Paper of Research Result Seminar

AKTIVITAS EKSTRAK ANTIFUNGI ISOLAT AKTINOMISETES

SA E40 FS ASAL TANAH PERAKARAN MANGROVE SEGARA
ANAKAN, CILACAP TERHADAP PERTUMBUHAN JAMUR
PATOGEN TANAMAN
Silviyatun Ni’mah1, Dini Ryandini2, Endang Sri Purwati3
Pemrasaran1, Pembimbing I2, Pembimbing II2
Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman Purwokerto
Email: silviyatun4869@gmail.com

Abstract

Actinomycetes are Gram positive bacteria that able to produce bioactive

compounds e.g antifungal compound. This research aims to know the inhibitory
percentage of antifungal extract of actinomycetes against plant pathogenic fungi
(Fusarium sp., Rhizoctonia solani., Sclerotium rolfsii). This research used survey and
experimental methods. Survey method was used to get the best actinomycetes
isolates to against plant pathogenic fungi and to know the Rf value of antifungal
compounds. Experimental method by Factorial Completely Randomized Design with
two factors, i.e growth medium and incubation period. Each factor has three levels.
Each treatment was repeated 3 times. The independent variables were growth
medium SCN Broth (E1), ISP2 Broth (E3), ISP3 Broth (E3) and incubation period (7
days (T7), 14 days (T14), 21 days (T21), while the dependent variable was the
inhibitory percentage of antifungal extract against Fusarium sp., R. solani, and S.
rolfsii. The main parameter was the inhibitory percentage of antifungal extract
against plant pathogenic fungi. The supporting parameters were dry biomass weight,
and medium pH. The main parameters of survey method while, zone wide of
actinomycetes isolate against plant pathogenic fungi, and Rf value of Thin Layer
Chromatography (TLC). The data was analyzed by Analysis of Variance (ANOVA)
at 95% of confidence level, then followed by Duncan's Multiple Range Test
(DMRT). The result showed that 1 of 3 potential actinomycetes (SA E46 -3, SA 25,
SA E40 FS) has the best capability in inhibiting the growth of pathogenic fungi, i.e
actinomycetes isolate SA E40 FS. The best incubation period in producing antifungal
compound was 21 days. The widest percentage inhibitory showed by treatment
E1T21, with 43,38% against Fusarium sp., 41,03% against S. rolfsii, and 49,53%
against R. solani. The characteristic of antifungal extract has 3 fractions of bioactive
compound with Rf value ranged to 0,70-0,85.

Keywords: actinomycetes, antifungal activity, Fusarium sp., Rhizoctonia solani,

Sclerotium rolfsii.

PENDAHULUAN struktur tanah tersebut (Anas, 1989).

Keberadaan mikroba di dalam
tanah terutama dipengaruhi oleh sifat
kimia dan fisika tanah. Struktur tanah
akan menentukan keberadaan oksigen
dan lengas dalam tanah, sehingga hal
ini akan membentuk lingkungan mikro
dalam suatu struktur tanah. Mikroba
akan membentuk mikro koloni dalam
Menurut Rao (1994), rhizosfer
merupakan tempat pertemuan antara
tanah dengan akar tumbuhan. Jumlah
mikroba di daerah perakaran lebih
banyak dibanding di tanah yang tidak
terdapat perakaran, karena di daerah
perakaran terdapat nutrien-nutrien
seperti asam amino dan vitamin yang

