Marcelo Andrade. Docente: Raúl Sendra. Medicina Veterinaria-Inmunología. Fecha de exposición: 06/11/17. INTRODUCCIÓN. Para que el resultado final de una prueba analítica de laboratorio sea correcta, la calidad de la prueba depende del cumplimiento en cadena de una buena práctica, que comienza desde el momento de la preparación del paciente para la obtención de la muestra, posteriormente con la extracción de la misma ( utilizando distintas técnicas dependiendo de lo que se quiera obtener) y finalmente termina con una interpretación de los resultados obtenidos. OBTENCIÓN DE MUESTRAS. Sangre Examen directo para detectar virus, bacterias y protozoos. Pruebas serológicas, tiene que ser muestra coagulada. Plasma sanguíneo. MANEJO DE MUESTRAS. Cantidad de muestra tomada y conservante utilizado Las muestras deben ser tomadas en cantidad suficiente y en las condiciones especiales que cada una requiere. Identificación de muestras Las muestras deben estar perfectamente identificadas, tanto las muestras que sean para análisis interno en las dependencias del centro como las que sean para análisis en laboratorios externos. Identificación de muestras que van a ser analizadas en el propio Centro Veterinario • Las muestras deben ser identificadas en el momento de su extracción para minimizar los errores. • En el bote o soporte de la muestra debe incorporarse como mínimo el nombre de paciente y el número de historia clínica. • El personal que recepciona la muestra debe incorporar estos datos y completarlos en unas fichas de registro que debe ser accesibles desde el laboratorio, donde figurarán todos los análisis, los ya realizados y los pendientes. Identificación de la muestra que va a ser enviada a un laboratorio externo • La muestra deberá ir acompañada de un volante de petición del que quedará copia o registro en el Centro Veterinario. El volante de petición deberá incorporar los datos del paciente, de la clínica, del veterinario responsable, fecha, breve historia clínica y determinación que se solicita. Remisión de muestras de citología. Las muestras deben enviarse en contenedores adecuados. Las extensiones se enviarán fijadas y colocadas en porta-preparaciones de plástico. Se pueden proteger envolviéndolas con varias capas de papel absorbente. DESCRIPCIÓN DE PRUEBAS DE LABORATORIO. Test de ELISA es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo.
(Abbas et al, 2012)
PCR (REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA) El proceso de detección de un agente infeccioso por amplificación genética se desarrolla de manera habitual en tres etapas. La primera consiste en la extracción y purificación de los ácidos nucleicos del microorganismo de la muestra biológica, seguido de la amplificación de un segmento seleccionado del genoma del microorganismo mediante reacción en cadena de la polimerasa, es decir, la PCR propiamente dicha. Finalmente, en la tercera etapa se lleva a cabo la detección de los fragmentos amplificados en la PCR (amplicones) por electroforesis en gel de agarosa y tinción con bromuro de etidio, o mediante hibridación con sondas específicas. PRUEBA DE AGLUTINACIÓN En las pruebas de aglutinación (p. ej., aglutinación con látex, coagregación), una partícula (cuenta de látex o bacteria) se acopla con un reactivo antigénico o humoral. La partícula compleja formada se mezcla con la muestra (como LCR o suero); si el anticuerpo o el antígeno buscados están presentes en la muestra, producirán el entrecruzamiento de las partículas, lo que se observa como una aglutinación. FIJACIÓN DEL COMPLEMENTO Esta prueba mide la cantidad de anticuerpos consumidores de complemento (o que lo fijan) de una muestra de suero o LCR. Se usa para el diagnóstico de algunas infecciones virales o micóticas. La muestra se incuba con cantidades conocidas de complemento y del antígeno que es el blanco del anticuerpo en estudio. El grado de fijación del complemento indica la cantidad relativa de anticuerpos en la muestra. La prueba permite medir los títulos de anticuerpos IgM e IgG, o puede modificarse para detectar determinados antígenos. Es precisa, pero tiene aplicaciones limitadas, es laboriosa y requiere muchos controles. PRUEBA DE PRECIPITACIÓN Estas pruebas miden la cantidad de antígeno o de anticuerpo en los líquidos corporales a partir del grado de precipitación visible de complejos de antígeno-anticuerpo dentro de un gel de agarosa o en solución. En general, una muestra de sangre se mezcla con un antígeno de prueba para detectar los anticuerpos del paciente, en general cuando se sospecha una infección micótica o una meningitis piógena. Para obtener un resultado positivo, se requiere una gran cantidad de anticuerpo o de antígeno, y por ello la sensibilidad es baja. PRUEBA DE INMUNOTRANSFERENCIA DE WESTERN Esta prueba detecta anticuerpos contra el microorganismo en una muestra del paciente (que puede ser suero u otro líquido corporal) mediante su reacción con antígenos blanco (p. ej., componentes virales) que se hallan inmovilizados en una membrana mediante electrotransferencia. La inmunotransferencia de Western suele tener una buena sensibilidad, aunque menor a la de las pruebas de cribado como el ELISA, y generalmente su especificidad es elevada. INMUNOFLUORESCENCIA Se emplean anticuerpos para identificar la distribución anatómica de un antígeno en el interior de un tejido o de los compartimientos celulares . Para ello se incuba el tejido o la célula con un anticuerpo marcado con un flurocromo o una enzima, y la posición que ocupe el marcado, determinada con el microscopio adecuado sirve para deducir la ubicación del antígeno. KITS DISPONIBLES EN CHILE PARA MEDICINA VETERINARIA. Animales menores: 1.Para Parvovirus canino: Detección de antígenos específicos de Parvovirus canino en 10 minutos, tomando una muestra de heces con una tórula que luego se introduce en un tubo hasta que las partículas se ubiquen en fondo, extraer con una pipeta y colocar en dispositivo de reacción. Resultados: Dos líneas rojas es positivo, una sola línea es negativo. 