BIOLÓGICOS CONTAMINANTES
Se entiende por “exposición a agentes biológicos contaminantes” a la presencia de éstos en el entorno laboral. El estudio de
un problema de riesgo biológico comienza por la identificación y evaluación de los riesgos y constituye además una de las
obligaciones del empresario recogidas en el Real Decreto 664/1997 (https://www.boe.es/boe/dias/1997/05/24/pdfs/A16100-
16111.pdf) y su Guía de Aplicación, publicada por el INSHT, en el año 2001. Este Real Decreto establece además, que
identificados uno o más riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo, se procederá, para
aquellos que no hayan podido evitarse, a evaluar la naturaleza, el grado y duración de la exposición de los trabajadores,
indicando, asimismo, que la evaluación se efectuará teniendo en cuenta toda la información disponible, en particular: su
naturaleza y peligrosidad, las recomendaciones de las autoridades sanitarias, la información sobre las enfermedades que
pueden ser contraídas, los efectos alérgicos y/o tóxicos potenciales o el riesgo adicional para los trabajadores
especialmente sensibles.
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Identificación y evaluación de los agentes biológicos contaminantes
Objetivos de estudio:
Al finalizar el estudio de este tema el estudiante debe conocer:
la relación entre una determinada actividad laboral y la exposición a un contaminante biológico.
los tipos de técnicas analíticas empleadas para la identificación de los contaminantes biológicos.
Contenidos:
Posibles orígenes y focos de los contaminantes biológicos. Tipos de exposición según la
actividad laboral.
Identificación y evaluación de los riesgos biológicos. Indicadores de riesgo.
Detección de los agentes biológicos contaminantes:
o Métodos de captación o recogida de muestras (muestreo ambiental y muestreo de superficie)
o Cultivo de las muestras recogidas. Manipulación, transporte, almacenamiento y eliminación de
las muestras
o Técnicas analíticas (cuantitativas y cualitativas)
o Valoración de la exposición a contaminantes biológicos
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Agentes físicos y biológicos y medicina del trabajo. UNED. Riesgos Biológicos. Raquel Martín Folgar.
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Agentes físicos y biológicos y medicina del trabajo. UNED. Riesgos Biológicos. Raquel Martín Folgar.
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Identificación teórica de los riesgos, que supone la recogida general de información científica. Se trata
de la identificación teórica de los agentes biológicos más probables, considerando sus fuentes de exposición,
reservorios, información científica y posibles estudios epidemiológicos posteriores. Hay que considerar además,
el grado de virulencia, expresado como Dosis Infectiva Mínima (DIM, que representa la cantidad mínima
necesaria de un agente biológico que tiene que penetrar en el huésped para provocar una infección y que
dependerá según el agente biológico, la vía de entrada y la resistencia del huésped), la facilidad de
propagación, la gravedad de las infecciones así los tratamientos profilácticos y curativos.
Evaluación de los puestos de trabajo con riesgo y de los trabajadores expuestos. Implica un estudio
preciso del puesto de trabajo, la probabilidad de diseminación del material infectado, las posibles vías de
penetración, la frecuencia de la exposición etc…
El estudio de la exposición a agentes biológicos en el lugar de trabajo puede ser simple si se trata de actividades que
impliquen la manipulación deliberada del agente, puesto que se conocen las características de los microorganismos
utilizados, o muy complejo en el caso de las actividades en las que pueda darse la presencia accidental de patógenos o
aquellas actividades en las que pueden estar presentes mezclas de diferentes microorganismos, como ocurre en las
actividades agrícolas, trabajos de eliminación de residuos, tratamiento de aguas residuales, etc… En estos casos, debe
considerarse los riesgos basándose en el peligro que supongan todos los agentes biológicos presentes y el
procedimiento para su identificación puede efectuarse mediante el estudio de indicadores que pongan de manifiesto su
exposición:
Indicadores globales (IGL), como el recuento de bacterias, hongos o levaduras viables totales que mediante
técnicas analíticas dan idea de la carga microbiológica total y permiten la identificación del microorganismo.
Indicadores de grupo (IGR), para grupos homogéneos de agentes biológicos y/o productos derivados.
Indicadores específicos (IES), indicados en el estudio de agentes biológicos específicos relacionados con un
entorno laboral concreto.
