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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

Asignatura:
Biología Celular

Ensayo de Investigación Basado en la Práctica de Laboratorio

Tema:
CONTAJE DE CÉLULAS EN LA CÁMARA DE NEUBAUER

Elaborado por:
ERIKA ROMERO
JENNIFER SARSOZA

Docente: PhD. Lilian M. Araujo Baptista

SEGUNDO SEMESTRE

Fecha de envió: Jueves, 11 de enero del 2018

Fecha de entrega: Jueves, 18 de enero del 2018

OCTUBRE-MARZO 2018

RIOBAMBA – ECUADOR
GUÍA DE PRÁCTICA N° 3
NOMBRE DEL DOCENTE PhD. Liliana M. Araujo Baptista FECHA: 2018/01/18
LUGAR DE LA PRÁCTICA LABORATORIO CLÍNICO
TITULO DE LA PRACTICA: CONTAJE DE CÉLULAS EN LA CÁMARA DE NEUBAUER
OBJETIVO DIDÁCTICO
Proveer de los conocimientos necesarios para el correcto manejo de la cámara de Neubauer, conociendo su valiosa
utilidad en el contaje de distintos tipos de células.

Adquirir habilidades y destrezas para el fortalecimiento en el uso de equipos y materiales orientados al estudio de la
biología celular.

INTRODUCCIÓN
La sangre está compuesta de glóbulos rojos, glóbulos blancos, plaquetas y plasma, que es el líquido que
transporta las células sanguíneas. Un conteo de células sanguíneas comprueba el tipo y número de células en
la sangre. Un conteo puede dar a su médico información importante acerca de su salud.

El recuento total de leucocitos es un parámetro útil que orienta al médico en los procesos virales, bacterianos,
inflamatorios o sépticos, marcándole una pauta en su diagnóstico y tratamiento. Para poder valorar cuáles
son las posibles causas de una alteración de los glóbulos blancos en los estudios hematológicos, debe tenerse
en cuenta el recuento total y el análisis diferencial de los glóbulos blancos. Los valores de referencia pueden
variar dependiendo de la edad, sexo, raza y estados fisiológicos específicos.

El recuento de leucocitos por el método manual se fundamenta en la dilución desangre total anticoagulada
con EDTA, utilizando una pipeta de Thoma para glóbulos blancos para dicha dilución y el conteo de las células
mediante un hemocitómetro (cámara de Neubauer) y microscopio óptico convencional. Para el cálculo se
toma en cuenta la dilución, el área de la superficie contada y la altura de la cámara utilizada.

Normalmente se utiliza la cámara de Neubauer (los cuadrados grandes para el recuento de leucocitos, y los
pequeños para el de hematíes). El hemocitómetro (cámara de Neubauer) es un instrumento ideado para
contar células sanguíneas y se puede usar también para estimar la concentración de conidias en una
suspensión acuosa de esporas. El reglaje del hemocitómetro en su base consiste de 9 mm 2. Las líneas
limítrofes son las líneas centrales en grupos de a tres. El milímetro cuadrado localizado en el centro, está
formado por 25 grupos cada uno de 16 pequeños cuadrados, cada grupo separado por una triple línea, siendo
la del medio el límite. Los cuatro milímetros cuadrados de las esquinas están divididos en 16 pequeños
cuadros. Estas diferencias en las divisiones se hacen para ayudar en la orientación cuando se esté contando.
La altura del área del contaje cuando se coloca el cubreobjetos es de 0,100 mm, de tal manera que el volumen
de la suspensión sobre un milímetro cuadrado es de 0,1 rnm". Los hemocitómetros son dobles o sea que
tienen dos áreas sobre las cuales se puede efectuar el conteo están localizadas una a cada lado de las áreas
planas levantadas en la sección central del hemocitómetro.

OBJETIVO GENERAL:
Reconocer las partes de la cámara de Neubauer y conocer su utilización en el contaje de células sanguíneas (glóbulos
blancos)
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
Identificar las distintas partes de la cámara de recuento, la zona de trabajo y las diferenciaciones dentro del retículo
central
Conocer y aplicar la metodología para realizar un recuento de leucocitos con el uso correcto de una cámara de Neubauer
Realizar los cálculos necesarios para estimar el número celular por milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado
FUNDAMENTACIÓN
El recuento de Leucocitos es la técnica que permite calcular el número de glóbulos blancos que se encuentran en un volumen de
sangre. Una forma de expresar el resultado es como el número de leucocitos por mm 3. El recuento orienta en el diagnóstico y
evolución de un sujeto en estudio. Los leucocitos protegen al organismo de las infecciones y colaboran en la respuesta inmunológica.
Si se desarrolla una infección, los leucocitos atacan y destruyen las bacterias, hongos o virus causantes de la infección, razón por la
cual las variaciones están frecuentemente asociadas a la presencia de enfermedad.
También se utiliza para controlar tratamientos antiinfecciosos y/o antiinflamatorios y, entre otros estudios, para el control de
tratamientos quimioterápicos o con radiación.
Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.
Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:
 Dilución de la sangre
 Muestreo de la sangre diluida en un volumen
 Recuento de células en ese volumen
Para el recuento de leucocitos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas. Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes
pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el líquido de Turk,
que consta de:

