CARDIOMYOCYTES

PENGANTAR

Jantung manusia dewasa memiliki kemampuan terbatas untuk beregenerasi dan mengalami
perbaikan luas saat dibutuhkan, sebagai contoh setelah infark miokard. Perkembangan
teknologi stem cell yang pesat telah meningkatkan harapan untuk perawatan yang
revolusioner untuk gangguan jantung dan gangguan jaringan lainnya. Pluripotent stem cell,
human Embryonic Stem Cell (hESC) dan induced Pluripotent Stem Cell (iPs) yang diinduksi,
memiliki kemampuan untuk berdiferensiasi menjadi kardiomiosit fungsional dengan metode
diferensiasi ganda (Kehat et al., 2001, Mummery et al., 2003, Zhang et al., 2009, Freund et al.,
2010). Sebaliknya, kemampuan diferensiasi jantung pada dewasa, multipotent stem cell yang
ditemukan pada jaringan janin dan dewasa belum terselesaikan. Satu-satunya stem cell
dewasa yang jelas memiliki kemampuan untuk membedakan dengan kardiomiosit yang
berdenyut adalah sel progenitor jantung (Oh et al., 2003, Gouman et al., 2007).
Meskipun kardiomiosit dapat dibedakan, penggunaan terapeutik mereka masih dalam tahap
awal. Namun, kardiomiosit fungsional dapat dibedakan dari stem cell dan kardiomiosit
fungsional sendiri sangat berguna sebagai model sel jantung. Sebagai tambahan, peristiwa
saat diferensiasi sangat berharga untuk studi perkembangan. Meskipun kardiomiosit yang
berasal dari hESC menyerupai kardiomiosit janin yang menunjukkan karakteristik fungsional
dan struktural yang belum matang dibandingkan kardiomiosit dewasa, mereka memiliki
banyak kemampuan yang menjanjikan untuk industri farmasi dan untuk penelitian akademis
dasar. Perkembangan teknologi iPS manusia (Takahashi et al., 2007, Yu et al., 2007) telah
meningkatkan potensi penggunaan kardiomiosit terdiferensiasi lebih banyak lagi. Dengan
metode ini, garis stem cell yang spesifik pasien dapat diturunkan dan oleh karena itu contoh
penyakit untuk penyakit parah dapat diperoleh.
Namun, diferensiasi jantung masih belum terkontrol dan tidak efisien. Meskipun metode
diferensiasi yang baru didefinisikan dengan baik telah diterbitkan, diferensiasi spontan pada
tubuh embrio dan deferensiasi yang sedikit lebih diarahkan pada ko-kultur dengan sel END-2
masih banyak digunakan. Selain itu, garis hESC bervariasi dalam kemampuan mereka untuk
membedakan linement jantung.
Tujuan dari tesis ini adalah untuk mengevaluasi diferensiasi pluripoten stem cell (sel hESC dan
iPS) terhadap kardiomiosit dan untuk mengkarakteristikan sel yang terdiferensiasi. Selain itu,
potensi diferensiasi dari beberapa garis biakan hESC pada sel tikus dan sel feeder manusia
dievaluasi. Diferensiasi dilakukan dengan dua metode diferensiasi dan sebagai tambahan
terhadap beberapa metode karakterisasi biologi molekuler, sifat elektrofisiologi kardiomiosit
terdiferensiasi telah ditentukan.

REVIEW LITERATUR

STEM CELL
Stem cell adalah sel yang tidak khusus yang mampu memperbarui dirinya sendiri melalui
pembelahan sel atau dapat dibedakan menjadi sel jaringan atau organ-spesifik dengan fungsi
khusus (Wobus dan Boheler, 2005). Klasifikasi stem cell ditunjukkan pada Gambar 1. Sel-sel
di dalam embrio sampai tahap morula 8-sel adalah totipoten; Mereka bisa menghasilkan
seluruh organisme. Stem cell yang berasal dari massa sel dalam (ICM) blastokista tidak lagi
totipoten namun pluripoten, memiliki kemampuan untuk berdeferensiasi menjadi semua
jenis sel tubuh. Selain itu, organ tertentu memiliki multipotent stem cell yang memiliki
kemampuan diferensiasi lebih terbatas (Wobus dan Boheler, 2005).
Stem cell memungkinkan beragam penelitian perkembangan misalnya, garis keturunan
manusia awal, diferensiasi sel dan maturasi. Mereka dapat berfungsi sebagai model unik sel
manusia untuk penelitian akademis maupun industri farmasi. Selain itu, kemajuan dalam
penelitian stem cell telah meningkatkan harapan untuk terapi pengobatan sel yang baru
terhadap penyakit berat yang melibatkan kerusakan jaringan dan sel seperti diabetes,
gangguan neurologis, dan gagal jantung. Harapan dan perkembangan ini membangun
keberhasilan transplantasi stem cell hematopoietik sumsum tulang (HSCs) yang memiliki lebih
dari 30 tahun aplikasi pasien pada penyakit darah dan kanker (Thomas et al., 1959, Weissman,
2000).
 Figure 1. Origin and classification of stem cells. Zygote is totipotent, it can form any type of
cells and the whole organism. Pluripotent human embryonic stem cells (hESC) are derived
from the inner cell mass of the blastocyst-staged embryo. Induced pluripotent cells (iPS
cells) are also pluripotent and are derived from human somatic cells by reprogramming with
pluripotency inducing factors. Multipotent stem cells can be isolated from fetus or adult
Gambar
tissues. 1.Figure
Asal dan is klasifikasi
modified stemfrom cell. Zigot adalah
pictures by totipotent,Twomey
Catherine ia dapat membentuk semua
(http://www.nationalacademies.org/stemcells).
jenis sel dan keseluruhan organisme. Pluripotent human embryonic stem cell (hESC) berasal
dari massa sel dalam embrio blastokista. Sel pluripotent yang diindukasi (sel iPS) juga
20 ulang dengan faktor
pluripotent dan berasal dari sel somatik manusia dengan memprogram
induksi pluripotent. Multipotent stem cell dapat diisolasi dari janin atau jaringan dewasa.
Gambar dimodifikasi oleh Catherin Tworney
((http://www.nationalacademies.org/stemcells).
PLURIPOTENT STEM CELL
HUMAN EMBRYONIC STEM CELL
Istilah “embryonic stem (ES) cell” diperkenalkan pada tahun 1981 untuk membedakan sel
pluripotent yang berasal dari embrio dengan sel pluripotent embrional karsinoma yang
berasal dari teratokarsinoma (Martin, 1981). Sel ES pertama berasal dari tikus ICM pada tahun
yang sama (Evans dan Kaufman, 1981) dan pada tahun 1994 Bongso dkk melaporkan
keberhasilan isolasi sel-sel ICM manusia dan kultur mereka dilanjutkan untuk setidaknya dua
bagian in vitro (Bongso et al., 1994). Garis stem cell embrionik manusia permanen pertama
diturunkan lebih dari satu decade yang lalu oleh Thomson dkk (Thomson et al., 1998) dan
garis-garis ini masih banyak digunakan. hESC berasal dari ICM blastokista (Thomson et al.,
1998), morula (Strelchenko et al., 2004) atau bahkan dari embrio preimplantasi tahap akhir
(7-8 hari) (Stojkovic et al., 2004). Embrio manusia telah disumbangkan untuk penelitian oleh
pasangan yang menjalani perawatan fertilisasi in vitro dan sebaliknya mereka akan
membuangnya karena embrio berkualitas tinggi atau buruk.
hESC mampu berkembang biak secara ekstensif pada keadaan yang tidak berdiferensiasi
secara in vitro dan memiliki kemampuan untuk membedakan ke tiga lapisan kuman dan
selanjutnya dapat, pada prinsipnya, memberikan perkembangan pada semua jenis sel tubuh.
HESC mengekspresikan faktor transkripsi dan marker permukaan yang terkait dengan
perbedaan, seperti Octamer-4, domain POU, kelas 5, faktor transkripsi 1 (Okt4), Nanog
homeobox (Nanog), wilayah penentuan jenis kelamin Y-box 2 (Sox2), tahap embrio spesifik
antigen 4 (SSEA-4), antigen terkait tumor 1-60 (TRA-1-60) dan TRA-1-81 (Hoffman dan
Carpenter, 2005). Aktivitas telomerase dan alkalin fosfatase dari hESCs tinggi dan kariotipe
harus normal dan tetap tidak berubah selama periode kultur yang diperluas (Hoffman and
Carpenter, 2005).

