5.2.

Setelah terpapar berulang kali dengan xenobiotik, tubuh dapat mengubah nasib
toksikoksiknya dengan mengurangi penyerapan racun, membatasi distribusi,
meningkatkan metabolisme atau mempercepat ekskresi senyawa induk atau
metabolit. Kemampuan untuk meningkatkan proses ini bergantung pada adanya
sensor yang mendeteksi pelanggaran xenobiotik dan meningkatkan respons
transkripsi yang mempercepat eliminasi racun dari tubuh. Meskipun penelitian
secara historis memusatkan perhatian pada mekanisme dimana kapasitas seluler
untuk metabolisme xenobiotik terdorong pada paparan berulang, sistem
penginderaan yang sama yang menengahi perubahan ini biasanya secara bersamaan
mengatur pengontrol membran yang mengendalikan penyerapan, distribusi dan
penghapusan xenobiotik. Respons terintegrasi ini membuat naluri desain
biologis: setiap peningkatan pembentukan metabolit dalam tubuh berpotensi
kontraproduktif kecuali kemampuan untuk mengekstrak spesies ini secara
permanen juga ditingkatkan.

5.2.1.

Kapasitas hati dan jaringan lain untuk metabolisme xenobiotik bervariasi di

bawah pengaruh diet, usia, merokok dan paparan obat. Pada tingkat molekuler,
eksposur xenobiotik yang berkepanjangan meningkatkan tingkat CYP individu
melalui fenomena yang disebut induksi. Peningkatan kapasitas biotransformasi
oksidatif ini biasanya bersifat jinak karena ini dimaksudkan untuk
mempercepat pembersihan xenobiotik dari tubuh, walaupun konsekuensi berbahaya
dapat terjadi jika racun dibuat lebih mudah beracun melalui jalur CYP yang
dapat diinduksi. Induksi CYP juga memiliki konsekuensi signifikan untuk
terapi obat dan merupakan penyebab utama interaksi obat-obat (drug-drug
interaction / DDIs) pada pasien yang menerima banyak obat secara bersamaan.
Karena konsentrasi obat dalam darah bisa turun karena adanya pembersihan yang
meningkat oleh hati, induksi CYP merampas pasien yang mendapat manfaat klinis
dari obat-obatan mereka. Karena waktu diperlukan untuk sintesis protein CYP
baru, masalah klinis yang disebabkan oleh perumus CYP sering memerlukan 1
minggu atau lebih untuk menjadi jelas (yaitu setelah pasien premedikasi
melakukan terapi dengan obat tambahan). Hal ini berbeda dengan DDI yang
disebabkan oleh inhibisi CYP yang biasanya terwujud sedikit lebih cepat.
Induksi CYP ditemukan pada tahun 1950an ketika hypnosedatives barbiturat
banyak digunakan alat bantu tidur. Meskipun pada awalnya merespons dengan
baik pada awalnya, banyak penerima melaporkan kehilangan efektivitas atau
toleransi pada penggunaan berulang-ulang. Studi pada hewan laboratorium
mengungkapkan dasar kinetik untuk toleransi barbiturat semacam itu, dengan
peningkatan empat tingkat ke dalam total CYP hepatik yang terdeteksi setelah
terpapar dengan obat ini. Karena barbiturat dimetabolisme lebih cepat,
diperlukan dosis yang lebih tinggi untuk mendapatkan respons sedatif, yang
menyebabkan ketergantungan fisik pada pasien. Setelah penemuan ini,
popularitas barbiturat menurun secara signifikan. Awalnya, teknik untuk
mendeteksi induksi CYP dalam jaringan bergantung pada prosedur klasik untuk
memperkirakan total CYP (yaitu ekstrak protease microsome yang menggelegak
dengan gas karbon monoksida (CO) diikuti dengan penambahan zat pereduksi
untuk membentuk spesies yang menyerap cahaya pada 450 nm) . Bila menggunakan
metode ini untuk mengukur 'total CYP' pada hewan yang diterapi barbiturat,
peneliti yang mengamati mengetahui bahwa penyerapan maksimum pigmen CO-heme
berkurang sebenarnya 448 nm dibandingkan dengan 450 nm pada kontrol. Temuan
ini menyarankan subpopulasi CYP yang berbeda mungkin merespons
ketidakteraturan induser individual. Peneliti akhirnya mendapatkan alat yang
ampuh untuk mengukur protein CYP individu dalam sel dan jaringan, termasuk
antibodi spesifik yang mengikat masing-masing isoform CYP utama. Reagen ini
banyak digunakan selama prosedur 'Western blotting' yang memungkinkan
perbandingan antar sel dari hewan kontrol dan jaringan yang terpapar inducer.
Pengembangan metode untuk mendeteksi transkrip mRNA untuk CYP individu
(misal: Northern blotting dan kemudian RT-PCR dan microarray) sangat membantu
studi induksi CYP. Secara kolektif, pendekatan ini mengungkapkan bahwa
sebagian besar induser mempengaruhi tingkat isoform individu CYP secara
berbeda, dengan sering hanya beberapa atau bahkan isoform tunggal yang paling
terpengaruh. Dengan menyarankan induser berbeda mungkin bertindak melalui
jalur transduksi yang berbeda, temuan ini mendorong para periset untuk
mengklarifikasi mekanisme yang mendasari induksi CYP.

