KATA PENGANTAR

Puji Syukur kami panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas selesainya laporan
biokimia praktek. Makalah ini disusun guna memenuhi tugas Bio Kimia. Dalam makalah ini
dibahas tentang Uji kualitatif karbohodrat, uji kelarutan lipid, uji pembentukan emulsi dan
penyabunan, uji identifikasi kolesterol, uji identifikasi asam amino dan protein, sifat denaturasi
protein, uji pengaruh suhu, pH, inhibitor, konsentrasi substrat dan enzim terhadap aktifitas
enzim,.

Kami mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu,sehingga
makalah ini dapat diselesaikan tepat pada waktunya.

Kami menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari sempurna baik dari bentuk
penyusunan maupun materinya.oleh karena itu, kami mengharapkan kritik dan saran yang
membangun dari Dosen Pembimbing demi kesempurnaan makalah ini.

Akhir kata semoga makalah ini dapat memberikan manfaat untuk pembaca.

Jakarta, 18 Mei 2017

Dadan Nur Rachmat

P3.73.34.1.16.044

1
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR......................................................................................................................................... 1
DAFTAR ISI..................................................................................................................................................... 2
UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT ..................................................................................................................... 3
UJI MOLISCH.............................................................................................................................................. 3
UJI IODIUM................................................................................................................................................ 5
UJI BARFOED ............................................................................................................................................. 6
UJI BENEDICT............................................................................................................................................. 8
UJI SELIWANOFF...................................................................................................................................... 10
UJI OSAZON ............................................................................................................................................. 11
UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT SECARA SISTEMATIKA ............................................................................... 12
LIPIDA .......................................................................................................................................................... 13
UJI KELARUTAN ....................................................................................................................................... 13
UJI PEMBENTUKAN EMULSI .................................................................................................................... 14
UJI PENYABUNAN.................................................................................................................................... 15
UJI IDENTIFIKASI KOLESTEROL .................................................................................................................... 16
UJI SALKWOSKI ........................................................................................................................................ 16
UJI IDENTIFIKASI ASAM AMINO DAN PROTEIN ........................................................................................... 17
UJI NINHIDRIN ......................................................................................................................................... 17
UJI BIURET ............................................................................................................................................... 18
UJI MILLON .............................................................................................................................................. 20
UJI XANTHOPROTEIN .............................................................................................................................. 21
SIFAT DENATURASI PROTEIN (Panas, pH, dan Logam Berat) ...................................................................... 22
ENZIM.......................................................................................................................................................... 24
UJI PENGARUH SUHU TERHADAP AKTIVITAS ENZIM .............................................................................. 24
UJI PENGARUH pH TERHADAP AKTIVITAS ENZIM ................................................................................... 26
UJI PENGARUH INHIBITOR TERHADAP AKTIVITAS ENZIM ...................................................................... 28
UJI PENGARUH KONSENTRASI SUBSTRAT TERHADAP AKTIVITAS ENZIM ............................................... 30
UJI PENGARUH KONSENTRASI ENZIM TERHADAP AKTIVITAS ENZIM ..................................................... 32

2
 UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT

UJI MOLISCH

TUJUAN :

Untuk membuktikan adanya karbohidrat dalam suatu sample

PRINSIP :

Reaksi ini disebabkan oleh daya dehidrasi asam an organic pekat terhadap karbohidrat,
membentuk furfural atau turunannya, seperti hidroksimetil-furfural. Pereaksi Molisch
yang terdiri atas α-naftol akan bereaksi dengan furfural membentuk senyawa berwarna
ungu.

REAKSI :

CH
|
CHOH
| + H2SO4 + 3H2O
CHOH
|
CHOH
|
CH2OH

(Pentosa) (Furfural)

CHO
|
CHOH
|
CHOH
+ H2SO4 H2C + H2O
|
CHOH
|
CHOH
|
CH2OH

(Heksosa) (5-hidroksimetil-furfural)

3
ALAT-ALAT :

 Tabung Reaksi
 Pipet Tetes
 Pipet Ukur 1mL

REAGENSIA :

 Pereaksi Molisch
(Larutan α-naftol 5% dalam etanol 95%
 H2SO4

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan amilum 1%
 Larutan maltose 1%
 Larutan laktosa 1%
 Larutan sukrosa 1%
 Larutan glukosa 1%
 Larutan fruktosa 1%
 Larutan galaktosa 1%
 Larutan arabinose 1%
 Aquadest (pembanding)

CARA KERJA :

1. Masukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing 1 mL larutan sample

2. Tambahkan masing-masing 2 tetes pereaksi Molisch, campur sampai homogen
3. Tambahkan 0,5 mL H2SO4 pekat ke masing-masing tabung dengan cara memiringkan
tabung dan mengalirkan H2SO4 pekat melalui dinding. Jangan dikocok !!
4. Reaksi positif (adanya karbohidrat) ditandai dengan pembentukan cincin berwarna
ungu pada batas antara kedua lapisan cairan tersebut

4
 UJI IODIUM
TUJUAN :

Membuktikan adanya karbohidrat dari golongan polisakarida

PRINSIP :

Polisakarida dengan larutan Iodium akan membentuk kompleks warna biru/ungu

(amilum) dan merah (glikogen), sedangkan oligosakarida dan monosakarida dengan larutan
Iodium tidak membentuk kompleks warna (tidak berwarna)

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Pipet ukur 1 mL

REAGENSIA :

 Perekasi Iodium
Larutan 20 gram KI dalam 1000 mL aquadest dan tambahkan I2 secukupnya
sampai larutan berwarna kuning tua

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan amilum 1%
 Larutan maltose 1%
 Larutan laktosa 1%
 Larutan sukrosa 1%
 Larutan glukosa 1%
 Larutan fruktosa 1%
 Larutan galaktosa 1%
 Larutan arabinose 1%
 Aquadest (pembanding)

CARA KERJA :

1. Masukkan kedalam tabung reaksi masing-masing 1 mL larutan sample

2. Tambahkan masing-masing 2-3 tetes pereaksi Iodium, campur hingga homogeny
3. Amati kompleks warna yang terbentuk :
- Warna biru/ungu : polisakarida (amilum)
- Warna merah : polisakarida (glikogen)
- Tidak berwarna : bukan polisakarida

5
 UJI BARFOED

TUJUAN :

Untuk membedakan karbohidrat dari golongan disakarida dan monosakarida

PRINSIP :

Gula yang mempunyai gugus aldehid atau keton bebas akan mereduksi ion kupri dalam
suasana asam menjadi kupro oksida yang tidak larut dan berwarna merah. Monosakarida akan
mereduksi lebih cepat daripada disakarida.

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Pipet ukur 2mL
 Penangas air

REAGENSIA :

 Pereaksi Barfoed
Larutkan 48 gram Cu-asetat dalam 900mL air mendidih. Tambahkan segera 50 mL asam
laktat 8,5 % ke dalam larutan yang masih panas. Kocoklah sampai semua endapan larut.
Encerkan dengan aquadest sampai 1000mL

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan amilum 1%
 Larutan maltose 1%
 Larutan laktosa 1%
 Larutan sukrosa 1%
 Larutan glukosa 1%
 Larutan fruktosa 1%
 Larutan galaktosa 1%
 Larutan arabinose 1%
 Aquadest (pembanding)

6
CARA KERJA :

1. Masukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing 2 mL larutan Barfoed

2. Tambahkan masing-masing 0,5 mL sample (10 tetes) campur hingga homogen
3. Panaskan dalam penangas air mendidih selama 5 menit.
4. Perhatikan adanya endapan merah yang terbentuk.
5. Bila positif dalam waktu 5 menit menunjukkan monosakarida, bila lebih dari 5 menit
menunjukkan disakarida.

7
 UJI BENEDICT

TUJUAN :

Untuk membuktikan adanya karbohidrat yang mempunyai sifat sebagai gula pereduksi

PRINSIP :

Gula yang mempunyai gugus aldehid atau keton bebas akan mereduksi ion kupri dalam
suasana alkalis menjadi kupro oksida yang tidak larut dan berwarna merah

REAKSI :

CuSO4 + 2NaOH Cu(OH)2 + Na2SO4

Gula pereduksi
2Cu(OH)2 2CuOH + H2O + O
Pemanasan
|
Cu2O + H 2O
(Merah bata)

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Pipet ukur 5mL
 Penangas air

REAGENSIA :

 Pereaksi Benedict
Larutkan 173 gram Na-Sitrat dan 100 gram Na2CO3 dalam 800 mL air (Homogenkan).
Larutkan 17,3 gram CuSO4 dalam 100 mL air, kemudian tambahkan perlahan-lahan
kedalam larutan sitrat-karbonat sambil terus diaduk. Encerkan dengan aquadest sampai
1000mL.

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan amilum 1%
 Larutan maltose 1%
 Larutan laktosa 1%
 Larutan sukrosa 1%
 Larutan glukosa 1%

8
  Larutan fruktosa 1%
 Larutan galaktosa 1%
 Larutan arabinose 1%
 Aquadest (pembanding)

CARA KERJA :

1. Masukkan kedalam tabung reaksi masing-masing 2,5mL larutan Benedict

2. Tambahkan masing-masing 4 tetes sample, campur hingga homogeny
3. Panaskan dalam penangas air mendidih selama 5 menit
4. Perhatikan adanya endapan merah yang terbentuk.

