Microbiología I
“Practica No.3. Nutrición de los microorganismos”
Equipo No.4
Raúl Ernesto Huerta Mejorada
Marvin Cruz Miranda
Daniel Perea Ruiz
Luz Helena Rojas López
Rogelio Jair Velázquez Rincón
7°B
Fecha de término: 05 de Octubre del 2017
Fecha de entrega: 12 de Octubre del 2017
Coquimatlán, Col
INTRODUCCIÓN
Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos en
un laboratorio se denomina medio de cultivo. Algunas bacterias pueden crecer en
casi cualquier medio de cultivo; otros requieren medios especiales, y otros no
pueden crecer en ningún medio. Los microorganismos que se introducen en un
medio de cultivo para iniciar el crecimiento se denomina inóculo. Los microbios que
crecen y se multiplican en o sobre un medio es referido como cultivo.
MATERIALES
Equipo
Balanza digital
Balanza analítica
Microprocessor pH Meter Modelo pH 211
Material
5 cajas Petri
Asa de inoculación
Mechero bunsen
4 matraz Erlenmeyer de 250 mL
1 probeta de 100 mL
6 espátulas
Papel Aluminio
Malla de asbesto
Tripie
Frascos de vidrio limpios
Ligas
Papel estraza
Cinta testigo
Material biológico
Cultivo de Escherichia coli
Cultivo de Staphylococcus aureus
Cultivo de Saccharomyces cerevisiae
Nutrientes
Agar bacteriológico
Minerales
o Fosfato de amonio
o Sulfato de magnesio
o Cloruro de potasio
Fuente de Carbono. Dextrosa
Fuente de Nitrógeno. Peptona de gelatina
Reactivos
Hidróxido de sodio 10%
Ácido clorhídrico 0.1 N
MÉTODO
Creación de los medios.
En 4 matraces Erlenmeyer añadir 100 mL de agua. Marcar los matraces como A,
AM, AMC y AMCN. Preparar los medios de la siguiente forma:
1. En el matraz A añadir 1.5 g de agar bacteriológico.
2. En el matraz AM añadir 1.5 g de agar bacteriológico y 0.1 g de fosfato de
amonio, sulfato de magnesio y cloruro de potasio.
3. En el matraz AMC añadir lo mismo que en el matraz AM, más 1 g de dextrosa
(fuente de carbono).
4. En el matraz AMCN añadir lo mismo que en el matraz AMC, más 1 g de
peptona de gelatina (fuente de nitrógeno).
Dejar reposar el matraz un momento para dejar que los nutrientes se
humedezcan completamente, para que al mezclar el matraz no se formen grumos.
Una vez mezclado el matraz con los nutrientes se ajusta el pH en el
potenciómetro.
Se realiza un calibrado al potenciómetro con soluciones buffer a pH de 7 y 4.
Y después se mide el pH del medio. El pH requerido para el medio es 7.1, por lo
que se deberá ajustar añadiendo NaOH al 10% o HCl al 0.1 N.
Después de que el medio se dejó a un pH de 7.1 se procede a calentar en el
mechero bunsen. Se calienta unos segundos y se retira para que el medio no se
proyecte, un medio proyectado no sirve. Este calentamiento se da hasta que no
haya grumos en las paredes del matraz.
Después del calentado pasar a un frasco de vidrio, tapar el frasco con papel
aluminio y la tapa. Envolver en papel de estraza y cinta testigo. Dejar en el autoclave
por 24 horas.
Creación de los cultivos.
Dejar los frascos con los medios en baño maría para derretirlos. Una vez
líquidos, añadir el medio a cajas Petri. Una caja Petri para caja medio.
Dejar enfriar el medio y marcarlos como A, AM, AMC y AMCN.
Marcar con un plumón el fondo de vidrio de cada caja Petri para dividirla en
cuatro sectores y numerar cada sector.
Inocular los sectores correspondientes de cada caja con uno de los tres
organismos; dejar el cuarto sector de cada caja sin inocular.
Invertir las cajas, incubarlos a 37º C durante 48 horas y observar el
crecimiento en cada uno de los sectores inoculados. La caja rotulada “A” no contiene
nada más que agua destilada y agar. Los minerales de los otros tres medios
incluyen fosfato de amonio (NH4H2PO4), cloruro de potasio (KCl) y sulfato de
magnesio (MgSO4). La fuente de carbono orgánico empleada en los últimos dos
medios es la azúcar glucosa, y la fuente de nitrógeno orgánico empleada es una
peptona bacteriológica.
Hacer observaciones y dibujar los resultados.
RESULTADOS
Resultados
Tabla No. 1 “crecimiento bacteriano en distintos medios”
Cultivo/ E. coli S. aureus S. cerevicae control
microorganismo
Agar 1 + + + -
Agar 2 + - - -
AM + - + -
AMC ++ - + -
AMCN +++ +++ + -
Simbología: +.- crecimiento escaso, ++.- crecimiento moderado, +++.- crecimiento
abundante, AM.- (Agar, mineral), AMC.- (Agar, mineral, carbohidratos), AMCN.-
(Agar, mineral, carbohidratos, nitrógeno).
CUESTIONARIO
1. ¿Qué interpretaciones puede hacer respecto a las habilidades de los
distintos organismos para proliferar en los distintos medios usados?
Los organismos fotótrofos (del griego: photo = luz, troph = nutriente) son quienes
tienen capacidad de tomar fotones de la luz del sol como fuente de energía.
(Cadavid, 2013)
Los organismos quimiótrofos o quimiosintéticos son aquellos capaces de utilizar
compuestos inorgánicos reducidos como sustratos para obtener energía y utilizarla
en el metabolismo respiratorio. (Cadavid, 2013)
Vitamina Bacteria
Tiamina B1 Bacillus anthracis
Rivoflavina Clostridium tetani
Niacina Brucella abortus
Piridoxina B6 Lactobacillus spp.
Biotina Leuconostoc mesenteroides
Ácido pantoténico Proteus morganii
Ácido fólico Leuconostae dextranicum
Cobalamina Lactobacillus spp.
Vitamina K Bacteriodes melaninogenicus
(Cadavid, 2013)
5. Mencione necesidades nutricionales mínimas de algunas bacterias
heterotróficas.
Electrones
Donadores de electrones, en las bacterias quimiolitótrofas, la energía se
obtiene por oxidación de amoníaco a nitritos y éstos a nitratos, como
ocurre con las nitrificantes; o bien por la oxidación de sulfuros, azufre o
tiosulfatos a sulfatos como lo hace Thiobacillus thioxidans.
Aceptores de electrones, en este caso los nitratos se reducen a nitritos,
óxidos de nitrógeno y nitrógeno elemental a través de un proceso
desasimilatorio conocido como desnitrificación. Del mismo modo los
sulfatos pueden ser reducidos a sulfuros. Ambos procesos se llevan a
cabo en condiciones de anaerobiosis.