Artigo

DETERMINAÇÃO DE GLICERINA LIVRE E TOTAL EM

BIODIESEL B100 CONFORME MÉTODOS OFICIAIS
RESUMO
Fausto Munari,
Daniela Cavagnino e
Os conteúdos de glicerina livre e total no biodiesel B100 são indicadores da quali- Andrea Cadoppi
dade deste combustível. Níveis altos de glicerina e glicerídeos no biodiesel podem
Thermo Fisher Scientific,
causar problemas de entupimento nos motores, além de diminuir a estabilidade Milan, Italy
deste produto durante o seu armazenamento. Os limites máximos de glicerina livre
e total aceitos no biodiesel estão definidos em normas oficiais, que estabelecem a Correspondência:
Nova Analítica Imp. Exp. Ltda.
cromatografia a gás como o método a ser empregado na determinação dos conte- R. Assungui, 432
údos destas substâncias. Este trabalho apresenta os resultados obtidos na deter- CEP: 04131-000
minação de glicerina livre e total em amostras de biodiesel B100, segundo a norma São Paulo. SP
Fone: (11) 2162-8080
EN 14105, com o cromatógrafo a gás TRACE GC Ultra e o amostrador automático Fax: (11) 2162-8081
TriPlus (Thermo Scientific).

Palavras-chave: biodiesel, cromatografia a gás, glicerina livre, glicerina total, inje-

ção cold on-column

SUMMARY

Free and bonded glycerin contents are an indicator of the biodiesel quality. High
levels of glycerin and glycerides can cause injector deposits, clogged fuelling sys-
tems and problems during storage. Maximum free and total glycerin contents in
biodiesel B100 are specified in official standards that define the gas chromatogra-
phy as the standard method for this analysis. This paper relates specifically to the
use of the Thermo Scientific TRACE GC Ultra and TriPlus autosampler for use in the
determination of free and total glycerin in biodiesel, according to EN 14105.

Keywords: biodiesel, gas chromatography, free glycerin, total glycerin, cold on-
column injection

INTRODUÇÃO

O interesse no biodiesel como um combustível al-
ternativo tem crescido muito nos últimos anos, princi-
palmente devido ao seu baixo impacto ambiental em
comparação ao óleo diesel e por ser obtido a partir de
fontes renováveis.
Para ser comercializado, o biodiesel deve atender
às especificações definidas em normas oficiais que in-
dicam as características do produto a serem contro-
ladas e seus respectivos valores aceitos. O processo
mais usual de produção de biodiesel é a transesteri-
ficação de óleos vegetais com metanol, cujo produto
são os ésteres metílicos de ácidos graxos. Além dos
ésteres metílicos desejados, o produto deste proces-
so pode conter a matéria-prima não reagida (triglicerí-
deos) e metanol residual, além de traços de glicerina,
um sub-produto separado do biodiesel durante o pro-
cesso de fabricação, e traços de mono e diglicerídeos
formados como intermediários da reação. A qualidade
do biodiesel B100 é controlada, entre outras caracte-
rísticas, pelos seus conteúdos de glicerina livre e total,
determinados segundo as normas EN 14105 e ASTM
D6584 (1 e 2), que definem a análise da amostra por
cromatografia em fase gasosa, após derivatização com
N-metil-N-trimetilsilil-trifluoroacetamida (MSTFA). A ca-
libração é feita pelo emprego de dois padrões internos:
1,2,4-Butanotriol para a glicerina e tricaprina para a