INDUCED PLURIPOTENT STEM CELL

Kloning mamalia pertama, "Dolly" domba, menunjukkan bahwa nukleus dari sel yang
terdiferensiasi diprogram ulang ke dalam keadaan yang tidak berdiferensiasi (Wilmut et al.,
1997). Kloning Dolly dicapai dengan teknik yang disebut transfer nuklir sel somatik (SCNT), di
mana inti oosit digantikan oleh inti yang berasal dari sel somatik. Pada prinsipnya, embrionik
stem cell juga dapat diturunkan dari embrio yang diproduksi oleh SCNT yang memungkinkan
produksi garis hESC spesifik pasien. Namun, teknik ini memiliki syarat etis yang besar, karena
embrio manusia hanya diproduksi untuk produksi sel ES dan sejumlah besar oosit manusia
akan dibutuhkan. Selain itu, banyak negara telah melarang kloning manusia oleh undang-
undang (Yamanaka, 2008). SCNT ditunjukkan pada Gambar 2.
hESC mengandung faktor-faktor yang dapat menginduksi pemrograman ulang inti sel somatik
(Cowan et al., 2005, Allegrucci et al., 2007). Oleh karena itu fusi sel somatik dengan sel ES
meregenerasi sel pluripoten. Namun, sel pluripoten yang diperoleh dari fusi mengandung
kedua kromosom dari sel ES dan dari sel somatik yang mengakibatkan penolakan jika
ditanamkan (Yamanaka, 2008). Fusi sel ditunjukkan pada Gambar 2.
Namun demikian, temuan di atas menuntun peneliti mencari faktor yang menginduksi
pemrograman ulang. Akhirnya, pada tahun 2006 Takahashi dan Yamanaka memperkenalkan
empat gen pluripoten; Oct4, Sox2, c-myc dan Krupple-like family transcription factor 4 (Klf4),
yang dapat memprogram ulang embrionik tikus sebagaimana fibroblast dewasa menjadi
pluripotent stem cell (Takahashi dan Yamanaka, 2006). Tahun berikutnya faktor yang sama
digunakan untuk membuat sel pluripoten yang diinduksi (sel iPS) dari fibroblas manusia
(Takahashi et al., 2007). Sel iPS manusia juga diperoleh oleh Thomson dan rekan kerja dengan
menggunakan Oct4 dan Sox2 dalam kombinasi dengan Nanog dan Lin-28 homolog (Lin28),
bukan c-myc dan Klf4 (Yu et al., 2007). Sejak saat itu, perkembangan di bidang ini sangat
intensif dan teknik ini telah dijadikan terobosan besar dalam penelitian stem cell. Sel iPS
diilustrasikan pada Gambar 1 dan 2.
 Thomson and co-workers by using Oct4 and Sox2 in combination with Nanog and
Lin-28 homolog (Lin28) instead of c-myc and Klf4 (Yu et al., 2007). Ever since, the
development in this field has been very intensive and this technique has been
designated as a major breakthrough in stem cell research. The iPS cells are
illustrated in Figure 1 and 2.

Figure 2. Pluripotent hESC lines can, in principle, be derived from embryos obtained by
somatic cell nuclear transfer (up), where the nucleus from the somatic cell is transferred to
an enucleated egg. Pluripotent hESCs can also be obtained by fusing a somatic cell with an
ES cell (right). The somatic cell can also be reprogrammed to plutipotent state by
Gambar 2. Garisinducing
pluripotency hESC pluripoten pada
factors. Figure prinsipnya
is modified fromdapat diturunkan
pictures by CatherinedariTwomey
embrio yang
(http://www.nationalacademies.org/stemcells).
diperoleh melalui transfer sel somatik (naik), di mana nukleus dari sel somatik dipindahkan
ke telur enukleat. hESC pluripoten juga dapat diperoleh dengan menggabungkan sel somatik
The iPS cells have the same genome as the person whose cells have been
dengan sel ES (kanan). Sel somatik juga dapat diprogram ulang ke keadaan pluripotent dengan
reprogrammed and this makes it possible to obtain patient specific stem cells. These
faktorcells can be differentiated
penginduksi andGambar
pluripotency. they candimodifikasi
serve as a celldari
or disease
gambarmodel
oleh or even mayTwomey
Catherine
lead to stem cell therapies in the future (Dimos et al., 2008, Park et al., 2008).
(http://www.nationalacademies.org/stemcells).
The iPS cells share the characteristics of hESCs, such as expression of
pluripotency markers, differentiation capability and need for supporting matrix of

Sel iPS memiliki genom yang sama dengan orang yang selnya telah diprogram ulang
22 dan ini

memungkinkan untuk mendapatkan spesifik stem cell pasien. Sel ini dapat dibedakan dan
dapat berfungsi sebagai model sel atau penyakit atau bahkan dapat menyebabkan terapi
stem cell di masa depan (Dimos et al., 2008, Park et al., 2008).
Sel iPS berbagi karakteristik hESCs, seperti ekspresi marker pluripotency, kemampuan
diferensiasi dan kebutuhan untuk matriks pendukung lapisan feeder. Selain itu, metode kultur
sel dan diferensiasi serupa untuk kedua tipe stem cell (Takahashi et al., 2007).
MULTIPOTENT STEM CELL
STEM CELL JANIN
Stem cell janin dapat diperoleh baik dari janin atau dari struktur ekstra embrio seperti darah
tali pusat, cairan ketuban, Wharton’s jelly, membran amnion dan plasenta (Hemberger et al.,
2008, Pappa dan Anagnou, 2009). Penggunaan janin itu sendiri sebagai sumber stem cell
memiliki pertimbangan etis yang besar sedangkan struktur eksta embrio dapat disebut
sebagai sumber stem cell yang ideal. Jaringan ini tidak dapat dibuang setelah lahir dan
memiliki jaringan besar sehingga stem cell mudah dipanen. Selain itu, stem cell yang berasal
dari janin mengekspresikan marker stem cell yang serupa dengan hESCs, sedangkan potensi
diferensiasi mereka berada di antara hESC dan stem cell dewasa (Guillot et al., 2007, Pappa
dan Anagnou, 2009).

STEM CELL DEWASA

Stem cell dewasa adalah sel yang tidak berdiferensiasi yang ditemukan pada jaringan yang
berbeda yang memiliki keterbatasan kemampuan pembaharuan dan diferensiasi diri,
biasanya terbatas pada jenis sel jaringan tempat mereka berasal (Choumerianou et al., 2008).
Meskipun stem cell dewasa memiliki kemampuan diferensiasi dan self-renewal yang terbatas,
mereka sangat cocok untuk tujuan terapeutik; stem cell pasien sendiri dapat digunakan dan
oleh karena itu penolakan dapat dielakkan. Selain itu, stem cell dewasa tidak memiliki syarat
etis dan mudah diisolasi (Choumerianou et al., 2008).
Seperti yang disebutkan, mungkin sumber stem cell yang paling terkenal adalah sumsum
tulang (BM: Bone Marrow). Transplantasi sumsum tulang autologous telah digunakan pada
banyak pasien dengan kanker, termasuk sistem hematolymphoid (limfoma dan leukemia), sel
plasma (multiple myeloma), dan kanker payudara (Thomas et al., 1959, Thomas, 1999,
Weissman, 2000). Sumsum tulang mengandung dua jenis stem cell multipoten. Stem cell
hematopoietik (HSC) mampu menjadi semua jenis sel darah (Orkin, 2000) dan stem cell
mesenchymal (MSCs) dapat dibedakan menjadi beberapa jenis sel jaringan mesenchymal
seperti tulang, tulang rawan, selulosa dan sel otot (Pittenger et al., 1999). Selain sumsum
tulang, MSC dapat ditemukan di hampir semua organ dan jaringan postnatal, mis. dari
jaringan adiposa (da Silva Meirelles et al., 2006). Stem cell yang berasal dari jaringan adiposa
(ASC) mudah dipanen dalam jumlah besar dan dilaporkan memiliki sifat dan potensi.
diferensiasi yang sama dengan BM-MSC (Zuk et al., 2001, Zuk et al., 2002, Lindroos et al.,
2009).

STEM CELL JANTUNG

Secara klasik, jantung diklasifikasikan sebagai organ post-mitosis. Namun, dukungan untuk
kemampuan regeneratif endogen jantung telah datang dari penelitian yang menentukan usia
sel manusia. Jangka hidup kardiomiosit manusia telah berhasil dipelajari dengan
memanfaatkan tingkat sel jantung 14C dan sesuai dengan hasil, selama umur manusia rata-
rata, separuh pada kardiomiosit diganti (Bergmann et al., 2009). Bukti lebih lanjut untuk
kemampuan regeneratif jantung berasal dari penelitian terbaru tentang sel progenitor
jantung manusia. Sel manusia dengan kemampuan untuk membedakan menjadi kardiomiosit
telah diperoleh dari biopsi miokard (Goumans et al., 2007). Beberapa jenis sel dengan
karakteristik stem cell telah ditemukan dari jantung termasuk sel yang mengekspresikan
reseptor faktor stem cell(Bear-et al., 2007) atau stem cell antigen-1 (Sca-1) pada permukaan
selnya (Oh et al., 2003). Selain itu, sel-sel yang mengekspresikan faktor transkripsi
homeodomain islet-1 (Isl-1) (Laugwitz et al., 2005), sel populasi samping (SP) (Pfister et al.,
2005) dan sel yang dapat tumbuh pada kardiospher telah ditemukan. (Messina et al., 2004).
Sel progenitor jantung telah dinominasikan sebagai sel kandidat untuk regenerasi jantung dan
kerja intensif sedang berlangsung untuk mengaktifkan sel-sel ini untuk berkembang biak dan
berdiferensiasi secara in situ. Namun, asal dan kemampuan spesifik yang membentuk sel
jantung fungsional dari progenitor ini harus lebih teliti (Gonzales dan Pedrazzini, 2009).