9
 UJI SELIWANOFF

TUJUAN :

Untuk membedakan adanya karbohidrat yang mempunyai gugus aldehid (aldose) dan
keton (ketosa)

PRINSIP :

Reaksi ini spesifik untuk ketosa. Dasarnya ialah pembentukan 4-hidroksimetil furfural yg
bereaksi dengan resorsinol (1,3-dihidroksi benzene) membentuk senyawa berwarna merah.

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Pipet ukur 2mL
 Penangas air

REAGENSIA :

 Pereaksi Seliwanoff
Larutkan 0,05 gram resorsinol dalam 100 mL HCl encer (1:2)

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan amilum 1%
 Larutan maltose 1%
 Larutan laktosa 1%
 Larutan sukrosa 1%
 Larutan glukosa 1%
 Larutan fruktosa 1%
 Larutan galaktosa 1%
 Larutan arabinose 1%
 Aquadest (pembanding)

CARA KERJA :

1. Masukkan kedalam tabung reaksi masing-masing 1mL larutan Sewilanoff

2. Tambahkan masing-masing 3 tetes sample, campur hingga homogeny
3. Panaskan dalam penangas air mendidih selama 3 menit
4. Perhatikan adanya warna merah yang terbentuk

10
 UJI OSAZON

TUJUAN :

Untuk membuktikan bahwa karbohidrat dapat membentuk Kristal osazon dan dapat
digunakan untuk identifikasi berdasarkan bentuk kristalnya

PRINSIP :

Suatu aldosa/ketosa akan bereaksi dengan fenilhidrazin membentuk fenilhidrazon. Hasil

oksidasi fenilhidrazon akan bereaksi dengan fenilhidrazin berlebih membentuk osazon (dapat
dilihat dari bentuk Kristal)

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Pipet ukur 2 mL
 Penangas air
 Mikroskop
 Objek glass

REAGENSIA :

 Pereaksi Osazon
1 bagian berat fenilhidrazin HCl ditambahkan 4 bagian berat Na-Sitrat

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan maltose 1%
 Larutan laktosa 1%
 Larutan glukosa 1%
 Larutan galaktosa 1%
 Larutan arabinose 1%

CARA KERJA :

1. Masukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing 100mg pereaksi osazon

2. Tambahkan masing-masing 1 mL sample, campur hingga homogen
3. Tutup tabung reaksi dengan kapas, panaskan dalam penangas air sampai terbentuk
Kristal

4. Lihat bentuk Kristal dengan bantuan mikroskop

11
 UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT SECARA SISTEMATIKA

Sample

Uji Molisch

Negatif (Non KH) Positif (KH)

Uji Iodium

Positif (Polisakarida) Negative (Di/Monsakarida)

Uji Barfoed

Positif (Monosakarida) Negatif (Disakarida)

Uji Seliwanoff Uji Benedict

Positif Negatif Positif Negatif (Sukrosa)

Osazon Osazon

 Glukosa  Maltosa
 Galaktosa  Laktosa
 Arabinosa

12
 LIPIDA
UJI KELARUTAN
TUJUAN :

Untuk mengetahui tingkat kelarutan lipida terhadap berbagai jenis pelaru t organik.

PRINSIP :

Lipida sukar/tidak larut dalam air tetapi mudah larut dalam pelarut-pelarut organik.
Molekul lipida berinteraksi dengan molekul pelarut organik dalam bentuk interaksi hidrofobik,
sehingga lipida tersebar merata diantara pelarut organik.

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet ukur 2mL

REAGENSIA :

- Berbagai pelarut organik, seperti :

 Eter
 Benzene
 Aceton
 Etanol panas, alkohol panas
 Kloroform
- Aquadest

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Gliserol
 Mentega
 Lemak (Gajih)
 Minyak goreng

CARA KERJA :

1. Masukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing sejumlah 100 mg sample (10 tetes)
2. Tambahkan ke dalam masing-masing tabung sebanyak 2mL pelarut serta aquadest
sebagai pembanding
3. Kocok kuat-kuat selama 2 menit, kemudian diamkan selama 10 menit
4. Perhatikan kelarutannya, jika kurang jelas ambil 1 tetes larutan tersebut kemudian
teteskan di atas kertas saring.
5. Keringkan dan perhatikan adanya bercak (Uji Bercak)

13
 UJI PEMBENTUKAN EMULSI
TUJUAN :

Untuk mengetahui bahwa minyak dan air dapat dicampur secara merata dan stabil
dalam bentuk emulsi dengan bantuan suatu bahan pengemulsi (emulgator)

PRINSIP :

Suatu senyawa bersifat pengemulsi (emulgator) bila dapat larut baik dalam air maupun
dalam minyak. Adanya emulgator ini menyebabkan minyak dapat tersebar merata dan stabil di
antara molekul-molekul air.

