UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO – PUNO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

OBTENCIÓN DE LA CATALASA A PARTIR DE LA CEBOLLA

(Allium Cepa)

PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

CURSO: SEMINARIO DE INVESTIGACIÓN EN INGENIERÍA

QUÍMICA

DOCENTE: Ing. Dr. Gregorio PALOMINO CUELA

PRESENTADO POR:

Juan Yubher, CHOQUE RAMOS

PUNO – PERÚ

2017
 INDICE
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .............................................................................. 1
2. ANTECEDENTES ................................................................................................................ 2
3. JUSTIFICACION.................................................................................................................. 4
4. OBJETIVOS DE ESTUDIO ................................................................................................. 5
4.1. OBJETIVO GENERAL ................................................................................................ 5
4.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS ........................................................................................ 5
5. MARCO TEÓRICO CONCEPTUAL .................................................................................. 5
5.1. CATALASA ................................................................................................................. 5
5.1.1. Función de la catalasa ........................................................................................... 6
5.1.2. Mecanismo de reacción ......................................................................................... 6
5.2. CEBOLLA (Allium cepa) ............................................................................................. 7
5.2.1. Composición Química: .......................................................................................... 7
6. HIPOTESIS ........................................................................................................................... 8
6.1. HIPOTESIS GENERAL ............................................................................................... 8
6.2. HIPOTESIS ESPECIFICO ........................................................................................... 8
7. UTILIDAD DE LOS RESULTADOS DE ESTUDIO .......................................................... 8
7.1. LA INDUSTRIA ALIMENTICIA ................................................................................ 8
7.2. ESTERILIZACIÓN EN FRÍO ............................................................................................ 9
8. METODOLOGIA ................................................................................................................. 9
8.1. PARÁMETROS A TENER EN CUENTA PARA LA OBTENCIÓN DE ENZIMAS 9
8.1.1. Actividad especifica .............................................................................................. 9
8.1.2. PH optimo ........................................................................................................... 10
8.1.3. Solubilidad .......................................................................................................... 10
8.1.4. Sales .................................................................................................................... 10
8.1.5. Centrifugación ..................................................................................................... 11
8.2. APLICACIÓN DEL MÉTODO DE PRECIPITACIÓN POR SALES ....................... 11
8.2.1. Ecuación de la precipitación con sales: ............................................................... 12
8.2.2. Cálculo de la concentración de la enzima ........................................................... 12
8.3. DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA OBTENCION DE LA CATALAZA POR EL
METODO DE PRECIPITACION POR SAl........................................................................... 13
9. AMBITO DE ESTUDIO ..................................................................................................... 14
10. RECURSOS .................................................................................................................... 14
10.1. PRESUPUESTO ..................................................................................................... 14
11. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES .................................................................................... 16
12. BIBLIOGRAFIA Y FUENTES DE INFORMACION ................................................... 16
13. ANEXOS......................................................................................................................... 17
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En la actualidad los altos índices de enfermedades por falta de catalasa (acatalasemia
o enfermedad de takuhara) ausencia de catalasa en los peroxisomas lo que ocasiona
una disminución de actividad de síntesis de la enzima catalasa que tiene como función
reducción del agua oxigenada producida por el organismo contra defensa microbiana.

La preocupación de la humanidad por su salud personal, proliferación de

enfermedades a causa de este y la falta de producción masiva de esta enzima ha
incitado una forma de obtención de la catalasa utilizando como materia prima la
cebolla que es una hortaliza y será nuestra fuente de catalasa.

Unos de los problemas en la obtención de la catalasa es el alto porcentaje de una

molécula conocida como PRENCO.esta molécula a priori es inodora (no tiene olor )
por eso la cebolla solo huela mal después de cortarla .al hacerlo se rompen las células
de la cebolla y se libera una enzima llamada alinasa que reacciona con la anterior
molécula obteniéndose principalmente una molécula llamada 1- ácido
propenilsulfenico que es la causante del mal olor y lagrimeo y uno de los problemas
donde va dirigido este proyecto.

El siguiente trabajo tiene como propósito corroborar el método precipitación por

salado que se va a utilizar y darle un valor agregado a nuestro producto.

