CHOLESTEROL

Colesterol
CHOD-POD. Enzimático colorimétrico

Determinación cuantitativa de colesterol 5. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de
IVD reactivo. El color es estable como mínimo 60 minutos.

Conservar a 2-8ºC CALCULOS

( A ) Muestra
PRINCIPIO DEL METODO x 200 (Conc. Patrón) = mg/dL de colesterol en la muestra
( A ) Patrón
El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado
según la reacción siguiente: Factor de conversión: mg/dL x 0,0258= mmol/L.
CHE CONTROL DE CALIDAD
Ésteres colesterol + H2O Colesterol + Ácidos grasos
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
CHOD
Colesterol + O2 4-Colestenona + H2O2 SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
POD Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar
2 H2O2 +Fenol + 4-Aminofenazona Quinonimina + 4H2O el instrumento, los reactivos y el calibrador.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
colesterol presente en la muestra ensayada1,2. correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las
tolerancias.
SIGNIFICADO CLINICO
VALORES DE REFERENCIA
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del 5,6
organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que Evaluación del riesgo :
necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas Menos de 200 mg/dL Normal
hormonas. La determinación del colesterol es uno de las herramientas 200-239 mg/dL Moderado
más importantes para el diagnostico y clasificación de las lipemias. El 240 o más Alto
aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
riesgo cardiovascular5,6. establezca sus propios valores de referencia.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio.
CARACTERISTICAS DEL METODO
Rango de medida: Desde el limite de detección de 0,6 mg/dL hasta el limite
REACTIVOS de linealidad de 600 mg/dL.
R1 PIPES pH 6,9 90 mmol/L Si la concentración es superior al limite de linealidad, diluir la muestra 1/2
Tampón Fenol 26 mmol/L con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Colesterol esterasa (CHE) 300 U/L Precisión:
R2 Colesterol oxidasa (CHOD) 300 U/L Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
Enzimas Peroxidasa (POD) 1250 U/L Media (mg/dL) 90,1 305 90,4 301
4 - Aminofenazona (4-AF) 0,4 mmol/L SD 0,64 3,30 1,12 2,30
Patrón primario acuoso de Colesterol 200 CV (%) 0,71 1,08 1,24 0,76
CHOLESTEROL CAL
mg/dL Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,002 A.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias
PREPARACION sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( ) el contenido de un vial de R 2 comerciales (x).
Enzimas en 1 frasco de R 1 Tampón. Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Coeficiente de correlación (r): 0,995.
Estabilidad (RT): 4 meses en nevera (2-8ºC) o 40 días 15-25ºC. Ecuación de la recta de regresión: y= 1,004x - 0,931.
Mantener protegido de la luz Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD INTERFERENCIAS
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de No se han observado interferencias de hemoglobina hasta 5 g/L y
1,2
caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bilirrubina hasta 10 mg/dL .
bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
3,4
contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. determinación del Colesterol .
Indicadores de deterioro de los reactivos:
NOTAS
- Presencia de partículas y turbidez.
1. CHOLESTEROL CAL: Debido a la naturaleza del producto, es
- Absorbancia (A) del Blanco a 505 nm 0,1.
aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar
MATERIAL ADICIONAL con facilidad.
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm (500-550). 2. LCF(Lipid Clearing Factor) está integrado en el reactivo.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores
- Equipamiento habitual de laboratorio. sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se recomienda
utilizar calibradores séricos.
MUESTRAS 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
1,2
Suero o plasma : Estabilidad de la muestra 7 días a 2-8ºC y varios 5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la
meses si se mantiene la muestra congelada (-20ºC). aplicación de este reactivo en distintos analizadores.

PROCEDIMIENTO BIBLIOGRAFIA
1. Condiciones del ensayo: 1. Naito H.K. Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (500-550) Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437.
2. Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz
System. Clin Chem 1978; 24 (12): 2161-2165.
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC /15-25ºC 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
3. Pipetear en una cubeta: 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Blanco Patrón Muestra
RT (mL) 1,0 1,0 1,0 PRESENTACION
(Nota1-2)
Patrón ( L) -- 10 -- Ref: 1001090 10 x 50 mL
Muestra ( L) -- -- 10 Ref: 1001091 10 x 20 mL
Cont.
4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC ó 10 min. a temperatura Ref: 1001092 4 x 125 mL
ambiente. Ref: 1001093 4 x 250 mL

BSIS11-E Ed.02/2007 SPINREACT,S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
 CHOLESTEROL

Cholesterol
CHOD-POD. Enzymatic colorimetric

Quantitative determination of cholesterol 5. Read the absorbance (A) of the samples and Standard, against the
IVD Blank. The colour is stable for at least 60 minutes.