5.2.1.2.
Xenosensor pertama yang ditemukan adalah reseptor aril hidrokarbon (AhR),
aktivator transkripsi yang mengendalikan ekspresi dua CYP yang terkait erat,
CYP1A1 dan CYP1A2. Yang terakhir dinyatakan dalam hati, sementara CYP1A1
diekspresikan pada tingkat rendah di banyak jaringan ekstrahepatik termasuk
lapisan epitel di paru-paru, kulit dan saluran pencernaan. Sementara CYP1A1
memetabolisme obat yang relatif sedikit, CYP1A2 mengoksidasi beberapa obat
manusia utama termasuk clozapine, naproxen, teofilin dan kafein. Baik CYP1A1
dan 1A2 penting dalam toksikologi karena mereka memetabolisme berbagai macam
racun asing, dengan peran tertentu dalam bioaktivasi hidrokarbon aromatik
polisiklik. Baik CYP1A1 dan 1A2 sangat disebabkan oleh TCDD ('dioxin'),
polutan organoklorin di mana-mana yang menarik banyak perhatian penelitian
karena perannya dalam keluhan kesehatan bahwa veteran perang Vietnam yang
vakum (lihat Bab 4, Seksi 4.2.2) . TCDD juga berkontribusi terhadap sejumlah
kecelakaan industri yang terjadi selama paruh kedua abad ke-20 (misalnya
Seveso, Italia, 1976). Paparan zat beracun ini terkait dengan berbagai
sindrom kanker pada manusia dan hewan pengerat serta respons toksik lainnya
termasuk kelainan perkembangan pada imunosupresi yang belum lahir, dan
gangguan kulit yang dikenal dengan chloracne. Ahli toksikologi Kanada Allan
Okey menemukan Ah R xenosensor pada tahun 1979 saat ia bekerja di
laboratorium Daniel Nebert di National Institutes of Health di Amerika
Serikat. Metode yang digunakan untuk mengisolasi protein Ah R tampak sangat
berat dari sudut pandang saat ini namun merupakan tonggak utama dalam
munculnya toksikologi modern. Sementara para peneliti telah mencari dengan
sia-sia reseptor steroid sebagai target TCDD, ditemukan bahwa sel-sel yang
memiliki reseptor berbeda untuk xenobiotik beracun mengangkat status seluruh
bidang biotransformasi biologis.
Protein AhR termasuk keluarga transkrip renik helix-loop-helix (bHLH), yang
memiliki motif struktural khas yang terdiri dari dua heliks α yang
dihubungkan oleh satu lingkaran. Satu heliks biasanya memediasi ikatan dengan
urutan DNA tertentu, sementara yang lain memfasilitasi interaksi dengan
protein pasangan. Setelah aktivasi, Ah R menargetkan elemen respons
xenobiotik (XRE) di dalam promoter gen TCDD-responsif. Ah R juga mengandung
motif struktural lainnya yang penting untuk aksinya, termasuk domain PAS-A
dan PAS-B yang berpartisipasi dalam dimerisasi protein dan ikatan ligan.
Dalam beberapa tahun terakhir, para periset juga menemukan interaksi Ah R
dengan unsur genetik baru TCDD-respons yang berbeda dari XREs klasik.
Sementara peran mereka agak tidak jelas, mereka tampaknya menengahi respons
baru terhadap aktivator AhR nonkasik dan mungkin mencakup sejumlah ligan
endogen. Biasanya, Ahhi yang tidak aktif diasingkan di dalam sitosol
hepatosit melalui pengikatan beberapa protein pasangan termasuk protein