1
2. ANTECEDENTES

Health (2005), en su investigación “Extracción y purificación de una catalasa de

Candida albicans” demostró que Las células de levadura de Candida albicans H317
se hicieron crecer hasta la fase de medio log, se rompieron mecánicamente y el
extracto bruto resultante se clarificó por centrifugación. Esta fracción rica en catalasa
(1,26 x 10 (-4) unidades / ml) se fraccionó por enfriamiento isoeléctrico en fase
líquida en un gradiente de pH que variaba de 3 a 10 utilizando la Rotofor Isoelectric
Focusing Preparative Cell. Después de la separación isoeléctrica, las fracciones que
contenían actividad de catalasa se enfocaron entre pH 6,7 y 9,3. Las fracciones
activas se agruparon y volvieron a concentrarse. Después del segundo
fraccionamiento. Catalasa aumentó a 1,52 x 10 (-2) unidades / ml y se restringió a
fracciones que oscilaban entre pH 7,6 y 8,8. Hasta este punto se consiguió una
purificación de 121 veces. El análisis nativo de electroforesis en gel de poliacrilamida
de las fracciones activas reveló una banda que migraba entre 272.000 y 132.000
daltons que mostraba actividad catalasa. La purificación de la catalasa de C. albicans
nos permitirá evaluar su posible papel en la protección de este patógeno oportunista
de los productos de la explosión oxidativa. Los anticuerpos generados contra la
catalasa proporcionan medios para la evaluación de defensas fúngicas neutralizantes
contra productos de la explosión oxidativa durante la fagocitosis.

Pérez et al. (2013), en su investigación “Extracción de catalasa del suelo” Se

demostraron que condiciones experimentales para la extracción de catalasa
extracelular del suelo usando pirofosfato tetra-sódico como solución extractiva. La
mezcla de suelo con pirofosfato 0,01 M en una relación 1: 2 (p / v), ajuste del pH a
7,0-7,3, 18 h de agitación alterna a 1,05 x g (60 rpm) y filtración bacteriológica
después de la centrifugación fueron las condiciones óptimas para Extracción de
fracciones del suelo con actividad de catalasa. La concentración y el pH del
pirofosfato fueron los factores con mayor influencia en los rendimientos de
extracción. Se describen algunos aspectos de la variación del pH en las extracciones
sucesivas de la enzima y las diferencias entre el uso de soluciones extractivas a un
mismo pH del tampón o el control del pH de la extracción.

2
Cells ( 2015), en su tesis “Extracción de superóxido dismutasa, catalasa y anhidrasa
carbónica del hemolizado de glóbulos rojos sin estroma para la preparación del
complejo nanobiotecnológico de polihemoglobina-superóxido dismutasa catalasa-
anhidrasa carbónica” presento un nuevo método para extraer simultáneamente
superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y anhidrasa carbónica (CA) de la
misma muestra de glóbulos rojos (glóbulos rojos). Esto evita la necesidad de utilizar
enzimas comerciales caras, lo que permite un proceso rentable para la producción a
gran escala de un complejo nano biotecnológico de polyHb-SOD-CAT-CA, con el
aumento de las tres funciones de glóbulos rojos. Una concentración óptima de
tampón de fosfato para el tratamiento con etanol-cloroformo da como resultado una
buena recuperación de CAT, SOD y CA después de la extracción. Pueden usarse
diferentes concentraciones de las enzimas para aumentar la actividad de la poliHb-
SOD-CAT-CA a 2, 4, o 6 veces la de los RBC.