KARAKTERISTIK STEM CELL EMBRIONIK MANUSIA

GARIS STEM CELL

Pada akhir tahun 2009, jumlah total garis hESC di seluruh dunia diperkirakan 1 071 (Loser et
al., 2010). Meskipun jumlah garis hESC meningkat tajam sejak tahun 2005, estimasi menjadi
414 baris pada saat itu, dua garis H1 dan H9 (WiCell Research Institute) telah menjadi jalur
hESC yang paling banyak digunakan dalam penelitian sel punca (Guhr et al., 2006). , Scott et
al., 2009, Loser et al., 2010). Terlepas dari banyaknya garis, jumlah garis yang tersedia dan
ditandai dengan baik mungkin jauh lebih rendah. Karena data karakterisasi yang buruk
diterbitkan, tetap merupakan pertanyaan terbuka apakah garis sel yang dilaporkan dalam
literatur ilmiah menunjukkan karakteristik garis sel pluripoten manusia dan tersedia untuk
penelitian (Loser et al., 2010).
Penggunaan garis WiCell secara luas sebagian disebabkan oleh kibajakan dan undang-undang
tentang penggunaan hESC di negara-negara tertenu, seperti di Amerika Serikat. Pada bulan
Agustus 2001, Presiden Bush mengeluarkan sebuah undang-undang yang melarang
pendanaan federal untuk penelitian yang dibuat dengan garish ESC yang diturunkan setelah
tanggal tersebut (Murugan 2009). Meskipun Presiden Obama mencabut kebijakan Bush pada
tahun 2009 yang menungkinkan penggunaan garish ESC yang diturunkan setelah 2001, dana
federal untuk derivasi garish ESC baru masih dilarang (Murugan, 2009). Namun demikian,
karena perbedaan antara garis stem cell, dominasi beberapa garis dalam penelitian hESC
dapat mengurangi penerapan universal dari hasil dan oleh karena itu membatasi
perkembangan lapangan (Loser et al., 2010).
Jika hESC digunakan dalam aplikasi klinis, seharusnya ada cukup stem cell untuk menutupi
spektrum antigen tranplantasi dan selanjutnya untuk menghindari masalah penolakan
kekebalan tubuh. Diperkirakan bahwa di Inggis, 150 haris hESC yang diperoleh secara acak
akan menghasilkan antigen leukosit manusia (HLA) yang beranfaat bagi sebagian besar
potensial resipien (Taylor et al., 2005). Selain itu, variasi genetik dari garish ESC juga lebih baik
untuk skrining obat dan aplikasi keselamatan famakologi industri farmasi (Ingelman-Sundberg
dan Rodriguez-Antona, 2005, Allegrucci dan Young, 2007).
Teknik derivasi kultur hESC bervariasi antar laboratorium (Allegrucci dan Young, 2007). Selain
itu, tahap balstokista, tahap ketika hESC diturunkan, ditandai oleh tingginya aktivitas
epigenetic, termasuk metilasi DNA, inaktivasi kromosom X dan pemodelan dinamik kromatin
(Bibikova et al., 2006). Olek karena itu, dapat dimengerti bahwa garish ESC berbeda dalam
hal epigenetic, misalnya sel H7 hES tidak mengekspresikan penanda inaktivasi kromosom X
seperti pada H9 dan hES 25 (Hoffman dan Carpenter, 2005). Selain itu, tidak diketahui
seberapa stabil profil epigenetik sel ES selama kultur jangka panjang, atau bagaimana hal itu
dapat berubah seiring dengan sel yang berdiferensiasi sepanjan jalur perkembangan yang
berbeda (Bibikova et al., 2006).
Oleh karena itu, variasi derivasi dan perawatan dikombinasikan dengan variasi genetik sampel
manusia mengarah pada garish ESC dengan sifat yang berbeda (Allegrucci el at., 2005,
ALlegrucci dan Young, 2007). Namun, terlepas dari kemungkinan diketahui pengaruh genetik
atau lingkungan pada fenotip garish ESC, banyak garis telah diterbitkan tanpa detail
karakteristik data (Adewumi et al, 2007). Selain itu, mungkin karena pemeliharan garish ESC
yang melelahkan dan mahal, hanya sedikit penelitian yang dipublikasikan yang
membandingkan karakteristik beberapa garish ESC. Menurut studi perbandingan ini, hESC
telah terbukti serupa dalam hal ekspresi marker pluripotensi namun setelah sel mulai
berdeferensiasi, ekspresi marker diferensiasi dan kecenderungan deferensiasi lebih lanjut
bervariasi antara garish ESC yang berbeda (Adewumi et al., 20017, Kim et al., 2001, Osafune
et al., 2008). Karena pengamatan ini telah disarankan, bahwa garish ESC yang paling sesuai
harus dipilih sesuai dengan kecenderungannya untuk berdeferensiasi terhadap garis yang
diminati (Osafune et al., 2008).
Selain perubahan karena teknik turunan dan kultur, kultur dan pelepasan hESC yang
berkepanjangan dapat mengubahnya untuk perubahan adaptif seperti perubahan kariotipik,
tingkat pertumbuhan yang meingkat atau penurunan apoptosis (Draper et al., 2004a, Draper
et al., 2004b., Enver et al., 2005, Hanson dan Caisander, 2005, Baker et al., 2007, Hovatta et
al., 2010, Narva et al., 2010). Menurut studi kariotipe berdasarkan G-banding, selama kultur
berkepanjangan, perubahan kariotipe yang paling sering diamati adalah pendapatan
kromosom 12, 17, dan X, yang juga terlihat pada tumor germ cell (Baker et al., 2007). Selain
itu, lebih banyak kesamaan antara hESC dan sel tumor telah ditemukan dalam penelitian yang
menggunakan analisis DNA resolusi tinggi (Hovatta et al., 2010, Narva et al., 2010).

KULTUR SEL
hESC memerlukan kondisi kultur khusus untuk mempertahankan pluripotensi dan kariotipe
stabil dan fenotipenya. Selain media kultur khusus, sel feeder dibutuhkan untuk pelekatan,
makanan dan untuk menjaga agar hESC tida berdeferensiasi. Awalnya hESC diturunkan dan
dikultur di atas sel embrionik fibroblast tikus (MES: Mouse Embryonic FIbroblast) dalam
media kultur yang terdiri dari serum janin sapi (FBS: Fetal Bovine Serum) (Thomson et al.,
10998, Reubionoff et al., 2000). Selanjutnya, feeder berbasis manusia telah digunakan untuk
menggantikan MEF (Hovatta et al., 2003, Inzunza et al., 2005, Skottmann dan Hovattta, 2006)
dan Knockout Serum Replacement (SR) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) telah menggantikan
FBS dalam media kultur hESC. FBS adalah eragen bermasalah karena mengandung komponen
yang tidak diketahui dan rangkaian serum yang berbeda bervariasi dalam kemampuannya
untuk mempertahanakan pluripotensi atau bahkan membedakan hESC. Meskipun SR masih
terdiri dari banyak komposen berbasis hewani, efek ini lebih pasti dan juga bermanfaat pada
proliferasi hESC (Koivisto et al., 2004).
Banyak usaha telah diinvestasikan untuk mengganti sel feeder hidup oleh beberapa substrat
lainnya untuk mengembangkan sistem kultut hESC yang bebas feeder (Akopian et al., Xu et
al., 2001, Thomas et al., 2009). Matrigel (BD Biosciences) yang tersedia secara komersial,
laminin dan fibronektin telah dilaporkan untuk mempertahankan keadaan pluripotent dari
hESC (Amit et al., 200, Amit et al., 2004, Rosler et al., 2004).
has replaced FBS in hESC culture medium. FBS is a problematic reagent because it
Passaging (penerimaan)
contains unknowndari hESC merupakan
components langkah
and different menantang
serum dalam
batches vary in produksi hESC. Stem
their capability
to maintain pluripotency or even differentiate hESCs. Although SR still consists of
cell tumbuh
manydianimal
kolonibased
(Gambar 3) dan koloni
components, ini harus
it is more dipecah
defined baikbeneficial
and also secara mekanik
effects maupun
on
hESCs’ proliferation (Koivisto et al., 2004).
enzimatik selama passaging. Pemotongan mekanis koloni menjasi potongan yang lebih kecil
Much effort has been invested in replacing living feeder-cells by some other
substrates to sel
tidak mengekspos develop feeder-free
ke inzin hESC (misalnya
xenogenik culture systems (Akopian
tripsin et al., Xu et IV)
atau kolagenase al., yang
2001, Thomas et al., 2009). Commercially available Matrigel (BD Biosciences),
memisahkannya
laminin anddengan cara yang
fibronectin havelebih
been seragam
reported namun padapluripotent
to maintain saat bersamaan
state ofmengganggu
hESCs
(Amit et al., 2000, Amit et al., 2004, Rosler et al., 2004).
molekul adhesi permukaan sel dan komunikasi dengan sel lainnya. Selain itu, disosiasi hESC
Passaging of hESC is another challenging step in hESC production. Stem cells
grow in colonies
ke tahap sel tunggal dapat (Figure 3) and sel
mempengaruhi these colonies
menjadi have tokariotipik
perubahan be broken eitheret al.,
(Brimble
mechanically or enzymatically during passaging. Mechanical cutting of the colonies
2004). Bagaimana pun, passaging
into smaller pieces adalahthelangkah
does not expose melelahkan
cells to xenogenic dan juga
enzymes (e.g. penting
trypsin ordalam
collagenase IV) which dissociate them in a more uniform way but at the same time
produksidisrupt
hESC. their cell surface adhesion molecules and communication with other cells. In
addition,
Sistem kultur yangdissociation
lebih tepat of hESC tountuk
diperlukan single cell stage
memenuki may predispose
kebutuhan cells dan
aplikasi klinis to juga
karyotypic changes (Brimble et al., 2004). Either way, passaging is a laborious and
untuk penelitian hESC.
also critical Untuk
step in menghindari
the production bahan dan masalah xenogenik dan disebabkan
of hESCs.
A more defined culture system is needed to fulfil the needs of clinical
oleh variasi FBS yang
applications andlot-to-lot,
also for faktor
hESC pertumbuhan
research. To avoid dan enzim yangmaterials
xenogenic digunakan anddalam
problems
passaging caused by lot-to-lot
akan meningkatkan variation
produksi of FBS,
hESC dan growth factors
membuatnya lebihand enzymes
standard used
dan in
konsisten.
passaging would enhance the hESC production and make it more standardized and
consistent.

