COCOS GRAM POSITIVOS

MICHAEL JAVIER MUÑOZ ORTIZ

DANIEL TAMARA TAMARA

NERLYS THOMAS SERRANO

UNIVERSIDAD DE SUCRE

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE MEDICINA

BIOESTRUCTURA IV

MICROBIOLOGIA

SINCELEJO-SUCRE

2010
 OBJETIVO GENERAL

 Estudiar las características de los cocos Gram positivos.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Observar cocos Gram positivos del género Streptococcus y Staphylococcus en

preparaciones fijas utilizando la técnica de coloración de Gram.

 Observar el crecimiento y características de cocos Gram positivos del genero

Staphylococcus en una siembra de agar chocolate.

 Observar el crecimiento y características de cocos Gram positivos del genero

Streptococcus en una siembra de agar sangre.
 MARCO TEORICO

Los cocos Gram positivos se pueden clasificar, en primera instancia, en cuanto a sus
requerimientos atmosféricos. Así tenemos los cocos Gram positivos anaerobios estrictos
constituidos por los géneros Peptococcus y Peptoestreptococcus, los cuales serán
estudiados en el capítulo referido a bacterias anaerobias.
Por otro lado tenemos los cocos Gram positivos aerobios y anaerobios facultativos que
están constituidos por la familia Micrococacceae (géneros Staphylococcus,
Micrococcus, Planococcus y Stomacoccus) y los géneros Streptococcus y Enterococcus.
De estos, los géneros que tienen gran importancia médica son Staphylococcus,
Streptococcus y Enterococcus.

Genero Staphylococcus.

Los Staphylococcus son células esféricas grampositivas, generalmente dispuestas en

racimos irregulares parecidos a racimos de uvas, estos crecen con rapidez sobre muchos
tipos de medios y son metabólicamente activos, fermentan carbohidratos y producen
pigmentos que varían desde el color blanco hasta el amarillo intenso. Algunos son
miembros de la flora normal de la piel y mucosas de los humanos mientras otros
producen supuración, formación de abscesos y varias infecciones piogénicas e incluso
septicemia mortal. Los Staphylococcus patógenos por lo general producen hemolisis y
coagulación del plasma y también producen enzimas y toxinas extracelulares.

El género Staphylococcus contiene al menos 35 especies pero existen tres de mucha

importancia clínica que son Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y
Staphylococcus saprophyticus.

S. aureus: Este patógeno del hombre, produce una serie de productos extracelulares
tóxicos que causan intoxicaciones alimentarias. También produce furunculosis y
septicemias.

S. epidermidis: Se localiza habitualmente en la piel humana. Es un patógeno

oportunista, puede producir endocarditis, septicemias, conjuntivitis e infecciones
urinarias.

S. saprophyticus: Posee la enzima ureasa y es capaz de adherirse a las células

epiteliales del tracto urogenital, Es causa frecuente de infecciones del tracto urinario en
mujeres jóvenes y uretritis en varones.
Los Staphylococcus tienen un diámetro aproximado de 1 µm y las células están
dispuestas en grupos irregulares. En líquidos de cultivo también se observan cocos
únicos en parejas, tétradas y cadenas, los Staphylococcus están desprovistos de
motilidad y no forman esporas.

Para su identificación y diferenciación en el laboratorio existen diferentes tipos de

pruebas diagnosticas en las cuales se tiene en cuenta la morfología celular, el color de la
colonia, la producción de enzimas (catalasa, coagulasa, DNAsa) la producción de
hemolisis y la susceptibilidad a la Novobiocina. Las pruebas diagnosticas más utilizadas
son las siguientes:

• Prueba de catalasa: esta es una prueba que se utiliza para la búsqueda de enzimas
del complejo citocromo oxidasa. El procedimiento que se lleva a cabo en esta
prueba es colocar una gota de de solución de peróxido de hidrogeno al 3% sobre
un portaobjetos y una pequeña cantidad del crecimiento bacteriano se coloca en
la solución. La formación de burbujas (producción de oxigeno) es indicativo de
una prueba positiva.