Physiol (2013), en su investigación “la descomposición del peróxido de hidrogeno

por el hígado catalasica” demostró que la velocidad de descomposición del peróxido
de hidrógeno por la catalasa en función de (a) la concentración de catalasa, (b) la
concentración de peróxido de hidrógeno, (c) la concentración de iones hidrógeno, (d)
la temperatura ha sido estudiada en un intento de correlacionar estas variables como
Posible. Se concluye que la reacción implica principalmente la adsorción de peróxido
de hidrógeno en la superficie de la catalasa. 2. Se considera que la descomposición
del peróxido de hidrógeno por la catalasa implica dos reacciones, a saber, la
descomposición catalítica del peróxido de hidrógeno, que es un máximo a un pH
óptimo de 6,8 a 7,0, y la "inactivación inducida" de la catalasa por el "naciente"
Oxígeno producido por el peróxido de hidrógeno y todavía adherido a la superficie
de la catalasa. Esto difiere de la visión más generalmente aceptada, a saber, que la
inactivación inducida es debido al H2O2 sí mismo. Sobre la base de la vista anterior,
se da una nueva interpretación a la ecuación de Yamasaki y se señala la conexión
entre las ecuaciones de Yamasaki y de Northrop. Se muestra que la velocidad de
inactivación inducida es mínima al pH que es óptimo para la descomposición del
peróxido de hidrógeno. 3. El incremento crítico de la descomposición catalítica del
peróxido de hidrógeno por la catalasa es del orden de 3.000 calorías. El incremento

3
crítico de la inactivación inducida es bajo en soluciones diluidas de peróxido de
hidrógeno, pero aumenta hasta un valor de 30.000 calorías en soluciones
concentradas de peróxido.

3. JUSTIFICACION

Esta investigación se justifica en que en la actualidad es crucial para la salud del

hombre esta enzima se encuentra en casi todos los organismos vivos en el planeta
que se están expuestos al oxígeno. Esta enzima antioxidante también puede
catalizar la conversión de peróxido de hidróxido en agua y oxígeno. El peróxido
de hidrógeno es un subproducto del metabolismo celular que apoya algunas
funciones útiles incluyendo una respuesta inmunológica saludable.

También se demostraron sus poderosas propiedades antioxidantes, la catalasa es

muy benéfica para los procesos de los órganos y el cuerpo. Además de fungir
como súper antioxidantes, la catalasa también tiene la habilidad de usar el
peróxido de hidrógeno para oxidar toxinas incluyendo el metanol, etanol, ácido
fórmico, formaldehido, y nitrito. Este tipo de actividad dual la convierte en una
enzima celular crucial.

La catalasa extraída de la cebolla (Allium Cepa) también ayuda a evitar daños al

ADN esto basado en un estudio realizado en el año 2006 por el Instituto de
Citología y Genética determinó que el estrés oxidante, la acumulación de proteína
y el daño al ADN podrían reducirse en presencia de enzimas antioxidantes,
incluyendo la catalasa y el glutatión presentes en los extractos de citosol y de la
mitocondria de las células del hígado de las ratas. Este estudio también descubrió
que los suplementos dietéticos incrementan la actividad de la catalasa en la
mitocondria del hígado de las ratas produciendo una menor disfunción
mitocondrial y desacelerando el proceso de envejecimiento en dichos animales.

Desde el punto de vista de salud social un problema que aqueja a la mitad de la

población mundial según la Academia de Dermatología es la canicie si bien la
aparición se debe a muchas causas como el estrés, déficit vitamínico, problemas

4
 hormonales etc. pero se sabe actualmente que ello este asociado principalmente
al peróxido de hidrogeno es por ello que se hace esta investigación.

4. OBJETIVOS DE ESTUDIO
4.1. OBJETIVO GENERAL
Obtención de la catalasa a partir de la cebolla roja (allium cepa) por el método
de precipitación.
4.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
• Evaluar si el proceso de obtención de catalasa utilizando el método de
precipitación por salado es el adecuado.
• Precisar las condiciones óptimas de operación (T°, pH , solubilidad, actividad,
sales)
• Determinar la cinética de obtención de la catalasa
• Evaluar un método de reducción de malos olores en el producto

