Los espectros de absorción ultravioleta, la fluorescencia y
fosforescencia de excitación y espectros de emisión de dieciséis
barbitúricos y ciertos compuestos modelo tienen
han examinado y correlacionados. La estructura de la fluorescente
dianión en los barbitúricos 5,5 - disustituido era
se muestra. La fosforescencia se observó a una longitud de onda
menor
que la de la fluorescencia indicador a temperatura ambiente
para los barbitúricos que contienen un sustituyente 5 - fenilo.
La fluorescencia derivada de la dianiónico
forma de anillo heterocíclico , mientras que la fosforescencia
derivado del núcleo aromático . Los efectos de
interacciones estéricas y el pH sobre la fosforescencia de la
Se discuten fenilo sustituido barbitúricos. detección
límites a temperatura ambiente y a 77 K para los barbitúricos
de uso común se han determinado .
Las propiedades de luminiscencia de los oxybarbiturates
han sido estudiados por varios grupos de trabajadores (1-5) por lo
general
con la intención de desarrollar métodos analíticos
a niveles de microgramos o submicrogram. En algunos casos,
sólo
características de fluorescencia a temperatura ambiente han sido
descrito, pero más recientemente el desarrollo de baja temperatura
(77 K) técnicas ha permitido observaciones de
fosforescencia también (5-7).
Muchos oxybarbiturates exhiben una fluorescencia analíticamente
útil
en soluciones alcalinas a temperatura ambiente.
Los que contienen grupos N-metilo, sin embargo, son
prácticamente
no fluorescente. Los barbitúricos que contienen un anillo de fenilo
en
la posición 5 puede presentar una bastante fuerte fosforescencia,
con una vida útil de varios segundos, incluso cuando Nmethyl
grupos también se incorporan. Los presentes trabajadores,
y más recientemente Miles y Schenk (7) han señalado que
este fosforescencia se produce a una longitud de onda más corta
que
la fluorescencia a temperatura ambiente.
En un intento de explicar estos fenómenos, el pH-dependencia
de los espectros de absorción y emisión de una
número de oxybarbiturates se han estudiado. Los resultados
que aquí se presenta puede permitir el análisis de luminiscencia
estas moléculas para proceder sobre una base teórica sólida,
y proporcionar más información sobre la estructura-luminiscencia
relaciones en especies heterocíclicos.
EXPERIMENTAL
estudiados se muestran en la Tabla I: la fusión
puntos estaban dentro de 2 "C de valores de la literatura, y se les
mostró
a ser homogénea utilizando la técnica de cromatografía en capa
fina
de Bogan, Rentoul, y Smith (8). Ácido 5-Ethylbarbituric,
pf 190-191 "C; ácido 5-phenylbarbituric, pf 265-266" C; y 5-
ácido benzylbarbituric, pf 209-210 "C se prepararon por
condensación
del éster malónico apropiado con urea en presencia de
etóxido de sodio; el éxito de estas síntesis se verificó utilizando
Espectroscopía de RMN y espectrometría de masas. Otros
barbitúricos
fueron regalos de las empresas nombradas en la tabla I.
Tampones de acetato se utilizaron para obtener soluciones con
valores de pH en el
rango de 3.6 a 5.4; tampones de fosfato en el rango de 6,0 a 8,4; y
borato
tampones en el rango de 8,4 a 10,0. Soluciones con pH por debajo
de 2,0 y
por encima de 10,0 se obtuvieron utilizando ácido clorhídrico
diluido y sodio
hidróxido, respectivamente. Todos los valores de pH fueron
medidos a temperatura ambiente
con un Pye Unicam 290-pH-metro.
No corregida de excitación, fluorescencia y fosforescencia
espectros,
vidas fosforescencia, y los límites de detección se determinaron
usando un espectrofluorímetro Baird-Atómica SFlOOE, como
anteriormente
descrito (5). Se determinaron los rendimientos cuánticos relativos
utilizando longitudes de onda de excitación y emisión de 260 y
405 nm, respectivamente.
Las soluciones que contienen aproximadamente 30 pg de
barbitúricos
por ml de NaOH 0,1 M etanólicos se utilizaron. Todas las
soluciones tenían
densidades ópticas de 50.02. Los disolventes utilizados para baja
temperatura
trabajo se obtuvieron mediante la adición de volúmenes iguales
de etanodiol a la
soluciones acuosas adecuadas. El agua se destiló tres veces
de un todo-vidrio se purificó aparato y etanol como anteriormente
descrito (5).
Los espectros de absorción ultravioleta se midieron a temperatura
ambiente
con un SPBOOO espectrofotómetro Pye Unicam-, usando 10-mm
células de sílice camino de longitud.
RESULTADOS
Absorción Spectra. Tabla I1 muestra la absorción principal
máximos y coeficientes de extinción molar de varios
oxybarbiturates importantes a diversos valores de pH. En
los espectros de ácido barbitúrico (Figura l), las curvas obtenidas
en el rango de 1,0 a 7,0 pH aparentemente pasado a través
un único punto isosbéstico. No hubo cambios en el
espectro entre pH 7,0 y pH 10,0, pero por encima de pH 10
hubo un desplazamiento batocrómico en el máximo de absorción
y una disminución en el coeficiente de extinción. Todos
curvas en esta región de pH alcalino pasan a través de un nuevo
punto isosbéstico. Concentraciones de hidróxido de sodio
mayores
de 1 M no produjo más cambios en el espectro. Todos
los cambios descritos podrían revertirse mediante la adición de
ácido a la solución.