 Ácido acético glaciar………………………………… 2 mL


 Violeta de genciana (disolución de 1%)…………… 1 mL
 Agua destilada en cantidad suficiente para……100 mL
Deberá filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos

El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento. El ácido acético produce
la lisis de los eritrocitos, sin alterar los leucocitos y el violeta de genciana tiñe el núcleo de los leucocitos para que éstos puedan
observarse mejor.
En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hematíes hemolizados. Se debe tener en
cuenta que los leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el tornillo micrométrico del microscopio que los restos
de hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas
finas y brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el tornillo micrométrico del microscopio hacia delante y hacia atrás. En la
cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y leucocitos son diferentes, como se muestra en la figura 2.

Figura 2. Retículo de la cámara de Neubauer


MATERIALES Y MÉTODOS
Equipos:
Microscopio de campo claro
Materiales:
1. Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca)
2. Equipo para venopunción (Tubo lila)
3. Boquilla blanca
4. Tubo de goma
5. Tubos de ensayo
6. Papel parafilm
7. Cámara de Neubauer
8. Cubrehematímetro
9. Gasas
Reactivos:
 Alcohol al 70%
 Liquido de Turk
Muestras biológicas:
 Sangre venosa
PROCEDIMIENTO
1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un
tubo lila con EDTA
2. Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3. Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0,5 o hasta 1 y completar con solución diluyente hasta 11, para
realizar una dilución de 1/20 o 1/10, respectivamente. La pipeta de eritrocitos presenta una ampolla de dilución mayor, al llenar
de sangre hasta 0,5 o hasta 1, y se completa con solución diluyente hasta 101 la sangre queda diluida a 1/200 o 1/100,
respectivamente. Una vez que se ha llenado la pipeta con la sangre limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre
se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben
quedar burbujas.

5. Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente
de 2-3 minutos (no con demasiada energía, para evitar que se rompan las células)
6. Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.
7. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, pues en esa zona el líquido está exento de células, luego colocar una gota
pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.

8. Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten


9. Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar en los 4 cuadrados angulares.
10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en
el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.

CÁLCULOS:
Tal y como puede apreciarse en la figura 3, cada retículo se divide en nueve cuadrados grandes de 1mm de lado. Siendo
los cuadrados de las esquinas los destinados al recuento de leucocitos (al existir éstos en menor número que hematíes,
se precisa menor número de líneas de referencia), a su vez dichos cuadrados se subdividen en 16 cuadrados
denominados medianos de 0,25 mm de lado.
El cuadrado central es el destinado al recuento de hematíes y plaquetas. Dicho cuadrado se subdivide en 25 cuadrados
medianos (0,2 mm de lado), y a su vez éstos se subdividen en 16 cuadros denominados pequeños. Por tanto el número
total de cuadraditos constituyentes del cuadro central es de 400 cuadrados.

Figura 3. Retículo de la cámara de Neubauer


Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso serían
número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3.
Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y se multiplica por el
factor para obtener número de leucocitos por milímetro cúbico (mm 3) de sangre.
Cálculo del factor:
N° de leucocitos x mm3 = altura x dilución x área
N° de leucocitos x mm3 = 1/10 mm x 1/20 x 4 mm2 = 1/10 000
N° de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50
N° de leucocitos x mm3 = N° de leucocitos contados x 50
En el análisis hecho, los resultados de la cuenta de células quedaron así por casilla:
VALORES DE REFERENCIA, RESULTADOS Y CONCLUSIONES:
VALORES DE REFERENCIA
RESULTADOS: Recuento de Leucocitos en cámara de Neubauer
Calcular el recuento de leucocitos por mm3 de sangre (WBC) en muestra procesada.

Indicar si los valores hallados están dentro del intervalo de referencia para le edad y el sexo.

Interpretar los valores del WBC.