kejutan panas (90 hsp90), c-SRC, p23 dan XAP2. Setelah mengikat TCDD, hsp90
dipindahkan dan relokasi nuklir dipupuk melalui pembentukan kompleks dengan
translokasi inti reseptor hidrokarbon aril (ARNT), anggota keluarga faktor
transkripsi bHLH / PAS lainnya. Kompleks transkripsi yang dihasilkan
mengaktifkan ekspresi kunci TCDD-responsif gen, gen, termasuk gen untuk enzim
yang terlibat dalam metabolisme xenobiotik oksidatif (CYP1A1, CYP1A2, CYP1A1,
ALDH3A1), reduktif (NQO1) dan konjugasi xenobiotik (misalnya UGT1A2 dan
GSTA). Aktivasi AhR akibat ligan dengan demikian meningkatkan secara luas
kapasitas metabolisme jaringan terhadap sirkulasi xenobiotik. Dalam beberapa
tahun terakhir, penggunaan microarray untuk mendeteksi gen responsif TCDD
memiliki nilai yang teridentifikasi pada sejumlah gen yang berubah dalam
banyak jalur seluler yang melampaui biotransformasi biologis dan termasuk
komunikasi sel, transduksi sinyal, peradangan, kontrol siklus sel,
proliferasi sel dan diferensiasi. Meskipun temuan ini tampaknya relevan
secara langsung dengan banyak respons beracun yang menyertai pemaparan TCDD,
variabilitas yang signifikan dalam respons transkripsi yang diinduksi oleh
TCDD antara spesies dan strain hewan eksperimental yang berbeda mempersulit
klarifikasi peran biologis mereka. Beberapa petunjuk tentang peran Ah R di
luar regulasi metabolisme xenobiotik muncul setelah penciptaan tikus Ahr -
knockout yang sering menunjukkan defisiensi pada fungsi kardiovaskular,
kesuburan dan regulasi pertumbuhan. Sementara hewan-hewan ini resisten
terhadap toksisitas TCDD, definisi-definisi lain ini menunjukkan peran
endogen yang luas bagi AhR dalam fisiologi normal. Selain memediasi respons
terhadap TCDD, AhR diaktifkan oleh banyak racun asing lainnya termasuk
pestisida organoklorin, amina aromatik dan hidrokarbon aromatik polisiklik.
Sejumlah agen farmasi juga bertindak sebagai induser AhR, termasuk omeprazol,
fletus dan le fl unomide. Beberapa molekul endogen termasuk berbagai
metabolit tryptophan teroksidasi seperti kynurenin, nila dan indirubin serta
metabolisme heme yang mungkin mewakili ligan alami untuk Ah R, namun perannya
dalam pengaturan fisiologis tetap harus diklasifikasi sepenuhnya. Investigasi
terbaru tentang sifat biologis gen homolog TCDD-insensitif Ah R dalam spesies
invertebrata model seperti C. elegans menjanjikan adanya peran biologis non-
biologis dari Ah R. Penemuan upaya Ah R yang intensi untuk mengidentifikasi
reseptor untuk induksi CYP lainnya. . Seiring waktu, xenosensor dikaitkan
dengan sebagian besar isoform CYP yang berpartisipasi dalam metabolisme obat
manusia, walaupun CYP2D6 tetap merupakan pengecualian penting untuk peraturan
ini. Sementara CYP2D6 berkontribusi pada metabolisme satu dari enam atau
tujuh obat dalam penggunaan klinis saat ini, tidak ada mekanisme transduksi
yang mungkin ada untuk isoform CYP ini.

