Review Article

Penambatan molekuler dan Studi in vitro senyawa flavonoid pada inducible nitric synthase
(iNOS)
Recky Patala
Abstract
Beberapa flavonoid, termasuk kuersetin, dilaporkan menunjukkan aktivitas penghambatan
terhadap Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS), sebuah isoenzim yang bertanggung jawab untuk
pembentukan nitric oxide. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan parameter
pengikatan dan penghambatan beberapa turunan kuersetin pada iNOS dengan metode penambatan
dan prediksi sifat absorpsi dan distribusi oral. Tujuh flavonoid terpilih dan sepuluh turunan
kuersetin digunakan sebagai ligan untuk penelitian ini. Struktur iNOS diperoleh dari data base
protein Brookhaven (PDB ID: 1M9T) dan studi penambatan dilakukan dengan menggunakan
perangkat lunak ArgusLab. Energi ikatan (ΔGbind) dan ikatan hidrogen digunakan untuk
menganalisis interaksi antara ligan dan sisi aktif iNOS. PreadMET on line program digunakan
untuk memprediksi sifat absorpsi dan distribusi oral termasuk permeabilitas sel Caco-2, HIA
(Human Intestinal Absorpition) dan ikatan protein plasma. Hasilnya menunjukkan bahwa ikatan
hidrogen yang terbentuk antara flavonoid dan iNOS selalu melibatkan kelompok amida residu
glisin (A365) dan tripsin (A366) pada sisi aktif iNOS dan gugus flavonoid 4-karbonil. Dalam
bentuk penambatan, daerah planar cincin A flavonoid berorientasi pada bidang heme dari iNOS.
Dengan demikian, gugus 4-karbonil dan daerah planar cincin A flavonoid sangat penting untuk
berikatan dengan iNOS. Regresi linier energi ikatan versus logaritma negatif IC50 flavonoid
memberikan persamaan –log IC50 = -0,399 ΔGbind = -5,608 (R2 = 0,686; p <0,01) dan prediksi IC50
Quercetin adalah 76,79 μM. Nilai Human Intestinal Absorpition (HIA) dan Caco-2 pada kuersetin
adalah 63,5% dan 3,4 nm detik-1 sedangkan ikatan protein plasma masing-masing 93,2%.
Quercetin-3-O-asetat, 6,8-dikloroquercetin-3-O-asetat dan 6-bromoquercetin-3-O-asetat
menunjukkan IC50 yang diperkirakan lebih rendah dan sifat absorpsi dan distribusi yang lebih baik
daripada kuersetin.

PENGANTAR

nitric oxide (NO) dihasilkan dari L-arginin dalam jaringan mamalia oleh enzim Nitric Oxide
Synthase (NOS). Ada tiga isoenzim NOS, yaitu, nNOS (konstitutif dalam jaringan saraf), eNOS
(konstitutif pada sel endotel vaskular) dan iNOS (diinduksi oleh sitokin dalam makrofag dan
hepatosit) (Knowles dan Moncada, 1994 ). Ekspresi konstitutif eNOS dan nNOS bertanggung
jawab untuk kadar fisiologis rendah NO, sedangkan jumlah yang lebih besar dari NO diproduksi
oleh iNOS. iNOS diinduksi oleh produk mikroba, seperti lipopolisakarida (LPS) dan sitokin
inflamasi seperti interleukin-1 (IL-1), tumor necrosis factor-α (TNF-α) dan interferon-γ (INF-γ)
dalam makrofag dan beberapa sel-sel lain (Hamalainen et al ., 2007). Produksi NO meningkat
pada respon terhadap rangsangan inflamasi dan memediasi efek destruktif (Korhonen et al.,
2005). Karena pentingnya NO yang berasal dari iNOS pada respon peradangan, ada beberapa
upaya penelitian untuk menemukan selektif inhibitor iNOS. Senyawa ekspresi penghambatan
atau aktivitas iNOS diusulkan menjadi potensi sebagai agen anti-inflamasi (Knowles dan
Moncada, 1994).

Flavonoid ( 1 Gbr. ) Adalah kelompok alami poli senyawa fenolik yang mengandung dua cincin
benzena dihubungkan bersama-sama dengan pyran heterosiklik atau cincin pyrone dan banyak
ditemukan dalam buah-buahan dan sayuran.

