VALENTINA ARANGO RESTREPO
INTRODUCTION
Pseudomona aeruginosa
Gram-negative bacterium with non-
fermentative oxidative metabolism. It
is a monoflagellated bacilli that
develops in humid environments and is
associated to intrahospitalary
infections with limited therapeutic
options due to the resistance
mechanism that it is capable of
developing against various groups of
drugs.
Carbapenems
Beta-lactam antibiotics with a broad
spector of bactericidal activity because
they are highly resistant to beta-
lactamases. They act by inhibiting
peptidoglycan synthesis due to great
affinity for PBP, so they inhibit the
synthesis of the cell wall. They are
bactericidal and produce rapid lysis of
bacteria. The resistance to this kind of
antibiotics is due to the acquisition of
resistant genes encoding carbapenem-
hydrolyzing enzymes.
INTRODUCTION The Pseudomonas aeruginosa is one of the most
opportunistic pathogen that causes diseases such as
respiratory tract infections, otitis media and
nosocomial infections. The treatment for these
diseases is getting more complicated due to the
new mechanisms of resistance to different kind of
drugs including Carbapenems thah have been kept
as a last resort therapy for the control of MDR P.
aeruginosa infection, but this bacterias now has
resistant genes that encode for carbapenems-
hydrolyzing enzymes, such as metallo-B-lactamases
and for the development multidrug efflux
machinery which increase the resistance.
OBJECTIVE
The aim of this study is to examine the
coexistence of different genes encoding
carbapenemases in P. aeruginosa clinical isolates.
Also, the expression level of porins (OprD) and
efflux machinery were evaluated as contributing
mechanisms of carbapenem resistance in these
isolates. This can shed more light on promising
targets for developing strategies to defend the
dissemination of carbapenem resistance, propose
infection control regimens and assign suitable
treatment for such infection.
MÉTODOS
AISLAMIENTOS
Se identificaron 90 aislados
de P. Aeruginosa
Fuentes: esputo, orina,
exudados de pus
Mayo 2015 – Septiembre
2015
Recogidas en pacientes en
tratamiento ambulatorio y en
pacientes internos
SUCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
Fundamento:
Depositar en la superficie de una placa de agar
inoculada con el microorganismo, discos de papel
filtro cargados con antibióticos, crenado un
gradiente de concentración y la sensibilidad del
microorganismo esta indicada por el tamaño de la
halo en la zona de inhibición.
¿Para qué?
Este test se hace con el fin de determinar y
confirmar los antibióticos a los que la bacteria es
resistente según si hay o no crecimiento en el halo
de inhibición.
MÉTODOS
DETERMINACION DEL MIC
Fundamento:
Se preparan diluciones del antimicrobiano en
concentraciones con progresión geométrica de 2
con las que se inoculan las cepas y después se
incuban para evaluar el crecimiento bacteriano.
¿Para qué?
este test se hace con el fin de determinar que
concentración causa la inhibición del antimicrobiano.
TEST DE HODGE MODIFICADO
Fundamento:
Capacidad que tiene la enzima (Carbapenemasa)
de hidrolizar al antimicrobiano favoreciendo así el
crecimiento de ésta e inhibiendo el efecto antibiótico.
¿Para qué?
Esta prueba se hace para confirmar que
el mecanismo de resistencia de la bacteria a los
antimicrobianos del grupo carbapenémicos es
debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.
MÉTODOS
PCR
Fundamento:
Amplificación enzimática in vitro de un gen o un
fragmento de DNA o indirecta de RNA, la
amplificación es el incremento geométrico del
número de copias de la secuencia.
¿Para qué?
Este test tiene numerosas aplicaciones, en este
caso fue utilizado para identificar la presencia
de genes (blaVIM-1, blaVIM-2, blaNMD-1)
que codifican a carbapenemasas.
PCR EN TIEMPO REAL
Fundamento:
Sigue el mismo fundamento de la PCR convencional,
pero en este caso la amplificación y detección se
producen de manera simultanea en el mismo vial
cerrado, sin necesidad de una acción posterior.
Además mediante la detección por fluorescencia se
puede medir durante la amplificación la cantidad de
DNA sintetizado en cada momento.
¿Para qué?
Este test es utilizado para desarrollar ensayos
moleculares que permitan la identificación y
cuantificación de agentes infecciosos de interés clínico.
METÓDOS
¿Para qué?
PFGE Esta prueba tiene diferentes aplicaciones
como: determinación de las isoenzimas,
secuenciación de acidos nucleicos, mapas de
Fundamento: restricción. En este caso fue utilizado para
Separación de fragmentos de ADN realizer una caracterización molecular de los
cromosómicos de elevado tamaño mediante mecanismos de resistencia de la P.Aeruginosa
la aplicación de campos eléctricos, a carbapenemicos.
alternando la dirección de la corriente
eléctrica de manera pulsada a través de un
gel semisólido, la separación se da en
función de la mayor o menor dificultad que
presentan para moverse a través de los
poros, de tal manera que la velocidad de
los mismos será directamente proporcional
a su tamaño
RESULTADOS
RESULTADOS
RESULTADOS
RESULTADOS
DISCUSSION
AUTHOR CONCEPT AGREE / DISAGREE

Diab M [27] High prevalence of blaVIM-2

Zafer MM [28] among P. aeruginosa isolates
NMD-1 was reported with low
Zafer MM [36]
prevalence

OprD inactivation is the most

common mechanism of
Kim CH [42]
carbapenem resistance in P.
aeruginosa

P. aeruginosa isolates have

Sole M [44] several resistance mechanisms to
carbapenem
CONCLUSIONS
Bacteria develop mechanisms of resistance against
differents types of drugs, which makes treatment
difficult and facilitates the dispersion of strains
resistant to bacteria, and therefore increases
mortality against these infections.

The molecular characterization of Pseudomonas

aeruginosa allows to establish new parameters for
the treatment of these infections and to increase the
control mechanisms to avoid the spread of
Pseudomonas infections resistant to carbapenemics.