Efek Hepatoprotektif Wortel (Daucus carota L.

)
pada Tikus yang diinduksi Paracetamol
Pushpendra Kumar Jain, Navneet Khurana, Yogesh Pounikar, Shailendra Patil, Asmita Gajbhiye
Departemen Ilmu Farmasi, Dr Hari Singh Gour Central University, Sagar, Madhya Pradesh, India E- mail: pushpendra_utd@rediffmail.com
Abstrak - Tanaman produk memainkan peran penting dalam hepatoprotection melalui properti antioksidan nya. Oleh karena itu, pencarian obat modern berasal dari tumbuhan
dengan properti ini telah menjadi fokus utama pada hepatoprotection hari ini. Penelitian ini diselidiki untuk mencari agen hepatoprotektif baru dari sumber alami, ekstrak metanol
tanaman nutitional, daun carota Daucus diuji terhadap kerusakan hati tikus albino. Kadar enzim penanda serum yaitu SGOT, SGPT (aminotransferase), ALP (alkaline phosphatase)
dan TB (bilirubin total) dalam serum masing-masing. Perubahan histopatologi bagian hati juga dibandingkan dengan kontrol masing-masing. 30% parasetamol diinduksi signifikan
(P <0,05) peningkatan enzim hati disertai dengan nekrosis hati dan disarrangements lainnya terlihat pada jaringan hati. Secara bersamaan, pengobatan oral dengan kaempferol
(KF) diisolasi dari tanaman D. carota dibalik untuk semua parameter serum dan hati, dosis-ketergantungan, di 30% parasetamol diperlakukan tikus. Hasil biokimia juga
dibandingkan dengan standar yaitu obat silymarin. Temuan ini menunjukkan potensi hepatoprotektif dari D. buah carota terhadap kerusakan hati mungkin disebabkan karena
adanya flavonoid seperti konstituen KF.
Kerusakan hati Kata kunci; kaempferol; Wortel; hepatoprotection; flavonoid.
I. PENDAHULUAN
Wortel merupakan sayuran yang dikenal secara ilmiah sebagai wortel L. milik keluarga Umbelliferae (Apiaceae). Mengenai nilai gizi nya, wortel memiliki jumlah berlimpah
karoten beta (provitamin A) yang memberikan sayuran warna khas. Selain itu, wortel kaya akan serat makanan, antioksidan dan mineral, terutama kalium. Isi nutrisi setiap wortel
mentah 100 g yang diperkirakan sebagai berikut: air (89 g), karbohidrat (8,71 g), protein (0,98 g), lipid (0,24 g), serat makanan (2,24 g), vitamin A ( 12 mg), vitamin C (7,1 mg),
kalsium (33 mg), magnesium (18 mg) dan kalium (240 mg), sebagaimana dicatat oleh Ensminger [1].
Mengenai manfaat kesehatan, wortel merupakan sumber yang sangat baik dari beberapa senyawa antioksidan seperti senyawa fenolik yang memainkan peran penting dalam
sifat antioksidan wortel dan turunan hydroxycinnamic lainnya seperti asam dicaffeoylquinic dalam ekstrak mungkin mengerahkan beberapa kegiatan antioksidan yang kuat
bersama dengan asam klorogenat [2] .suatu senyawa antioksidan wortel melindungi terhadap penyakit jantung dan cancer.Beta karoten melindungi terutama malam visi ditambah
bertindak sebagaikuat
antioksidandan memberikan perlindungan terhadap degenerasi makula dan pengembangan katarak snile [1].
Studi eksperimental dan klinis pada wortel (bubuk atau ekstrak) dan konstituen aktif (terutama karotenoid) mengungkapkan bahwa mereka memiliki efek hiperglikemik [3,
4]; aktivitas antikanker karena adanya alpha karoten dan falcarinol [5, 6] efek perlindungan terhadap penyakit jantung koroner [7], hipokolesterolemik dan kegiatan hipolipidemik
[8, 9].
Di sisi lain, konsumsi berlebihan karoten makanan kaya wortel dapat menyebabkan kondisi yang disebut “carotenoderma” di mana telapak tangan dan kulit lainnya
mengembangkan warna kuning karena tubuh perlahan-lahan mengkonversi karoten menjadi vitamin A. Untungnya, kondisi ini menghilang setelah pengurangan konsumsi wortel
[1].
Kerusakan hati yang terjadi karena infeksi, obat-obatan menginduksi toksisitas seperti Parasetamol (PCM), lingkungan dan faktor-faktor sosial seperti alkoholisme, dan
sebagainya [10]. Hepatcytes berpartisipasi dalam proses detoksifikasi tubuh dan dengan demikian menjadi rentan terhadap kerusakan melalui generasi radikal bebas [11]. Oksigen
reaktif radikal bebas telah dikenal untuk menghasilkan cedera jaringan melalui kovalen mengikat dan peroksidasi lipid dan telah terbukti meningkatkan fibrosis hepatoprotektif
Pengaruh Wortel (Daucus carota L.) pada Tikus Parasetamol Mabuk seperti yang terlihat dari sintesis kolagen meningkat [12]. Saat diamati peningkatan pesat di konsumsi obat
herbal di seluruh dunia telah dirangsang oleh beberapa faktor, termasuk gagasan bahwa semua produk herbal yang aman dan efektif [13]. Parameter untuk penilaian tingkat
hepatoprotectivity adalah serum glutamat oksaloasetat transminase (SGOT), serum glutamat piruvat transminase (SGOT), alkaline phosphatase (ALP) dan bilirubin total (TB)
bersama dengan pemeriksaan histopatologi jaringan hati.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mempelajari pengaruh makan konsentrasi yang berbeda dari wortel pada tikus hepatotoksik.