Gamb. 1: struktur umum flavonoid

Tabel 1: Struktur dan aktivitas in vitro penghambatan flavonoid dan energi ikatan yang
diprediksi pada iNOS

* IC50 nilai-nilai yang diambil dari Olszanecki et al. (2002)

Flavonoid telah dikenal untuk menunjukkan potensi manfaat kesehatan (Hamalainen et al .,
2007). Beberapa flavonoid telah dilaporkan memiliki sifat anti-inflamasi dengan menghambat
iNOS dalam medium kultur yang diransang LPS, yaitu, kaempferol, quercetin, apigenin,
primuletin, catechin, hesperetin dan naringenin (Tabel 1) (Olszanecki et al ., 2002). Quercetin
(3,3' , 4' , 5,7-pentahydroxyflavon) adalah flavonoid yang sesuai untuk dipilih sebagai senyawa
utama untuk pengembangan agen anti-inflamasi, karena selain efek anti-inflamasi, quercetin juga
menunjukkan efek pelindung dalam saluran pencernaan (Morikawa et al., 2003. ; Coskun et al .,
2004). Namun, penggunaan klinis dengan menggunakan quercetin dibatasi oleh bioavailabilitas
rendah oral (Peng et al., 2008). Dengan demikian, modifikasi molekul kuersetin diperlukan
untuk meningkatkan bioavailabilitas oral dan meningkatkan sifat farmakologinya.

Penambatan molekuler adalah alat dalam biologi molekuler struktural dan penemuan obat
berbasis struktur. Tujuan dari penambatan ligan-protein adalah untuk memahami dan
memprediksi pengenalan molekuler, menemukan kemungkinan mode ikatan dan memprediksi
afinitas pengikatan (Morris dan Lim-Wilby, 2008). ArgusLab 4.0.1. adalah perangkat lunak
penambatan yang tersedia secara bebas, yang menjalankan dua program penambatan, yaitu,
GADock dan ArgusDock ( ArgusLab, 2004 ). Program ini mampu untuk perhitungan ikatan
energi bebas antara protein dan ligan. Selanjutnya, ArgusLab adalah program yang mudah dan
murah yang berguna untuk penapisan virtual (Oda dan Takahashi, 2009).

Prediksi sifat ADME (absorpsi, distribusi, metabolisme dan ekskresi) telah dikembangkan untuk
mengurangi kemungkinan kegagalan pada tahap pengembangan kandidat obat. PreADMET
adalah aplikasi berbasis web untuk memprediksi data ADME dan membuat perpustakaan obat
menggunakan metode in silico. Program ini berguna untuk konstruksi sistem prediksi absorpsi
obat. Dalam absorpsi, aplikasi tersebut menyediakan model prediksi untuk uji in vitro sel Caco-
2 dan sel MDCK (Madin-Darby canine kidney) serta uji in silico HIA (human intestinal
absorption). Pada distribusi, aplikasi ini memberikan prediksi ikatan protein plasma dan
penetrasi BBB (blood brain barrier) (Lee et al ., 2003). Tujuan penelitian ini yaitu untuk
mendapatkan parameter ikatan dan penghambatan beberapa turunan quercetin pada iNOS dengan
metode penambatan dan prediksi sifat absorpsi dan distribusi oral.

BAHAN DAN METODE

Semua kegiatan penelitian dilakukan di Laboratorium Desain Obat dan High Computing,
Sekolah Farmasi ITB, Indonesia.

Model Struktural: Struktur koordinasi untuk iNOS diambil dari RCSB Protein Data Bank (PDB
ID: 1M9T), di mana domain inducible NOS oxygenase dicokristalisasi dengan 3-bromo-7-
nitroindazole (Rosenfeld et al , 2002.). Struktur 3D flavonoid dan turunannya quercetin pertama
dibuat menggunakan Arguslab 4.0.1., kemudian dioptimalkan menggunakan Austin Model 1
(AM1), maksimum 200 pengulangan, diikuti oleh minimisasi gradient konjugasi untuk Root
Mean Square (RMS) gradient energi 0,01 kkal / (mol Å) ( ArgusLab 4.0.1, 2004 ).