60 Revista Analytica • Fevereiro/Março 2009 • Nº39

determinação de mono, di e triglicerídeos, respectiva-
mente. O conteúdo de glicerina combinada na amostra,
para determinação da glicerina total, é calculado pela
aplicação de fatores de conversão médios aos mono,
di e triglicerídeos.
A amostra deve ser introduzida na coluna capilar
através de um sistema de injeção capaz de transferir
tanto os compostos voláteis quanto os menos voláteis,
sem discriminação ou degradação.
Este trabalho descreve um método gás cromatográ-
fico para a determinação de glicerina livre e total em
biodiesel B100, segundo a norma EN 14105, com o em-
prego de um cromatógrafo a gás TRACE GC Ultra e um
amostrador automático TriPlus (Thermo Scientific).
MATERIAIS E MÉTODOS
Reagentes necessários
N-metil-N-trimetilsilil-trifluoroacetamida (MSTFA)
n-Heptano
Piridina
1,2,4-Butanotriol – solução 1 mg/mL em piridina (pa-
drão interno 1)
1,2,3-Tricaproilglicerol (tricaprina) – solução 2,8 mg/mL
em piridina (padrão interno 2)
Materiais de referência: glicerina, mono, di e trioleína
Mistura padrão de monoglicerídeos (monopalmitina,
monoestearina e monooleína)
Soluções de calibração
Quatro soluções de calibração contendo gliceri-
na, mono, di e trioleína, butanotriol (padrão interno 1)
e tricaprina (padrão interno 2), diluídas em piridina nas
Figura 1. Esquema do sistema gás cromatográfico. 1: controle digital dos fluxos de gases; 2: injetor cold on-column; 3: pré-coluna; 4. restritor
calibrado; 5: linha de gás de arraste auxiliar; 6: conector metálico em T, com purga de gás de arraste; 7: coluna analítica; 8: detector
Revista Analytica • Fevereiro/Março 2009 • Nº39
concentrações especificadas na norma EN 14105, fo-
ram adquiridas da Sigma-Aldrich. Uma alíquota de
100 µL do reagente derivatizante (MSTFA) foi adiciona-
da a cada solução de calibração. Os vials foram fecha-
dos e agitados vigorosamente por 15 min. Em seguida,
8 mL de n-heptano foram adicionados a cada vial. Após
homogeneização, cada solução foi injetada no croma-
tógrafo a gás.
Preparação da amostra
De cada amostra de biodiesel a ser analisada, uma
alíquota com cerca de 100 mg foi transferida para vial de
10 mL e pesada com precisão (± 0,1 mg). Em seguida,
foram adicionados 80 µL do padrão interno 1, 100 µL
do padrão interno 2 e 100 µL do derivatizante MSTFA.
Os vials com amostra foram fechados e agitados vigo-
rosamente por 15 min. Em seguida, 8 mL de n-heptano
foram adicionados a cada vial e após homogeneização
a amostra foi injetada no cromatógrafo a gás.
Condições cromatográficas
A análise de glicerina, mono, di e triglicerídeos por
cromatografia a gás requer um sistema de injeção ca-
paz de transferir tanto os compostos voláteis quanto
os menos voláteis, sem discriminação ou degradação.
Neste trabalho, o cromatógrafo a gás empregado foi um
TRACE GC Ultra equipado com injetor cold on-column,
detector de ionização em chama (FID), amostrador
automático TriPlus e sistema de dados ChromQuest
(Thermo Scientific). A coluna analítica empregada foi
a TRACE TR-BioDiesel(G) (Thermo Scientific), apolar,
com 10 m de comprimento, 0,32 mm de diâmetro in-
terno e 0,1 μm de espessura de filme. Uma pré-coluna
61
Artigo
com 1m x 0,53 mm d.i. foi conectada à coluna analítica
por um conector metálico em T, de pequeno volume
morto (Figura 1). Este conector foi desenvolvido para
solucionar os problemas de vazamento encontrados
com os conectores de vidro em temperaturas altas. O
conector em T empregado não apresentou vazamentos
nas condições de grandes e freqüentes variações de
temperatura do forno. Uma purga contínua de gás de
arraste para dentro da coluna analítica evita o alarga-
mento das bandas cromatográficas no conector em T.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Curvas analíticas
A análise das soluções de calibração com quatro
componentes, em quatro concentrações diferentes,
gerou quatro curvas analíticas: para glicerina, monoole-
ína, dioleína e trioleína (Figura 2), respectivamente. Os
coeficientes de correlação linear (r2) encontrados supe-
raram o valor 0,9 especificado na norma EN 14105, de-
monstrando a boa linearidade alcançada pela técnica
de injeção cold on-column.
Figura 2. Curvas analíticas para glicerina, monooleína, dioleína e trioleína
62
Análises das amostras
Em conformidade com a norma EN 14105, a quanti-
dade de glicerina em cada amostra foi calculada através
da equação da curva analítica da glicerina. De modo
semelhante, as quantidades de mono, di e trigliceríde-
os foram calculadas através das equações das curvas
analíticas da monooleína, dioleína e trioleína, respecti-
vamente.
A identificação dos picos de cada grupo de compos-
tos pode ser feita pelo emprego dos tempos de reten-
ção relativos, publicados na norma EN 14105, tomando
o tempo de retenção do padrão interno 1 como referên-
cia para a glicerina e o tempo de retenção do padrão
interno 2 como referência para os grupos de mono, di
e triglicerídeos. Neste trabalho, porém, a identificação
dos picos foi feita por comparação com os componen-
tes conhecidos nas soluções padrão.
A Figura 3a mostra um cromatograma típico de bio-
diesel, com a programação de temperatura do forno
sobreposta. A figura 3b apresenta o cromatograma de
uma mistura de calibração e a figura 3c a solução pa-
drão de monoglicerídeos que é analisada para avaliar a
Revista Analytica • Fevereiro/Março 2009 • Nº39
Artigo

Figura 3. Cromatogramas de uma amostra de biodiesel, de uma solução de calibração e de uma solução padrão de monoglicerídeos