1
diekskresikan oleh jaringan akar.
Hutan mangrove Segara Anakan
secara ekologis berfungsi sebagai
tempat pemijahan (spawning ground),
dan mencari makan (feeding ground)
bagi berbagai jenis hewan seperti ikan,
udang dan makrobenthos (Moosa et
al., 1996). Pembusukan bahan organik
dan penambatan nitrogen yang
disebabkan oleh adanya proses
dekomposisi sisa vegetasi di kawasan
mangrove menyebabkan tingginya
kelimpahan Aktinomisetes di tanah
kawasan mangrove, salah satunya di
Segara Anakan. Hal tersebut
dikarenakan mayoritas Aktinomisetes
merupakan saprofit tanah dan air
(Sunaryanto et al., 2009).
Karakteristik morfologi
aktinomisetes mempunyai struktur
hifa, termasuk dalam bakteri Gram
positif. Streptomyces, aktinomisetes
yang telah banyak dipelajari,
mempunyai kandungan G+C tinggi,
berkisar 51-70% (Putri & Nurkanto,
2016). Streptomyces dan
Micromonospora diketahui mampu
menghasilkan senyawa antifungi
(Sunaryanto et al., 2009).
Produksi senyawa metabolit
aktinomisetes dipengaruhi oleh
sumber nitrogen, komponen mineral,
dan sumber karbon pada medium
pertumbuhannya. Produksi senyawa
metabolit juga dipengaruhi oleh laju
pertumbuhan isolat yang digunakan
(Lertcanawanichakul et al., 2015).
Senyawa antifungi atau senyawa
antimikroba lainnya biasanya
dihasilkan pada awal fase stasioner
dalam pertumbuhan mikroorganisme.
Umumnya selama 14-21 hari masa
inkubasi merupakan fase stasioner dari
aktinomisetes (Mulyadi & Sulistyani,
2013). Evaluasi senyawa antifungi
yang dihasilkan dapat diidentifikasi
menggunakan metode Kromatografi
Lapis Tipis (KLT) dengan melihat
2
besarnya nilai retention factor (Rf)
(Sajid et al., 2011).
Jamur adalah organisme yang
sel-selnya berinti sejati (eukaryotic),
biasanya berbentuk benang,
bercabang-cabang, tidak berklorofil,
dinding selnya mengandung kitin,
selulosa, atau keduanya. Jamur ada
yang dikenal sebagai jamur patogen
bagi pertumbuhan tanaman,
diantaranya, Fusarium, Rhizoctonia,
dan Sclerotium (Semangun, 1996).
Salah satu metode pengendaliannya
adalah dengan menggunakan agensia
biologis seperti jamur dan bakteri.
Beberapa spesies bakteri seperti
aktinomisetes mampu menghambat
pertumbuhan jamur patogen dengan
cara memproduksi zat anti jamur
(antibiotika) dan enzim hidrolitik
ekstraseluller seperti kitinase dan
selulase yang mampu mendegradasi
dinding sel jamur patogen (Raharini et
al., 2012).
Berdasarkan uraian di atas
maka aktinomisetes berpeluang
sebagai agensia pengendali jamur
pathogen tanaman. Tujuan penelitian
adalah mendapatkan isolat
aktinomisetes yang mampu
menghambat jamur pathogen tanaman,
bagaimana kemampuan
penghambatannya dan mengetahui
senyawa antijamur yang
dihasilkannya.
METODE PENELITIAN
Materi penelitian
Materi yang digunakan dalam
penelitian adalah isolat aktinomisetes
SA E46-3, SA 25, dan SAE40FS
koleksi Laboratorium Mikrobiologi
Fakultas Biologi Unsoed, isolat jamur
patogen Fusarium sp., R. solani, S.
rolfsii, koleksi Laboratorium Mikologi
dan Fitopatologi Fakultas Biologi
Unsoed, media Strach Casein Nitrate
Agar (SCNA), Potato Dextrose Agar
(PDA), Strach Caseine Nitrate Broth
(SCNB), Yeast Extract Malt Extract
Broth (ISP 2), Oatmeal Broth (ISP 3),
etil asetat, alkohol 70%, spiritus,
akuades, pH universal, kertas saring
Whatman no. 41, TLC alumunium
sheet silica gel 60 F254 Merck, KOH
3%.
Alat yang digunakan dalam
penelitian ini adalah mikroskop, oven,
autoklaf, Laminar Air Flow (LAF),
timbangan analitik, microwave, hot
plate dan magnetic stirrer, corong
pemisah, termometer, pipet ukur dan
filler, pipet tetes, mikropipet dan tip,
microtube, Erlenmeyer, beaker glass,
object glass, cover glass, batang
drugalsky, cawan petri, botol sampel,
gelas ukur, tabung reaksi, rak tabung,
lampu bunsen, spatula, batang
pengaduk, sprayer, jarum ose, lemari
pendingin, pH universal, kamera, UV
cabinet.
Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Biologi Unsoed, pada bulan Juni-
Oktober 2017.