Indicadores individuales (IIN), en el caso de problemas específicos relacionados con un determinado agente
biológico puede establecerse una investigación de especies individuales, por ejemplo: Pseudomona aeruginosa.
*En la página 511, Tema 31 del libro básico propuesto para el estudio de la asignatura puede encontrarse un ejemplo que
aclara lo que definen cada uno de estos indicadores.
La evaluación de la exposición a cualquier tipo de contaminante debe iniciarse con la recogida de la máxima información
posible relativa a las características del trabajo y de su entorno y a las alteraciones de la salud existentes o sospechadas.
Esta información, proporciona las pautas por donde deberá transcurrir la investigación. Existe un primer método de
evaluación, cualitativo, denominado “Método de evaluación por presunción de presencia” que consiste en evaluar las
posibilidades de que un determinado ambiente laboral, procedimiento de trabajo o material manipulado, suponga un foco
de contaminación biológica que pueda afectar a la salud de los trabajadores expuestos. Se trata de una valoración del
sistema preventivo para la prevención de un riesgo biológico implantado en una determinada empresa. La valoración
concluye con la detección de deficiencias sobre el plan de prevención exigible para el control del riesgo, y la propuesta de
las medidas correctoras correspondientes. El procedimiento de evaluación deberá repetirse regularmente y cada vez que
se produzca un cambio en las condiciones que puedan afectar a la exposición de los trabajadores. La valoración del
riesgo permitirá establecer las medidas de contención que reduzcan la exposición y priorizar la acción preventiva.
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exposición a bioaerosoles y reconoce que la validación de los métodos de medición de microorganismos está limitada por
la falta de materiales y/o métodos de referencia.
Existen diferentes métodos de captación ambiental de contaminantes y se basan en pasar un determinado volumen de
aire sobre un soporte de retención del contaminante mediante un sistema de aspiración. Los soportes deben impedir la
destrucción de los microorganismos manteniéndolos vivos y contienen una sustancia gelatinosa a la que se añaden
elementos nutritivos que favorecen la reproducción de los microorganismos captados para su posterior conteo. Un
requisito imprescindible de todos los muestreadores de aerosoles es que deben tener una eficacia del muestreo
conocida.
Los procedimientos empleados para la captación de bioaerosoles que pueden cultivarse son:
Sedimentación, los microorganismos son recogidos por gravedad en placas Petri con un medio de cultivo
adecuado. Posteriormente, las placas se procesan según las técnicas microbiológicas más adecuadas.
Recogida en medio acuoso, consiste en pasar un volumen de aire a través de una solución isotónica
contenida en un frasco lavador y su posterior determinación cuantitativa.
Impactación, se basa en la retención de microorganismos libres o adheridos a partículas de polvo
(aerotransportados), en placas que contengan medios de cultivo.
Para los agentes biológicos que puedan encontrarse en forma de esporas, como el polen, se emplea la
Filtración como método de captación en la que un volumen de aire se filtra a través de filtros de gelatina que
pueden cultivarse posteriormente en un medio de cultivo adecuado.
En el caso de bioaerosoles no cultivables, se utilizan en su mayoría métodos de filtración sobre membrana, para detectar
la presencia de elementos celulares o técnicas cromatográficas (método que permite separar, identificar y cuantificar
los diferentes compuestos presentes en una mezcla líquida o gaseosa) en el caso de captación y cuantificación de
metabolitos.
7.3.1.2. Muestreo de superficie, esta técnica de muestreo permite determinar la posible contaminación por agentes
biológicos en las materias primas, el polvo, las propias personas, los instrumentos de trabajo, la ropa, las manos, el
mobiliario o los elementos de construcción que por sus características pueden convertirse en reservorios de agentes
biológicos. El muestreo de superficies es necesario puesto que la medición ambiental puede resultar en: inexistencia de
contaminación y dar lugar a “falsos negativos”, además, la medición de superficie permite la identificación de los focos de
contaminación que constituye uno de los objetivos fundamentales en la evaluación a la exposición a agentes biológicos.
Los procedimientos empleados para el muestreo de superficie son:
Placa de contacto, se trata de utilizar placas con un exceso de un medio de cultivo adecuado que se colocan
sobre la superficie a estudiar ejerciendo una ligera presión y manteniéndola inmóvil durante el contacto.