5. MARCO TEÓRICO CONCEPTUAL

5.1. CATALASA
La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los
organismos aerobios. Cataliza la dismutación del peróxido de hidrógeno
(H2O2) en agua y oxí- geno. La mayoría de estas enzimas son homotetrámeros
con un grupo hemo en cada subunidad. Se ha determinado la estructura
cristalográfica de nueve catalasas. Algunas catalasas tienen subunidades
pequeñas (masa molecular ≈ 60 kDa) y otras grandes (masa molecular > 80
kDa). Entre estos dos tipos de catalasas existen diferencias estructurales
importantes. Las catalasas pequeñas son menos resistentes a la
desnaturalización, unen NADPH, tienen hemo b y se inhiben e inactivan por
sustrato. En cambio, las catalasas grandes tienen un dominio extra en el C-
terminal que es semejante a la flavodoxina, son muy resistentes a la
desnaturalización, tienen hemo d, presentan enlaces covalentes inusuales
cercanos al sitio activo y son resistentes a concentraciones molares de H2O2.
Aquí revisamos los aspectos estructurales de las catalasas y sus posibles
implicaciones funcionales. Diaz, (2005)

5
5.1.1. Función de la catalasa

Las especies de oxígeno reactivas como el radical superóxido, el radical

hidroxilo y el peróxido de hidró- geno (H2O2) se forman durante la reducción
del dioxígeno en agua. Estas especies pueden dañar las proteínas, los lípidos
y los ácidos nucleicos, por lo que se requieren sistemas antioxidantes
eficientes, entre los que se incluyen ciertas enzimas. El peróxido de hidrógeno
se forma por la dismutación del radical superóxido y también en la reacción
de algunas oxidasas. Hay varias enzimas capaces de degradar el peróxido de
hidrógeno: las catalasas, las peroxidasas y las peroxirredoxinas (1, 2). Las
peroxidasas eliminan el H2O2 usándolo para oxidar otros sustratos. Diaz,
(2005)

5.1.2. Mecanismo de reacción

En la reacción de la catalasa ocurre la transferencia de dos electrones entre

dos moléculas de peróxido de hidrógeno en la cual una funciona como
donador y otra como aceptor de electrones. El mecanismo de reacción se lleva
a cabo en dos pasos. En el primero la catalasa se oxida por una molécula de
peróxido formando un intermediario llamado compuesto I. El compuesto I se
caracteriza por tener un grupo ferroxilo con FeIV y un radical catiónico de
porfirina. En esta reacción se produce una molécula de agua (Reacción 1). En
el segundo paso de la reacción, el compuesto I es reducido por otra molécula
de peróxido regresando la catalasa a su estado inicial y produciendo agua y
dioxígeno (Reacción 2). En ciertas condiciones el compuesto I puede captar
un electrón originando el compuesto II. El compuesto II tiene un estado de
oxidación intermedio a los observados en el compuesto I y la catalasa en
reposo. Al reaccionar con una molécula de H2O2 forma el compuesto III, que
tiene un estado de oxidación FeVI. El compuesto II y el compuesto III son
inactivos catalíticamente. Diaz, (2005)

6
5.2. CEBOLLA (Allium cepa)

cebolla hace referencia a la planta cuyo nombre científico es Allium cepa,

aunque existen varios tipos, pero en la presente investigación utilizaremos la
cebolla roja

Las células que forman el bulbo comestible de la cebolla son ovaladas y se

unen entre sí gracias a una sustancia denominada péptico que confiere firmeza
a la estructura. Cuando la cebolla es cortada y las células se rompen, la
combinación entre aminoácidos y ciertas enzimas genera sulfóxido de
tiopropanal. Este elemento provoca irritación en la nariz y en los ojos: por eso
se dice que la cebolla hace que los seres humanos lloren. La cebolla tiene
un sabor algo picante y un aroma muy intenso y característico. Su ingesta
contribuye a combatir los efectos del reumatismo, a prevenir la osteoporosis
y las infecciones y a proteger el sistema cardiovascular. Esto se debe que
cuenta con potasio, calcio, silicio y fósforo, entre otros nutrientes. Porto,
(2016)

5.2.1. Composición Química:

Tabla 01: composición química de la cebolla (Allium Cepa)

COMPONENTE CEBOLLA CRUDA

CONTENIDO POR
UNIDAD
Agua 91.00%
Carbohidratos 7.50 g
Proteínas 1.25 g
Lípidos trazas
Calcio 25.00 mg
Fósforo 28.75 mg
Fierro 0.38 mg
Potasio 155.00 mg
Sodio 1.88 mg
Vitamina A (valor) -UI
Tiamina 0.06 mg

7
 Riboflavina 0.01 mg
Niacina 0.13 mg
Ácido ascórbico 8.13 mg
Valor energético 34.38 cal
Fuente: Matthews, (2007)

6. HIPOTESIS

6.1. HIPOTESIS GENERAL

A partir de la cebolla roja se obtiene catalasa por el método de precipitación

por salado.