Metode Penelitian
Penelitian dilakukan secara
survey dan eksperimental. Metode
survey dilakukan untuk menyeleksi
isolat aktinomisetes yang memiliki
kemampuan anti jamur terbaik, uji
KLT senyawa aktif. Penelitian
mengenai penghambatan ekstrak
senyawa antifungi isolat aktinomisetes
terhadap jamur patogen tanaman
dilakukan dengan metode
eksperimental menggunakan
Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola
faktorial, yang terdiri atas dua faktor
yaitu jenis medium pertumbuhan dan
waktu inkubasi, dengan masing-
masing faktor terdiri atas tiga taraf.
Faktor pertama yang dicoba adalah :
3
E1 = Ekstrak senyawa antifungi dari
kutur SCNB
E2 = Ekstrak senyawa antifungi dari
kutur Yeast Extract Malt Extract Broth
(ISP 2)
E3 = Ekstrak senyawa antifungi dari
kutur Oatmeal broth (ISP 3)
Faktor kedua waktu inkubasi adalah :
T7 = Inkubasi 7 hari
T14 = Inkubasi 14 hari
T21 = Inkubasi 21 hari
Masing-masing perlakuan
diulang 3 kali. Variabel penelitian
berupa variabel bebas dan tergantung.
Variabel bebas pada metode
eksperimental adalah jenis medium
isolat aktinomisetes dan masa
inkubasi, sedangkan variabel
tergantungnya adalah aktivitas
penghambatan dari ekstrak senyawa
antifungi terhadap Fusarium sp., R.
solani, dan S. rolfsii. Parameter utama
yang diamati adalah persentase
penghambatan yang terbentuk oleh
ekstrak senyawa antifungi isolat
aktinomisetes terpilih. Parameter
pendukung adalah bobot kering
biomassa, dan nilai pH medium.
Parameter utama dalam penelitian
menggunakan metode survei adalah
lebar zona hambat terbesar yang
terbentuk oleh 3 isolat aktinomisetes
terhadap Fusarium sp., R. solani, dan
S. rolfsii, dan nilai Rf KLT ekstrak
senyawa antifungi yang dihasilkan
oleh isolat aktinomisetes terpilih.
Cara Kerja
Sterilisasi Alat dan Medium
Pertumbuhan (Novel et al, 2008)
Alat-alat gelas dan media
pertumbuhan (SCNA, SCNB, PDA,
ISP 2, dan ISP 3) disterilisasi
mengguna-kan autoklaf dengan suhu
121oC (250oF) dan pada tekanan 2 atm
selama 15 menit.
Peremajaan Isolat Aktino-misetes
dan jamur pathogen tanaman
(Sharma & parihar, 2010)
Isolat aktinomisetes SA E46-3,
SA 25, dan SAE40FS diremajakan
pada medium SCNA miring. Kultivasi
dilakukan selama 5-7 hari pada suhu
ruang. Rekultur isolat jamur patogen
Fusarium sp., R. solani,, dan S. rolfsii
pada medium PDA di dalam cawan
petri, diinkubasi selama 7x24 jam.
Seleksi Isolat Aktinomisetes
Menghambat Pertumbuhan Jamur
Patogen Tanaman (Kang et al,
2010)
Isolat aktinomisetes SA E46 -3,
SA 25, dan SA E40 FS masing-masing
diinokulasikan pada bagian tengah
cawan petri berisi medium SCNA
dengan metode streak. Kemudian,
diinkubasi selama 7x24 jam. Setelah
itu, jamur patogen diambil tiga plug
dengan diameter 4 mm dan diletakkan
di sebelah sisi isolat aktinomisetes
dengan jarak dari tepi cawan 2 cm.
Selanjutnya, diinkubasi pada suhu
ruang. Zona hambat yang terbentuk
diamati setiap 1x24 jam selama 3 hari.
Karakterisasi Isolat Aktinomisetes
Terpilih (Sharma & Parihar, 2010)
Pengamatan Morfologi
Pengamatan makromorfologi
dilakukan dengan parameter koloni
yang diamati meliputi: warna
miselium aerial, warna miselium
substrat, bentuk koloni, tepi koloni,
elevasi koloni, permukaan koloni dan
ukuran koloni. Pengamatan
mikromorfologi dilakukan dengan cara
mengamati tipe rantai spora
menggunakan mikroskop cahaya
dengan perbesaran 400 hingga 1000
kali dan mengamati sifat dinding sel
(sifat Gram).
4
Pengamatan sifat biokimia
Pengamatan sifat biokimia yang
dilakukan adalah sifat dinding sel atau
sifat Gram dengan KOH 3% (Powers,
E.M., 1995), uji oksidase (Atlas et al.,
1984), uji katalase (Atlas et al.,1984),
uji Oksidatif-Fermentatif (Kismiyati,
2009), uji IMViC (Indol, Methyl Red,
Voges Proskauer, Citrate) (Atlas,
1984), Uji Penggunaan Sumber
Karbon dan Produksi Asam pada
raffinosa, mannosa, laktosa, arabinosa,
sukrosa, fruktosa, xylosa, dan maltosa.
(Charousova et al., 2016)
Produksi Senyawa Antifungi