• Prueba de coagulasa: en esta prueba se utiliza plasma humano diluido 1:5 y se

mezcla con un volumen igual de caldo de cultivo sobre agar y se incuba a 37ºC.
Además se incluye como control un tubo de plasma mezclado con caldo estéril.
Si se forma coagulo en 1 a 4 horas de la prueba es positiva.

• Prueba de DNAsa: Permite diferenciar S.aureus que es la única especie dentro

del Género Staphylococcus que posee DNAsa de las otras especies. Esta prueba
Se basa en la presencia de la enzima termoestable DNAsa que es capaz de clivar
los enlaces fosfodiester internos de la molécula de DNA. Se utiliza un medio
sólido que contiene verde de metilo el cual se combina con DNA altamente
polimerizado. Cuando la combinación no ocurre, por acción de la enzima
DNAsa, se produce una decoloración del medio. El procedimiento que se lleva
a cabo es sembrar una colonia de Staphylococcus en forma de moneda en una
placa de medio sólido que contiene DNA y verde de metilo. Se incuba 18 horas
a 35º. Si se forma un halo transparente alrededor de la siembra indica presencia
de DNAsa.
• Susceptibilidad a la Novobiocina: el objetivo de esta prueba es separar
S.saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los demás estafilococos
coagulasa negativos. Varias especies del Género Staphylococcus son resistentes
a la novobiocina. Se siembra una placa de agar sangre con un hisopo embebido
en una suspensión de la cepa a estudiar. Luego se aplica el disco de novobiocina
y se incuba a 35º por 18 horas. Si se produce un halo de inhibición de
crecimiento menor o igual a 16mm corresponde a S. saprophyticus. Un halo de
inhibición mayor de 16mm corresponde a otros Staphylococcus coagulasa
negativos.

Genero Streptococcus.
Son bacterias esféricas grampositivas que se presentan en parejas o en cadenas cuando
crecen en medio líquido. Inmóviles, algunas especies poseen cápsula, son naerobios
facultativos, quimiorganótrofos y poseen un metabolismo fermentativo. Estas producen
hemólisis de la sangre cuando crecen en medios agar sangre. Son parásitos de
vertebrados, habitando fundamentalmente en el tracto respiratorio. Algunas especies son
patógenas de humanos y animales, otros tienen importancia en la industria láctea y
productos fermentados.

Según el tipo de hemolisis los Streptococcus se clasifican en:

ß hemolíticos: son aquellos que producen una hemólisis total de los glóbulos rojos,
observándose como un halo transparente alrededor de las colonias.
α hemolíticos: son aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa como un
halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias.
Gamma hemolíticos: son aquellos que no producen hemólisis sobre el agar sangre.

Las especies de Streptococcus de importancia médica son:

• Estreptococos del grupo A: Streptococcus pyogenes producen amigdalitis e

impétigo.
• Estreptococos del grupo B: Streptococcus agalactiae producen meningitis en
neonatos y trastornos del embarazo en la mujer.
• Neumococo: Streptococcus pneumoniae es la principal causa de neumonía
adquirida en la comunidad.
• Streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos
dentales.
• Streptococcus mutans causa importante de caries dental. Pertenece al grupo de
Streptococcus viridans.
 MATERIALES

 Colorante para la coloración de gram:

• Cristal violeta.

• Solución de lugol.

• Alcohol-acetona.

• Safranina.

 Laminas porta objetos.

 Solución salina o agua destilada.

 Cultivos de bacterias (Staphylococcus, Streptococcus).

 Cajas de petri con medios de agar sangre y agar chocolate.

 Asas redondas.

 Microscopio de luz.

 Mechero.
PROCEDIMIENTO
 RESULTADOS

En esta práctica de laboratorio se presentan los siguientes resultados:

Siembra en agar chocolate. Fig2: Observación de Streptococcus

en una caja de petri con agar sangre
24 horas después de su siembra.

Observación con tinción de Gram.

Fig1: Observación de Staphylococcus

en una caja de petri con agar chocolate
24 horas después de su siembra.