2. Para distemper canino: Detección de antígenos específicos de Virus Distemper canino en 10 minutos, tomando una muestra de secreción ocular o nasal con una tórula, realizando el mismo proceso anterior. 3.Para Giardia canina: Detección de antígenos específicos de Giardia lamblia (protozoo) en 10 minutos, tomando una muestra de heces con una tórula, realizando el mismo proceso anterior. 4.Para Brucella canina: Detección de antígenos específicos de Brucella (Bacteria) en 10 minutos, tomando una muestra de suero, plasma o sangre entera con una pipeta de la cantidad antes extraída, colocándola en el dispositivo de reacción para luego aplicarle una sustancia buffer. Resultados: Dos líneas rojas es positivo, una sola línea es negativo. 5.Para Leucemia + Inmunodeficiencia felinas: Detección de antígeno p27 de virus de Leucemia y anticuerpo p24 de Inmunodeficiencia en 10 minutos, tomando una muestra de suero, plasma o sangre entera, realizando el mismo procedimiento anterior solo que en dos espacios diferentes en el dispositivo de reacción. Animales mayores: Enfermedades presentes en Chile (SAG, 2015) Bovinos: Brucelosis (Brucella abortus) ( FC, ELISA ) La brucelosis del ganado es una enfermedad causada por Brucella abortus (B. abortus), una bacteria intracelular facultativa. El modo más importante de transmisión de la enfermedad es la ingestión de organismos B. abortus que pueden estar presentes en tejidos de fetos abortados, membranas fetales y fluidos uterinos. La característica clínica principal de la enfermedad es el aborto. Diarrea viral bovina (PCR, ELISA) El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) deprime el sistema inmunológico vacuno, tornando al animal susceptible a muchas otras infecciones. Leucosis bovina enzoótica (ELISA) El virus de la leucemia bovina (BLV) es un retrovirus que puede causar linfosarcoma en el ganado. El virus reside en los linfocitos de la sangre donde los anticuerpos circulantes son incapaces de neutralizarlo. Rinotraqueítis infecciosa bovina / Vulvovaginitis pustular infecciosa (ELISA) La rinotraqueítis infecciosa bovina (IBR) es una enfermedad infecciosa altamente contagiosa causada por el herpesvirus-1 bovino (BHV-1). Además de causar enfermedad respiratoria, este virus puede causar conjuntivitis, abortos, encefalitis e infecciones sistémicas generalizadas. Tuberculosis bovina (ELISA) La tuberculosis bovina causada por el Mycobacterium bovis (M. bovis) Équidos: Enfermedades presentes en Chile Arteritis viral equina en burros silvestres (PCR) La Arteritis Viral Equina (AVE) es una enfermedad respiratoria que se transmite mediante la inhalación de partículas provenientes del exudado nasal de equinos infectados. La enfermedad también puede transmitirse en forma venérea durante el apareamiento, ya sea monta natural o mediante la inseminación artificial. Gripe o influenza equina (ELISA) La influenza A es una zoonosis de significativa importancia debido a su prevalencia mundial, numerosos subtipos y naturaleza reordenante. Presenta una amplia gama de perfiles patógenos, desde la casi ausencia de signos clínicos hasta la alta mortalidad, dependiendo de la especie afectada y del subtipo involucrado. Piroplasmosis equina (ELISA) La piroplasmosis equina es una infección en los caballos producida por protozoos y transmitida por garrapatas. Es posible que sea difícil diagnosticar la piroplasmosis, ya que puede causar signos clínicos variables y no específicos. Los síntomas de esta enfermedad varían desde fiebre aguda, inapetencia y malestar hasta anemia, ictericia, muerte súbita, o pérdida de peso crónica y poca tolerancia al ejercicio. Ovinos/Caprinos: Artritis/encefalitis caprina (ELISA) Es una enfermedad viral en cabras causada por el virus Artritis y Encefalitis Caprina (AEC), de importancia económica. El virus AEC es un lentivirus y uno de los mas severos lentivirus de la familia Retroviridae. Infecta a sus huéspedes de por vida. Aunque la mayoría de las infecciones son subclínicas, algunos animales desarrollan síndromes progresivos intratables tales como poliartritis en animales adultos y encefalomielitis en cabritos. Epididimitis ovina (Brucella ovis) (FC) La brucelosis ovina es causada por una bacteria llamada Brucella ovis (B. ovis). Todas las razas ovinas son susceptibles a la brucelosis, la cual puede causar pérdidas económicas considerables debido a un incremento en el sacrificio de carneros, menores porcentajes de señalada de corderos y períodos de parición extendidos. La enfermedad produce inflamación del epidídimo en carneros y de la placenta en ovejas preñadas. La infección de ovejas preñadas conduce a abortos y muerte de corderos recién nacidos debido a cambios microscópicos y macroscópicos a nivel de la placenta y el feto. Otros: Lagomorfos: Mixomatosis (PCR) Enfermedad infecciosa, causada por un virus, que padecen los conejos y que se caracteriza por la aparición de tumefacciones en las mucosas y en la piel.