Penambatan Molekuler: Struktur dari kedua molekul protein dan ligan diekstraksi dari data
PDB dan digunakan dalam uji penambatan. Setelah menambahkan atom hidrogen, molekul ligan
diminimalkan dengan menggunakan Universal Force Field (UFF) diimplementasikan dalam
ArgusLab. Untuk uji penambatan, baik ArgusDock dan GADock dievaluasi; kemudian, hasilnya
dibandingkan. Pengaturan default dari fungsi penilaian dan fungsi biasa, digunakan untuk
penelitian ini. Selain itu, ukuran kotak yang terikat pada sisi ikatan ditentukan secara otomatis
menggunakan ArgusLab (16.452x15.215x14.010 Å). Root-mean-Square Deviation (RMSD)
antara struktur ligan eksperimental dan struktur ligan komputasi dihitung untuk mengevaluasi
akurasi kalkulasi pose; kalkulasi pose dengan RMSD yang kurang dari atau sama dengan 2,0 Å
yang didefinisikan sebagai pose yang layak. Metode divalidasi pada kalkulasi penambatan
kemudian digunakan untuk melakukan penambatan flavonoid dan turunannya quercetin pada sisi
ikatan iNOS. Afinitas pengikatan ditandai dengan nilai energi ikatan (ΔG) dan ikatan hidrogen
antara ligan dan enzim (Oda et al., 2007).

Memprediksi afinitas turunan quercetin pada iNOS: Data aktivitas biologis in vitro
dilaporkan sebagai IC50 untuk penghambatan iNOS oleh flavonoid yang digunakan untuk
penelitian ini (Olszanecki et al., 2002.). Kurva korelasi energi ikatan (ΔG, kkal mol-1) flavonoid
dengan iNOS untuk aktivitas eksperimental (-log IC50) dibuat. Persamaan regresi yang diperoleh
kemudian digunakan untuk menghitung prediksi IC50 turunan quercetin (Zheng et al., 2006.; Ji
dan Zhang, 2006).

Memprediksi sifat absorpsi dan distribusi menggunakan PreADMET: Program PreADMET

diakses di http://preadmet.bmdrc.org/. Struktur senyawa kimia digambar atau diupload dari
Molfile (*.mol). Program ini secara otomatis menghitung prediksi parameter adsorpsi dan
distribusi yang kita digunakan, yaitu, permeabilitas untuk sel Caco-2, HIA (human intestinal
absorption) dan ikatan protein plasma (PreADMET, 2010).

HASIL

Akurasi metode penambatan: Arguslab memiliki dua program penambatan, yaitu, ArgusDock
dan GADock. Selain itu, nilai Å yang digunakan adalah sebagai fungsi penilaian. Kami
membandingkan akurasi ArgusDock dan GADock, dengan mengukur Root Mean Square
Deviation (RMSD) pada koordinat Cartesian dari atom ligan (3-bromo-7-nitroindazole) di
konformasi penambatan dan kristalografi. Sebuah metode penambatan umumnya dianggap
berhasil jika nilai RMSD kurang dari 2A (Morris dan Lim-Wilby, 2008). Dalam penelitian ini,
program ArgusDock gagal melakukan perhitungan penambatan akurat, karena nilai RMSD
adalah 5,9067 Å. Namun, program GADock memberikan hasil yang lebih baik. Gambar
2 menunjukkan superposisi konformasi 3-bromo-7-nitroindazole dari struktur kristal X-ray
kompleks 3-bromo-7-nitroindazole-iNOS dari perhitungan penambatan oleh program
GADock. Nilai RMSD antara dua konformasi hanya 1,3494 Å, yang menunjukkan bahwa
parameter ditetapkan untuk penambatan yang mampu mereproduksi struktur X-ray. Selain itu,
kedua ligan (ligand asli dan dari simulasi penambatan) berinteraksi dengan residu sama iNOS,
yaitu, Met368, sehingga program ini kemudian digunakan untuk melakukan perhitungan
penambatan dari flavonoid dan turunannya quercetin.