Medium Fermentasi SCNB, ISP
2 broth, dan ISP 3 broth steril
disiapkan sebanyak 100 ml dan
dimasukkan dalam botol sampel
ukuran 120 ml. Isolat aktinomisetes
terpilih sebanyak 6 plug masing-
masing diinokulasi-kan, selanjutnya
diinkubasi selama 21 hari dengan
penggojogan menggunakan shaker
incubator dengan kecepatan 250 rpm
pada suhu 28oC.
Setiap selesai masa inkubasi
dilakukan filtrasi, pengukuran pH
medium, dan pengukuran bobot kering
biomassa miselium. Pengukuran pH
medium dilakukan dengan
menggunakan pH meter. Filtrasi
dilakukan dengan menyaring filtrat
menggunakan kertas Whatman no.41
untuk memisahkan filtrat dengan
biomassa. Biomassa yang didapat
kemudian dikeringkan menggunakan
oven pada suhu 80oC selama 2 jam,
kemudian dilakukan penghitungan
bobot kering biomassanya
menggunakan rumus :
Bobot Kering = Bobot biomassa dan kertas -
bobot kertas saring
Ekstraksi Senyawa Antifungi
Filtrat diekstraksi dengan pelarut
etil asetat (1:1, v/v), penggojogan
filtrat selama 2x10 menit sehingga
antara filtrat dan pelarut terpisah dan
didapatkan ekstrak. Ekstrak kemudian Analisis Data
diuapkan menggunakan rotatory Data hasil pengukuran aktivitas
o
evaporator pada suhu 70 C. senyawa antifungi dianalisis dengan
metode Analysis of Variance
Uji Penghambatan Ekstrak (ANOVA) pada tingkat kepercayaan
Senyawa Antifungi 95%. Hasil uji ANOVA yang berbeda
Pengujian dilakukan dengan nyata dilanjutkan dengan uji Duncan’s
cara membuat sumuran pada bagian Multiple Range Test (DMRT). Hasil
tengah medium PDA. Sumuran karakterisasi dianalisis secara
ditetesi ekstrak senyawa antifungi deskriptif.
sebanyak 100 µL. ekstrak dibiarkan
meresap pada medium uji. Isolat jamur HASIL DAN PEMBAHASAN
patogen tanaman selanjutnya Hasil pengujian isolat
diinokulasikan di tiga titik pada aktinomisetes SAE46-3, SA25, dan
medium uji dengan jarak 2 cm dari SAE40FS yang berpotensi
sisi cawan. Setelah itu, di inkubasi dan menghambat pertumbuhan jamur
diamati setiap 1x24 jam selama 3 hari. patogen tanaman diperoleh isolat
Persentase hambatan yang terbentuk aktinomisetes SAE40FS (Gambar 1.),
diukur dan dihitung. Penghitungan hal ini dapat diketahui dengan adanya
persentase hambatan dilakukan dengan hambatan pada pertumbuhan jamur
rumus: patogen tanaman. Pertumbuhan pada
Persentase hambatan = R1-R2x(R1)-1x100% jamur uji yang terhambat
R1 = jari-jari koloni jamur yang berlawanan menunjukkan bahwa isolat SA E40 FS
dengan pusat antagonis
R2 = jari-jari koloni jamur menuju pusat
mampu menghasilkan senyawa
antagonis antifungi. Menurut Arifuzzaman et al.,
(2010) penentuan aktivitas
Karakterisasi Senyawa Antifungi penghambatan dapat diamati secara
(Prakash et al., 2013) kualitatif dengan memberi skor dari
Lempeng kromatografi diberi zona hambat yang terbentuk. Aktivitas
garis dan diberi penanda titik antifungi ditandai dengan
menggunakan pensil untuk pertumbuhan jamur patogen yang
menentukan titik awal dan titik akhir kurang baik.
jalannya senyawa Ekstrak kental Menurut Lahdenpera (2000),
senyawa antifungi (E1T21, E2T21, mekanisme penghambatan patogen
dan E3T21) sebanyak 10 µl masing- tanaman oleh Streptomyces yaitu, (1)
masing ditotolkan pada titik awal. melalui kompetisi yang terjadi di
Lempeng kemudian direndam dalam rhizosfer. Streptomyces mampu
eluen berupa campuran kloroform, etil menggunakan eksudat akar secara baik
asetat, dan asam asetat dengan untuk pertumbuhannya. (2)
perbandingan 5:3:1 hingga mencapai hiperparasitisme, kelompok
titik akhir. Lempeng diangkat dan Streptomyces mampu mempenetrasi
dikeringkan dalam oven pada suhu dinding miselium jamur patogen
80oC selama 10 menit. Lempeng Pythium, Rhizoctonia, dan Fusarium
kemudian diamati menggunakan alat oxysporum. Enzim pemecah dinding
UV cabinet. Spot yang terbentuk sel diperlukan dalam proses
diukur nilai Rfnya. hiperparasitisme.
Nilai Rf = jarak tempuh substansi/ SA E40 FS SA E40 FS SA E40 FS
jarak tempuh eluen