II. BAHAN DAN METODE

A. Hewan
muda baik tikus albino jantan atau betina (Wistar strain), dengan berat 120-150 g yang dibeli dari pemasok lokal (Sagar Biologicals) yang bertempat di kandang standar dan
dipertahankan pada suhu ambien dengan 12:12 cahaya h dan siklus gelap. Hewan diizinkan akses gratis ke makanan (chow standar laboratorium tikus) dan air selama penelitian.
Semua prosedur dilakukan sesuai pedoman dari CPCSEA komite dan penggunaan protokol dalam penelitian ini telah disetujui (No. Hewan Eths. Comms./10/87/40, 22/05/2010)
oleh panitia Kelembagaan Etika Animal.
Gambar 1: Struktur kimia kaempferol
B. Obat dan bahan kimia
kaempferol (. Cat No K0133) yang dibeli dari Sigma-Aldrich Pvt. Ltd, USA. SGOT, SGPT kit, glutation tereduksi, asam thiobarbituric dan bahan kimia lainnya yang dibeli
dari pemasok lokal.
C. Pembuatan ekstrak tanaman
Buah wortel dibeli dari pemasok lokal dan diidentifikasi (No. Bot./Herb./A- 1870) oleh Dr Pradeep Tiwari, Deptt. Botani, Dr. HS Gour Central University, Saugor (MP),
India. Buah yang kering bubuk (2kg) dari D. carota diekstraksi dengan metanol. Ekstrak pekat dilarutkan dalam air dan berturut-turut diekstraksi dengan heksana, etil asetat dan
butanol. Ekstrak butanol diuapkan di bawah vakum untuk menghasilkan (30 g) fraksi flavonoidal, yang memberikan tes Shinodha positif. Ekstrak dikenakan pemurnian lebih
kolom gel silika menggunakan kloroform: aseton: asam format (75: 16.5: 8) sebagai eluen; yang menghasilkan (25,5 mg) senyawa 1-6 masing-masing. Senyawa ini diidentifikasi
sebagai glikosida flavonol dan hidrolisis asam dari senyawa 1, 2 dan 6 hasil flavonoid dasar, kaempferol (KF) [14], senyawa 3 hasil Isorhamnetin dan senyawa 4 dan 5 hasil
Quercetin [15]. Fraksi 1, 2 dan 6 dicampur dan berkonsentrasi campuran diikuti dengan rekristalisasi dengan metanol. Jarum kuning kristal berbentuk kaempferol (Gambar 1)
diperoleh.
Gambar 2: photomicrographs histologi kontrol Vehicle (a), Parasetamol control (b), kontrol kaempferol (100 dan 200 mg / kg) (c dan d) dan Silymarin hati diperlakukan (e) tikus.
D. Karakterisasi terisolasi flavonoid

1. studi larut

untuk penentuan profil kelarutan KF, itu diambil secara akurat jumlah berat yaitu 2 mg dalam 10 ml pelarut yang berbeda dengan penurunan polaritas.
2. Penentuan fitokimia

Tes fitokimia yang berbeda diterapkan pada ekstrak yang berbeda untuk konfirmasi alkaloid, karbohidrat, tanin, resin, minyak atsiri dan juga untuk flavonoid.