Gambar.Figure
hESC3.garis
hESCH7
linekoloni yangcultured
H7 colony dikulturon pada
humanfeeder
foreskinfibroblast kulit kulup
fibroblast feeders. manusia.
Scalebar
200µm.
Scalebar 200m.
PENANDA PERKEMBANGAN DAN DIFERENSIASI JANTUNG
Pada vertebrata, jantung adalah organ pertama yang terbentuk dan fungsi peredaran
darahnya sangat penting untuk kelangsungan hidup embrio (Buckingham et al., 2005). Sel
miokard berasal dari mesoderm, lapisan benih yang muncul saat gastrulasi dari garis primitif.
Bentuk awal jantung adalah tabung jantung yang kemudian mengalami pengulangan
multifase dan akhirnya membentuk jantung dengan 4 bilik (Buckingham et al., 2005).
Studi tahap awal diferensiasi jantung terhambat oleh kurangnya tahap awal marker sel
jantung (Lough dan Sugi, 2000). Ekspresi transient Brachyury T banyak digunakan untuk
menggambarkan mesoderm dan selanjutnya pembentukan garis keturunan jantung (Kispert
dan Herrmann, 1994). Menurut pengetahuan saat ini, ada dua populasi sel progenitor
jantung, yang disebut bidang jantung, yang berkontribusi terhadap pembentukan jantung
(Buckingham et al., 2005). Satu garis keturunan berkontribusi pada pembentukan ventrikel
kiri, sebagian ventrikel kanan, kanal atrioventricular dan atrium. Garis keturunan lainnya
bertanggung jawab atasa pembentukan saluran keluar dan juga ventrikel kanan dan atrium.
Bidang terakhir, yang disebut bidang jantung sekunder atau jantung anterior ditandai oleh
Islet-1 (Isl-1), faktor transkripsi homeodomain LIM. Bidang ini membentuk dua pertiga dari
jantung embrio, termasuk otot jantung, otot polos dan sel endotel (Cai et al., 2003). Marker
awal lainnya untuk progenitor jantung adalah mesoderm yang baru terbentuk pada garis
primitif (Kitajima et al., 2000). Pada mamalia, protein morfogen tulang (Bone Morphogenic
Proteins/BMPs), mengubah faktor pertumbuhan  superfamily (TGF-s) dan faktor
pertumbuhan fibroblast (FGFs) telah menjadi penting untuk pengembangan jantung dan
faktor-faktor ini mengatur oengaktifan den pengatur miokardial seperti gen terkait faktor
transkripsi NK2, locus 5 (Nkx 2.5) dan GATA binding-protein 4 (GATA4) (Brand, 2003). Langkah
perkembangan dalam pembentukan jantung diilustrasikan pada gambar 4.
Gambar 4. Skema sederhana dari langkah perkembangan dalam pembentukan jantung. Stem
cell embrionik memiliki potensi untuk berdiferensiasi menjadi tipe sel dari ketiga lapisan
benih, endoderm, mesoderm atau ektoderm. Mesoderm adalah asal sel jantung dan telah
Figure 4. A simple schematic of developmental steps in heart formation. Embryonic stem
ditunjukkan bahwa
cells have sinyal induksi
the potential diferensiasi
to differentiate into celljantung
types of sebagian berasal
all three germ dari
layers, endoderm. Dua
endoderm,
mesoderm or ectoderm. Mesoderm is the origin of cardiac cells and it has been shown that
populasi seldifferentiation
cardiac progenitor inducing
jantung,signals
bidangarejantung,
to a largeberkontribusi padaorigin.
extent of endoderm pembentukan
Two cardiac jantung.
progenitor cell populations, the heart fields, contribute to the formation of the heart. The left
ventrikel kiri isterbentuk
ventricle formed onlyhanya dari
from the bidang
primary jantung
heart primer,
field, whereas thesedangkan
atria and theatrium dan ventrikel
right ventricle
are formed from both of the progenitor cell populations.
kanan terbentuk dari kedua populasi sel progenitor.

PRODUKSI KARDIOMIOSIT
POTENSI DIFERENSIASI JANTUNG STEM CELL
Pluripotent stem cell, hESC dan iPS memiliki kemampuan untuk berdiferensiasi menjadi
kardiomiosit fungsional dengan beberapa merode (Kehat et al., 2001, Mummery et al., 2003,
Zhang et al., 2009, Freund et al., 2010). Sebaliknya, kemampuan diferensiasi stem cell jantung
28
dewasa multipoten kontroversial. Satu-satunya stem cell dewasa yang jelas memiliki
kemampuan untuk membedakan dengan kardiomiosit yang berdenyut adlah sel progenitor
jantung (Oh et al., 2003, Goumans et al., 2007).
Stem cell mesenkimal sumsum tulang dewasa manusia telah terbukti terdiferensiasi secara
invitro menjadi sel mirip kardiomiosit dengan ekspresi gen spesifik jantung (Rangappa et al.,
2003, Antonitsis et al, 2008). Namun, diferensiasi diinduksi oleh 5-azaxtidine, analog sitosin
yang dapat mereduksi aktivitas DNA metiltransferase di dalam sel (Wang et al., 2006). Metode
serupa telah dilaporkan menghasilkan sel dengan fenotipe kardiomiosit dari stem cell yang
diturunkan dari adipose manusia dan sel berdenyut spontan juga diperoleh setelah ko-kultur
dengan kardiomiosit tikus neonatal (Choi et al., 2010). Ketika sel hematopoietic yang
diturunkan sumsum tulang ditransplantasikan langsung ke jantung tikus yang mengalami
infark miokard akut, tidak ada kardiomiosit yang diturunkan dari transdiferensiasi sumsum
tulang ditemukan pada miokardium yang rusak. Namun, fusi sel telah ditemukan terjadi pada
tingkat yang sangat rendah, di mana sel yang diturunkan dari sumsum tulang telah menyatu
dengan kardiomiosit inang di luar area infark (Nyfren et al., 2004).
Banyak penelitian klinis telah mengevaluasi potensi terapeutik stem cell sumsum tulang
belakang manusia (misalnya sel troma mesenkim atau sel mononuclear) untuk memperbaiki
fungsi jantung setelah infark miokard (Gonzales dan Pedrazzini, 2009, Mathiase et al., 2009,
wei et al., 2009, Miettinen et al., 2010). Tidak ada bukti regenereasi jantung yang ditandai
dengan diferensiasi stem cell implant ke dalam kardiomiosit dan garis keturunan jantung
lainnya telah dilaporkan. Beberapa studi, namun tidak semuanya, melaporkan efek
menguntungkan pada fungsi jantung dan gejala (Woller et al., 2004, janssens et al., 2006,
Lunde et al., 2006, Schachinger et al., 2006). Manfaat ini telah disarankan untuk menjadi
jangka pendek dan menutur pengobatan follow-up lima tahun dengan BMC tidak dapat
mencapai perbaikan fungsi jantung yang berkelanjutan (Meyer et al., 2009). Meskipun
demikian, hasil kongruen dari penelitian ini menunjukkan bahwa pemafaatan terapeutik dari
stem cell sumsum tulang manusia tampaknya aman.
Gambar 5. Aliran diferensiasi jantung dengan metode diferensiasi. Dari atas; marker untuk
Figure 5. Cardiac differentiation cascade and the differentiation methods. From the top;
Markers
berbagai for different
tahap stages ofjantung,
diferensiasi cardiac differentiation, steps in diferensiasi
langkah-langkah cardiac differentiation
jantung anddan
the metode
differentiation methods. END-2 differentiation has two variables, hESC are either plated on
top of END-2 cell layer or hESC are cultured as EBs in suspension in END-2 conditioned
diferensiasi. Perbedaan EEND-2 memiliki dua variable, hESC dilapisi di atas lapisan sel END-2
medium. In EB method, differentiation can be performed spontaneously or with
inducing growth factors. Monolayer differentiation is initiated with feeder
atau differentiation
hESC dikultur sebagai EBs daam suspense pada medium berkondisi END-2. Dalam
free hESC cultures. Culturing of hESC and differentiation with activin A and bone
morphogenic protein-4 (BMP-4) is preformed on top of Matrigel. By this method, beating
metode EB, diferensiasi dapat dilakukan secara spontan atau dengan diferensiasi yang
monolayer can be obtained whereas END-2 and EB method produce thee dimensional
beating areas.
menginduksi faktor pertumbuhan. Diferensiasi monolayer dimulai dengan kultur hsC bebas
feeder. Kultur hESC dan diferensiasi dengan activin A dan bone morfogenic protein-4 (BMP-
4) telah terbentuk di atas Matrigel. Dengan metode ini, monolayer berdenyut dapat diperoleh
sedangkan metode END-2 dan EB menghasilkan area berdenyut tiga dimensi.