Fig3: Muestra Staphylococcus,

Siembra en agar sangre.
observadas al microscopio con
objetivo de 100x.
 ANALISIS DE LOS RESULTADOS

Los estafilococos son poco exigentes en sus necesidades; crecen bien en cualquier
medio ordinario, aunque lo hacen mejor en los medios enriquecidos, como el Agar
chocolate. Son aerobios y anaerobios facultativos, con una temperatura óptima entre 30-
37ºC.
Una particularidad de los miembros de este género es que crecen en medios con una
concentración de ClNa que no soportan el resto de los microorganismos (bacterias
halófilas). Esto permite la creación de medios de cultivo casi específicos para los
estafilococos. A las colonias mas aisladas en la placa se le realiza una tinción de gram,
donde se observa al microscopio cocáceas gram positivo en racimo.

Las colonias son visibles fácilmente, sobre todo en Agar chocolate y sangre, con forma
redonda y aplanada, bordes netos, superficie lisa y brillante, consistencia variable, sin
olor y en algunas ocasiones, hemolíticas.

Las colonias de estafilococo son fáciles de reconocer, relativamente son grandes tienen
de 2 a 3 mm o más, dependiendo de la edad del cultivo. Las colonias son circulares,
convexas, de superficie lisa, bordes enteros, cremosas, blancas o amarillas o doradas.
Para iniciar la identificación además de las características de crecimiento tanto en medio
líquido como sólido y la coloración de Gram, se utiliza la prueba de la catalasa que
permite diferenciarlos del género estreptococo, el cual carece de esta enzima.

Los estreptococos son aerobios y anaerobios facultativos, creciendo ligeramente mejor

en atmósfera de CO2 al 10%. Crecen bien a 35-37ºC, aunque algunas especies pueden
hacerlo perfectamente entre 10 y 50ºC.

Los miembros del género Estreptococos son muy exigentes en cuanto a requerimientos
nutritivos, necesitando casi siempre sangre entera o calentada para su crecimiento, por
ello para su cultivo en esta practica se utilizo Agar sangre con el fin de potenciar su
crecimiento, ya que esta es una bacteria muy selectiva para crecer en diferentes medios.
En el Agar sangre crecen lentamente, formando colonias muy pequeñas, apenas visibles
a simple vista, planas, consistentes. Por ello en el cultivo que se realizo de estreptococo
no se evidencio un cultivo apropiado, ya que como crece de forma lenta necesita más
tiempo para que se puedan observar sus características principales.
 CAUSA DE ERRORES

En el transcurso de la práctica de laboratorio se evidenciaron varios errores, entre los

cuales tenemos:

• El cultivo madre que proporcionaba el estreptococo, se vio algo alterado, ya que

en la tinción de gram que se le realizo no se observo rastros de esta bacteria al
microscopio, también en el cultivo de este se evidenciaron pequeñas y escasas
colonias, lo que demuestra que el cultivo madre estaba alterado.

• Algunas características morfológicas de las bacterias en estudio presentan sus

características diferenciales con un tiempo mayor a 24 horas, y en esta practica
se hicieron los resultados en base a un tiempo de 24 horas, siendo lo ideal mas
de este tiempo, en el caso del genero estreptococo.
 CONCLUSIONES

En el desarrollo de esta práctica y en el cumplimiento de los objetivos propuestos, se

puede concluir que:

 Los Streptococcus ß hemolíticos producen una hemólisis total de los glóbulos rojos.

 Los cocos Gram positivos que tienen gran importancia médica son Staphylococcus,

Streptococcus y Enterococcus.

 En la prueba de catalasa, la formación de burbujas es indicativo de una prueba

positiva.

 Los Staphylococcus patógenos por lo general producen hemolisis y coagulación del

plasma y también producen enzimas y toxinas extracelulares.

 El genero estreptococo es muy exigente en su medio de cultivo, ya que necesita de

condiciones especificas de temperatura y medios de cultivo (Agar sangre) para su

crecimiento.
 BIBLIOGRAFIA

 Staphylococcus aureus infections N Engl J Med 1998; 339:520.

 http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2019.pdf

 http://www.biologia.edu.ar/bacterias/micro4.htm

 http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/agalac.htm

 http://en.wikipedia.org/wiki/Streptococcus