1. La enzima Invertasa cataliza la hidrólisis de Sacarosa a fructosa y glucosa.

Esta enzima
tiene un Km = 0.5 mM para sacarosa y una constante catalítica (Kcat) igual a 175 min-1.
Se mide su actividad en presencia de 0.25 mM de sacarosa con 25 x 10-6 µmol de
enzima.
a) ¿Qué velocidad de catálisis se observará (Vo) en estas condiciones?
b) ¿Qué fracción representa esto de la Vmáx?
c) ¿Cuánto sustrato habría que añadir para que la velocidad observada alcance 95% de
la Vmáx?
d) ¿Qué importancia podría tener esto para la posible aplicación industrial de la
enzima? - Explique sus respuestas.

2. La actividad de la Acetil-CoA carboxilasa, medida con tres diferentes concentraciones de

enzima y a tres diferentes concentraciones de sustrato fue la siguiente:

[Enzima] (µg de proteína)

0.1 0.2 0.5
[AcetilCoA] (µM) ¯ Velocidad (µmol / min)
0.05 0.275 0.546 1.373
0.14 0.482 1.001 2.502
0.23 0.580 1.185 2.891
0.32 0.642 1.385 3.463
0.50 0.755 1.494 3.656
0.59 0.766 1.497 3.810

a) Calcular para cada uno de los tres experimentos el valor de Km y el valor de Vmáx.
b) ¿Son los valores de Km y Vmáx iguales o diferentes?
c) Explique si lo que observó es lo que esperaba obtener.
d) Sabiendo que la enzima pesa 220000 grs/mol, haga una gráfica de Vmax vs µmol de
enzima total.
e) ¿Qué representa la pendiente de esta gráfica? (Vmáx / [ET])
f) ¿En qué se parece el valor anterior a la Actividad específica = Vmax/[ET]?
3. Se realizaron estudios de inhibición para dos enzimas diferentes presentes en el suero
bovino. Se varió la concentración de sustrato a en ausencia y en presencia de tres
concentraciones diferentes de inhibidores de cada enzima. En cada caso encontrar:
a) El valor de Km y Vmax.
b) El tipo de inhibición.
c) El valor de Ki para el inhibidor.

Enzima: Fosfatasa alcalina de suero bovino, inhibidor: Oxalato de Bromolevamisol

 [Bromolevamisol] (µM)
0 8 16 40
[Sustrato] (mM) Velocidades iniciales (µmol min-1 mgProt.-1)
0.1 0.231 0.210 0.191 0.158
0.3 0.431 0.369 0.309 0.239
0.7 0.607 0.488 0.425 0.277
1.3 0.751 0.599 0.467 0.304
1.8 0.811 0.657 0.530 0.319
2.6 0.912 0.657 0.546 0.328
4.1 0.957 0.688 0.561 0.351
5.8 0.981 0.741 0.558 0.344

Enzima: Transaminasa Glutámico Pirúvica, inhibidor: Ácido 2 hidroxisuccínico

[2hidroxisuccínico] (µM)
0.0 1.0 2.0 5.1
[Sustrato] (mM) Velocidades iniciales (µmol min-1 mgProt.-1)
0.6 0.59 0.48 0.38 0.24
1.4 1.12 0.91 0.78 0.51
2.9 1.63 1.43 1.19 0.87
5.2 1.94 1.70 1.64 1.19
8.0 2.19 1.94 1.94 1.56
10.3 2.28 2.06 1.99 1.74
16.0 2.32 2.33 2.24 1.89
25.1 2.62 2.53 2.25 2.09