30
METODE DIFERENSIASI
DIFERENSIASI SPONTAN PADA TUBUH EMBRIO
Sel hESC dan iPS dapat dibedakan secara spontan sebagai badan embrio (EB) (Gambar 5).
Pada prinsipnya, selama pembentukan EB kondisi kultur stem cell diubah dari dua dimensi
menjasi struktur tiga dimensi. Stem cell pluripotent pertama secara enzimatik atau mekanis
dipisahkan ke kelompok sel kecil. Kedua sel dibiarkan untuk membentuk agregat dalam
suspense dan setelah beberapa hari EB terbentuk biasanya dletakkan pada plate kultur
matriks berlapis sel (Kurosawa, 2007). Setelah hESC telah dipindah dari lingkungan yang
mendukung keadaan yang tidak berdiferensiasi, mereka mulai berdiferensiasi menjadi tiga
lapisan benih dalam agregat sel (itskovitz-Eldor et al., 2000). Selama tahanp awal kultur
suspensi, agregat sel berubah menjadi tubuh kistik dan cangkang tiga lapisan yang teridiri dari
protein seluler dan ekstraseluler yang terbentuk di sekitas EB (Sachlos dan Auguste, 2008).
Sinyal parakrin dan endokrin menentukan nasib stem cell. Demikian pula dengan embrio,
sinyal ini dapat menyebabkan pembentukan gradient konsentrasi dalam EB dan selanjutnya
mempengaruhi diferensiasi sel (Sachlos dan Auguste, 2008).
Pembentukan Eb memiliki karakteristik yang serupa dengan perkembangan embrio (Kelleer,
1995) dan oleh karena itu interaksi lapisan benih yang berneda dan pengaruhnya terhadap
diferensiasi sel dapat dipelajari pada kultur EB. Diferensiasi EB, seperti diferensiasi jantung,
sangat baik didokumentasikan dengan sel-sel ES tikus (Hescheler et al., 1997, Boheler et al.,
2002). Namun, pembentukan EB dan diferensiasi spontan dari hESC telah terbukti lebih sulit
dan tidak efisien jika dibandingkan dengan salinan dari tikus (Wobus et al., 1991, Kehat et al,
2001). Ketika sel-sel ES tikus dibedakan dalam EBs, area berdenyut muncul 1 hari setelah
plating, dan dalam 2-10 hari 80-90% EB menunjukkan area berdenyut (Wobus et al., 1991).
Di daerah diferensiasi berdenyut hESC diamati kemudian dan efisiensi diferensiasi jauh lebih
rendah, biasanya di bawah 10% (Kehat et al., 2001).
Kardiomisit dapat diperoleh dari sel hESC dan iPS dengan diferensiasi spontan pada EBs
(Itskovitz-Eldor et al., 2000, Kehat et al., 201, Zhang et al., 2009). Diferensiasi EB juga banyak
digunakan dalam produksi jenis sel lainnya seperti sel neuron, sel hematopoietic, adiposity
dan kondrosit (Pera dan Trounson, 2004). Untuk keseluruhan eksistensi hESC, diferensiasi EB
telah menjasi metode diferensiasi yang banyak digunakan karena sifatnya yang relatif
sederhana dan murah.
Ada beberapa metode untuk pembentukan EB (Kurisawa 2007). Suspensi kultur pada kultur
sel bacterial-grade pertama kali dikembangkan untuk sel ES tikus (Doetschman et al., 1985)
dan kemudian digunakan dalam diferensiasi kardiomiosit dari hESCs (Itskovitz-Eldor et al.,
2000, Kehat et al., 2001). Dalam metode ini sel dipisahkan secara enzimatik agregasi saat
kultur tidak terikan dalam media kultur. hESC rentan terhadap disosiasi ke tahap sel tunggal
(Thomsom et al., 1998, Amint et al., 2000, Kehat et al., 2001, Xu et al., 2002) dan oleh karena
itu hESC telah dipisahkan menjadi agregat sel kecil untuk mempertahankan kontak dari sel ke
sel (Amit et al., 2000, Pyle et al., 2006). Untuk meningkatkan pembentukan EB dalam suspensi
kultur, bioreaktor dan labu spinner juga telah digunakan (Messina et al., 2004, Kurosawa,
2007, Yirme et al., 2008).
Kardiomiosit juga telah dibedakan dengan metode hanging drop, dimana suspensi sel tunggal
di pipet dalam tetes kecil ke penutup petri dan penutupnya kemudian dimasukkkan di atas
piring (Takahashi et al.,2003, Burridge et al., 2007). Tetesan menggantung karena tegangan
permukaan dan menyediakan lingkungan yang baik bagi sel untuk digabungkan dan
membentuk EB. Metode drop-down tidak sesuai untuk diferensiasi EB jangka panjang karena
perubahan medium tidak mungkin (Kurosawa, 2007). Metode hanging drop secara
keseluruhan sangat sulit dilakukan dan oleh karena itu tidak sesuai untuk percobaan skala
besar.
Penelitian terbaru menunjukkan bahwa ukuran EB berpengaruh terhadap diferensiasi
kardiomiosit dan diferensiasi pada umumnya (Burridge et al., 2007, Bauwens et al., 200*,
Mohr et al., 2010). Oleh karena itu jumlah sel harus terukur untuk mengoptimalkan
diferensiasi. Metode drop down memungkinkan standarisai jumlah awal hESC. Namun, Ng
dkk mengembangkan metode yang lebih kuat daripada hanging-drop, sistem agregasi paksa
(forced aggregation/FA) untuk diferensiasi hematopoietic dan ini juga telah digunakan dalam
diferensiasi kardiomiosit (Ng et al., 2005, Burridge et al., 2007). Fa meniru metode drop down;
sel-sel dipaksa untuk agregasi dengan sentrifug di round bottome, low-adherence 96-well
plate wells. Perubahan medium dimungkinkan ke sumber dan oleh karena itu waktu kultur
yang lebih lama dapat digunakan dan agen induksi diferensiasi juga dapat ditambahkan ke
media kultur (Burridge et al., 2007). Potongan sel dua dimensi juga dapat diproduksi dengan
teknik mikroprinting, di mana koloni ukuran standar dibentuk dan kemudian dikerok ke dalam
suspensi kultur (Bauwens et al., 2008, Niebruegge et al., 2009). Teknik diferensiasi EB
dirangkum dalam tabel 1.
Teknik diferensiasi EB

Deskripsi Forced
Hanging Kultur Teknik
metode aggregation Manual
drop suspensi microprinting
(FA)

Disosiasi
Pelepasan koloni Pemotongan
koloni hESC Disosiasi enzimatik
microprinted manual

Sel tunggal/ Suspensi sel

Pembentukan agregat kecil diagregasikan ke Agregasi
Koloni sel tunggal atau bagian koloni
EB bentukan EB EB dengan spontan dalam
sel membentuk EB dalam suspensi
dalam sebuah sentrifus dalam suspensi
hanging drop 96-well plate

Bentukan EB ditransfer untuk

Kultur suspensi dilanjutkan
Biakan EB kultur suspensi

Setelah suspensi kultur EBs diletakkan pada plate kultur sel yang dilapisi

Pembentukan
Terukur, mudah,
EB yang Julah sel per EB Halus, disosiasi
Keuntungan jumlah sel per
haslus dalam Mudah mudah non-enzimatik
EB mudah
drop karena distandarisasi koloni hESC
distandarisasi
gravitsi

Koloni hESC
Melelahkan, Pembentukan Memerlukan Melelahkan,
Kerugian harus dipisahkan
tidak dapat EBs berukuran teknik untuk tidak dapat
ke tahap sel
diukur acak formasi koloni diukur
tunggal

(Bauwens et al.,
(Takahashi et (Doetschman et
(Ng et al., 2005) 2008, Niebruegge
Referensi al., 2003) al., 1985)
et al., 2009)

DIFERENSIASI PADA KO-KULTUR SEL VISCERAL-ENDODERM-LIKE TIKUS

Cara yang lebih terkontrol untuk membedakan kardiomiosit dari hESC adalah co-culture
dengan sel mirip endodermal tikus (END-2) (Gambar 5), teruatma dengan tidak adanya serum
dan dengan asam askorbat (Mummery et al., 2003, Passier e al., 2005). Faktor induksi
diferensiasi disekresikan dari sel END-2 dan oleh karena itu medium terkondisi END-2 juga
dapat digunakan untuk diferensiasi kardiomiosit (Graichen et al., 2008). Sel END-2
mendukung diferensiasi terhadap derivate endodermal dan mesodermal (Mummery et al.,
2003, Passier et al., 2005, Beqqali et al., 2006) dan menurut studi pengembangan embrio,
endoderm visceral anterior sangat penting dalam pengembangan jantung normal (Lough dan
Sugi, 2000). Oleh karena itu, disarankan bahwa diferensiasi kardiomiosit dapat dimediasi oleh
sel END-2 secara langsung atau oleh sel endodermal hESC (Passier et al., 2005).
Namun, mekanisme atau faktor spesifik yang menginduksi diferensiasi jantung oleh sel END-
2 tidak diketahui dengan jelas. Pengujian sistematik terhadap medium terkondisi END-2
menunjukkan bahwa sel END-2 mampu membersihkan insulin dari medium (Xu et al., 2008a).
Insulin telah terbukti dapat menghambat diferensiasi jantung dengan menekan pembentukan
endoderm dan mesoderm dan mendukung diferensiasi ektoderm (Freund et al., 2008). Insulin
bekerja melalui jalur reseptor insulin-like growth factor-1 (IGF-1R) dan jalur fosfatidylinositol
3-kinase (PI3K/Akt) dan telah disarankan untuk menghambat transisi epitelial ke transisi
mesenkimal dengan peningkatan kadar E-cadherin (Freund et al., 2008). Selain itu,
IGF/PI3K/Akt telah terbukti berperan dalam proliferasi kardiomiosit imatur (McDevitt et al.,
2005) yang menunjukkan bahwa jalur ini memiliki peran ganda pada kardiomiogenesis.
Sel END-2 bukan satu-satunya jenis sel yang menghabiskan insulis dari media kultur.
Fenomena yang sama diamati dengan sel MES1 (Mummery., et al 1986) dan fibroblast embrio
tikus (MEFs) yang tidak memiliki efek induksi jantung (Xu et al., 2008a). oleh karena itu deplesi
insulin kemungkinan bukan faktor penginduksi jantung dari sel END-2. Sebaliknya,
prostaglandin I2 IPGI2) ditemukan disekresikan pleh sel END-2 pada tingkat yang lebih tinggi
jika dibandingkan dengan jenis sel tikus lainnya yang kekurangan efek induktif jantung.
Termasuk PGI2 dalam medium diferensiasi tanpa pengondisian END-2 menghasilkan tingkat
diferensiasi yang sama dengan medium terkondisi END-2 (Xu et al., 2008a).
Selain PGI2, penghambatan p38 mitogen activated protein kinase (MAPK) meningkatkan
tingkat diferensiasi jantung (Graichen et al., 2008). Penghambatan MAPK selektif (molekul
SB203580 dan SB202190) (CUenda et al., 1995) ditemukan untuk meningkatkan tingkat
diferensiasi bila ditambahkan ke medium terkondisi END-2. Namun, efek induksi dari molekul
ini bergantung pada konsentrasi, pada konsentrasi tinggi (>15 M) pembentukan kardiomisit
menurun dan akhirnya terhambat (Xu et al., 2008a). penggunaan inhibitor p38 PD169316 juga
menyebabkan sel-sel ES tikus untuk berdiferensiasi terhadap garis saraf sedangkan
 pembentukan mesoderm jantung dihambat (Aouadi et al., 2006). Oleh karena itu
penghambatan MAPK memiliki efek sebaliknya pada tikus dan sel manusia.
Meskipun beberapa faktor dari sel END-2 yang mempengaruhi diferensiasi jantung telah
diidentifikasi (Graichen et al., 2008, Xu et al., 2008a), peran sel END-2 secara keseluruhan
dalam diferensiasi jantung tetap merupakan misteri. Teknik diferensiasi END-2 dibandingkan
pada Tabel 2.