PREGUNTAS DE AUTOEVALUACIÓN:
1. En una cámara de recuento, ¿cuánto están sobre elevadas las dos bandas laterales con respecto a la central donde
está grabado el retículo?
Esta grabado a 0,1mm.
2. ¿Qué muestra se utiliza para realizar un recuento de glóbulos blancos?
En la sangre total permitiendo calcular la cantidad de glóbulos blancos
3. ¿Qué anticoagulante se emplea para realizar un recuento de glóbulos blancos?
EDTA porque contiene preservante y anticoagulante.
4. ¿Cuál es el líquido de dilución utilizado en el contaje de glóbulos blancos?
Para el Recuento de Leucocitos se utiliza un líquido de dilución llamado líquido diluyente de Turck, que se compone de
las siguientes sustancias: Por cada 100 ml. De agua destilada:*2 ml de ácido acético glacial*1 ml de solución acuosa de
violeta de genciana al 1%Función del líquido de Turck: El ácido acético produce lisis de los eritrocitos sin alterar a los
leucocitos. El violeta de genciana tiñe el núcleo de los leucocitos para que estos puedan observarse mejor.
5. ¿Cómo debe ser el líquido de dilución utilizado para el recuento de leucocitos y de eritrocitos?
En los eritrocitos debe ser isotónico, para evitar alteraciones en los hematíes o su lisis.
Se suele utilizar el de Hayem, que está compuesto por:
– 2,5g de sulfato sódico
– 0,5g de cloruro sódico
– 0,25g de cloruro mercúrico
– 100ml de agua destilada
En los leucocitos debe ser hipotónico como el líquido de dilución Turck, compuesto por:
– 2ml de ácido acético glacial
– 1ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%
– 100ml de agua destilada.
El ácido acético produce la lisis de los eritrocitos, sin alterar los leucocitos.
El violeta de genciana tiñe el núcleo de los leucocitos para que éstos puedan observarse mejor.
6. ¿Para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución?
Permite reconocer fácilmente a los leucocitos, ya que tiñen ligeramente su núcleo, permitiendo observarlos más
fácilmente.
7. ¿Con qué objetivo se pueden contar los leucocitos?
Si los leucocitos se ven bien, se pueden contar con el objetivo de 10x.
8. ¿Cuáles son las posibles causas de error analítico que se puede cometer en el desarrollo de las técnicas del recuento
de glóbulos blancos?
 Coagulación parcial de la muestra
 No mezclar bien la sangre antes de llenar la pipeta
 No llenar bien la pipeta
 Usar pipetas húmedas
 No llenar completamente la cámara
 Inundación de la cámara
 Pipeta mal calibrada o sucia
 No desechar las 4 primeras gotas
 Presencia de burbujas
9. Teniendo en cuenta los valores de referencia citados, haga un listado de las variaciones fisiológicas y por lo menos
dos fisiopatológicas en cada determinación de recuento de glóbulos blancos.

Una cantidad muy alta o muy baja de glóbulos blancos indica un trastorno.

La leucopenia, que es una disminución del número de glóbulos blancos (leucocitos) por debajo de 4000 células por
microlitro de sangre, suele hacer que las personas sean más vulnerables a las infecciones.

La leucocitosis, un aumento en el número de glóbulos blancos (leucocitos) de más de 11.000 células por microlitro de
sangre, está causada a menudo por una respuesta normal del organismo frente a algunos fármacos, como los
corticosteroides, o bien para ayudar a combatir una infección. Sin embargo, también algunas neoplasias de la médula
ósea (como la leucemia) o la liberación de glóbulos blancos anormales o inmaduros de la médula ósea al torrente
sanguíneo provocan un aumento del número de glóbulos blancos (leucocitos) en la sangre.

Algunos trastornos solo implican a uno de los cinco tipos de glóbulos blancos.

 La neutropenia es un número anormalmente bajo de neutrófilos


 La leucocitosis neutrófila consiste en una cantidad anormalmente alta del número de neutrófilos
 La linfocitopenia consiste en un número anormalmente bajo de linfocitos
 La leucocitosis linfocítica es una cantidad anormalmente alta del número de linfocitos

Otros trastornos pueden implicar alteraciones simultáneas de más de un tipo de glóbulos blancos, o incluso de los cinco.
Los trastornos de los neutrófilos y de los linfocitos son los más habituales; los relacionados con los monocitos y
los eosinófilos son menos frecuentes, y los relacionados con los basófilos son raros.
10. Si la sangre se diluye a 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en dos cuadrados grandes periféricos, ¿cuál es el
contaje glóbulos blancos obtenido?
WBC = 100/2 x 10 x 10

WBC = 5000 leucocitos por mm3 de sangre

El WBC obtenido es normal (no hay ni leucopenia, ni leucocitosis).

CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES

BIBLIOGRAFÍA.
Cristaldo, Daniel Osmar: “Pruebas que Conforman el Hemograma”. Curso “Parámetros del hemograma. Utilidad e interpretación”.
Resolución 811/08 C.D. Corrientes, 16 de octubre de 2008.
Gauna Pereira, María del Carmen: “Bioseguridad en el Laboratorio”. Curso “Parámetros del hemograma. Utilidad e interpretación”.
Resolución 811/08 C.D. Corrientes, 16 de octubre de 2008.
Henry, J.B.: El Laboratorio en el Diagnóstico Clínico: Homenaje a Todd-Stanford & Davidsohn. Tomos I y II. Editorial Marbán. 2005.
Jiménez L F y Merchant H.: Biología Celular y Molecular. Prentice Hall. México, 2003.
Karp G.: Biología Celular y Molecular. McGraw-Hill Interamericana. México, 2009.
Martínez Fragoso, Vicente. Manual de Biometría Hemática. CBTis199, México, 2012. Pp. 22-24
Conteo de glóbulos blancos, artículo consultado el día 16 de enero de 2016 en
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003643.htm
Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos, articulo web consultado el día 16 de enero de 2016 en:
http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisis-hematologicos-y-citologicos.html