UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE MEDICINA
CÁTEDRA DE FARMACOLOGÍA
EXTENSIÓN TÁCHIRA

PRACTICA 2: DISTRIBUCIÓN DE MEDICAMENTO EN EL ORGANISMO

OBJETIVOS:

Se pretende con ésta práctica, que el estudiante:

1. Observe como influyen las características físico-químicas de una droga

(estructura química, pKa, grado de ionización, solubilidad) en la
distribución en los diferentes tejidos.

2. Observe la distribución de una droga liposoluble (Sulfonamida) en el

organismo utilizando dos vías diferentes de administración.

3. Analice la selectividad de la droga por ciertos tejidos y las barreras

especiales.

4. Se familiarice con los cálculos de dosis, en el animal de

experimentación.

MATERIAL BIOLÓGICO:

Ratas Adultas (2 por salón).

DROGAS:

Sulfonamida (Sulfametazina: Solución de 50 mg/ml).

REACTIVOS:

Solución 0.1. de hidróxido de sodio.

Solución de ácido Tricloroácetico al 5%
Solución de Nitrito de Sodio al 0.1%
Solución de Sulfamato de amonio al 0.5%
Solución de N-naftil- etilendiamina al 0.1%
EQUIPO ESPECIAL:

Colorímetro y accesorios (Spectronic 20)

Homogenizador de tejidos
4 tubos de ensayo
2 embudos
3 pipetas de 1 ml.
1 pipeta de 5 ml.
2 jaulas metabólicas
1 sonda para administración gástrica
1 mortero
1 báscula
1 jeringa y agujas
1 tijera
1 Papel de filtro.

MARCHA DEL EXPERIMENTO:

Media hora antes del principio de la práctica, se administrará por vía

oral a una rata 0.2 g/Kg. de Sulfonamida. Al comenzar la sesión de
laboratorio se anestesiará el animal con éter etílico colocando dentro de una
campana de vidrio; luego se procederá a abrir el tórax y se obtendrá
rápidamente la sangre de la vena cava inferior. De la sangre obtenida, 2 ml
se colocarán en un tubo de ensayo para realizar el experimento. Se tomará
muestra de orina, aprovechando la recogida en la jaula metabólica. Se
tomarán porciones de los siguientes órganos: intestino delgado, hígado,
corazón, riñón, cerebro y músculo esquelético.

Media hora antes del comienzo de la práctica se administrará por vía

intramuscular a una rata, 0.2 g/Kg de Sulfonamida. Al comenzar la sesión de
laboratorio se tomarán muestras como en el caso anterior, teniendo el
ciudadano de tomar el fragmento de músculo esquelético de la pata contraria
a la que se le realizó la inyección.

DISTRIBUCIÓN DE LAS MUESTRAS:

Las muestras de sangre, orina, riñón, corazón, cerebro, hígado, intestino y

músculo esquelético obtenidas de cada rata se distribuirán respectivamente
en cada una de las 8 mesas para determinar la concentración de
Sulfonamida, según el método de Bratton y Marshall, como se indica a
continuación.
SANGRE:

Se hemolizará 2 ml. De sangre en 14 ml. De agua, se dejará la muestra en

reposo por 10 minutos. Agregar después 5ml.de Acido Tricloroacético, para
precipitar las proteínas, mezclar y filtrar. Se tomarán 5 ml. De filtrado para
desarrollar color.

ORINA:

Se diluirá 0.1 ml. De orina con 8 ml. De agua, mezclar y después agregar 1.5
ml. De ácido Tricloroacético para luego filtrar. Se tomarán 5 ml. De esta
solución para desarrollar color.

TEJIDOS SOLIDOS:

Se tomará un trozo de músculo, intestino e hígado de aproximadamente 2.5

grs. Y se tomarán ambos riñones, corazón y cerebro. Estos tejidos se
desplazarán con tijeras en un mortero y se terminará de triturar agregándole
2 ml. De NaOH. Hecho esto, se completará el volumen a 10 ml. Con NaOH.
Se someterá la muestra a un proceso de homogenización por 10 minutos y
luego se centrifugará a 2500 RPM durante 10 minutos. Del líquido
sobrenadante se tomarán 2 ml., se le agregarán 6 ml. De H2O, mezclar y
luego agregar 2 ml. De ácido Tricloroacético. Agitar fuertemente y filtrar,
para desarrollar color.

DESARROLLO DEL COLOR:

A 5 ml. De filtrado libre de proteínas de cualquiera de las muestras se

agregará 0.5 ml. De solución de nitrito de sodio; después de 3 minutos de
reposo se añadirá 0.5 de sulfamato de amonio y se mezcla. Después de otros
2 minutos de reposo se añadirá 0.5 ml. De N-naftil-etilendianimina y se
mezcla.

Se leerá la intensidad del color a una longitud de onda de 545 milimicras,

comparando con un “Blanco” compuesto de 4ml. De agua destilada más 1 ml.
De ácido Tricloroacético, al cual se le desarrollará la reacción de color
(colorímetro Spectronic 20). Al final de la tesis está incluida la tabla para la
conversión de la lectura a mgs%.
FUNDAMENTO DE LA REACCION:

La Sulfonamida o cualquiera de sus derivados que posean un grupo Amino

libre unido al núcleo bencénico, al ser tratada con nitrato de sodio en
solución ácida, forma un compuesto diazoíco se acopla con el clorhidrato de
N (1 Naftil) etilendiamina para formar un compuesto de color rojo-púrpura
cuya intensidad es proporcional a la concentración de sulfonamida.

TABULACIONDE RESULTADOS:

Para cada mesa:

TEJIDO LECTURA COLORIMETRICA CONCENTRACIÓN SULFONAMIDA

mg% meg/ml mcg/g.

I.M.

Para todo el grupo:

CONCENTRACIONES MEDIDAS DE LA SULFONAMIDA

VIAL ORAL VIA I.M.
(Mcg/ml) ó (mcg/g) (mcg/ml) ó (mcg/g).
SANGRE
ORINA
HIGADO
RIÑON
CORAZON
INTESTINO
MÚSCULO
CEREBRO
 TABLA DE CONVERSIÓN PARA SULFONAMIDAS EN EL
COLORIMETRO SPECTRONIC 20

T 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 10.9 10.5 10.1 9.8 9.4 9.1 8.8

20 8.6 8.3 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6

30 6.4 6.2 6.1 5.9 5.7 5.6 5.4 5.3 5.2 5.0

40 4.9 4.7 4.6 4.5 4.4 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8

50 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 3.1 3.0 2.9 2.8

60 2.7 2.6 2.5 2.5 2.4 2.3 2.2 2.1 2.0 2.0

70 1.9 1.8 1.7 1.7 1.6 1.5 1.4 1.4 1.3 1.2

80 1.2 1.1 1.0 1.0 0.9 0.8 0.8 0.7 0.7 0.6

90 0.5 0.5 0.4

UNIDADES DE SULFONAMIDA en mgs X100

LONGITUD DE ONDA 545 mu

Ejm de conversión: La lectura en la escala de colorímetro fue de 47. Se

refiere entonces al 40 de la primera columna de izquierda y luego al 7 en la
línea superior, donde se corte las dos líneas corresponde a la concentración
(4.0) en mgs% (miligramos para 100 ml o 100 gr.
CALCULOS: