer (K3). Hal ini
menyebabkan terbentuknya spiral yang lebih sedikit dengan ukuran yang lebih kecil dari yang
diinduksi alkaloid Vinca lainnya, seperti yang dinilai oleh kecepatan sedimentasi. Menurut Lobert et
al. [35], ini berarti bahwa secara keseluruhan vinflunin kurang berikatan dengan tubulin daripada
kasus alkaloid Vinca lainnya. Vinflunine yang diinduksi
spiral yang lebih kecil menukar heterodimer tubulin lebih mudah, tercermin dari waktu relaksasi yang
singkat, yang diukur dengan percobaan pengenceran obat hamburan hamburan cahaya berhenti
yang bertujuan untuk menyelidiki kinetika reequilibrasi spiral yang diinduksi obat [35,22]. Seperti
yang dikemukakan oleh Lobert et al. [35], data kinetik ini berkontribusi pada pemahaman tentang
hasil yang dipublikasikan sebelumnya
percobaan alkilasi iodoasetamida [30].
3081/5000
Pemantauan alkilasi kelompok sulfhidril dari tubulin oleh iodo [14C] asetamida dengan
adanya alkaloid Vinca telah menunjukkan bahwa vinflunine atau vinorelin hanya
menghambat alkilasi tubulin secara sementara, karena penghambatannya dibalik setelah
inkubasi 2 jam, sedangkan pada Sebaliknya, vinblastine dan vincristine menginduksi inhibisi
persisten selama periode percobaan. Karena waktu relaksasi untuk spiral vinflunine dan
vinorelbine lebih pendek daripada spiral vinblastine dan vincristine, Lobert et al. [35]
mengusulkan bahwa dengan adanya vinflunine atau vinorelbine, heterodimer tubulin lebih
mudah terekspos kembali ke alkilasi daripada pada kasus vinblastine atau vincristine hadir.
Menariknya,
Jean-Decoster dkk. [32] menunjukkan bahwa pemisahan unit sentrosom yang diinduksi oleh
vinflunine segera dibalik setelah pencucian obat '', sementara proses ini lebih lambat pada sel
yang diobati dengan tiga alkaloid Vinca lainnya,
dengan efek vincristine yang membuktikan paling tidak reversibel. Oleh karena itu,
vinflunine, yang menunjukkan afinitas paling lemah untuk tubulin, tampaknya menghasilkan
interaksi yang paling mudah reversibel dengan tubulin. Selanjutnya, aksi vinflunine pada
dinamika mikrotubulus tampak berbeda secara signifikan
itu dari vinblastine [31]. Dinamika mikrotubulus dianalisis dengan mikroskop video
kuantitatif [31]. Gambar mikrotubulus ditangkap secara real time pada rekaman video yang
memungkinkan pengukuran panjang mikrotubulus dari waktu ke waktu dan oleh karena itu
perhitungan berbagai parameter kinetik (pertumbuhan mikrotubulus atau tingkat pemendekan
atau waktu jeda) yang diilustrasikan secara diagram pada Gambar 3. Vinflunine menekan
ketidakstabilan dinamis mikrotubulus dan yang paling banyak
Efek yang menonjol adalah memperlambat laju pertumbuhan mikrotubulus, untuk
meningkatkan durasi kejadian pertumbuhan, dan untuk mengurangi durasi pemendekan.
Berbeda dengan tindakan vinblastine, vinflunine tidak mengurangi tingkat pemendekan
mikrotubulus, juga tidak meningkatkan persentase waktu pengeluaran mikrotubulus dalam
keadaan dilemahkan atau dijeda. Vinflunine juga menekan mikrotubula yang treadmilling,
namun dengan potensi lebih lemah dari vinorelbine atau vinblastine. Ngan dkk. [31]
menunjukkan bahwa berbagai perbedaan ini dapat mengindikasikan bahwa vinflunine
mempengaruhi konstanta laju asosiasi tubulin dan disosiasi pada mikrotubulus yang
berlawanan berakhir dengan berbeda.
daripada vinorelbine dan vinblastine. Karena mikrotubulus treadmilling atau fluks diperlukan
untuk perkembangan kromosom normal melalui mitosis, ini
data menunjukkan secara keseluruhan bahwa vinflunine mungkin memiliki efek halus yang
berbeda pada kejadian mitosis tertentu. Singkatnya, vinflunine berikatan dengan tubulin dan
induksi
Tubulin self-association, seperti alkaloid Vinca lainnya. Secara keseluruhan, penambahan
obat, dimer ligan, atau spiral pada ujung mikrotubulus diperkirakan cukup untuk
mengganggu dinamika mikrotubulus. Namun, vinflunine menunjukkan sifat pengikatan
tubulin khas dari alkaloid Vinca lainnya, yang dapat menjelaskan tindakan diferensialnya
pada dinamika mikrotubulus.
4. Sitotoksisitas in vitro
4.1. Vinflunine sebagai agen tunggal
Vinflunine menggunakan aktivitas sitotoksik in vitro terhadap spektrum sel tumor yang luas dengan
nilai IC50 berkisar antara 10-8 sampai 10-7 M, saat diuji terhadap dua leukemia murine serta tujuh
garis sel manusia yang berasal dari paru-paru, usus besar, prostat, payudara , tumor ovarium dan
kandung kemih [30]. Percobaan yang dilakukan bersamaan dengan vincristine, vinblastine dan
vinorelbine terungkap
bahwa nilai IC50 yang diperoleh dengan vinflunine terbukti secara umum lebih tinggi oleh faktor 2
sampai 40 kali lipat [30]. Namun, urutan korelasi yang tinggi antara
mencatat nilai IC50, dicatat saat mengevaluasi sitotoksisitas terhadap panel sel tumor manusia yang
tidak dipilih ini, karena vinflunine, vinorelin atau vincristin relatif terhadap vinblastine konsisten
dengan semua senyawa ini yang memiliki target intraseluler serupa [30]. Selanjutnya, Jean-Decoster
dkk. [32] berangkat untuk menentukan apakah interaksi vinflunine dengan mikrotubulus dapat
terjadi
untuk sitotoksisitasnya menggunakan sel PtK2 (tikus kanguru). Mereka menunjukkan bahwa
konsentrasi penghambatan pertumbuhan sel (50-75 nM) memang menyebabkan penurunan nilai
pembentukan keselarasan kromosom serta tanda-tanda awal pemisahan unit sentrosom, yang
mencerminkan destabilisasi ringan dari mikrotubulus mitosis dan interphasic. Mereka menyimpulkan
Oleh karena itu sitotoksisitas vinflunine kompatibel dengan aksinya pada mikrotubulus yang paling
dinamis. Juga menarik untuk dicatat bahwa, akumulasi intrarelular vinflunine tampak lebih tinggi (9
kali lipat) dibandingkan dengan
vinorelin, vinblastin dan vincristin, seperti yang ditunjukkan oleh Jean-Decoster et al. [32]
menggunakan sel PtK2.
5. Mekanisme resistensi
Alkaloid Vinca sebagai kelas berpartisipasi dalam apa yang disebut 'klasik' multidrug resistance
(MDR), sebuah fenomena dimana overexpression dari pompa eflux membran plasma disebut P-
glycoprotein (Pgp) menghasilkan tingkat obat intraselular yang lebih rendah dan karenanya, dalam
sitotoksisitas yang dikurangi [ 38]. Di antara agen yang berinteraksi dengan tubulin, alkaloid Vinca
dan turunannya umumnya menunjukkan pola resistensi silang yang umum dan ini terutama terjadi
pada resistensi yang dimediasi Pgp [39]. Penting untuk memastikan apakah fluorinasi unik dalam
molekul vinflunine, di wilayah yang dieksploitasi sedikit
bagian catharantine, mungkin telah mempengaruhi interaksi vinflunine dengan Pgp. Seperti yang
dinilai oleh beberapa kriteria menggunakan model in vivo dan in vitro, penelitian yang dilaporkan
mengindikasikan bahwa, seperti alkaloid Vinca lainnya, vinflunine nampaknya termasuk dalam famili
senyawa yang menginduksi MDR yang bergantung pada Pgp [40]. Memang, sel tumor yang dipilih
untuk resistansi, baik in vivo (murine P388 leukemia) atau in vitro (karsinoma paru A549 manusia),
hingga vinflunine menunjukkan peningkatan ekspresi Pgp dan terbukti tahan silang, ke Vinca lainnya.
