LABORATORIO MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRÁCTICA DE LABORATORIO
Recuento de esporas de Clostridium sulfito reductor

1. Definición
Clostridium es un bacilo Gram positivo, esporulado que tiene la capacidad de reducir el ion sulfito a
sulfuro en presencia de sales de hierro dando colonias negras.
Este análisis es considerado como el recuento indicador más importante de los microorganismos
anaerobios espóroformadores.
Se suelen usar para apreciar la calidad higiénica del agua y productos animales o de origen animal,
por su capacidad de producir esporas resistentes puede sobrevivir en bajo número en algunos
alimentos tratados térmicamente, y al ser almacenados inadecuadamente o recalentados, se
pueden incrementar y producir un brote de intoxicación.

2. Materiales

- Pipetas estériles de 1 ml
- Tubos de ensayo estériles
- Portaobjetos
3. Medios de cultivo

Agua peptonada
Agar SPS
4. Reactivos

- Peróxido de hidrogeno
- Colorantes de Gram
5. Equipos

- Incubadora de 35 ± 2 °C
- Balanza
- Contador de colonias
- Pipeteador
- Campana de anaerobiosis
6. Procedimiento

- Pesar 10 gramos de alimento en 90 ml de la solución diluyente escogida.

- Realizar una dilución a partir de la primera dilución realizada.

Recuento de esporas de Clostridium

- Distribuir 1 ml de cada una de las diluciones realizadas en tubos estériles
- Calentar los tubos a 80ºC por 15 minutos. Enfriar rápidamente en agua corriente o baño de
hielo.
- Adicionar 10 ml de agar SPS. Dejar solidificar.
- Adicionar una segunda capa de medio y dejar solidificar nuevamente
- Incubar a 35ºC ± 2ºC en anaerobiosis
7. RECUENTO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS
LABORATORIO MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRÁCTICA DE LABORATORIO
Recuento de esporas de Clostridium sulfito reductor

Contar las colonias, retener las cajas que tengan un máximo de 300 colonias si es posible en
dos diluciones sucesivas.
Calcular el número de microorganismos por mililitro o gramo con la expresión.

N= ∑C
v (n1 + 0.1 n2 ) x d

Donde:
∑C: es la suma de colonias contadas en todas las cajas retenidas
v: Volumen servido en la caja
n1: es el número de cajas retenidas en la primera dilución
n2: es el número de cajas retenidas en la segunda dilución
d: es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución

Se redondea el resultado obtenido a dos cifras significativas

Si no hay colonias en las cajas debe reportarse como < 10 UFC/ ml o g según corresponda