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet ukur 2mL
 Pipet tetes

REAGENSIA :

 Aquadest
 Emulgator (sabun cair)

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Mentega
 Margarin
 Minyak goreng

CARA KERJA :

1. Masukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing 5 tetes sample

2. Tambahkan ke dalam masing-masing tabung 2 mL aquadest
3. Kocok kuat-kuat sehingga terbentuk emulsi yang keruh
4. Diamkan selama 5 menit dan perhatikan apakah emulsi tersebut terpisah kembali
menjadi 2 cairan
5. Ulangi percobaan diatas dengan menambahkan 1mL sabun cair
6. Kocok kuat-kuat dan biarkan
7. Perhatikan apakah emulsi yang terbentuk stabil artinya tidak terpisah kembali setelah di
diamkan

14
 UJI PENYABUNAN
TUJUAN :

Untuk mengetahui bahwa minyak dan soda (NaOH/KOH) dapat membentuk sabun

PRINSIP :

Minyak yang mempunyai gugus karboksilat akan bereaksi dengan soda (NaOH/KOH)
membentuk suatu garam karboksilat yang larut dalam air. Garam tersebut disebut sabun

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Penangas air

REAGENSIA :

 NaOH 10% dalam alkohol 90%

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Minyak goring

CARA KERJA :

1. Masukkan ke dalam tabung reaksi sebanyak 5 tetes minyak goring

2. Tambahkan ke dalam tabung NaOH 10% dalam alkohol 90% tetes demi tetes sampai ada
gumpalan
3. Kocok, panaskan dalam penangas air selama 10 menit
4. Amati terbentuknya sabun berupa gumpalan

15
 UJI IDENTIFIKASI KOLESTEROL

UJI SALKWOSKI
TUJUAN

Untuk mengetahui adanya kolesterol dalam suatu sampel

PRINSIP/DASAR

Kolesterol akan membentuk warna merah, ungu dan biru jika direaksikan dengan H2SO4
pekat.

ALAT-ALAT

 Tabung reaksi
 Pipet ukur 2 ml
 Pipet tetes

REAGENSIA

 Kloroform
 H2SO4 pekat

BAHAN UJI (SAMPEL)

 Larutan kolesterol 5% dalam kloroform

 Mentega
 Margarin
 Minyak goreng

CARA KERJA

1. Siapkan tabung reaksi yang bersih dan kering

2. Masukkan 1 ml larutan kolesterol 5% dalam kloroform kedalam tabung reaksi
3. Tambah dan campurkan secara hati-hati 1ml H2SO4 pekat
4. Setelah kedua lapisan campuran tersebut terpisah, perhatikanlah timbulnya warna
berturut-turut merah, biru, ungu dalam lapisan kloroform. Dalam lapisan H2SO4 pekat
akan tampak fluoresensi kuning
5. Lakukanlah terhadap sampel lain dengan terlebih dahulu melarutkan sampel dalam
kloroform

16
 UJI IDENTIFIKASI ASAM AMINO DAN PROTEIN

UJI NINHIDRIN
TUJUAN :

Untuk mengetahui adanya asam amino dalam suatu sample

PRINSIP :

Uji Ninhidrin merupakan uji umum karena semua asam amino atau protein yang
mengandung sedikitnya satu gugus karboksil (-COOH) dan gugus amina (-NH2) bebas akan
bereaksi dengan ninhidrin (triketon hidrindenahidrat) menghasilkan CO2, NH3 dan aldehid
beratom C kurang satu dari jumlah semula. Reaksi positif ditunjukkan dengan terbentuknya
warna biru tua/ungu (kecuali prolin dan hidroksiprolin berwarna kuning)

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet ukur 2mL
 Pipet tetes
 Penangas air

REAGENSIA :

 Larutan Ninhidrin 0,1%

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan albumin 2%
 Larutan pepton 2%
 Larutan kasein 2%
 Larutan gelatin 2%
 Aquadest

CARA KERJA :

1. Masukkan ke dalam tabung reaksi 1 mL larutan sample.

2. Tambahkan 0,5 mL larutan Ninhidrin 0,1%
3. Panaskan dalam air mendidih di penangas air selama 10 menit
4. Perhatikan perubahan warna yang terjadi

17
 UJI BIURET
TUJUAN :

Untuk mengetahui adanya senyawa dengan ikatan peptida (protein)

PRINSIP :

Biuret adalah senyawa dengan 2 ikatan peptide yang terbentuk pada

pemanasan urea.