64 Revista Analytica • Fevereiro/Março 2009 • Nº39

posição exata dos monoglicerídeos nas amostras des-
conhecidas e definir a janela exata deste grupo de com-
postos. O cálculo das áreas de todos os picos em cada
janela de tempos de retenção foi feito automaticamente
pelo programa ChromQuest.
A Figura 4 oferece detalhes de cada grupo de com-
postos do cromatograma da amostra de biodiesel (Fig. 3).
Avaliação de contaminação cruzada (carryover)
Para avaliar o sistema de injeção on-column empre-
gado, quanto ao efeito de contaminação cruzada, um
cromatograma em branco foi obtido pela injeção ape-
nas de solvente (Figura 5). Como este cromatograma
Figura 4. Detalhes das janelas definidas para os diferentes grupos de compostos no cromatograma do biodiesel
Revista Analytica • Fevereiro/Março 2009 • Nº39
foi obtido após uma seqüência de injeções de amostras
reais de biodiesel, ele demonstra claramente a ausên-
cia do efeito de carryover. Além disso, esta avaliação
mostra que a fração pesada da amostra elui completa-
mente da coluna durante a análise.
Avaliação da repetibilidade
A repetibilidade foi calculada como a diferença ab-
soluta entre dois resultados de análises independen-
tes, obtidos através do mesmo método, com amostras
idênticas, no mesmo laboratório, pelo mesmo operador,
usando o mesmo equipamento, com um pequeno inter-
valo de tempo (definição extraída da norma EN 14105).
65
Artigo

0 8 16 24 32
min

Figura 5. Cromatograma em branco obtido pela injeção de solvente após uma seqüência de injeções de amostras reais de biodiesel

TRACE GC Ultra:
Injetor Cold On-column

Gás de arraste Helio, 3 mL/min por 12 min,

elevado para 5 mL/min a 0,5 mL/min2
FID 380°C
80°C (1 min) a 180°C @ 15°C/min,
Programação de temperatura do forno 180°C a 230°C @ 7°C/min,
230°C a 365°C (4 min) @ 10°C/min
Amostrador automático TriPlus:
Volume da seringa / comprimento da agulha 10 μL / 80 mm
Volume Injetado 1 μL
Tabela 1. Condições operacionais do cromatógrafo a gás e do amostrador automático, usadas em todas as análises

Limites de Repetibilidade
% m/m Repetibilidade Experimental
EN 14105
(média de 2 análises) (% m/m absoluta)
(%m/m absoluta)
Glicerina Livre 0,007 + 0,0009 ± 0,0018
Monoglicerídeos 0,496 - 0,011 ± 0,063
Diglicerídeos 0,088 - 0,005 ± 0,0093
Triglicerídeos 0,050 - 0,0070 ± 0,0118
Glicerina Total 0,151 - 0,0030 ± 0,0144
Tabela 2. Resultados de análises de uma amostra de biodiesel

66 Revista Analytica • Fevereiro/Março 2009 • Nº39

A Tabela 2 apresenta os resultados obtidos para uma
das amostras de biodiesel analisadas. Para cada anali-
to, os resultados superaram o desempenho mínimo exi-
gido na norma EN 14105, como indicado na tabela. A
repetição das duas análises em outros dias sucessivos
gerou resultados semelhantes.
CONCLUSÃO
A determinação de glicerina livre e total em biodiesel
B100, realizada com o cromatógrafo a gás TRACE GC
Ultra configurado com injetor cold on-column, detector
FID e amostrador automático TriPlus, atendeu as exi-
gências de linearidade e precisão da norma EN 14105.
O injetor cold on-column evitou a discriminação da
fração pesada da amostra e eliminou os riscos de de-
gradação dos componentes termolábeis como os trigli-
cerídeos, garantindo excelente recuperação e integrida-
de da amostra. A coluna específica TR-BIODIESEL(G)
apresentou grande resistência mecânica nas condições
de temperaturas bastante elevadas deste método, o que
*Artigo traduzido por Silvana Odete Pisani (silvana.pisani@novanalitica.com.br)
Revista Analytica • Fevereiro/Março 2009 • Nº39
garante sua longa vida útil. O emprego de um conec-
tor metálico entre a pré-coluna e a coluna analítica, ao
invés de um conector de vidro, garantiu uma conexão
confiável e sem vazamentos, mesmo nas condições ex-
tremas de grandes e freqüentes variações de tempera-
tura deste método. O emprego de uma pré-coluna sem
fase estacionária é importante para evitar o efeito de
sobrecarga da coluna analítica e sua contaminação.
R e f er ê ncias
1. EN 14105: Fat and oil derivatives – Fatty Acid Methyl
Esters (FAME) - Determination of free and total glycerol and
mono-, di-, tri-glyceride content.
2. ASTM D6584: Standard Test Method for Determination of
Free and Total Glycerin in B-100 Biodiesel Methyl Esters
By Gas Chromatography
67