Store at 2-8ºC CALCULATIONS

PRINCIPLE OF THE METHOD ( A ) Sample
x 200 (Standard conc.) = mg/dL cholesterol in the sample
The cholesterol present in the sample originates a coloured complex, ( A ) S tan dard
according to the following reaction:
Conversion factor: mg/dL x 0.0258= mmol/L.
CHE
Cholesterol esters + H2O Cholesterol + fatty acids
QUALITY CONTROL
CHOD
Cholesterol + O2 4-Cholestenona + H2O2 Control sera are recommended to monitor the performance of assay
POD procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and
2 H2O2+ Phenol + 4-Aminophenazone Quinonimine + 4H2O 1002210).
If control values are found outside the defined range, check the instrument,
The intensity of the color formed is proportional to the cholesterol
1,2 reagents and calibrator for problems.
concentration in the sample .
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
CLINICAL SIGNIFICANCE corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
Cholesterol is a fat-like substance that is found in all body cells. The
REFERENCE VALUES
liver makes all of the cholesterol the body needs to form cell 5,6
Risk evaluation :
membranes and to make certain hormones.
Less than 200 mg/dL Normal
The determination of serum cholesterol is one of the important tools in
200-239 mg/dL Borderline
the diagnosis an classification of lipemia. High blood cholesterol is
5,6 240 mg/dL and above High
one of the major risk factors for heart disease .
These values are for orientation purpose; each laboratory should establish
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should
its own reference range.
integrate clinical and other laboratory data.
REAGENTS PERFORMANCE CHARACTERISTICS
R1 PIPES pH 6.9 90 mmol/L Measuring range: From detection limit of 0,6 mg/dL to linearity limit of 600
Buffer Phenol 26 mmol/L mg/dL.
If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2
Cholesterol esterase (CHE) 300 U/L
with NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
R2 Cholesterol oxidase (CHOD) 300 U/L Precision:
Enzymes Peroxidase (POD) 1250 U/L
4 – Aminophenazone (4-AP) 0.4 mmol/L Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Cholesterol aqueous primary standard Mean (mg/dL) 90.1 305 90.4 301
CHOLESTEROL CAL SD 0.64 3.30 1.12 2.30
200 mg/dL
CV (%) 0.71 1.08 1.24 0.76
PREPARATION
Working reagent (WR): Dissolve ( ) the contents of one vial R 2 Sensitivity: 1 mg/dL = 0.002 A.
Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
Enzymes in one bottle of R 1 Buffer.
systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
Cap and mix gently to dissolve contents.
The results obtained using 50 samples were the following:
(WR) is stable: 4 months at 2-8ºC or 40 days at 15-25ºC.
Correlation coefficient (r): 0.995.
Avoid direct sunlight.
Regression equation: y= 1.004x – 0.931
STORAGE AND STABILITY The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
All the components of the kit are stable until the expiration date on the
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and INTERFERENCES
1,2
contaminations prevented during their use. Hemoglobin up to 5 g/L and bilirubin up to 10 mg/dL, do not interfere .
Do not use reagents over the expiration date. A list of drugs and other interfering substances with cholesterol
3,4
Signs of reagent deterioration: determination has been reported by Young et. al .
- Presence of particles and turbidity. NOTES
- Blank absorbance (A) at 505 nm 0.1. 1. CHOLESTEROL CAL: Proceed carefully with this product because due
ADDITIONAL EQUIPMENT its nature it can get contamined easily.
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 505 nm (500-550). 2. LCF (Lipid Clearing Factor) is integrated in the reagent.
- Matched cuvettes 1.0 cm light path. 3. Calibration with the aqueous Standard may cause a systematic error in
- General laboratory equipment. automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a
serum Calibrator.
SAMPLES 4. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
1,2
Serum or plasma : Stability of the sample for 7 days at 2-8ºC or 5. SPINREACT has instruction sheets for several automatic
freezing at –20ºC will keep samples stable for a few months. analyzers. Instructions for many of them are available on request.
PROCEDURE BIBLIOGRAPHY
1. Assay conditions: 1. Naito H.K. Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . .. . . 505 nm (500-550) Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437.
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 1 cm light path 2. Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic
Temperature . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .37ºC /15-25ºC System. Clin Chem 1978; 24 (12): 2161-2165.
3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
3. Pipette into a cuvette: 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Blank Standard Sample 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
WR (mL) 1.0 1.0 1.0 PACKAGING
(Note 1-2)
Standard ( L) -- 10 --
Ref: 1001090 10 x 50 mL
Sample ( L) -- -- 10 Ref: 1001091 10 x 20 mL
Cont.
4. Mix and incubate for 5 min. at 37ºC or 10 min. at room Ref: 1001092 4 x 125 mL
temperature. Ref: 1001093 4 x 250 mL

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