5 a b c

Gambar 1. Aktivitas penghambatan isolat
aktinomisetes SA E40 FS terhadap
pertumbuhan jamur patogen (a) Fusarium
sp.,(b) Sclerotium rolfsii,(c) Rhizoctonia
solani
Isolat aktinomisetes SA E40 FS
mempunyai morfologi koloni berupa
miselium substrat berwarna putih,
miselium aerial berwarna putih
keabuan, permukaan koloni berdebu
(powdery), bentuk koloni sirkuler, tepi
koloni berbingkul (undulate), elevasi
koloni menonjol (raised), ukuran
koloni kurang lebih 3 mm (gambar 2).
Morfologi sel yang dimiliki oleh isolat
ini diantaranya memiliki sifat Gram
positif yang ditunjukkan dengan tidak
terbentuknya lendir saat ditetesi KOH
3%, bentuk rantai spora yang dimiliki
oleh isolat ini adalah spiral.
a b
Gambar 2. (a) karakter kultur, (b)
morfologi koloni Isolat Aktinomistes
SA E40 FS
Menurut Holt et al., (2000),
salah satu ciri khas genus
Streptomyces, adalah koloninya
diselimuti oleh miselium udara yang
bebas dan hifa yang dikelilingi oleh
selubung (sheath) hidrofobik.
Awalnya hifa berwarna putih,
kemudian saat mulai pembentukan
spora hifa berubah menjadi warna-
warna tertentu. Selanjutnya, koloni
tampak memiliki serbuk di
permukaannya. Warna koloni
aktinomisetes berbeda-beda, karena
perbedaan kandungan pigmen dalam
selnya (Susilowati, 2007).
Hasil uji biokimiawi
menunjukkan bahwa isolat SA E40 FS
mempunyai sifat oksidatif dan
fermentatif, artinya isolat ini bersifat
6
aerob fakultatif. Hasil uji penggunaan
sumber karbon dan produksi asam
pada isolate SA E40 FS menunjukkan
isolat ini mampu menggunakan karbon
yang disediakan yaitu, xylosa,
raffinosa, mannosa, arabinosa,
fruktosa, sukrosa, ramnosa, dan
maltosa. Menurut Angustine et al.,
(2005) Streptomyces dapat
menggunakan sumber karbon dari
berbagai jenis gula antara lain
dextrosa, fruktosa, laktosa, maltosa,
mannitol, ramnosa. Sumber karbon
yang dimaanfaatkan Streptomyces
dapat mempengaruhi produksi dari
senyawa metabolit sekunder yang
dihasilkan.
Hasil uji IMVIC menunjukkan
bahwa isolat E40 FS negatif terhadap
uji ini. Menurut Tyagi et al., (2014)
semua isolat Streptomyces tidak
memiliki hasil positif pada uji IMVIC.
Hasil uji katalase dan oksidase
menunjukkan hasil positif. Hasil ini
sesuai dengan penelitian yang
dilakukan oleh Hasani et al., (2013)
yang menyatakan bahwa Streptomyces
mampu menghasilkan enzim katalase
dan sitokrom oksidase dalam
metabolismenya. Selain itu,
Streptomyces mampu mendegradasi
lignin, adenin, gelatin, dan pati.
Isolat aktinomisetes SA E40 FS
yang ditumbuhkan pada medium
produksi SCNB (E1), ISP 2 (E2), dan
ISP 3 (E3) diketahui dapat
menghasilkan senyawa antifungi yang
dapat menghambat pertumbuhan
jamur patogen tanaman. Pengujian
kemampuan isolat SA E40 FS
dilakukan dengan metode difusi,
menggunakan ekstrak senyawa
antifungi. Hasil pengujian
menunjukkan adanya penghambatan
dari ekstrak inkubasi hari ke-21
(E1T21, E2T21, E3T21) terhadap
pertumbuhan jamur patogen tanaman.
Berdasarkan pengujian yang dilakukan
diketahui bahwa E1T21 memiliki nilai
penghambatan terbesar terhadap
Fusarium sp., S. rolfsii dan R. solani
dengan persentase hambatan sebesar
43,38%, 41,03%, dan 49,53% (Tabel 1
dan Gambar 3.).
Kombinasi Persentase Hambatan (%)
Perlakuan
Fusarium R. solani S.
sp. rolfsii
E1T7 0 0 0
E1T14 0 0 0
E1T21 43,38 41,03 49,53
E2T7 0 0 0
E2T14 0 0 0
E2T21 38,72 34,74 35,86 Gambar 3. Zona Hambat Hasil Uji Ekstrak
E3T7 0 0 0 Senyawa Antifungi Isolat Aktinomisetes SA
E3T14 0 0 0 E40 FS (a) E1T21, (b) E2T21, (c) E3T21
Terhadap (1) Fusarium sp., (2) S. rolfsii, (3)
E3T21 36,32 36,09 31,87
R.solani.
Tabel 1. Persentase Hambatan Ekstrak Antifungi
Isolat Aktinomisetes SA E40 FS Terhadap Tabel 2. Analisis Ragam (ANOVA) Uji Penghambatan
Jamur Patogen Tanaman Ekstrak Senyawa Antifungi Isolat Aktinomisetes SA
E40 FS terhadap Fusarium sp
Hasil analisis ragam (ANOVA)
uji penghambatan ekstrak senyawa
antifungi isolat aktinomisetes terhadap
Fusarium sp. dan S. rolfsii
menunjukkan bahwa tidak adanya
interaksi dari dua perlakuan yang
diujikan (Tabel 4.3., Tabel 4.4., Tabel
Tabel 3. Analisis Ragam (ANOVA) Uji Penghambatan
4.5., Tabel 4.6.). Berdasarkan hasil Ekstrak Senyawa Antifungi Isolat Aktinomisetes SA
analisis yang diperoleh hanya waktu E40 FS terhadap S. rolfsii
inkubasi yang berpengaruh terhadap
produksi senyawa antifungi dalam
menghambat pertumbuhan jamur
patogen tanaman. Waktu inkubasi
yang tertinggi adalah hari ke-21.
Penghambatan ekstrak senyawa
antifungi isolat aktinomisetes terhadap Tabel 4. Analisis Ragam (ANOVA) Uji Penghambatan
R. solani menunjukkan bahwa adanya Ekstrak Senyawa Antifungi Isolat Aktinomisetes SA
interaksi dari dua perlakuan yang E40 FS terhadap R. solani

diujikan (Tabel 2., Tabel 3).