3. Diferensial Scanning kalorimetri

Thermogram pemindaian kalorimetri diferensial (DSC) dicatat dengan instrumen Mettler Star SW 9.00 DSC. Sampel disegel di sel kerah aluminium dan dipanaskan dari 20
sampai 400 º C pada suhu 10ºC / menit. Onset dan endapan suhu puncak KF dicatat.

4. Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis KF dilakukan dengan menggunakan Silica gel 60 F254 yang digunakan sebagai adsorben dan etil asetat: asam format: air 6,5: 2,0: 1,5 (v / v / v) sebagai
fase gerak. Setelah dikembangkan, plat ditempatkan di ruang yodium. Nilai Rf KF dicatat dan dibandingkan dengan standar.
5. Penentuan titik leleh

Titik lebur KF ditentukan oleh aparatus titik leleh (Scientific International, New Delhi, India).

6. Studi spektroskopi inframerah

Spektrum Fourier Transform Infrared (FTIR) KF diperoleh pada spektrometer Perkin Elmer 400 FTIR dengan menggunakan nomor gelombang 500-4000 cm-1 pelet KBr homogen
disusun dengan mencampurkan dan menggiling 500 mg potassium bromida dan 5 mg sampel dalam mortar dan Kemudian kompres bubuk halus ini untuk mendapatkan hard disk
yang dimasukkan ke dalam dudukan sampel inframerah dengan hati-hati.
7. Spektroskopi Resonansi Magnetik Nuklir

The 1H-NMR KF dicatat dalam Bruker 400 UltrashieldTM menggunakan DMSO sebagai pelarut.

E. Jadwal perawatan

Tikus dibagi menjadi empat kelompok (n = 6). Kelompok I (Kontrol Kendaraan) dan Kelompok II (kontrol toksik) mendapat minyak zaitun sebagai kendaraan selama 7 hari.
Kelompok III menerima suspensi KF di CMC (0,5%) secara lisan. Hewan kelompok IV diberi obat standar yaitu silymarin (SL) secara oral selama 7 hari. Semua kelompok
kecuali kelompok kontrol kendaraan menerima campuran PCM setara (750 mg / kg; oral) dan minyak zaitun selama 7 hari setelah 30 menit pada hari terakhir pengobatan masing-
masing.

F. Evaluasi aktivitas hepatoprotektif

Sampel darah ditarik pada hari ke 8 dari pleksus retro-orbital tikus dan disimpan di tabung sentrifus terpisah. Darah dibiarkan membeku pada suhu kamar sekitar 1 jam dan
kemudian disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 menit. Serum dipisahkan dan disimpan pada -20◦C untuk estimasi SGOT, SGPT, ALP dan TB.

G. Studi histopatologis

Studi histologis pada bagian hati dilakukan dengan hematoxylin dan pewarnaan eosin. Bagian yang bernoda diamati di bawah mikroskop pada 40X [16].

H. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan Sigmastat 3,5; perangkat lunak statistik Data dianalisis menggunakan ANOVA satu arah diikuti dengan uji Tukey. Dalam semua
hasil, kriteria untuk signifikansi statistik adalah p <0,05.

HASIL
A. Studi kelarutan

Profil kelarutan KF diamati pada pelarut dan temuan yang berbeda yang terdaftar pada Tabel 1.

B. Pemeriksaan fitokimia

Hasil yang diperoleh dari penelitian fitokimia dilaporkan pada Tabel 2.

C. Kajian Kromatografi Lapis Tipis

Nilai Rf KF ditemukan 0,78 dan juga dibandingkan dengan standar.