Gamb. 2: perbandingan konformasi 3-bromo-7-nitroindazole dari struktur kristal

kompleks 3-bromo-7-nitroindazole-iNOS (merah) dan dari simulasi
penambatan menggunakan program GADock (biru)

Gamb. 3: Superimposisi konformasi pengikatan flavonoid (hijau) pada sisi ikatan

iNOS. ikatan hidrogen ditandai dengan garis merah.
 Gamb. 4: Korelasi prediksi energi ikatan (ΔG, kkal mol -1) flavonoid dengan iNOS
pada aktivitas eksperimental (-log IC50)

Penambatan molekul flavonoid: Struktur flavonoid yang dipilih yaitu, kaempferol, quercetin,
apigenin, primuletin, catechin, hesperetin dan naringenin (Tabel 1) digunakan sebagai ligan
untuk penambatan molekuler pada sisi ikatan iNOS. Dengan menggunakan metode GADock,
penambatan tujuh flavonoid dengan iNOS dan afinitas ikatan ditandai oleh energi ikatan
(ΔG). Gambar 3 menunjukkan barisan dari konformasi ikatan flavonoid pada iNOS.

Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 4 , ada korelasi antara nilai eksperimental (ditunjukkan oleh
IC50) dan parameter teoritis (diukur dengan energi ikatan), yang benar dengan model struktural
dan metode penambatan:

korelasi ini menunjukkan bahwa nilai ΔG dihitung dengan metode GAdock dapat digunakan
untuk memprediksi aktivitas penghambatan iNOS dari turunan quercetin.
 Tabel 2: Struktur turunan Quercetin, energi ikatan dan prediksi aktivitas penghambatan
pada iNOS.

Memprediksi afinitas turunan quercetin pada iNOS: Menerapkan persamaan di atas, prediksi
nilai IC50 dari turunan quercetin (Tabel 2) dihitung. Gambar 5 menunjukkan interaksi 6, 8-
dichloroquercetin-3 -O- asetat pada sisi ikatan iNOS, dibandingkan dengan quercetin, energi
ikatan quercetin-3-O- asetat, 6,8-dichloroquercetin-3 -O- asetat dan 6-bromoquercetin-3- O -
asetat lebih rendah dari quercetin, menunjukkan bahwa senyawa ini diusulkan sebagai inhibitor
iNOS yang lebih kuat.
Ara. 5: (a) Interaksi quercetin dan (b) 6,8-dichloroquercetin-3- O -acetate pada sisi ikatan iNOS

Tabel 3: Prediksi sifat absorpsi dan distribusi turunan kuersetin

Prediksi sifat absorpsi dan distribusi: Tabel 3 menunjukkan nilai prediksi absorpsi dan
distribusi quercetin dan turunannya. Quercetin diprediksi absorpsi rendah dan senyawa
permeable rendah, serta sangat terikat. Ini bukan sifat baik untuk kandidat obat oral. Sebaliknya,
prediksi sifat absorpsi dan distribusi beberapa turunan kuersetin yang diusulkan lebih potensial
sebagai inhibitor iNOS dari quercetin, yaitu quercetin-3-O- asetat, 6,8-dichloroquercetin-3-
O- asetat dan 6-bromoquercetin-3 -O- asetat, umumnya lebih baik daripada
quercetin. Quercetin-3-O- asetat diperkirakan diabsorpsi baik dan senyawa ikatan lemah. Selain
itu, 6,8-dichloroquercetin-3-O- asetat dan 6-bromoquercetin-3 -O- asetat, diprediksi diabsorpsi
baik dan senyawa permeabilitas setengah.

DISKUSI

Prediksi interaksi antara struktur 3D protein dan ligan yang berbeda dengan penambatan
molekular membantu peneliti untuk mengetahui aspek-aspek penting seperti sisi aktif, energi
ikatan, dll. Teknik in silico ini sangat berguna dalam tahap awal penemuan obat (Amir et al .,
2010 ). ArgusLab adalah salah satu perangkat lunak komputasi dilengkapi dengan dua alat
penambatan molekuler, yaitu ArgusDock dan GADock. Oda et al., (2007) melaporkan bahwa
GADock lebih unggul dalam hal akurasi dari ArgusDock. Hasil validasi kami berdasarkan nilai
RMSD juga menunjukkan bahwa GADock memberikan akurasi yang lebih baik daripada
ArgusDock.