Tabel 2. Ringkasan teknik diferensiasi END-2

Teknik diferensiasi END-2

Metode deskripsi Ko-kultur END-2 Medium terkondisi END-2

END-2 culturing
Pembiakan pada sel END-2, mitomisin-C perlakuan dan persiapan lapisan sel
Kultur END-2
END-2 pada plate kultur sel atau tabung

Persiapan diferensiasi Produksi dari medium terkondisi (media

medium Media kultur sel normal kultur pada lapisan sel END-2 selama 4-5
hari)

Disosiasi koloni hESC

Pemotongan manual Disosiasi enzimatik

Plating bagian koloni hESC

Formasi EB pada suspensi
pada lapisan sel END-2
Prosedur diferensiasi
EB dikultur pada media terkondisi

Pembiakan dengan media diganti tiap 3-5 hari

Area berdenyut yang

~ 7 hari setelah inisiasi dari ko-
diamati ~12 hari setelah eksposur medium terkondisi
kultur

Keuntungan Mudah, cepat, tidak ada Medium terkondisi bisa disimpan, tidak
disosiasi enzimatik memerlukan plating EB, terukur

Produksi lapisan sel END-2

Kerugian Persiapan pada medium terkondisi
diperlukan sebelum
(kemungkinan variasi lot-to-lot)
diferensiasi

(Mummery et al., 2003, Passier

(Xu et al., 2008a)
Referensi et al., 2005)
DIFERENSIASI DENGAN FAKTOR PERTUMBUHAN YANG DIBATASI
Diferensiasi jantung terdiri dari janringan pensinyalan yang kompleks dan saat ini tidak ada
satu faktor untuk mengarahkan sel induk untuk membedakan secara efektif terhadap garis
keturunan jantung. Laflamme dkk. menggunakan komninasi activin A dan BMP-4 pada
diferensiasi kardiomiosit (Laflamme et al., 2007 (Gambar 5). Rangkaian faktor ini
meningkatakan pembentukan mesoendonerm, garis awal sel prekusor yang menghasilkan
mesoderm dan endoderm. Mesoderm adalah sel asal jantung dan telah ditunjukkan bahwa
sinyal induksi diferensiasi jantung sebagian besar berasal dari endoderm (Lough dan Sugi,
2000). Oleh karena itu, induksi mesoderm akan menghasilkan diferensiasi kardiomiosit
human embryonic stem cell-derived (hESC-CM) yang lebih efisien.
Protocol diferensiasi bertahap juga dikembangkan oelh Yang dkk (Yang et al., 2008). Protokol
ini melibatkan induksi populasi primitif streak-like, selain pembentukan mesoderm jantung
dan perluasan garis keturunan jantung. Protokol ini didasarkan pada diferensiasi EB dan
terdiri dari tiga tahap. FAktor pertumbuhan BMP-4, FGF, activin A, faktor vascular endothelial
growth (VEGF) dan dickkoptf homolog 1 (DKK 1) digunakan dalam berbagai kombinasi.
Formasi medoendoderm juga telah diinduksi oleh Wnt3A, aktivator jalur pensinyalan Wnt/-
catenin kanonik (Tran et al., 2009).
Secara bersamaan, meskipun penggunaan faktor pertumbuhan dapat meningkatkan
diferensiasi jantung, populasi kardiomiosit murni tidak dapat diproduksi dan petode
pengayaan perlu dilakukan. Karena protokol diferensiasi multifase dan tingginya biaya faktor
pertumbuhan, metode diferensiasi EB yang sederhana dan fungsional masih merupakan
metode yang banyak digunakan dalam produksi kardiomiosit. Namun, seperti pada
pembiakan hESC, sistem diferensiasi yang lebih pasti harus dikembangkan untuk diferensiasi
kardiomiosit untuk meningkatkan reproduksivitas dan kemurnian populasi kardiomiosit
terdiferensiasi.

PENGAYAAN KARDIOMIOSIT TERDIFERENSIASI

Karena diferensiasi yang tidak efeisien, populasi sel yang dihasilkan adalah campuran dari
jenis sel yang berbeda dan hasil kultur hESC-CM sanagt rendah. Diferensiasi EB dalam medium
yang mengandung serum menghasilkan <1% dan protokol activin A/BMP-4 yang lebih jelas
menghasilkan >30% kardiomiosit (Laflamme et al., 2007). Oleh karena itu, metode diferensiasi
perlu metode penyaringan dan pemurnian yang cukup meningkatkan dan efektif harus
dikembangkan sebelumhESC-CM dapat menjalani pengujian pada model hewan beasr dan
penggunaan klinis di masa depan.
Untuk tujuan penelitian tertentu, biasanya cukup untuk memperkaya hESC-CM dengan
secara mekanis memisahkan daerah berdenyut dari kultur diferensiasi (Kehat et al., 2001,
Mummery et al., 2003). Namun, hanya 5-20% sel di daerah berdenyut yang positif untuk -
actinin jantung (Passier et al., 2005).
Pemisahan gradient PercollTM berdasarkan pemisahan gradient densitas telah digunakan
dalam kombinasik dengan pembangkitan dan pemeliharaan tubuh jantung (Xu et al., 2006).
Setelah pemisahan dan 7 hari pemeliharaan suspensi, 50% EB yang dibiakkan mengandung
area berdenyut. Amun, metode ini sulit dilakukan reproduksi oleh orang lain (van Laake et al.,
2006).
Pemilihan transgenic adalah salah satu tehnik unutk memperkaya kardiomiosit dari kultur
diferensiasi hESC. Metode ini menggunakan haris hESC transgenik dimana gen green
fluorescent protein (GFP) atau gen resisten antibiotik berada jauh dibawah kendali promotor
spesifik jantung (misalnya promotor myosin light chain) (Kolossov et al., 2005), Anderson et
al., 2007, Huber et al., 2008b, Kita-Matsua et al., 2009). Meskipin metode ini efisien,
modifikasi genetik tidak layak untuk hESC atau sel iPS manusia atau tidak sesuai untuk
kemungkinan penggunaan klinis di masa depan (Mummery, 2010, Vidarsson et al., 2010).
Sebuah studi baru-baru ini menyortir kardiomiosit dari populasi sel campuran dengan
menggunakan molekul adhesi sel leukosit yang diaktifkan oleh marker permukaan secara
endogenus, CD 166 (ALCAM) (Rust et al., 2009). Namun, ada kekurangan protein permukaan
spesifik jantung dan oleh karena itu kekurangan antibodi untuk memungkinkan pemilahan
(Mummery, 2010). Meskipun demikian, pemilahan sel fluorescence-activated (FACS) berhasil
digunakan dalam seleksi dengan memanfaatkan kandungan mitokondria yang tinggi
kardiomiosit (Hattori et al., 2010).

KARAKTERISASI KARDIOMIOSIT TERDIFERENSIASI

ANALISIS FUNGSIONAL DAN STRUKTURAL
hESC-CM memiliki kemampuan untuk berdenyut secara spontan (Kehat et al., 2001,
Mummery et al., 203). Sel yang berdenyut pada tahap awal relatif kecil dan bulat terletak
pada akumulasi melingkar di EBs. Pada tahap selanjutnya, EBs secara bertahap berkembang
menjadi besar dan sel menjadi lebih memanjang dalam bentuk dan cenderung terakumilasi
dalam untai. Studi mikroskop electron menunjukkan bahwa kardiomiosit mengandung
myofibril yang pertama secara acak dan dengan cara yang bervariasi didistribusikan ke
seluruh sitoplasma. Namun, struktur terorganisir sarkomerik tejadi pada tahap diferensiasi
selanjutnya dengan pita A, I dan Z. dekat dengan sarkomer, mitokondria juga ada. Selain itu,
sel telah menginterferensi lempeng dengan persimpangan celah dan desmosom (Kehat et al.,
2001, Snir et al., 2003).

