Introdução
Os aminoácidos apresentam pelo menos dois grupos que são passíveis de sofrer
protonação (adição de H) e desprotonação (remoção de H+). Estas alterações estão
representadas na Figura 1.
𝑝𝐾1 − 𝑝𝐾2
𝑝𝐼 = = 5.97
2
A caseína é uma proteína encontrada no leite e, assim como outras proteínas, a sua
solubilidade depende de vários fatores, dentre eles o pH. Para todas as proteínas existe
um valor de pH no qual elas apresenta carga elétrica líquida igual a zero. Essa forma
também é também denominada de isoelétrica ou zwitteriónica.
A solubilidade das proteínas depende de vários fatores. Dentre eles, destaca-se a
presença das cargas elétricas ao longo da molécula. A existência de uma carga positiva
ou negativa determina a interação com o meio aquoso, além de estabelecer um estado
de repulsão entre as próprias moléculas de proteína, aumentando a interação com o
solvente e, consequentemente, favorecendo a solubilidade. Uma vez que no ponto
isoelétrico existe um equilíbrio entre o número de cargas positivas e negativas, o que
gera uma situação em que as forças de repulsão entre as moléculas de proteína e as
forças de interação com o solvente são mínimas. Assim, as proteínas vão formando
aglomerados que, cada vez maiores, e acabam por precipitar.
Materiais
Leite desnatado;
solução de ácido acético 1M
solução de hidróxido de sódio 1M;
etanol 95% (v/v);
éter etílico
copo de vidro;
proveta - 100 mL;
conta-gotas ou pipeta de Pasteur;
funil;
papel de filtro;
tubos de ensaio.
Procedimento
Obtenção da caseína
Aquecer 150 mL de água destilada a 38°C e em seguida adicionar50 mL de leite.
A essa solução adicionar ácido acético (aproximadamente 0,7 mL) gota a gota
até o aparecimento de um precipitado abundante.
Deixar a solução em repouso (~ 20 minutos) para a proteína sedimentar.
Decantar e remover o sobrenadante.
Adicionar ao precipitado 20 mL de etanol, misturar bem, filtrar ou centrifugar
(3000 rpm durante 5 minutos) e remover a componente líquida.
Ao precipitado (ou sedimentado) adicionar 5 mL de éter etílico e, após agitação,
filtrar novamente. Secar o filtrado em papel de filtro.
Preparação da solução da caseína
Colocar 1g do precipitado num copo de vidro;
Adicionar 50ml de água destilada;
Adicionar 25 ml de NaOH 1M;
Agitar lentamente para evitar formar espuma;
Adicionar 25ml de ácido acético 1M e agitar cuidadosamente;
Acertar pH até à neutralidade usando as soluções de ácido ou base.
Registo de resultados:
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7 Tubo 8 Tubo 9
pH
Turbidez