6.2. HIPOTESIS ESPECIFICO

• El proceso de obtención de la catalasa a partir de la cebolla roja por
el método de precipitación por salado es el adecuado.
• Aplicando las condiciones de (T, pH, solubilidad, actividad, sales)
son los adecuados y óptimos para la obtención de la catalasa.
• Aplicando el proceso de extracción de la catalasa se determina la
cinética de obtención del proceso
• Evaluando un método de reducción de malos olores son los
adecuados para su operación.

7. UTILIDAD DE LOS RESULTADOS DE ESTUDIO

7.1. LA INDUSTRIA ALIMENTICIA
La catalasa junto con una enxima llamada glucosa oxidasa, que cataliza la
oxidación de la glucosa para formar glucano delta-lactona. Este procesa usa
oxígeno y libera peróxido de hidrógeno como subproducto. El agregado de
catalasa rompe el peróxido de hidrógeno. Combinar glucosa oxidasa y catalasa
en los envases de alimentos ayuda a reducir la cantidad de glucosa y oxígeno
en el producto, facilitando su almacenamiento y haciéndolo menos
perecedero. Otra aplicación común se da en la eliminación de glucosa de las
claras de huevo; esto se usa mucho en la industria de la panadería.

8
 7.2. ESTERILIZACIÓN EN FRÍO

A veces, la leche y el queso se esterilizan mediante un tratamiento con peróxido

de hidrógeno. Naturalmente, es necesario deshacerse de todos los residuos de
peróxido de hidrógeno una vez finalizado el proceso. Agregando catalasa a la
mezcla, los químicos de los alimentos pueden eliminar los restos de H2O2 y
preparar leche para la fabricación del queso. El sistema de glucosa oxidasa y
catalasa también se usa para reducir el contenido de gas dentro de las bebidas
embotelladas y enlatadas y para reducir el oscurecimiento de la mayonesa.
8. METODOLOGIA
8.1. PARÁMETROS A TENER EN CUENTA PARA LA OBTENCIÓN DE
ENZIMAS

A la hora de utilizar las enzimas en operaciones de restauración, debemos conocer

su temperatura específica. En general, los catálogos dan información precisa de la
temperatura óptima para cada tipo de enzima en particular. Los catalizadores
biológicos que operan en el interior de sistemas vivos, tienen una temperatura
óptima de trabajo entorno a los 37-40 ºC. Pero existen excepciones como enzimas
producidas por microorganismos que son segregados al exterior del organismo
mismo y que tienen una temperatura óptima de 25 ºC.

8.1.1. Actividad especifica

La actividad específica es la cantidad de sólido necesaria para hidrolizar una
cantidad predeterminada de un cierto sustrato en un cierto tiempo y a una cierta
temperatura. A la hora de escoger una enzima, es necesario elegir la de mayor
actividad, ya que esto significa que es necesario una menor cantidad de enzima
para hidrolizar un sustrato, y por tanto, será menor la cantidad de enzima que
deberemos eliminar después del tratamiento. La actividad específica está
expresada en unidad de sustrato transformado por miligramo de preparación
enzimática, en condiciones estándar de temperatura y a un cierto valor de pH.
Cuanto más alto es el valor, mayor es la capacidad catalítica de una cierta cantidad
de enzima. Algunos productos comerciales, como la lipasa y la pepsina, tienen
una actividad específica muy elevada (hasta 1500-2000 unidad por mg) mientras
que otros (sobre todo ciertas proteasas microbióticas) tienen valores muy

9
inferiores (0,1-1 unidad por mg). En las preparaciones de baja actividad es muy
importante acercarse lo máximo posible a las condiciones óptimas de trabajo (pH
y temperatura).