Frotis (Swab-rinse), este método se basa en la utilización de bolas de algodón envueltas en gasa estériles
(hisopos), que nos permiten muestrear zonas de difícil acceso para las placas de contacto y que posteriormente
se ponen en contacto con un medio de cultivo adecuado.
permitirá la formación de las colonias de algunos tipos de microorganismos. Existen diferentes variedades de medios de
cultivo en función del objetivo del análisis. Una práctica habitual en el laboratorio es utilizar diferentes medios de cultivo y
condiciones de incubación para poder poner de manifiesto el mayor número de microorganismos que sea posible.
Los soportes normalmente utilizados para la captación de microorganismos se pueden clasificar en:
Medios de cultivo generales, permiten el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos (bacterias,
hongos).
Medio de cultivo selectivo, estos medios contienen inhibidores que impiden el crecimiento de determinados
agentes biológicos y permite, por lo tanto, el crecimiento de un tipo específico de microorganismo.
Medio de cultivo diferencial, permite el crecimiento de varios microorganismos, pero contiene ingredientes que
producen diferencias de apariencia de algunos de ellos. Ejemplo: medio de cultivo de Agar Eosina - Azul de
metileno; este medio selectivo y diferencial se utiliza para la detección de las enterobacterias. Es un medio
selectivo porque la presencia del azul de metileno inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas, y es
diferencial puesto que, de las Gram-negativo, Escherichia coli, Klebsiella y Enterobacter forman colonias de
color azul púrpura con brillo metálico, mientras que Shigella, Salmonella o Pseudomonas forman colonias
incoloras o rosadas. La utilización de estos medios constituye la base de los métodos clásicos de la
identificación bacteriana.
Uno de los aspectos más importantes en el cultivo de microorganismos es la temperatura de incubación, que
habitualmente se corresponde con la del desarrollo normal del microorganismo en la naturaleza. La temperatura óptima
de incubación para microorganismos patógenos es de 37°C, que es la temperatura del cuerpo humano donde se
desarrollan estos microorganismos.
Para la manipulación, transporte, almacenamiento y eliminación de las muestras recogidas mediante las
diferentes técnicas comentadas previamente, hay que tener en cuenta varios puntos importantes con el fin de evitar
manipulaciones incorrectas que den lugar a errores en la medición:
Esterilización de soportes y medios de cultivo utilizados
Desinfección del equipo de muestreo
Desinfección de las manos o utilización de guantes estériles para la manipulación de las muestras
Sellado de los soportes hasta su utilización
Sellado posterior a la captación de la muestra
Transporte inmediato al laboratorio para su procesamiento
Procesamiento de las muestras mediante técnicas analíticas adecuadas
Almacenamiento limitado de las muestras a bajas temperaturas
Destrucción de los cultivos por esterilización en autoclave (sistema cerrado donde se forma vapor de agua y se
somete a una presión elevada lo que hace que el agua alcance una temperatura de 121ºC causando la
desnaturalización de enzimas y por lo tanto la muerte de los microorganismos y la destrucción de las esporas.
Habitualmente, se esteriliza a 121ºC durante 20 minutos. Existen algunos microorganismos como los priones
que son capaces de soportar las temperaturas de un autoclave. Posteriormente las muestras se eliminan por
incineración u otros métodos llevados a cabo por entidades autorizadas.
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Agentes físicos y biológicos y medicina del trabajo. UNED. Riesgos Biológicos. Raquel Martín Folgar.
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nuestro país ni en los de nuestro entorno socioeconómico. Las características propias de la naturaleza de los
contaminantes biológicos (su capacidad de reproducción, el hecho de que dentro de una misma especie microbiana
existan cepas con distinto poder patogénico o que factores como la temperatura o la humedad pueden condicionar su
presencia en un determinado ambiente), dificultan el establecimiento de unos criterios de valoración generalizados y
válidos para cualquier situación.
Sin embargo, algunos autores y organismos como la ACGIH (American Conference of Governmental Industrial
Hygienists), la AIHA (American Industrial Hygiene Association), la OMS (Organización Mundial de la salud), el HSE
(Health and Safety Executive), etc. han intentado establecer límites de exposición ambiental para agentes biológicos y
sus productos basándose en los efectos en la salud.