D. Analisis Spektroskopi Inframerah

Spektrum IR KF menunjukkan puncak karakteristik pada 3411 (peregangan OH), 1663,1 (peregangan arli keton), 1608,8, 1523,5, 1496 (peregangan CC aromatik), 1383,1 (dalam
bidang OH bending fenol), 1318,9 (dalam bidang lentur CH ikatan dalam hidrokarbon aromatik), 1265 (peregangan CO aril eter), 1203 (peregangan CO fenol), 1167 (peregangan
C-CO-C dan tekuk dalam Ketone) dan 940,6, 821,4, 677, 602,3 cm-1 (keluar dari bidang CH membungkuk dari hidrokarbon aromatik).

E. Spektroskopi Resonansi Magnetik Nuklir

1H NMR (DMSO, 400 MHz) KF menunjukkan pergeseran kimia utama (δ) pada: 12,843 (s, 2H, 5-OH), 10,869 (s, 1H, 7-OH), 9.350 (s, 1H, 3-OH ), 7,35 (s, 1H, H-8), 6,85 (s,
1H, H5 '), 6,37 (s, 1H, H-4'), 4,58 (d, 1H, H-1 '), 4,04 (t, 1H, H-2'), 3,68 (d, 1H, H-6'a), 3,41 (dd, 1H, H6'b) 3,20 (m, 1H, H-3 '), 3,16 (m, 1H, H-5'), 3,14 (m, 1H, H -4 ') ppm.

F. Evaluasi untuk aktivitas hepatoprotektif

Hasil yang diperoleh untuk kadar SGOT, SGPT, ALP dan TB bersamaan dengan persentase perlindungan pada jaringan hati digambarkan pada Tabel 3 dan 4. SGOT (F (4,29) =
121,03, P <0,001), Tingkat SGPT (F (4,29) = 754,09, P <0,001), ALP (F (4,29) = 46,01, P <0,001) dan TB (F (4,29) = 10,71, P <0,001) secara signifikan meningkat pada kelompok
kontrol PCM dibandingkan dengan kontrol kendaraan. Efek ini dibalik dengan pengobatan bersama dengan KF yang menunjukkan tingkat penurunan SGOT, SGPT, ALP dan TB
yang signifikan (P <0,05) dibandingkan dengan kelompok kontrol perlakuan PCM.

G. Studi histopatologis

Profil histopatologis hati tikus yang diobati dengan PCM menunjukkan nekrosis centrolobular intens dan vaskularisasi. Degenerasi lemak diamati di daerah selain zona
antrilobular. Infiltrasi mononuklear di daerah perubahan lemak diamati. Hati tikus yang diobati dengan KF menunjukkan tanda-tanda perbaikan kerusakan hati akibat PCM yang
nyata karena terbukti dari adanya tali hepatika normal, tidak adanya nekrosis dan vakuola dan tingkat infiltrasi yang lebih rendah oleh sel-sel inflamasi yang sebanding dengan
SL. Perubahan histologis dengan kelompok kontrol yang berbeda disajikan pada Gambar 2.

IV. DISKUSI

Meskipun, carota Daucus memiliki aktivitas antioksidan karena efek pengurasan radikal bebasnya, mengapa juga melindungi hepatosit dari oksidasi akibat keracunan PCM
sehingga mengurangi luka hati.Dalam penelitian ini, KF diisolasi dari D, carota dan ditandai dengan studi kelarutan, DSC, KLT, titik leleh, analisis spektroskopi IR dan NMR.
Pemeriksaan fisikokimia dan spektroskopi ini dengan jelas menunjukkan bukti adanya KF secara terpisah. Dalam studi hepatoprotective in vivo menunjukkan bahwa KF adalah
phytoconstituent terapeutik aktif untuk memperbaiki efek agen hepatotoksik yaitu parecetamol dan menurunkan kadar SGOT, SGPT, ALP dan TB serum.
Radikal bebas oksidatif meningkat selama hepatotoksisitas dilaporkan memainkan peran penting dalam patogenesis kondisi ini. Ada banyak bukti yang menunjukkan KF memiliki
efek antioksidan [17]. Hal ini membuat kita tertarik untuk mengevaluasi efek antioksidan KF untuk peran terapeutik yang mendukung dalam hepatoproteksi.

Atas dasar investigasi dan hasilnya, kita dapat mencapai kesimpulan bahwa D. carota memiliki potensi terapeutik terhadap agen hepatotoksik seperti PCM karena adanya flavonoid
yang diberi nama kaempferol..