EKPRESI MARKER JANTUNG

Profil ekspresi gen hESC selama diferensiasi jantung (Beqqali et al, 2006, Synnergren et al.,
2008a) dan hESC-CM yang terdiferensiasi telah dipelajari oleh DNA microarray (Cao et al.,
2008, Synnergeren et al., 2008b), Kita-Matsuo et al., 2009, Xu et al., 2009). Studi ini
mengungkapkan bahwa ciri molekular dari hESC-CM menyerupai kardiomiosit dari jantung
manusia (Vidarsson et al, 2010).
Diferensiasi hESC-CM dapat diprediksi dengan ekspresi sementara marker mesodermal awal
Brachyury T. Brachyury T puncak ekspresi terdeteksi pada titik waktu 3 hari dari ko-kulutr
END-2 (Beqqali et al., 2006) dan satu hari kemudia di EBs (Bettiol et al., 2007). Brachyury T
termasuk dalam keluarga faktor transkripsi yang dikodekan oleh gen T-box (Showell et al.,
2004). Keluarga protein ini berfungsi dalam banyak proses perkembangan dan memiliki
kesamaan urutan dengan domain pengikatan DNA, domain-T (Showell et al., 2004). Fenotipe
tikus mutan Brachyury T heterozigot pertama kali dijelaskan oleh Nadine Dobrovolskaïa-
Zavadskaïa pada tahun 1927, pada tikus ini perkembangan aksial tidak selesai dan mereka
memiliki ekor yang cacat (Dobrovolskaïa-Zavadskaïa, 1927), tikus homozigot bagaimana pun,
menampilkan banyak kelainan mesodermal dan meninggal tak lama setelah gastrulasi
(Gluecksohn-Schoenheimer, 1938, Gluecksohn-Schoenheimer, 1944). Brachyury T dapat
dinominasikaan sebagai faktor transkripsi klasik, dilokalisasi di dalam nucleus dan merupakan
aktivator endogen gen mesodermal (Conlon et al., 1994, Kispert et al., 1995, Showell et al.,
2004). Pada embrio, ekspresi Brachyury T disarankan untuk diinduksi oelh sinya TGF DAN
FGF (Hemmati-Brinvanlou dan Melton, 1992, Amaya et al., 1993). Secara keseluruhan, sangat
sedikit target langusng untuk gen T-box yang telah diidentifikasi. Namun, FGF embrio (eFGF)
(Casey et al., 1998), homebox Bix4 yang diinduksi Brachyury (tada et al., 1998) dan XWnt11
(Tada dan Smith, 2000) telah diusulkan sebagai target hilir untuk Brachyury T.
Rangkaian diferensiasi dapat diikuti dengan ekspresi faktor transkripsi regulasi jantung seperti
faktor transkripsi peraturan Islet-1 (Isl-1), Mesp 1, GATA-4, Nkx2.5 dan T-box 6 transcription
factor 6 (Tbx6) (Graichen et al., 2008, Yang et al., 2008).
Troponin T (cTnT) dikodekan oleh gen TNNT2 (Thierfelder et al., 1994), adalah subunit
tropomyosin-binding dari kompleks troponin dan oleh karena itu dapat digunakan untuk
mengkarakterisasi hESC-CM. Kompleks troponin terletak pada filamen tipis otot lurik dan
mengatur kontraksi otot sebagai respons terhadap perubahan konsentrasi ion kalsium
intraselular seperti yang ditinjau (Farah dan Reinach, 1995, Tobacman, 1996). Sebagai
tambahan terhadap cTnT, protein struktural spesifik jantung lainnya digunakan untuk
mengkonfirmasi fenotip jantung dari hESC-CM berdenyut seperti troponin jantung I, myosins
atau α-actinin jantung (Kehat et al., 2001, Mummery et al., 2003).
Selain itu protein aparatus kontraktil, protein persimpangan celah dan saluran ion dapat
digunakan dalam karakterisasi hESC-CM. Persimpangan celah terbentuk dari protein connexin
dan memiliki peran penting dalam transduksi sinyal. Connexin 43 (Cx43) adalah bentuk yang
paling umum di ventrikel, Cx40 mendominasi atria dan Cx45 ditemukan pada atrium dan
ventrikel dan juga dari serat Purkinje (Gaborit et al., 2007).

ELEKTROFISIOLOGI
hESC serta kardiomiosit yang diturunkan sel iPS menunjukkan morfologi aksi potensial
heterogen (AP) yang dapat dibagi menjadi subtipe nodal, atrial dan ventrikular sesuai dengan
bentuk AP seperti ditunjukkan pada Gambar 6 (He et al., 2003a, Zhang et al.., 2009). Jika
dibandingkan dengan kardiomiosit neonatus atau ventrikel atau manusia dewasa, hESC-CM
memiliki potensi diastolik maksimum yang relatif positif (MDP) dan laju kenaikan AP yang
lambat (dV / dtmax) dan oleh karena itu disebut sel atrial dan ventricular-like embrio (He et
al., 2003a).
Sel pemecah berdiferensiasi menunjukkan AP spontan dan aktivitas kontraktil dan oleh
karena itu mengekspresikan protein struktural jantung dan arus ionik (Kehat et al., 2001, He
et al., 2003b, Mummery et al., 2003). Selama diferensiasi, ekspresi beberapa gen saluran ion
meningkat yang menunjukkan bahwa hESC-CM mencapai keadaan yang lebih matang dengan
waktu dalam budaya (Sartiani et al., 2007).
Diferensiasi sel berdenyut menunjukkan AP spontan dan aktivitas kontraktil dan oleh karena
itu mengekspresikan protein struktural jantung dan arus ionik (Kehat et al., 2001, He et al.,
2003b, Mummery et al., 2003). Selama diferensiasi, ekspresi beberapa gen saluran ion
meningkat yang menunjukkan bahwa hESC-CM mencapai keadaan yang lebih matang dengan
waktu dalam kultur (Sartiani et al., 2007).
Secara tradisional klem tambalan telah digunakan untuk menganalisis potensi aksi dan juga
sifat elektrofisiologis kardiomiosit. Teknologi mikro-elektrode array (MEA) memberikan
platform lain yang berguna untuk mempelajari elektrofisiologi sel, terutama kardiomiosit
yang berasal dari ES (Hescheler et al., 2004, Reppel et al., 2004). Dalam MEA, sel-sel diletakkan
di atas elektroda dalam platform well-type sel kultur dan dapat dikultur dan diukur berulang
kali untuk jangka waktu yang lama. Sebagai tambahan, MEA dapat digunakan untuk menguji
efek agen farmasi pada hESC-CM (Braam et al., 2010).

Figure 6. Action potential phases and cardiomyocyte subtype specification A. Action

potential (AP) parameters: Action potential amplitude (APA), maximum rate of rise of the
action potential (dV/dtmax), action potential delay (ADP) and membrane diastolic potential
(MDP). AP phase 0 is a rapid depolarization phase when the sodium channels are activated
Gambarand 6. Tahapan
membranepotensial aksiisdan
permeability spesifikasi
increased to Na subtipe
+ kardiomiositisA.followed
. Rapid depolarisation Parameter potensial
by rapid
2+
repolarization phase 1 and plateau phase 2, where Ca ions are entered to the cell
aksi (AP): Aksi potensi
throught amplitudo
L-type calcium (APA), At
channels. lajuphase
kenaikan maksimum
3, calcium potensial
channels aksi (dV and
are inactivated / dtmax),
repolarization is caused by outward potassium currents. Repolarization is due to the
potensial aksi tunda
currents carried (ADP) danthepotensi
mainly by slow Iksdiastolik
and rapidmembran (MDP).
Ikr components APdelayed
of the fase 0rectifier
adalah fase
potassium channels. The Ikr current is produced by hERG channel (encoded by the human
depolarisasi cepat ketika saluran
ether-à-go-go-related gene). natrium diaktifkan
By contrast, inward dan permeabilitas
potassium membrantomeningkat
current contributes the
maintenance of the resting membrane potential, phase 4. B-D. Classification of ventricular
menjadi(B),
Naatrial
+. Depolarisasi cepat diikuti
(C) an pacemaker-like (D) oleh
actionfase repolarisasi
potentials. cepataction
Ventricular fase potential
1 dan plateu
has afase 2,
prominent plateau phase whereas atrial action potential is more triangularly shaped.
dimanaPacemaker-like
ion Ca2 + dimasukkan ke sel melalui
cells are characterized by saluran kalsiumvelocity
slower upstroke tipe-L. and
Padaamplitude
fase 3, ifsaluran
compared to ventricular and atrial type of cells.
kalsium tidak aktif dan repolarisasi disebabkan oleh arus potasium keluar. Repolarisasi

2.5.4 Excitation-contraction coupling

The calcium handling properties of hESC-CM have not been studied intensively.
However, due to the few existing reports, hESC-CM possesses functional, albeit
disebabkan oleh arus yang dibawa terutama oleh Iks yang lambat dan komponen Ikr yang
cepat dari saluran potassium penyearah yang tertunda. Arus Ikr dihasilkan oleh saluran hERG
(dikodekan oleh gen eter-à-go-go-related manusia). Sebaliknya, arus potasium ke dalam
berkontribusi terhadap pemeliharaan potensial membran istirahat, fase 4. B-D. Klasifikasi
potensial ventrikular (B), atrial (C), alat pacu jantung (D). Potensial aksi ventrikel memiliki fase
plateu yang menonjol sedangkan potensial aksi atrium lebih berbentuk segitiga. Sel
pacemaker-like ditandai dengan kecepatan dan amplitudo naik yang lebih lambat jika
dibandingkan dengan tipe sel ventrikel dan atrium.