Setelah divalidasi, program GADock digunakan untuk melakukan penambatan molekular antara
sisi ikatan iNOS dan flavonoid. Secara umum, flavonoid terdiri dari 2 cincin benzena (A dan B),
yang dihubungkan oleh sebuah cincin pyrane mengandung oksigen (C). Struktur X-ray 3-bromo-
7-nitroindazole, sebuah iNOS inhibitor, menunjukkan bahwa cincin aromatik dari 3-bromo-7-
nitroindazole mengikat kantung heme iNOS. Selain itu, bagian nitro membentuk ikatan hidrogen
dengan gugus amida dari Met368. Flavonoid dapat menambat sama sebagai 3-bromo-7-
nitroindazole dengan bagian planar cincin A flavonoid berorientasi terhadap bidang heme
iNOS. Menurut Rosenfeld et al . (2002) , ketika terikat NOS, sistem planar menunjukkan
afinitas tinggi dibandingkan dengan sistem nonplanar. Kelompok karbonil flavonoid membentuk
ikatan hydrogen dengan kelompok amida dari Gly365 dan Trp366.

Studi sebelumnya menggambarkan interaksi ligan pada iNOS dilaporkan oleh Francis et
al. (2008) . Dilaporkan bahwa sisi aktif dari NOS terdiri dari empat kantung, yaitu substrat yang
mengikat kantung S, kantung tengah M, kantung C1 dan kantung C2 pada akses kanal
substrat. Residu Trp372 dan Glu377 dalam kantung S (iNOS) telah ditemukan menjadi residu
utama dengan substrat (L-arginin) membentuk ikatan hidrogen. Hasil penelitian kami
menunjukkan bahwa flavonoid membentuk ikatan hidrogen dengan residu Gly365 dan
Trp366. Namun, ada perbedaan struktural yang jelas antara L-arginin dan flavonoid sebagai ligan
karena menyebabkan berbagai residu asam amino dari iNOS yang mengambil bagian dalam
interaksi.

Berdasarkan studi dari interaksi antara flavonoid dan sisi ikatan iNOS, afinitas turunan quercetin
pada sisi ikatan iNOS diprediksi. Diperoleh bahwa nilai energi ikatan dari quercetin-3 -O- asetat,
6,8-dichloroquercetin-3 -O- asetat dan 6-bromoquercetin-3 -O- asetat lebih rendah dari
quercetin, menunjukkan bahwa senyawa ini memiliki afinitas tinggi pada sisi ikatan iNOS dari
quercetin. Sifat penghambatan iNOS dari senyawa ini belum dilaporkan. Sebagian besar
publikasi (Hu dan Kitts 2004 ; Hamalainen et al , 2007. ; Wan et al ,. 2009 ) melaporkan efek
penghambatan flavonoid pada ekspresi genetik iNOS bukan sifat penghambatan iNOS dari
turunan quercetin. Informasi yang paling relevan dengan pekerjaan kami yang dilaporkan
oleh Chen et al . (2001) di mana quercetin pentaasetat meningkatkan aktivitas iNOS untuk
membentuk Nitric Oxide (NO), dibandingkan dengan quercetin.

Absorpsi dan distribusi, bagian dari farmakokinetik, dianggap sebagai parameter penting untuk
memilih senyawa sebagai kandidat obat. Dalam studi ini, tiga parameter dari program
PreADMET dihitung untuk quercetin dan turunan quercetin. PreADMET menampilkan prediksi
sifat penyerapan, termasuk permeabilitas sel Caco-2 serta persen human intestinal absorption (%
HIA). Model sel Caco-2 dipercaya untuk model in vitro untuk prediksi penyerapan obat oral,
sedangkan HIA adalah jumlah bioavailabilitas dan penyerapan yang dievaluasi dari rasio
ekskresi atau ekskresi kumulatif dalam urin, empedu dan feses. Untuk sifat distribusi, kami
menggunakan perhitungan prediksi ikatan protein plasma yang tersedia dalam program
PreADMET. Hanya obat yang tidak terikat yang tersedia untuk difusi atau transportasi melintasi
membran sel dan juga untuk interaksi dengan target farmakologis; Oleh karena itu, ikatan protein
plasma dengan obat memainkan peran penting dalam keberhasilan obat ( Lee et al ., 2003 ).