En un protocolo elaborado por el Comité sobre Bioaerosoles de la ACGIH para ambientes de oficinas, se
establece un modo de actuación en función de la concentración ambiental de agentes biológicos. Según este protocolo,
si la concentración supera las 10.000 Ufc/m3, se han de aplicar de inmediato una serie de medidas correctoras que se
describen en el propio protocolo. Mientras que si la concentración es inferior a las 10.000 Ufc/m3, recomienda identificar
los posibles agentes etiológicos pertenecientes tanto a bacterias como a hongos, y aplicar las medidas correctoras si
alguno de ellos excede las 500 Ufc/m3. Se entiende que estos niveles son aplicables para agentes no infecciosos y
siempre que no existan trabajadores que estén sensibilizados contra ellos o sus productos.
Existen normas o reales decretos para agentes específicos como, por ejemplo, el Real Decreto 865/2003, de 4 de julio,
por el que se establecen los criterios higiénico-sanitarios para la prevención y control de la legionelosis. También la Guía
técnica para la evaluación y prevención de los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos del INSHT
(2003) establece que en la actualidad se admite un límite máximo de exposición profesional a endotoxinas de 200 ng/m3.
Los efectos sobre la salud debidos a la exposición a agentes biológicos no infecciosos dependen no sólo de su
concentración en el aire, sino también de las especies presentes, su tamaño y sus condiciones de viabilidad y
crecimiento. Algunos autores consideran que los límites de exposición deberían establecerse de forma diferencial para
especies o grupos de microorganismos como bacterias gram-negativo, actinomicetos y esporas de hongos o para
sustancias tóxicas de origen microbiano como endotoxinas y alérgenos, en lugar de, para niveles totales de
microorganismos.
El hecho de que hoy en día se desconozcan las relaciones dosis-efecto de muchos contaminantes biológicos y
enfermedades en los seres humanos supone un gran obstáculo a la hora de establecer unos criterios de valoración que
faciliten la evaluación de la exposición a dichos contaminantes. Por tanto, para valorar los resultados obtenidos tras una
toma de muestras debe primar siempre el criterio profesional.
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ATENCIÓN: Para la preparación de este tema, se colgará en el curso virtual en la sección de “Documentos”, “Riesgos
Biológicos”, “Material evaluable” la siguiente documentación adicional en formato pdf que podrá ser objeto de preguntas
de examen:
BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA
1. Guía técnica, realizada por el Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo (INSHT), para la evaluación y
prevención de los riesgos derivados de la exposición a agentes biológicos durante el trabajo, conforme a lo
establecido en el Real Decreto 664/1997 del 12 de mayo, BOE nº 124.
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Normativa/GuiasTecnicas/Ficheros/agen_bio.pdf
2. REAL DECRETO 664/1997, de 12 de mayo, sobre la protección de los trabajadores contra los riesgos relacionados
con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo. BOE nº 124 24/05/1997.
http://www.insht.es/portal/site/Insht/menuitem.1f1a3bc79ab34c578c2e8884060961ca/?vgnextoid=a70817815b2d511
0VgnVCM100000dc0ca8c0RCRD&vgnextchannel=25d44a7f8a651110VgnVCM100000dc0ca8c0RCRD&tab=tabCon
sultaCompleta
3. Riesgos químicos y biológicos ambientales. Prevención de riesgos profesionales de grado superior. ITACA
(Interactive Training Advanced Computer Applications, S. L.). Ediciones CEAC 2006. Planeta DeAgostini Profesional
y Formación, S. L. IBSN: 978-84-329-1774-5
4. Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo (INSHT). Nota técnica de prevención nº 611 “Agentes
biológicos: análisis de las muestras”.
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros/601a700/ntp_611.pdf
5. Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo (INSHT). Nota técnica de prevención nº 409 “Contaminantes
biológicos: criterios de valoración”.
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http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros/401a500/ntp_409.pdf
6. Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo (INSHT). Nota técnica de prevención nº 609: “Agentes
biológicos: equipos de muestreo (I)”.
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros/601a700/ntp_609.pdf
7. Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo (INSHT). Nota técnica de prevención nº 610: “Agentes
biológicos: equipos de muestreo (II)”.
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros/601a700/ntp_610.pdf
8. Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo (INSHT). Nota técnica de prevención nº 608 “Agentes
biológicos: planificación de la medición”
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros/601a700/ntp_608.pdf
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