2H2N – C – NH2 H2N – C – NH – C – NH2 + NH3

O O O

(2 mol urea) (biuret) (amonia)

Reaksi biuret adalah reaksi terhadap adanya paling sedikit 2 ikatan peptida.
Pereaksi biuret (larutan CuSO4 alkalis) terdiri atas larutan NaOH dan CuSO4. Cu
pada larutan alkalis bereaksi dengan protein membentuk suatu kompleks
koordinasi antara Cu2+ dengan gugus CO dan NH pada ikatan peptida. Kompleks
tersebut memberi warna lembayung (ungu)

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes

REAGENSIA :

 Larutan NaOH 10%

 Larutan CuSO4

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan albumin 2%
 Larutan pepton 2%
 Larutan kasein 2%
 Larutan gelatin 2%
 Aquadest

CARA KERJA :

18
1. Masukkan ke dalam tabung reksi 1 mL larutan sample
2. Tambahkan 1 mL larutan NaOH 10%, kocok hingga homogeny
3. Tambahkan 1 tetes larutan CuSO4, campur dengan baik. Bila belum terbentuk warna
ungu tambahkan lagi setetes CuSO4 hingga maksimum 10 tetes

19
 UJI MILLON

TUJUAN :

Untuk mengetahui adanya asam amino tirosin

PRINSIP :

Tirosin merupakan asam amino yang mengandung gugus hidroksifenil (fenol) akan
mengalami nitrasi dengan pereaksi Millon yang mengandung ion-ion merkuri/merkuro dalam
asam nitrat/nitrit, membentuk warna merah

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Pipet ukur 2 mL
 Penangas air

REAGENSIA :

 Pereaksi Millon

100 gram merkuri dalam 140 mL asam nitrat pekat dan diencerkan dengan air sampai
volumenya 3 kali

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan albumin 2%
 Larutan pepton 2%
 Larutan kasein 2%
 Larutan gelatin 2%
 Larutan fenol 2%

CARA KERJA :

1. Masukkan kedalam tabung reaksi 2 mL larutan sample

2. Tambahkan 2-3 tetes pereaksi Millon. Campur dengan baik
3. Panaskan dalam penangas air selama 5 menit, perhatikan adanya warna merah

20
 UJI XANTHOPROTEIN
TUJUAN :

Untuk mengetahui adanya asam amino yang mengandung inti benzene

PRINSIP :

Nitrasi ini benzene dari asam amino (tirosin, fenilalanin, dan triptofan) dalam molekul
protein membentuk senyawa nitro yang berwarna kuning. Dalam suasana basa akan terionisasi
dan warnanya berubah menjadi kuning tua/jingga.

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Pipet ukur 2mL
 Penangas air

REAGENSIA :

 HNO3 pekat
 NaOH pekat (40%)

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan albumin 2%
 Larutan pepton 2%
 Larutan kasein 2%
 Larutan gelatin 2%

CARA KERJA :

1. Masukkan ke dalam tabung reaksi 1 mL larutan sample

2. Tambahkan 0,5 mL HNO3 pekat. Perhatikan terbentuknya endapan putih
3. Panaskan hati-hati, endapan akan larut kembali dan larutan berubah menjadi kuning
4. Dinginkan dibawah air mengalir, dan tambahkan tetes demi tetes NaOH pekat
5. Perhatikan perubahan warna yang terjadi

21
 SIFAT DENATURASI PROTEIN (Panas, pH, dan Logam Berat)

TUJUAN:

Untuk mengetahui bahwa protein akan mengalamidenaturasi/koagulasi pada kondisi

lingkungan yang ekstrem.

PRINSIP/DASAR

Secara alamiah, dalam kondisi suhu dan pH tertentu protein mudah larut dan
berinteraksi dengan air. Bila salah satu kondisitersebut berubah, struktur tersier dariprotein
juga berubah dan molekul protein tidak dapat lagi berinteraksi dengan air. Akibatnya daya larut
protein menjadi hilang dan berkoagulasi/terdenaturasi.