Berdasarkan hasil yang didapat
senyawa antifungi yang diproduksi
pada medium SCNB dan diinkubasi
selama 21 hari mempunyai pengaruh
terhadap pertumbuhan R. solani.
Berdasarkan hasil ini, maka hipotesis Penghambatan ekstrak senyawa
kedua ditolak. antifungi isolat aktinomisetes terhadap
R. solani menunjukkan bahwa adanya
interaksi dari dua perlakuan yang
diujikan (Tabel 4). Berdasarkan hasil
yang didapat senyawa antifungi yang
7
diproduksi pada medium SCNB dan
diinkubasi selama 21 hari mempunyai
pengaruh terhadap pertumbuhan R.
solani. Berdasarkan hasil ini, maka
hipotesis kedua ditolak.
Berdasarkan hasil penelitian
yang dilakukan diketahui persentase
hambatan yang dihasilkan masing-
masing ekstrak berbeda-beda. Hal ini
menunjukkan bahwa senyawa
antifungi yang dihasilkan mempunyai
mekanisme kerja yang berbeda
terhadap jamur uji. Menurut Pathania
dan Brown (2008), antifungi akan
menunjukkan aktivitas toksisitas
selektif dan berbeda pada tiap
organisme. Perbedaan daya hambat
juga dapat disebabkan karena
antifungi yang dihasilkan memiliki
perbedaan susunan kimia. Mekanisme
dan letak kerja antifungi dapat
dipengaruhi oleh adanya perbedaan
antifungi yang dihasilkan dan susunan
dari struktur kimianya.
Berdasarkan hasil penelitian
diketahui pada inkubasi hari ke-7 dan
14 isolat aktinomisetes belum
memproduksi senyawa antifungi.
Senyawa antifungi dihasilkan pada
hari ke-21 waktu inkubasi.
Berdasarkan penelitian
Lertcanawanichakul et al. (2015),
beberapa metabolit sekunder disintesis
tidak pada waktu yang sama dan tidak
pada semua waktu inkubasi. Produksi
senyawa metabolit dipengaruhi oleh
laju pertumbuhan isolat yang
digunakan. Senyawa antifungi atau
senyawa antimikroba lainnya biasanya
dihasilkan pada awal fase stasioner
dalam pertumbuhan mikroorganisme.
Fase stasioner merupakan fase disaat
kondisi medium pertumbuhan telah
kehabisan nutrisi dan terjadi
akumulasi zat sisa metabolisme yang
bersifat toksik (Madigan et al., 2015).
Umumnya selama 14-21 hari masa
inkubasi merupakan fase stasioner dari
aktinomisetes yang merupakan fase
8
mikroorganisme menghasilkan
metabolit sekunder diantaranya adalah
antibiotik dan pigmen (Mulyadi &
Sulistyani, 2013).
Berdasarkan hasil penelitian
yang diperoleh medium SCNB
merupakan medium yang optimal
dalam menghasilkan senyawa
antifungi. SCNB mempunyai
kandungan starch sebagai sumber
karbon, casein sebagai sumber
nitrogen, dan nitrate sebagai kofaktor.
Adanya komponen yang kompleks
pada medium SCNB ini menyebabkan
isolat aktinomisetes dapat
menghasilkan senyawa metabolit
sekunder dalam jumlah yang banyak.
Medium ISP 2 mengandung yeast
extract yang berfungsi sebagai sumber
nitrogen, dan adanya malt extract yang
berfungsi sebagai sumber karbon.
Medium ISP 3 mengandung oatmeal
yang berfungsi sebagai sumber karbon
(Wulandari & Sulistyani, 2016).
Biomassa yang dihasilkan dari
berbagai waktu inkubasi mengalami
peningkatan, namun untuk nilai akhir
pH medium fermentasi cenderung
fluktuatif (Tabel 4.8.). Menurut
Tarhan et al (2011), biomassa dan nilai
pH medium fermentasi mempengaruhi
produksi metabolit yang dihasilkan.
Semakin tinggi bobot biomassa yang
dihasilkan, maka produksi senyawa
metabolit pun semakin tinggi. Naik
turunnya pH medium fermentasi
dipengaruhi oleh aktivitas hidrolisis
senyawa-senyawa karbon yang
menghasilkan asam-asam organik,
sehingga akan mempengaruhi nilai
akhir dari pH medium fermentasinya.
Menurut Ayari et al., (2016)
perubahan nilai pH medium yang
terjadi dapat menginduksi
terbentuknya substansi baru yang
mempunyai pengaruh terhadap
produksi antibiotik ataupun antifungi.