La sustitución de un grupo alquilo o arilo individual en la
posición 5
no tuvo ningún efecto notable sobre estos fenómenos: así, 5-
etil-, 5-fenil-, y los ácidos 5-benzylbarbituric todos tenían
propiedades similares a las de la propia ácido barbitúrico.
Los espectros de absorción de 5-fenil-5 ethylbarbituric
ácido (fenobarbital) a diferentes valores de pH se muestran en la
Figura 2. Dos puntos isosbésticos se encontraron de nuevo, pero
estos
eran distintas de las de ácido barbitúrico. Una vez más un
batocrómico
cambio se observó en las altas de pH, con un acompañante
ligero descenso en el coeficiente de extinción. Las propiedades
de ácido 5-fenil-5 methylbarbituric (rutonal) eran muy
similar. Todos los barbitúricos con un sustituyente 5 - fenil mostraron
una
luminiscencia retardada a 77 K , con toda una vida de varios
Espectros Methylphenobarbitone (Figura 3 ) mostró sólo una segundos . Esta emisión tuvo una intensidad máxima a ca.
isosbestic punto único , que se produjo en una longitud de onda 395 nm y mostró un grado considerable de estructura fina ,
similares similar a la que se encuentra en el espectro de fosforescencia
a la del punto isosbéstico de bajo pH en el fenobarbital . de tolueno (Figura 6 ) . Además, excepto en el
1,3 - Dimethylphenobarbitone , sin embargo, tenía un espectro de caso del ácido 5 - phenylbarbituric , que se mantuvo durante
absorción que era independiente del pH , con una
todo el rango de pH de 0-14 , aunque algunos cambios en el
fuerte absorción por debajo de 235 nm
curso de la vida
¿Ocurrió (Tabla VI ) . Benzylbarbituric fue también
Fluorescencia espectros a temperatura ambiente. A los 20
fosforescente, pero sólo en solución alcalina .
"C, la fluorescencia del ácido barbitúrico, 5-ethylbarbituric
ácido, y el ácido 5-benzylbarbituric en NaOH acuoso 0,1 M
DISCUSIÓN
mostró una emisión muy débil a aproximadamente 400 nm.
Cualquier intento de interpretar espectros de luminiscencia en
La intensidad en cada caso fue 50% menos que el disolvente
la
Raman dispersión de la señal. Ácido 5-Phenylbarbituric
base de la espectroscopia de absorción se basa en la suposición
mostró una
que el pKa valores para cada sustancia en el emocionado
fluorescencia más intensa (A, = 300 nm, Xf = 410 nm)
Estado son similares a los de la planta correspondiente
que, sin embargo, permaneció menos intenso thanthat de una
moléculas estatales , un supuesto que no siempre es bien
típica
fundado
Barbitúrico 5,5-disustituido (Figura 4). En punto muerto
( 9 ) . Sin embargo, en las especies estudiadas aquí , la
etanol, ácido 5-phenylbarbituric era no fluorescente, pero la
grandes cambios en la intensidad fluorescente se produjo a un
fluorescencia reapareció en la adición de NaOH a una
pH
concentración final de 0,1 M.
similar a la que, cuando los espectros de absorción también
La mayoría de los barbitúricos 5,5-disustituidos eran
cambió .
fluorescente
Los espectros de absorción ultravioleta de los oxybarbiturates
en solución alcalina, la excitación y emisión
fueron estudiados por primera vez en detalle por Fox y Shugar
espectros de fenobarbital (Figura 5) que es típico. Este
( IO ) ,
fluorescencia tuvo una intensidad máxima a pH 13,0 a 13,5,
que mostraron que , en el caso de sí mismo ácido barbitúrico ,
y que no estaban en casa de pH por debajo de 10.0. Emisión y
la
fluorescencia
la forma triketo (I) era estable a pH de ácido . En el rango de
longitudes de onda y los límites de detección para estos
pH
compuestos
7-10 el mono- anión formado podría ser estabilizado por
se enumeran en la Tabla 111. especies con aromático o
tautomería
sustituyentes alifáticos insaturados (compuestos 5, 6, 12
(I1 y 111 )
15) tenían una fluorescencia menos intenso que los demás.
Absoluto
Esta hipótesis fue apoyada por el resultado de que la
rendimientos cuánticos no fueron determinadas, pero la
relación propiedades espectrales de ácido methylbarbituric eran
rendimientos cuánticos de algunos de los barbitúricos se dan idénticos
en a las del compuesto original. En el presente trabajo la
espectros obtenidos para el ácido barbitúrico son similares a
Tabla IV. Derivados N-Methyl de barbitúricos 5,5
los o
disustituidos
(Es decir., Compuestos 17-21) eran no fluorescente en
absoluto Fox y Shugar , y su hipótesis se ve apoyada
de pH. por el hallazgo de que la sustitución de un único átomo de
Luminiscencia espectros a 77 K. En una 1: l v / v de agua: hidrógeno
etanodiol disolvente que contiene 0,1 M de NaOH, los en la posición 5 (compuestos 2-4) tiene poco efecto sobre la
barbitúricos ssectra .
listado en la Tabla V tenía propiedades de fluorescencia
similares
a las exhibidas a temperatura ambiente, aunque una ligera
azul cambio se observó en los máximos de longitud de onda
de la
absorción y espectros de emisión. Una vez más la
fluorescencia de
estos compuestos sólo se observó en solución alcalina,
pero en las mismas condiciones de barbitúricos con alilo y
otros sustituyentes insaturados no aromáticos (compuestos
12-15) fueron sólo débilmente luminiscente.