ALAT-ALAT

 Tabung reaksi
 Pipet tetes
 Pipet ukur 2 ml
 Penangas air

REAGENSIA

 H2SO4 pekat
 Larutan AgNO3 2%
 Larutan HgCl2 2%
 Larutan Pb-asetat 2%
 Larutan CuSO4 2%

BAHAN UJI (SAMPLE)

 Larutan albumin 2%

22
CARA KERJA DENATURASI PROTEIN OLEH PEMANASAN

1. Masukkan kedalam tabung reaksi 2ml, larutan sample

2. Panaskan dalam air mendidih di penangas air selama 10-15 menit
3. Perhatikan apakah ada endapan atau kekeruhan

CARA KERJA DENATURASI PROTEIN OLEH ASAM KUAT

1. Masukkan kedalam tabung reaksi 2ml, larutan sampel

2. Tambahkan 0.5 ml, H2SO4 pekat melalui dinding
3. Perhatikan apakah ada endapan atau kekeruhan

CARA KERJA DENATURASI PROTEIN OLEH LOGAM BERAT

1. Masukkan kedalam tabung reaksi 2 ml, larutan sampel

2. Tambahkan setetes demi setetes larutan AgNO3 2%, perhatikan adanya endapan atau
kekeruhan
3. Lakukan hal sama dengan larutan HgCl2 2%, larutan Pb-asetat 2% dan larutan CuSO4 2%

23
 ENZIM
UJI PENGARUH SUHU TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

TUJUAN :

Untuk membuktikan bahwa kecepatan reaksi enzimatik sampai suhu tertentu sebanding
dengan kenaikan suhu, dan reaksi paling cepat berlangsung pada suhu optimum

PRINSIP :

Suhu yang sangat rendah akan menyebabkan terhentinya kerja enzim secara reversible,
karena dalam keadaan tersebut tidak akan terjadi benturan antara partikel E dan S. akibatnya
kompleks E-S yang sangat penting dalam reaksi enzimatik tidak terbentuk, sehingga P juga tidak
terbentuk. Bila suhu dinaikkan sedikit demi sedikit benturan E dan S untuk membentuk
kompleks E-S akan makin meningkat sehingga P yang terbentuk makin banyak. Keadaan ini
terjadi sampai pada suhu tertentu, yaitu suhu optimum

Suhu yang lebih tinggi dari suhu optimum menyebabkan enzim terdenaturasi, akibatnya
meskipun benturan E dengan S meningkat, kompleks E-S tidak terbentuk karena enzim
terdenaturasi. Akibatnya pembentukan P berkurang. Denaturasi enzim dapat terjadi irreversible
terutama bila suhu lingkungan jauh melampaui suhu optimum

ALAT DAN BAHAN :

 Tabung reaksi
 Pipet ukur 5 mL
 Pipet tetes
 Gelas kimia / beaker glass
 Penangas air/waterbath

REAGENSIA :

 Larutan Lugol 1%
 Larutan NaCl 0,9%

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan enzyme amylase (air liur yang diencerkan dengan NaCl 0,9% 1:9)
 Larutan amilum 1%

24
CARA KERJA :

1. Siapkan 3 tabung reaksi yang bersih dan kering. Masukkan 3 mL larutan amilum 1% ke
dalam tiap tabung reaksi
2. Siapkan 3 tabung reaksi yang bersih dan kering. Masukkan 0,5 mL larutan enzim amylase
3. Pasangkan tiap satu tabung amilum dengan satu tabung larutan enzim
4. Masukkan pasangan pertama ke dalam gelas kimia yang berisi es, pasangkan kedua
pada suhu kamar dan pasangan ketiga pada suhu 100oC
5. Biarkan tiap pasangan pada suhu yang telah ditentukan selama 5 menit
6. Setelah 5 menit, tuangkanlah larutan amilum ke dalam tabung yang berisi enzim,
campur dengan baik dan pertahankan pada suhu masing-masing. Bersamaa dengan
bercampurnya antara enzim dan amilum segera catat waktunya
7. Setiap 1 menit, ambillah 5 tetes campuran enzim dengan amilum kemudian tambahkan
larutan lugol 1% sebanyak 2 tetes
8. Amati warna yang terbentuk, bila terbentuk warna biru atau ungu berarti (+) selain
warna tersebut berarti (-)
9. Lakukan percobaan nomor 7 sampai didapatkan hasil (-) atau sampai campuran habis
10. Catat waktu yang diperlukan sampai menghasilkan hasil (-) pada tiap-tiap campuran

25
 UJI PENGARUH pH TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

TUJUAN :

Untuk membuktikan bahwa keasaman (pH) mempengaruhi kecepatan reaksi enzimatik

PRINSIP :

Enzim bekerja pada suatu kisaran pH dan menunjukkan aktivitas maksimum pada pH
optimum dan diluar pH optimum aktivitas enzim akan menurun atau terhenti