Gambar 4. Histogram Biomassa Kultur Isolat Aktinomisetes
SA E40 FS Pada Medium dan Waktu Inkubasi
Berbeda Berdasarkan Berat Kering Miselium
Gambar 4.4. Histogram Nilai pH Medium Produksi Kultur
Isolat Aktinomisetes SA E40 FS Pada
Medium dan Waktu Inkubasi Berbeda
Berdasarkan Berat Kering Miselium
Ekstrak kasar senyawa antifungi
isolat aktinomisetes dikarakterisasi
menggunakan metode KLT. Hasil
karakterisasi menggunakan lempeng
kromatografi berhasil memisahkan
senyawa yang terkandung dalam
ekstrak kasar. Terpisahnya senyawa
satu dengan yang lainnya ditandai
dengan terbentuknya beberapa spot
berwarna setelah dilihat menggunakan
sinar UV dengan panjang gelombang
366 nm. Hasil yang diperoleh
menunjukkan fraksi-fraksi senyawa
aktif yang berbeda jaraknya terhadap
origin spot (titik awal). Berdasarkan
perhitungan antara jarak spot yang
terbentuk terhadap jarak tempuh eluen,
masing-masing ekstrak kasar
mempunyai jumlah fraksi yang sama
dan nilai Rf yang relatif sama. Ekstrak
E1T21 mempunyai 3 fraksi dengan
nilai Rf 0,78; 0,80; dan 0,84, ekstrak
E2T21 mempunyai 3 fraksi dengan
nilai Rf 0,70; 0,78; dan 0,80, serta
ekstrak E3T21 mempunyai 3 fraksi
9
dengan nilai Rf 0,70; 0,75; dan 0,82
(Gambar 4.5.).
Batas
eluen
c Origin spot
a b
Gambar 5. Profil KLT pemisahan senyawa
aktif dari ekstrak kasar isolat aktinomisetes
(a) E1T21, (b) E2T21, (c) E3T21
menggunakan fase gerak (eluen) kloroform,
etil asetat, dan asam asetat (5:3:1 v/v)
Tabel 5. Biomassa dan Nilai pH Medium Fermentasi
Isolat Aktinomisetes pada Medium dan
Waktu Inkubasi Berbeda
Nilai Rf ekstrak senyawa
c
antifungi isolat aktinomisetes yang
dihasilkan berkisar dari 0,70 hingga
0,80 sehingga hipotesis yang ketiga
dapat diterima. Diduga salah satu
fraksi memiliki aktivitas sebagai
senyawa antifungi. Menurut Ali
(2009) karakterisasi secara parsial
senyawa antifungi dari isolat terpilih
dapat menggunakan metode TLC-
Bioautografi. Menurut Prakash et al.,
(2013) ekstrak kasar aktinomisetes
(Streptomyces rochei MSA14)
dilakukan pemurnian secara parsial
menggunakan TLC menunjukkan
beragam spot dari suatu senyawa aktif,
dengan nilai Rf antara 0,22 hingga
0,99. Faktor yang mempengaruhi Anas. 1989. Biologi Tanah dalam
keberhasilan KLT adalah sifat dari praktek. Bogor: Institut Pertanian
penyerap dan derajat aktifitasnya, Bogor.
tebal dan kerataan lapisan penyerap, Angustine, SK., Bhavsar SP.,
pelarut fase gerak, derajat kejenuhan, Kapadamis, BP. 2005. Production
jumlah cuplikan, konsentrasi senyawa, of Growth Dependent Metabolite
serta suhu dan kesetimbangan (Wall, Active Against Dermatophytes by
2007). Streptomyces rachei AK39.Indian
journal Medical Research, 121,
pp. 164-170.
KESIMPULAN DAN SARAN Arifuzzaman, M., Khatun, M.R. dan
Kesimpulan Rahman,H. 2010. Isolation and
Kesimpulan pada penelitian ini Screening of Actinomycetes from
adalah : Sundarbans Soil for Antibacterial
1. Isolat aktinomisetes E40 FS asal Activity. African Journal of
tanah perakaran mangrove Segara Biotechnology, 9(29),pp. 4615-
Anakan Cilacap mempunyai 4619.
aktivitas antifungi terhadap Atlas, R.M., Brown, A.E., Dobra,
pertumbuhan jamur patogen K.W., dan Miller, L. 1984.
tanaman (Fusarium sp., Experimental Microbiology. New
Rhizoctonia solani, Sclerotium York: Macmillan Publishing
rolfsii). Company.
2. Waktu optimum isolat Ayari, A., Morakchi, H., dan Djamila,
aktinomisetes E40 FS dalam K.G. 2016. Isolation of Antifungal
menghasilkan senyawa antifungi Activity of Novel Marine
adalah 21 hari. Actinomycete, Streptomyces sp.
3. Senyawa antifungi isolat AA13 Isolated from Sediments of
aktinomisetes E40 FS mempunyai Lake Ougeria (Algeria) Against
karakter nilai Rf antara 0,70 hingga Candida albicans. African
0,84. Journal of Microbiology
Reseacrh, 10(6), pp. 156-171.
Charousova, I., Javorekova, S., Medo,
Saran J. dan Schade, R. 2016.
Perlu dilakukan penelitian lebih Characteristic of Selected Soil
lanjut untuk mengetahui fraksi aktif Streptomycetes with
sebagai antifungi dengan metode Antimicrobial Potential Against
bioautografi, dan menentukan jenis Phytopathogenic Microorganism.
senyawa antifungi dengan Journal of Microbiology,
menggunakan metode HPLC. Biotechnology and Food Sciences,
5(1), pp. 64-68.
DAFTAR REFERENSI Hasani, Amin., Ashraf K., dan
Khosrow I. 2013. Streptomycetes:
Ali, A. 2009. Skrining dan Characteristics and Their
Karakterisasi Parsial Senyawa Antimicrobial Activities.
Antifungi dari Actinomycetes International Journal of Advanced
Asal Limbah Padat Sagu Biological and Biomedical
Terdekomposisi. Jurnal Berk. Research, 2(1), pp. 63-75
Penel. Hayati, 14:219-225 Holt, J.G., Krieg, N.R., Sneath,
P.H.A., Staley, J.T., & Williams,
10
 S.T. 2000. Bergey’s Manual of
Determinative Bacteriology 9th
Edition. Lippincott Williams &