Meskipun, quercetin telah dibuktikan dapat melakukan beberapa aktivitas biologis yang
bermanfaat, konsentrasi tinggi yang efektif dan sifat penyerapan yang kurang, terbatas untuk
aplikasi praktis. Gugler et al . (1975) telah mempelajari profil farmakokinetik quercetin. Hal itu
mengakibatkan bahwa setelah pemberian iv, ikatan protein dari quercetin lebih tinggi dari
98%. Setelah pemberian oral tidak ada ukuran konsentrasi plasma dari quercetin yang dapat
dideteksi, maupun tidak ditemukan dalam urin, baik dalam tidak berubah atau sebagai bentuk
dimetabolisme. Hal itu diusulkan bahwa penyerapan quercetin sangat rendah. Nilai prediksi
kami dari sifat farmakokinetik dari quercetin dihitung dengan PreADMET menunjukkan hasil
yang sama. Di sisi lain, profil farmakokinetik beberapa turunan kuersetin, termasuk quercetin-3
-O- asetat, 6,8-dichloroquercetin-3 -O- asetat dan 6-bromoquercetin-3 -O- asetat, yang
diprediksi akan lebih baik dari kuersetin. Disarankan bahwa modifikasi molekul oleh asetilasi
dan halogenations meningkatkan lipofilisitas dari quercetin dan selanjutnya ditingkatkan
penyerapan oral. Selain itu, modifikasi ini juga mengurangi ikatan protein quercetin.

KESIMPULAN

Metode GAdock lebih cocok untuk memprediksi aktivitas penghambatan iNOS dari turunan
quercetin. Dengan menggunakan metode GAdock, penambatan komputasi flavonoid pada sisi
ikatan iNOS mengakibatkan korelasi antara nilai eksperimental (IC50) dan parameter teoritis
(energi ikat). Quercetin-3 -O- asetat, 6,8-dichloroquercetin-3 -O- asetat dan 6-bromoquercetin-
3 -O- asetat yang diusulkan untuk menjadi lebih potensial sebagai iNOS inhibitor dari
quercetin. prediksi sifat penyerapan dan distribusi dari senyawa ini yaitu human intestinal
absorption, permeabilitas sel Caco-2 dan persen ikatan plasma protein lebih baik daripada
quercetin.
REFERENSI
Amir, A., MA Siddiqui, N. Kapoor, A. Arya dan H. Kumar, 2011.Dalam silico docking molekul
virus influenza (PB2) protein untuk memeriksa khasiat obat. . Tren Bioinform, 4: 47-55.
CrossRef | Direct Link |

ArgusLab 4.0.1, 2004.Software Planaria LLC. Seattle.

Chen, YC, SC Shen, WR Lee, WC Hou, LL Yang dan TJF Lee, 2001.Penghambatan nitrat
inhibitor sintase oksida dan lipopolisakarida yang diinduksi diinduksi NOS dan ekspresi
siklooksigenase-2 gen dengan rutin, kuersetin dan kuersetin pentaasetat di RAW 264.7
makrofag. J. Sel. Biochem, 82:. 537-548.
CrossRef | PubMed | Direct Link |

Coskun, O., M. Kanter, F. Armutcu, K. Cetin, B. Kaybolmaz dan O. Yazgan 2004.Efek protektif
dari quercetin, antioksidan flavonoid, di mutlak etanol yang diinduksi acut tukak
lambung. Eur. J. Jenderal Med, 1:. 37-42.
Direct Link |

Francis, SM, A. Mittal, M. Sharma dan PV Bharatam 2008.Desain Benzene-1,2-diamina sebagai

selektif diinduksi inhibitor sintase oksida nitrat: Sebuah dikombinasikan de novo desain dan
docking analisis. J. Mol. Model, 14:. 215-224.
CrossRef |

Gugler, R., M. Leschik dan HJ Dengler 1975.Disposisi dari quercetin pada manusia setelah dosis
oral dan intravena tunggal. Eur. J. Clin. Pharm, 9:. 229-234.
CrossRef |