8.1.2. PH optimo
Como hemos visto anteriormente, el pH es un factor importante ya que, si éste no
es el óptimo, entonces la actividad enzimática puede ser inferior a la adecuada. El
pH viene especificado por los fabricantes en el propio bote o en la bibliografía
especializada.

8.1.3. Solubilidad

Algunas proteínas son más solubles en agua que otras. Si una proteína tiene
regiones más hidrofílicas ("que aman el agua"), serán más solubles que unas que
sean más hidrofóbicas ("temerosas al agua"). A medida que aumenta la
concentración de sal, las proteínas hidrofóbicas menos solubles y más solubles
precipitarán primero. Las proteínas estrechamente relacionadas no se pueden
separar por precipitación salina, porque van a precipitar a aproximadamente la
misma concentración de sal, pero las que tienen estructuras y características muy
diferentes a menudo se pueden separar de esta manera.

8.1.4. Sales
El sulfato de amonio es la sal más popular para este procedimiento, ya que tiene
muy alta solubilidad en agua, incluso a temperaturas muy bajas. Normalmente,
deseas mantener tu solución fría para inhibir la actividad de las proteasas,
proteínas que cortan a otras proteínas. La concentración de sal se describe
generalmente por el porcentaje de saturación, donde el 25% es el 25% de
saturación (la concentración a la que no se puede disolver más sal).

10
 8.1.5. Centrifugación
Por lo general, se añade la sal gradualmente a la solución de proteína mientras se
agita con rapidez (un agitador magnético es muy útil para este tipo de
procedimiento). La solución se centrifuga, lo que hace que algunas de las
proteínas se precipiten. A menudo este procedimiento se divide en varios pasos.
Es posible, por ejemplo, comenzar con 25% de saturación (un recorte del 25%), y
luego ir a un corte de 75%. Este proceso permite dividir las proteínas en tres
grupos, las que precipitan a 25%, las que precipitan a 75% y las que se precipitan
en el medio.
La salazón supondrá una pérdida de la proteína que deseas aislar. Cada proteína
tiene su propia curva de solubilidad, la solubilidad de la proteína como una
función de la concentración de soluto ("fuerza iónica"). Por consiguiente, incluso
si el aumento de la concentración de sal es insuficiente para precipitar la totalidad
de la proteína de interés, todavía se puede precipitar algo de ella. Por otra parte,
no se puede utilizar la salazón para aislar una proteína específica, ya que otras
proteínas se precipitan junto con ella. Por lo general, la salazón es sólo el primer
paso de un proceso de purificación de proteínas.

8.2. APLICACIÓN DEL MÉTODO DE PRECIPITACIÓN POR SALES

Se tomaron 5 mL de extracto enzimático y se ajustaron a una concentración de
(NH4)2SO4 variable en un rango entre el 10 y el 80% de saturación, con
incrementos de 5 unidades de porcentaje y empleando una solución saturada de
sal (4 M). Las muestras resultantes se centrifugaron a 4500 rpm durante 15 min;
los sobrenadantes fueron separados mediante micropipetas y los pellets (producto
precipitado) fueron resuspendidos en 5 mL de solución buffer acetato 0.1 M y pH
4.5. Finalmente, se procedió a realizar las pruebas pertinentes de determinación
de actividad enzimática tanto a los sobrenadantes como a los pellets
resuspendidos, de acuerdo a la metodología explicada.
Se preparó una muestra correspondiente al blanco para cada valor dentro del
barrido de porcentaje de saturación en estudio, adicionando los volúmenes
requeridos de solución de (NH4)2SO4 4 M a 5 mL de solución de metabisulfito
de sodio 0.1 M. Todos los blancos son analizados mediante las pruebas que se
aplican a los sobrenadantes y a los pellets resuspendidos.

11
 8.2.1. Ecuación de la precipitación con sales:

log S = A – m[Sal]
Donde:
S = Solubilidad de la proteína a un valor dado de concentración salina.
A = Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura. Esta constante
usualmente toma un valor mínimo en el punto isoeléctrico, es característica de
cada proteína e independiente del tipo de sal.
m = Pendiente de la curva de solubilización por salado. Ésta es independiente del
pH y la temperatura, pero varía con el tipo de sal y de proteína. Las sales que
contienen aniones polivalentes tales como sulfatos y fosfatos tienen valores de m
mayores que las sales univalentes. Los cationes polivalentes como el calcio y el
magnesio disminuyen el valor de m.