ALAT DAN BAHAN :

 Tabung reaksi
 Pipet ukur 5mL
 Pipet tetes

REAGENSIA :

 Larutan Lugol 1%
 Larutan HCI 1 N
 Larutan NaOH 1 N
 Larutan NaCI 0,9%

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan enzim amilase (air liur yang diencerkan dengan NaCI 0,9% 1 : 9)
 Larutan amilum 1%

CARA KERJA :

1. Siapkan 3 tabung reaksi yang bersih dan kering. Masukkan 3 mL larutan amilum 1% ke
dalam tiap tabung reaksi
2. Siapkan 3 tabung reaksi yang bersih dan kering. Pada tabung pertama masukkan 0,4 mL
larutan enzim amilase dan 2 tetes HCI 1 N, tabung kedua masukkan 0,4 mL larutan
enzim amilase dan 2 tetes NaCI 0,9% dan tabung ketiga masukkan 0,4 mL larutan enzim
amilase dan 2 tetes NaOH 1 N
3. Pasangkan tiap satu tabung amilum dengan satu tabung larutan enzim
4. Tuangkanlah larutan amilum ke dalam tabung yang berisi enzim, campur dengan baik.
Bersamaan dengan bercampurnya antara enzim dan amilum segera catat waktunya
5. Setiap 1 menit, ambillah 5 tetes campuran enzim dengan amilum kemudian tambahkan
larutan Lugol 1% sebanyak 2 tetes

26
6. Amati warna yang terbentuk, bila terbentuk warna biru atau ungu berarti (+) selain
warna tersebut berarti (-)
7. Lakukan percobaan nomor 5 sampai didapatkan hasil (-) atau sampai campuran habis
8. Catat waktu yang diperlukan sampai menghasilkan hasil (-) pada tiap campuran

27
 UJI PENGARUH INHIBITOR TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

TUJUAN :

Untuk membuktikan bahwa inhibitor dapat mempengaruhi kecepatan reaksi enzimatik

PRINSIP :

Inhibitor dapat bersifat kompetisi dan non kompetisi, inhibitor kompetisi bersifat
reversible artinya efeknya dapat dihilangkan dengan penambahan substrat secara berlebih
sehingga terbentuk komplek E-S yang akhirnya terbentuk pula P. inhibitor non kompetisi
bersifat irreversible artinya efeknya tidak dapat dihilangkan sehingga tidak terbentuk kompleks
E-S dan akhirnya P juga tidak terbentuk

ALAT DAN BAHAN :

 Tabung reaksi
 Pipet ukur 5mL
 Pipet tetes

REAGENSIA :

 Aseton
 Larutan Lugol 1%
 Larutan AgNO3 2% N
 Larutan Pb-asetat 2%
 Larutan NaCI 0,9%

BAHAN UJI (SAMPLE) :

 Larutan enzim amilase (air liur yang diencerkan dengan NaCI 0,9% 1 : 9)\
 Larutan amilum 1%

CARA KERJA :

1. Siapkan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering. Masukkan 3 mL larutan amilum 1% ke
dalam tiap tabung reaksi
2. Siapkan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering. Pada tabung pertama masukkan 0,5 mL
larutan enzim amilase dan 3 tetes aseton, tabung kedua masukkan 0,5 mL larutan enzim
amilase dan 3 tetes AgNO3 2%, tabung ketiga masukkan 0,5 mL larutan enzim amilase
dan 3 tetes Pb-asetat 2%, dan tabung ke empat 0,5 mL larutan enzim amilase dan 3
tetes NaCl 0,9%
3. Pasangkan tiap satu tabung amilum dengan satu tabung larutan enzim

28
4. Tuangkanlah larutan amilum ke dalam tabung yang berisi enzim, campur dengan baik.
Bersamaan dengan bercampurnya antara enzim dan amilum segera catat waktunya
5. Setiap 1 menit, ambillah 5 tetes campuran enzim dengan amilum kemudian tambahkan
larutan Lugol 1% sebanyak 2 tetes
6. Amati warna yang terbentuk, bila terbentuk warna biru atau ungu berarti hasil (+) selain
warna tersebut berarti hasil (-)
7. Lakukan percobaan nomor 5 sampai didapatkan hasil (-) atau sampai campuran habis
8. Catat waktu yang diperlukan sampai menghasilkan hasil (-) pada tiap campuran

29
 UJI PENGARUH KONSENTRASI SUBSTRAT TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

TUJUAN :

Untuk membuktikan bahwa kecepatan reaksi enzimatik sampai batas tertentu

dipengaruhi oleh konsentrasi substrat

PRINSIP :

Pada konsentrasi enzim tertentu, penambahan substrat sampai konsentrasi tertentu

akan meningkatkan kecepatan reaksi hingga mencapai kecepatan maksimum. Penambahan
substrat setelah konsentrasi tersebut tidak akan meningkatkan kecepatan reaksi, sebab telah
melampaui titik jenuh enzim.