Hamalainen, M., R. Nieminen, P. Vuorela, M. Heinonen dan E. Moilanen 2007.Efek anti-

inflamasi flavonoid: Genistein, kaempferol, quercetin, dan daidzein menghambat STAT-1 dan
NF-kB aktivasi, sedangkan flavon, isorhamnetin, naringenin, dan pelargonidin inhihibit hanya
aktivasi NF-kB bersama dengan efek penghambatan terhadap iNOS ekspresi dan NO produksi
dalam makrofag diaktifkan. Mediator Inflamm, 2007:. 1-10.
CrossRef |

Hu, C dan DD Kitts 2004.Luteolin dan luteolin-7-O-glukosida dari bunga dandelion menekan
iNOS dan COX-2 dalam sel RAW264.7. Mol. Sel. Biochem, 265:. 107-113.
CrossRef |
Ji, HF dan HY Zhang, 2006.Evaluasi teoritis flavonoid sebagai agen multipoten untuk
memerangi penyakit Alzheimer. J. Mol. Struct. THEOCHEM, 767: 3-9.
CrossRef |

Knowles, RG dan S. Moncada, 1994.Oksida nitrat synthasein mamalia. Biochem. J., 298: 249-
258.
Direct Link |

Korhonen, R., A. Lahti, H. Kankaanranta dan E. Moilanen 2005.Produksi oksida nitrat dan sinyal
peradangan. Curr. Obat Target Inflamm. Alergi, 4: 471-479.
PubMed |

Lee, SK, IH Lee, HJ Kim, GS Chang, JE Chung dan KT No 2003.The PreADME Pendekatan:
Program Berbasis Web untuk Prediksi Cepat Fisiko-Kimia, Penyerapan Obat dan Obat-Like
Properties. Blackwell Publishing, Massachusetts, pp: 418-420.

Morikawa, K., M. Nonaka, M. Narahara, I. Torii dan K. Kawaguchi et al ., 2003.Efek

penghambatan kuersetin pada peradangan karagenan diinduksi pada tikus. Hidup Sci, 26:. 709-
721.
CrossRef |

Morris, GM dan M. Lim-Wilby 2008.Docking molekular, Metode dalam Biologi

Molekuler. Dalam: Molecular Modeling Protein, Kukol, A. (Ed.). Humana Press, Totowa, New
Jersey, pp: 365-382.

Oda, A. dan O. Takahashi, 2009.Validasi efisiensi arguslab untuk mengikat perhitungan energi
bebas. Chem-Bio. Informatika J., 9: 52-61.

Oda, A., M. Okayasu, Y. Kamiyama, T. Yoshida, O. Takahashi dan H. Matsuzaki 2007. Evaluasi
akurasi docking dan investigastions peran dari parameter dan setiap istilah dalam fungsi
mencetak gol untuk docking protein-ligan menggunakan software
arguslab. Banteng. Chem. Soc. Jap, 80:. 1920-1925.
CrossRef |

Olszanecki, R., A. Gebska, VI Kozlovski dan RJ Gryglewski 2002.Flavonoid dan oksida nitrat
sintase. J. Physiol. Pharmacol, 53:. 571-584.
Direct Link |

Peng, Y., Z. Deng dan C. Whang, 2008.Studi Persiapan dan prodrug dari quercetin
pentabenzensulfonate. Yakugaku Zasshi, 128: 1845-1849.
Direct Link |

Rosenfeld, RJ, ED Garcin, K. Panda, G. Andersson dan A. Aberg et al ., 2002.Perubahan

konformasi dalam Sintase nitrat oksida yang disebabkan oleh chlorzoxazone dan nitroindazoles:
analisis Kristalografi dan komputasi potensi inhibitor. Biokimia, 41: 13.915-13.925.
PubMed |

Wan, LL, J. Xia, D. Ye, J. Liu, J. Chen dan G. Wang, 2009.Efek dari quercetin pada gen dan
protein ekspresi NOx dan NOS setelah iskemia miokard dan reperfusi pada
kelinci. Cardiovasc. Ther, 27:. 28-33.
PubMed |

Zheng, M., Z. Zhang, W. Zhu, H. Liu, X. Luo, K. Chen dan H. Jiang, 2006.Profil struktural
penting dari inhibitor fungsional ganda terhadap siklooksigenase-2 (COX-2) dan 5-lipoxygenase
(5-LOX): docking Molekuler dan 3D-QSAR analisis pada analog DHDMBF. Bioorganik
Med. Chem, 14:. 3428-3437.
CrossRef |