5.2.1.4.
The Xenosensors PXR dan CAR memiliki relevansi yang sangat besar dengan
farmakologi manusia (Tabel 5.1). Milik kelas yang terpisah dari faktor
transkripsi ke Ah R, PXR dan CAR menyerupai reseptor nuklir 'klasik' yang
menengahi efek biologis dari ligan endogen seperti hormon tiroid, kolesterol,
estrogen dan asam empedu. Motif struktural utama yang dimiliki oleh CAR dan
PXR mencakup domain pengikat DNA (DNA-binding domain / DBD) yang sangat mirip
di antara anggota keluarga dan biasanya terdiri dari dua motif seng, fitur
struktural yang dimiliki oleh banyak protein pengikatan DNA. Satu zinc fi
nger juga mengandung dimerisation D-box yang memungkinkan dengan protein
mitra reseptor nuklir lainnya. Ciri khas lain dari reseptor nuklir klasik
adalah domain pengikatan ligan (LBD) yang menunjukkan variabilitas struktural
karena kebutuhan setiap reseptor untuk mengikat ligan yang berbeda.
Biasanya bentuk homodimers terdiri dari anggota keluarga yang sama, sedangkan
yang diaktifkan oleh ligan eksogen (misalnya PXR, CAR, PPAR) biasanya
heterodimerise dengan reseptor retinoid X (RXR). P XR, reseptor X yang hamil,
sangat relevan dengan farmakologi manusia karena ini mengatur ekspresi
sejumlah CYP yang melakukan peran utama dalam metabolisme obat, termasuk
CYP1A, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP3A4, CYP3A5 dan CYP3A7. PXR juga mengatur
ekspresi anggota keluarga UDP-glucuronosyltransferase, sulfotransferase dan
glutathione-S-transferase plus sejumlah transporter xenobiotik. Induser
klasik PXR meliputi obat-obatan seperti deksametason, klotrimazol dan
rifampisin serta banyak polutan lingkungan termasuk DDT, di-n-butyl phthalate
(DBP), chlordane, dieldrin dan endosulfan. PXR juga diaktifkan oleh berbagai
fitokimia yang ada dalam obat-obatan herbal seperti wort St John. Pengikatan
ligan ini ke PXR mempromosikan pembentukan heterodimer yang melibatkan
reseptor X retinoid (RXR) serta protein pendukung lainnya seperti koenzim
reseptor steroid 1 (SRC-1). Kompleks transkripsional yang dihasilkan
menargetkan elemen respons xenobiotik masing-masing di dalam wilayah promoter
'responsif gen 5'. Setelah transkripsi, molekul mRNA diekspor melalui pori-
pori nuklir untuk memungkinkan pemrosesan ribosom dan sintesis protein CYP
baru yang kemudian memfasilitasi pembentukan metabolit yang lebih mudah
diekskresikan sesuai Gambar 5.1. Sementara xenosensor utama seperti PXR dan
CAR memiliki banyak kesamaan dengan kelas reseptor nuklir glukokortikoid,
mereka biasanya memerlukan konsentrasi ligan yang lebih tinggi untuk aktivasi
transkripsi yang terjadi (misalnya konsentrasi mikromolar dibandingkan dengan
konsentrasi hormon nano yang mengaktifkan reseptor glukokortikoid). Berkaitan
dengan pertimbangan ini, studi struktural telah menunjukkan plastisitas yang
jauh lebih besar dalam domain pengikat ligan PXR dibandingkan reseptor
glukokortikoid, yang memungkinkan para mantan untuk mengakomodasi sejumlah
besar ligan besar dan struktural. Sifat-sifat ini membantu menjelaskan
mengapa PXR bisa dibilang merupakan anggota keluarga xenosensor yang paling
tidak diskriminatif, yang mampu menggerakkan ekspresi CYP setelah terpapar
pada berbagai macam xenobiotik yang beragam secara struktural.