8.2.2. Cálculo de la concentración de la enzima

Para calcular de antemano la concentración necesaria para cada enzima se

realizará la siguiente operación:
ms = CV x V /As
ms= gramos del enzima
V = milímetros de enzima en solución
CV= concentración del enzima en unidades por ml en la solución
As= actividad del solido expresada en mg

12
 8.3. DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA OBTENCION DE LA CATALAZA
POR EL METODO DE PRECIPITACION POR Sal

CEBOLLA ROJA MATERIA PRIMA

(NH4)2SO4, 4.00M EXTRACTO

ENZIMATICO
Variable 10- 80%

4500 rpm CENTRIFUGADOR

SEPARACION
MICROPIPETAS

Resuspencion 5ml PELLETS

solución buffer
acetato 0.1 M ,Ph
4.5

DETERMINACION DE
ACTIVIDAD
ENZIMATICA

5 ml PREPARACION EN
55
metabisulfito de BLANCO POR
sodio 0.1 M MUESTRA

RESUSPENCION DE
LOS PELLETS

13
9. AMBITO DE ESTUDIO

La siguiente investigación se realizará en el laboratorio de control de calidad de

la Facultad de Ingeniería Química UNA-Puno.

10. RECURSOS

Se usará como lugar de trabajo de investigación en el laboratorio de Control de

calidad de la facultad de ingeniería química que dispone materiales, equipos y
reactivos, que no se está mencionando a continuación en el presupuesto, ya que
es de la facultad de ingeniería Química de la UNA-PUNO.

10.1. PRESUPUESTO
Presupuesto disponible: S/.500,00

Descripción Unidad de Costo Cantidad Costo total

medida Unitario (S/.) (S/.)
Personal Unidad 500.00 01 500.00
Materia prima Unidad 0,50 10 5,00
(cebolla)
Reactivos o insumos
de laboratorio
• Sulfato de Gramos 5,00 1 5.00
amonio Unidades 30.00 2 60.00
• Solución
buffer acetato
• Metabisulfito Gramos 5.00
de sodio 1 5.00

14
 Adquisición de
materiales y equipos
• centrifugador Unidades -- -- --
• Escobilla de
limpieza Unidades 2,00 03 6,00
• Detergente
industrial Unidades 5,00 01 5,00

• Lentes de
seguridad
• Guantes de
seguridad
• Mandil de
seguridad
Servicios
• Alquiler del Veces 200.00 01 200.00
laboratorio
para trabajar Periodo 50,00 01 50,00
• Transporte
• Viáticos
Viaje 10,00 05 50,00
Persona 50,00 01 50,00
Sub total 436.00
Improvistos
5% del subtotal 21.80
Total 457.80

15
 11. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

N° de Semanas

Actividades
1 2 3 4 5 6 7 8

Revisión bibliográfica

Formulación del marco teórico y conceptual

Adquisición de equipos y materiales

Implementación del laboratorio

Revisión de estrategia experimental y parte

experimental

Ordenamiento de resultados

Análisis de los resultados

Redacción del informe final

12. BIBLIOGRAFIA Y FUENTES DE INFORMACION

• C. Walsh, Enzymic Reaction Mechanisms. San Francisco, Calif. : W. H.

Francisco Jose Plou Gasca, las Enzimas
• Freeman and Co., 1979.
• LEHNINGER, A., NELSON, D., COX, M., Principios de Bioquímica 4º Edición,
Ed. Omega,
• Sergio Huerta Ochoa, UAM-Iztapalapa – Bioquimica Experimental
• Universidad Nacional Autónoma De México - Bioquímica Aplicada

16
13. ANEXOS
FIGURA 01: sulfato de amonio FIGURA03: metabisulfito de sodio

FIGURA 02: Solución buffer acetato

17
FIGURA 04: Esquema de obtención de enzimas forma general

FIGURA 05: Cinética de las enzimas, forma general

18