PERANGKAI EKSITASI-KONTRAKSI
Kopling eksitasi-kontraksi
Sifat penanganan kalsium dari hESC-CM belum dipelajari secara intensif. Namun, karena
beberapa laporan yang ada, hESC-CM memiliki komponen penanganan kalsium fungsional,
walaupun belum menghasilkan, bila dibandingkan dengan kardiomiosit orang dewasa
(Dolnikov et al., 2006, Liu et al., 2007, Satin et al., 2008). Untuk aplikasi klinis, sistem kalsium
harus berfungsi dengan baik agar hESC-CM dapat diintegrasikan dengan benar setelah
transplantasi. Integrasi yang buruk pada host miokardium bisa menimbulkan ancaman
aritmia yang serius. Bagaimanapun, pemahaman yang lebih baik tentang sifat kalsium dari
hESC-CM yang terdiferensiasi diperlukan.
APLIKASI UNTUK STEM CELL EMBRIONIK MANUSIA ATAU KARIDOMIOSIT YANG DITURUNKAN
INDUCED PLURIPOTENT STEM CELL
SEL JANTUNG MANUSIA/MODEL JARINGAN

Sejak pembentukan garis hESC permanen pertama (Thomson et al., 1998), ada harapan besar
untuk mengganti jaringan jantung yang rusak dengan kardiomiosit yang dturunkan hESC.
Namun, banyak masalah utama yang perlu dipecahkan sebelum hESC-CM dapat digunakan di
klinik. Sebelum penggunaan klinis menjadi kenyataan, kemungkinan bahwa hESC-CM akan
berlaku untuk penemuan obat dan aplikasi keamanan farmakologi (Braam et al., 2009).
Meskipun demikian, diferensiasi jantung dan sel brdenyut sudah merupakan alat yang
berguna untuk biologi perkembangan dan untuk mempelajari patofisiologi penyakit jantung
manusia. Selain itu, teknologi iPS memungkinkan produksi sel spesifik pasien yang
memperluas penggunaan potensi lebih jauh.

PATOFISIOLOGI PENYAKIT JANTUNG

Banyak penyakit jantung disebabkan oleh mutasi gen atau interaksi gen-lingkungan. Sejauh
ini, penyakit parah ini telah diteliti pada model hewan, terutama dengan tikus transgenik.
Meskipun model tikus dapat menghasilkan informasi yang berharga, perbedaan antara
fisiologi manusia dan tikus membatasi penerapan hasilnya, misalnya tingkat denyutan tikus
yang jauh lebih cepat dapat menggantikan efek aritmia yang akan parah bagi manusia (Freund
and Mummery, 2009).
Kardiomiosit yang berasal dari hESC yang dimodifikasi secara genetik dapat digunakan
sebagai model penyakit. Untuk membangun garis hESC termutasi dan model penyakit, garis
hESC perlu dimanipulasi secara genetis. Namun, manipulasi genetik hESCs terbukti lebih
menantang jika dibandingkan dengan sel ES tikus dan hanya sejumlah kecil laporan tentang
penargetan dan manipulasi gen yang berhasil telah diterbitkan (Braam et al., 2008, Giudice
dan Trounson, 2008).
Untuk mendapatkan garis penyakit tertentu, langkah manipulasi genetik dapat dielakkan
dengan menurunkan garis sel iPS dari pasien dengan penyakit genetik (Park et al., 2008, Ebert
et al., 2009, Freund et al., 2010). Diferensiasi sel iPS model ini ke tipe sel yang diinginkan
memungkinkan studi pengembangan dan patofisiologi penyakit. Selain itu, faktor-faktor yang
mempengaruhi perkembangan dan kemajuan penyakit dapat dipelajari (Freund et al., 2010).
Namun, teknologi sel iPS masih dalam masa pertumbuhan dan masih harus dilihat jika sel
yang terdiferensiasi benar-benar mewujudkan fenotipe penyakit mutasi yang mereka bawa
dan berfungsi sebagai model penyakit nyata (Freund and Mummery, 2009).

KEAMANAN FARMAKOLOGI DAN PENEMUAN OBAT

Jantung telah terbukti sangat sensitif terhadap efek samping senyawa farmasi. Reaksi berat,
seperti sinkop, aritmia dan kematian mendadak, takikardia ventrikel polimorfik terkait,
torsade de pointes (TdP), menyebabkan penolakan persetujuan atau penarikan dari pasar
oleh banyak agen farmasi (Roden, 2004). Dengan tidak adanya pemahaman yang lengkap dan
analisis langsung TdP, otoritas pengatur telah menerapkan pemanjangan QT sebagai marker
kemungkinan pengembangan TdP yang diinduksi obat meskipun bukan penanda sempurna
untuk aritmogenesis (Finlayson et al., 2004). Perpanjangan interval QT akibat penundaan
repolarisasi ventrikel, baik yang disebabkan obat atau, misalnya, kongenital yang timbul dari
mutasi gen (sampai saat ini LQT1-12), dapat dikaitkan dengan TdP (Roden, 2004, Zareba dan
Cygankiewicz, 2008), meski hubungannya rumit (Shah dan Hondeghem, 2005). Namun,
interval QT adalah landasan pedoman untuk penilaian senyawa kimia baru sehubungan
dengan potensi proarrhythmic (ICH, 2005b, ICH, 2005a). Delayed rectifier potassium current
(IKr) bertanggung jawab untuk repolarisasi potensial aksi dan protein saluran dikodekan oleh
gen ether-to-go-go-related yang berhubungan dengan manusia (hERG) (Vandenberg et al.,
2001, Pollard et al., 2008). Penghambatan saluran hERG ini (KV11.1) dan penghambatan IKr
selanjutnya, adalah basis prediktor perpanjangan QT yang diinduksi obat bius dan TdP
(Redfern et al., 2003, Hancox et al., 2008). Saat ini sejumlah model praklinis dan tes telah
digunakan oleh perusahaan farmasi (Carlsson, 2006, Pollard et al., 2008). Tes ini mencakup
tes QT in vivo, seperti telemetri ECG untuk anjing sadar (Miyazaki et al., 2005), dan tes in vitro,
seperti uji repolarisasi, yang mendeteksi perubahan pada penundaan potensial aksi (APD)
jaringan jantung (terisolasi serat Purkinje hewan, otot papiler atau miosit jantung) atau uji
saluran hERG dimana arus hERG diekspresikan dalam sistem sel heterolog (seperti sel CHO
atau HEK293) atau IKr asli dikarakteristikkan (Finlayson et al., 2004, Martin et al., 2004).
Metode saat ini tidak sepenuhnya memadai (Redfern et al., 2003, Lu et al., 2008). Selain itu,
mereka mahal dan tes in vivo secara etis dipertanyakan karena banyaknya jumlah hewan yang
digunakan. Oleh karena itu diperlukan suatu metode in vitro berdasarkan sel jantung manusia
yang akan membawa nilai tambah dan reliabilitas untuk menguji agen farmasi baru.
Cardiomyocytes yang berasal dari sel hESC dan iPS memiliki banyak aplikasi potensial di
industri farmasi termasuk validasi target, skrining dan keamanan farmakologi. Sel ini akan
berfungsi sebagai sistem model manusia yang tak habis-habisnya dan dapat diulang ulang dan
laporan pendahuluan tentang validasi sistem hESC-CM sudah ada (Braam et al., 2010).
Namun, banyak optimasi dan pengembangan masih harus dilakukan, terutama karena fenotip
yang belum matang dari sel dan masalah ini karena efisiensi diferensiasi, heterogen hESC-CM
populasi dan metode pengayaan (Braam et al., 2009).

OBAT REGENERATIF
Pada prinsipnya, akan memungkinkan mengembalikan fungsi jantung yang rusak dengan
mentransplantasi sel hESC atau iPS yang terdiferensiasi. Namun, ini mungkin salah satu tugas
paling menantang untuk dipraktikkan. Jumlah sel transplant yang dibutuhkan tinggi dan harus
imunokompatibel. Selain itu, cangkok transplantasi harus diintegrasikan ke dalam inang
miokardium dan menerima aliran darah untuk tetap vital, berpasanganan dengan inang
miokardium dan kontrak secara sinkron sebagai respons terhadap sistem konduksi (Braam et
al., 2009).
Dengan menggunakan sel iPS sebagai sumber sel, sel imunomatched dapat diproduksi namun
metode terkini untuk memprogram ulang memerlukan infeksi sel somatik dengan beberapa
vektor virus (Takahashi et al., 2007, Yu et al., 2007), yang menghalangi pertimbangan
penggunaannya dalam obat transplantasi saat ini.
hESC-CM telah ditransplantasikan ke miokardium tikus yang sehat. Sel-sel tersebut dilaporkan
bertahan, membentuk jaringan miokard dan berkembang biak namun biasanya dipisahkan
dari miokardium tikus oleh lapisan jaringan fibrotik (Laflamme et al., 2005, van Laake et al.,
2007). Ketika ditransplantasikan ke jantung tikus atau tikus yang sakit, beberapa efek
menguntungkan untuk fungsi jantung muncul (Laflamme et al., 2007, van Laake et al., 2007).
Namun, setelah follow-up lebih lama, efek positifnya tidak ada lagi (van Laake et al., 2007,
van Laake et al., 2008, van Laake et al., 2009). Hal ini dipertanyakan apakah manfaat
sementara ini disebabkan oleh efek miokardium atau paracrine yang terbentuk, seperti yang
telah diusulkan untuk sel induk dewasa.
Meskipun beberapa informasi mengenai transplantasi dapat diperoleh dengan menggunakan
model hewan pengerat, penelitian dengan hewan yang lebih besar (babi, kambing dan
domba) dijamin memberikan hasil yang lebih akurat mengenai masalah keamanan, perangkai
listrik dan fungsi jantung. Penggunaan sel iPS atau ESC dari spesies yang sama akan
menghilangkan hambatan xeno (Braam et al., 2009).
Selain masalah yang disebutkan di atas, waktu terapi sel dan metode persalinan masih harus
ditentukan. Kemungkinan sel membutuhkan bahan pendukung selama transplantasi dan oleh
karena itu penelitian biomaterial juga diperlukan sebelum studi klinis dapat dirancang dengan
benar (Passier et al., 2008).