5.2.1.6
Meskipun istilah xenosensor menggarisbawahi peran mereka dalam fenomena
farmakologis dan toksikologi, protein multifaset ini cenderung memainkan
peran fisiologis yang beragam. Sebagai contoh, faktor transkripsi ligand-
activated membantu mengendalikan tingkat sirkulasi molekul endogen seperti
metabolit bilirubin heme serta hormon tiroid dan hormon steroid. Studi
tentang peran biologis xenosensor yang lebih luas diperumit oleh perbedaan
interspesies pada preferensi pengikatan ligan dari xenosensor dan gen yang
disebabkan ikatan ligan. Perhatian diperlukan saat melakukan ekstrapolasi
temuan mengenai sifat induser dalam satu spesies ke spesies lainnya.

5.2.2.
Elemen respon untuk xenosensor seperti AhR dan PXR terletak pada promoter gen
yang menyandikan banyak enzim yang menengahi metabolisme konjugasi seperti
UGTs, SULTs, GSTs dan NATs. Akibatnya, keterpaparan pada induser CYP klasik
seperti TCDD, rifampisin, fenobarbital atau deksametason sering meningkatkan
kapasitas seluler untuk metabolisme konjugasi. Sambil mengeksplorasi fenomena
ini, peneliti terkejut mengetahui bahwa induksi UGTs dan GSTs juga menyertai
paparan xenobiotik yang bukan ligan untuk protein xenosensor klasik namun
tetap menunjukkan reaktivitas sebagai elektrofil. Enzim enzim konjugatif dari
jenis ini meliputi berbagai senyawa fenol sintetis seperti buthorated
hydroxyanisole (BHA) dan t-butylhydroquinone (tBHQ) serta phytochemicals diet
termasuk penyusun teh hijau (-) - epigallocatechin-3-gallate (EGCG). Berbagai
konstituen isothiosianat dari sayuran seperti phenethyl isothiocyanate dan
sulforaphane juga sangat menginduksi ekspresi enzim konjugasi dan untuk
alasan ini menarik perhatian besar sebagai agen antikanker (yaitu sebagai
penyusun diet 'chemopreventative'). Bekerja di bidang ini dipelopori oleh
peneliti NIH, Michael Sporn, yang dikenal secara luas sebagai 'bapak
chemoprevention'. Dengan mengaktifkan faktor transkripsi Nrf2 yang menengahi
respons antioksidan, senyawa elektrofilik chemopreventative cenderung
memberikan sitoproteksi terhadap oksidan berbahaya

Kesimpulan
Bab sebelumnya kita (Bab 4) memeriksa beberapa mekanisme yang dianggap
memediasi toksisitas selama terpapar xenobiotik, dengan penekanan khusus
diberikan pada bahan kimia yang mengalami konversi menjadi zat pereda
modifikasi makromolekul yang reaktif. Kami melihat bahwa karena kompleksitas
kimia dan keragaman makromolekul lingkungan intraselular, banyak intermediet
reaktif menyerang banyak target seluler, sehingga menimbulkan perubahan luas
dalam sapuan jalur sel. Dalam bab ini, kami mensurvei bukti bahwa sel tidak
sepenuhnya diampuni oleh penyerang beracun ini, karena mereka memiliki sistem
penginderaan yang beragam yang mendeteksi xenobiotik yang beredar dan
memasang respons transkripsional yang rumit yang bekerja selama tahap
toksikokinetik dan toksikoksin aksi toksik. Dengan apresiasi terhadap
mekanisme dasar yang mendasari efek buruk dari racun pada sistem biologi, dan
kesadaran akan kemampuan sel untuk melawan kerusakan tersebut, sebaiknya kita
mengeksplorasi jenis respons beracun yang dihasilkan bahan kimia di organ
tubuh tertentu.