alkaloid, toksokubikin dan etoposida, tapi tidak
obat yang tidak terlibat dalam fenotipe MDR, seperti
cisplatin dan camptothecin [40,41]. Namun, meskipun
dalam berbagai model in vitro tumor MDR manusia
sel, resistensi terhadap vinflunine diidentifikasi dalam sel
Pgp yang terlalu banyak mengekspresikannya, sel MDR ini tampak agak
profil yang berbeda karena terbukti kurang lintas
resisten terhadap vinflunine relatif terhadap alkaloid Vinca lainnya
[40]. Lebih khusus lagi, MDR terkait Pgp
sublines, CEM / VBL1000 (leukemia manusia), MCF7 /
200R (karsinoma payudara manusia), T24M (kandung kemih manusia
karsinoma) dan P388 / ADR (murine leukemia)
kurang tahan terhadap vinflunin relatif terhadap vincristine
dan vinorelbine oleh faktor 2,5 sampai 13 kali lipat
[40]. Sensitivitas penuh terhadap vinflunine juga dipertahankan
sel yang mengekspresikan MDR non-Pgp-mediated alternatif
Mekanisme, seperti GLC4 / ADR (sel kecil manusia
kanker paru-paru) dan CEM / VM1 (limfoblastoid manusia
Sel T-sel leukemia) [40]. Mekanisme resistensi lainnya
dijelaskan untuk agen yang berinteraksi dengan mikrotubulus
Dilibatkan modifikasi tubulin. Penurunan tingkat
dari 4 formo tubulin telah dilaporkan baru-baru ini di a
subklinik kanker paru-paru manusia dipilih untuk ketahanan terhadap
vinflunine [41].
Meskipun vinflunine tampaknya menginduksi Pgp-mediated
resistensi, bisa ada implikasi klinis positif jika resistensi ini tidak akan berkembang dengan mudah.
Memang, dalam sebuah studi yang bertujuan untuk menetapkan apakah ada perbedaan tingkat dan
tingkat perkembangan perlawanan
baik in vivo maupun in vitro baik vinflunine atau vinorelbine di bawah kondisi seleksi yang sama,
Etie'vant et al. [41] menunjukkan bahwa perlawanan terhadap
vinflunine dihasilkan jauh lebih mudah daripada vinorelin. Studi in vivo, yang dilakukan dengan
menggunakan sel leukemia P388 murine, menunjukkan bahwa resistensi terhadap vinflunine dan
vinorelbine berkembang secara bertahap dari waktu ke waktu pada sel P388, seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 5 [41]. Namun, ketahanan lengkap terhadap vinflunine hanya didapat
setelah 36 perawatan mingguan, sedangkan ketahanan penuh terhadap
vinorelin sudah tercapai setelah 11 perawatan tersebut setiap minggu dengan dosis terapeutik yang
sebanding. Pendekatan serupa yang diterapkan secara in vitro mendukung temuan ini sejak periode
8 bulan diperlukan untuk menginduksi
resistansi pada sel-sel A549 (karsinoma paru-paru manusia) sehingga mereka dapat bertahan terus
menerus terhadap konsentrasi 2 × IC50 vinflunine, sedangkan pada percobaan serupa
Kondisi, resistensi terhadap vinorelbin sudah mudah
diperoleh (dalam 2 bulan) [41]. Oleh karena itu, secara ringkas,
Meskipun vinflunine tampaknya ikut serta
Pgp-mediated multidrug resistance, ini adalah yang kurang manjur
induser perlawanan seperti itu daripada vinorelin dan nampaknya
menjadi substrat yang lebih lemah untuk Pgp daripada Vinca lainnya
alkaloid, terutama vincristine dan vinorelbine, sebuah pengamatan
yang memiliki implikasi positif untuk klinisnya
pemakaian. tahan
Sel P388 / VFL. Sel-sel tahan vinflunine ini
juga ditandai dengan tingkat yang relatif lebih tinggi
ekspresi protein anti-apoptosis, Bcl-2 dan
Bfl-1 / A1 [42]. Singkatnya, penelitian ini menunjukkan hal itu
vinflunine mampu menginduksi kematian sel apoptosis pada P388
Sel leukemik, melibatkan serangkaian kejadian seluler semacam itu
sebagai caspase 3/7 aktivasi dan partisipasi yang pasti
Anggota keluarga Bcl-2 yang mungkin berperan dalam
respon seluler secara keseluruhan terhadap pengobatan vinflunine.