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Rak tabung
 Beaker glass
 Gelas ukur
 Pipet tetes
 Pencatat waktu/stopwatch

BAHAN :

 Substrat (amilum 1%)

 Enzim (saliva yang diencerkan 1 ; 9 dengan NaCl 0,9%)
 Aquadest
 Lugol (Iodium 1%)

CARA KERJA :

1. Siapkan 5 tabung reaksi yanh bersih dan kering. Masukkan 0,5 mL larutan enzim ke
dalam tiap tabung reaksi
2. Siapkan 5 tabung reaksi yang bersih dan kering. Pada tabung :
 Pertama masukkan 3 mL larutan substrat
 Kedua masukkan 2,5 mL larutan substrat dan 0,5 mL aquadest
 Ketiga masukkan 2 mL larutan substrat dan 1 mL aquadest
 Keempat masukkan 1,5 mL larutan substrat dan 1,5 mL aquadest
 Kelima masukkan 1 mL larutan substrat dan 2 mL aquadest
3. Pasangkan tiap satu tabung amilum dengan satu tabung larutan enzim

30
4. Tuangkanlah larutan amilum ke dalam tabung yang berisi enzim, campur dengan baik.
Bersamaan dengan bercampurnya antara enzim dan amilum segera catat waktunya
5. Setiap 1 menit, ambillah 5 tetes campuran enzim dengan amilum kemudian tambahkan
larutan 1% sebanyak 2 tetes
6. Amati warna yang terbentuk, bila terbentuk warna biru atau ungu berarti hasil (+) selain
warna tersebut berarti hasil (-)
7. Lakukan percobaan nomor 5 sampai didapatkan hasil (-) atau sampai campuran habis
8. Catat waktu yang diperlukan sampai menghasilkan hasil (-) pada tiap-tiap campuran

31
 UJI PENGARUH KONSENTRASI ENZIM TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

TUJUAN :

Untuk membuktikan bahwa kecepatan reaksi enzimatik berbanding lurus dengan

konsentrasi enzim

PRINSIP :

Pada konsentrasi substrat tertentu, penambahan enzim dengan konsentrasi bertingkat

akan meningkatkan terbentuknya jumlah kompleks E-S, sehingga jumlah P yang terbentuk juga
akan meningkat

ALAT-ALAT :

 Tabung reaksi
 Rak tabung
 Beaker glass
 Gelas ukur
 Pipet tetes
 Pencatat waktu/stopwatch

BAHAN :

 Substrat (amilum 1%)

 Enzim (saliva yang diencerkan 1 ; 9 dengan NaCl 0,9%)
 Aquadest

CARA KERJA :

1. Siapkan 5 tabung reaksi yang bersih dan kering. Masukkan 3 mL larutan amilum
(substrat) 1% ke dalam tiap tabung reaksi
2. Siapkan 5 tabung reaksi yang bersih dan kering. Pada tabung :
 Pertama masukkan 0,5 mL larutan enzim
 Kedua masukkan 0,4 mL larutan enzim amilase dan 0,1 mL NaCl 0,9%
 Ketiga masukkan 0,3 mL larutan enzim amilase dan 0,2 mL NaCl 0,9%
 Keempat masukkan 0,2 mL larutan enzim amilase dan 0,3 mL NaCl 0,9%
 Kelima masukkan 0,1 mL larutan enzim amilase dan 0,4 mL NaCl 0,9%
3. Pasangkan tiap satu tabung amilum dengan satu tabung larutan enzim
4. Tuangkanlah larutan amilum ke dalam tabung yang berisi enzim, campur dengan baik.
Bersamaan dengan bercampurnya antara enzim dan amilum segera catat waktunya

32
5. Setiap 1menit, ambillah 5 tetes campuran enzim dengan amilum kemudian tambahkan
larutan Lugol 1% sebanyak 2 tetes
6. Amati warna yang terbentuk, bila terbentuk warna biru atau ungu maka hasil (+) selain
warna tersebut berarti hasil (-)
7. Lakukan percobaan nomor 5 sampai didapatkan hasil (-) atau sampai campuran habis
8. Catat waktu yang diperlukan sampai menghasilkan hasil (-) pada tiap-tiap campuran

33