Wilkins, Philadelphia USA.
Kang,M.J., Strap, J.L. dan Crawford.
2010. Isolation and
Characterization of Potent
Antifungal Strains of The
Streptomyces violaceusniger
Clade Active Against Candida
albicans, J. Inda Microbiol.
Biotechnol, 37 pp. 35-41.
Kavitha., M. Vijayalakshmi., P.
Sudhakar., dan G. Narasimha.
2010. Screening of Actinomycete
Strains for The Production of
Antifungal Metabolites. African
Journal of Microbiology
Research, 4 (91), pp. 027-032.
Kismiyati., Subekti, R., Yusuf,
R.W.N., dan Kusdarwati, R. 2009.
Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Gram Negatif pada Luka Ikan
Maskoki (Carassius auratus)
Akibat Infestasi Ektoparasit
Argulus sp. Jurnal Ilmiah
Perikanan dan Kelautan, 1(2), pp.
129-134.
Lahdenpera, M.L. 2000. How
Mycostop Acts in the Control of
Fungal Plant Disease. Verdera, 5,
pp. 1-2.
Lertcanawanichakul, M., K. Pondet,
dan J. Kwanep. 2015. In Vitro
Antimicrobial and Antioxidant
Activities of Bioactive
Compounds (Secondary
Metabolites) Extracted from
Streptomyces lydicus A2. Journal
of Applied Pharmaceutical
Science, 5(02), pp. 17-21.
Madigan, M.T., Martinko, J.M.,
Bender, K.S., Buckley, D.H.,
& Stahl, D.A. 2015. Brock
Biology of Microorganisms
14th Edition. Pearson
Education, USA.
Moosa, Kasim, D. Rokhmin, M.
Hutomo, S.S. Ismu, and S. Salim.
11
1996. Indonesian Country Study
on Integrated Coastal and Marine
Biodiversity Management.
Ministry of State for Environment
Republic of Indonesia in
coorporation with Directorate for
Nature Management, Kingdom of
Norway.
Mulyadi., dan Sulistyani, N. 2013.
Aktivitas Cairan Kultur 12 Isolat
Actinomycetes Terhadap Bakteri
Resisten. Jurnal Kesmas, 7(2), pp.
55-122.
Novel, S.S., Asri, P.W., dan Ratu, S.
2008. Praktikum Mikrobiologi
Dasar. Jakarta: Erlangga
Pathania, Ranjana., dan Eric D.
Brown. 2008. Small and Lethal:
Searching for New Antibacterial
Compounds With Novel Modes of
Action. India: Departement of
Biotechnology, Indian Istitute of
Technology, Roorkee.
Powers, E.M. 1995. Fficacy of The
Ryu Nonstaining KOH technique
for rapidly Determining Gram
Reactions of Food-Borne and
Waterborne Bacteria and Yeasts.
Applied and Environmental
Microbiology, 61 (10), pp. 3756-
3758.
Prakash, S., Ramasubburayan, R., P.
Iyappraja., C. Kumar., C.J. Mary.,
A. Palavesam., dan G. Immanuel.
2013. Screening and Partial
Purification of Antifungal
Metaboliter from Streptomyces
rochei MSA14: an Isolate from
Marine Mining Soil of Southwest
Coast of India. Indian Journal of
Geo-Marine Sciences, 42(7), pp.
888-897.
Putri, Ade Lia dan Nurkanto, A. 2016.
Keragaman Aktinomisetes Asal
Serasah, Sedimen, dan Tanah
Pulau Enggano, Bengkulu. Berita
Biologi, 15(3), pp. 217-225.
Raharini, Aninda O., R. Kawuri., dan
K. Khalimi. 2012. Streptomyces
 sp. Sebagai Biokontrol Penyakit Journal of Appl. Biochem
Layu pada Tanaman Cabai Merah Biotechnol, 165, pp. 318-337.
(Capsicum annuum L.) yang Tyagi, J., Bhatnagar, T., & Pandey, F.
Disebabkan Oleh Fusarium 2014. Isolation and
oxysporum f.sp. capsici. Agrotrop, Characterization of
2(2), pp. 151-150. Actinomycetes from Soil and
Rao, N.S.S. 1994. Soil Microbiology, Screening Their Antifungal
Fourth Edition of Soil Activities. International Journal
Microorganism and Plant of Life Sciences Research, 2(4) :
Growth. USA: Science Publisher, 81-85.
Inc. Wall, P.E. 2007. Thin-Layer
Sajid, I., Shaaban, K.A. dan Hasnain, Chromatography: A Modern
S. 2011. Identification, Isolation Practical Approach. United
and Optimization of Antifungal Kingdom : Royal Society of
Metabolites from the Chemistry.
Streptomyces malachitofuscus Wulandari, Sabrina dan Sulistuyani.
CTF9. Brazilian Journal of 2016. Pengaruh Media Terhadap
Microbiology, 42, pp. 592-604. Pertumbuhan Isolat
Semangun. 1996. Pengantar Ilmu Actinomycetes Kode AL35 Serta
Penyakit Tumbuhan. Yogyakarta: Optimasi Produksi Metabolit
Gajah Mada University Perss. Antibakteri Berdasarkan Waktu
Sharma, Harpreet dan Leena.P. 2010. Fermentasi dan pH. Media
Antifungal Activity of Extracts Farmasi, 13 (2), pp. 186-198.
Obtained from Actinomycetes.
Journal of Yeast and Fungal
Research, 1(10), pp. 197-200.
Sunaryanto, R., Marwoto, B., Irawadi,
T. T., Mas’ud, Z.A., dan Hartoto,
L. 2009. Isolasi dan Penapisan
Aktinomisetes Laut Penghasil
Antimikroba. Jurnal Ilmu
Kelautan,14(2), pp. 98-101.
Susilowati, Dwi N., Ratih D. H., dan
Erny Y. 2007. Isolasi dan
Karakterisasi Aktinomisetes
Penghasil Antibakteri
Enteropatogen Escherichia coli
K1.1, Pseudomonas pseudomallei
02 05, dan Listeria
monocytogenes 5407. Jurnal
AgroBiogen, 3(1), pp. 15-23.
Tarhan, L., Kayah, H.A., Sazak, A., &
Sahin, N. 2011. The Correlation
Between TCA-Glyoxalate
Metabolite and Antibiotic
Production of Streptomyces sp.
M4018 Grown in Glycerol,
Glucose, and Starch Medium.

12