AUTORES:
Jaime Cedeño (Proyecto A – Microbiología A)
Sin embargo, debido a la presencia del hongo Botrytis cinerea en las plantaciones de rosa,
existen grandes pérdidas en los cultivos y por lo tanto pérdidas económicas, razón por la
cual existe la necesidad de crear estrategias eficaces para el control del hongo. Dada la
problemática de ciertos agentes patógenos como la podredumbre gris causada por
Botrytis cinérea, que se encontró en flores de los invernaderos del IASA I, se planteó un
estudio comparativo entre dos fungicidas y así establecer un control químico eficaz para
este hongo. El objetivo del presente trabajo es evaluar el efecto de los fungicidas, Novak
(Thiofanato metil) y Score en el tratamiento de la botrytis en rosas. (Agrytec, 2010).
2.2 Planteamiento del Problema
Los problemas a combatir en el cultivo intensivo de la rosa son las enfermedades
fungosas, en especial post cosecha; como es el “moho gris” o “botrytis” causado por
Botrytis cinerea.
La botrytis quizá sea la enfermedad más común y más ampliamente distribuida de las
plantas cultivadas en los invernaderos. Esta enfermedad aparece principalmente en forma
de tizones de inflorescencias, también como pudriciones del tallo, ahogamiento de las
plántulas, manchas foliares y como pudriciones de las raíces. Bajo condiciones húmedas
el hongo produce una capa fructífera conspicua de moho gris sobre los tejidos afectados.
En este momento, es uno de los problemas más graves de los cultivos protegidos y al aire
libre del litoral mediterráneo (López, 2012).
Botrytis cinerea precisa de bases nutritivas formadas por hojas senescentes, flores no
fecundadas, heridas o muñones de hojas resultantes de las podas, es decir materia orgánica
muerta, para poder iniciar la invasión de las partes vivas de la planta (Infoagro systems,
2006).
2.2.1 El Problema
El problema de la botrytis es afectar a las empresas florícolas y a los pequeños productores
alrededor de todo el país desde hace ya muchos años, sin embargo, el control
de Botrytis en los terrenos de cultivo mediante aspersiones químicas aún no ha tenido el
éxito deseado, especialmente en los climas húmedos y fríos. Para el control de la
enfermedad, se recomiendan las aspersiones o espolvoreaciones con captán, Novak
(Thiofanato metil), Score, entre otros fungicidas que son los que muestran mayor grado
de efectividad al momento de contrarrestar el hongo. (López, 2012)
Las primeras rosas cultivadas eran de floración estival, hasta que posteriores trabajos de
selección y mejora realizados en oriente sobre algunas especies, fundamentalmente Rosa
gigantea y R. chinensis dieron como resultado la primera "rosa hibrida de té”, también
conocida como 'La France', de carácter refloreciente. Esta rosa fue introducida en
occidente en el año 1793 sirviendo de base a numerosos híbridos creados desde esta fecha
(Infoagro, 2007).
Clase Magnoliopsida
Super orden Rosanae
Orden Rosales
Familia Rosaceae
Sub-familia Rosoideae
Tribu Roseae
Género Rosa
Especie R. 'La France'
Tabla 1. Taxonomía y Morfología de Rosa hibrida
(Wikipedia, 2016).
Los rosales son arbustos o trepadoras (a veces colgantes) generalmente espinosos, que
alcanzan entre 2 a 5 metros de alto, en ocasiones llegan a los 20 m trepando sobre otras
plantas. Tienen tallos semi-leñosos, casi siempre erectos (a veces rastreros), algunos de
textura rugosa y escamosa, con notables formaciones epidérmicas de variadas formas,
persistentes y bien desarrolladas (Quinche, 2009). Las hojas pueden ser perennes o
caducas, pecioladas e imparipinadas con entre 5 a 9 foliolos de borde aserrado y estípulas
basales. Las flores, que surgen en inflorescencias racimosas, formando corimbos, son
generalmente aromáticas, completas y hermafroditas; regulares, con simetría radial
(actinomorfas). (Becerra, 2010)
El perianto está bien desarrollado. El cáliz es dialisépalo, de 5 piezas de color verde. Los
sépalos pueden ser simples, o a veces de forma compleja con lobulaciones laterales
estilizadas. Corola dialipétala, simétrica, formada de 5 pétalos regulares (o múltiplos de
5), a veces escotados, y de variados colores llamativos, también blancos. El androceo está
compuesto por numerosos estambres dispuestos en espiral (varios verticilos),
generalmente en número múltiplo de los pétalos es 5. El gineceo apocárpico (compuesto
por varios pistilos separados). Nectario presente, que atrae insectos para favorecer la
polinización, predominantemente entomófila. Perigina (ovario medio), numerosos
carpelos uniovulados (un primordio seminal por cada carpelo), así cada carpelo produce
un aquenio. (López, 2012)
El fruto de la flor es el escaramujo, un tipo de infrutescencia denominada cinorrodón.
Está compuesto por múltiples frutos secos pequeños (poliaquenio) separados y encerrados
en un receptáculo carnoso (hipantio) y de color rojizo vistoso cuando está maduro
(Wikipedia, 2014).
3.1.1.3 Multiplicación
La propagación se puede llevar a cabo por semillas, estacas, injertos de vareta e injertos
de yema, aunque es este último el método más empleado a nivel comercial. La
reproducción por semillas está limitada a la obtención de nuevos cultivares. El injerto de
vareta o injerto inglés, rara vez se utiliza para la producción comercial de flor de corte,
ya que también requiere demasiado tiempo. (Infoagro, 2007)
En Holanda se emplea una técnica alternativa conocida como "stenting", que consiste en
injertar lateralmente el cultivar deseado sobre una estaquilla del porta-injertos que se
enraíza mediante los métodos normales de propagación. Actualmente también es posible
la producción de rosales in vitro (Infoagro et al, 2007).
3.1.1.4 Poscosecha
En la postcosecha intervienen varios factores, en primer lugar hay que tener en cuenta
que cada variedad tiene un punto de corte distinto y por tanto el nivel de madurez del
botón y el pedúnculo va a ser decisivo para la posterior evolución de la flor, una vez
cortada.
Una vez cortadas las flores los factores que pueden actuar en su marchitez son: dificultad
de absorción y desplazamiento del agua por los vasos conductores, incapacidad del tejido
floral para retener agua y variación de la concentración osmótica intracelular.
Los tallos cortados se van colocando en bandejas o cubos con solución nutritiva,
sacándolos del invernadero tan pronto como sea posible para evitar la marchitez por
transpiración de las hojas.
Una vez que las flores se sacan del almacén, se arrancan las hojas y espinas de parte
inferior del tallo. Posteriormente los tallos se clasifican según longitudes, desechando
aquellos curvados o deformados y las flores dañadas.
La clasificación por longitud de tallo puede realizarse de forma manual o mecanizada;
actualmente existen numerosas procesadoras de rosas que realizan el calibrado. Estas
máquinas cuentan con varias seleccionadoras para los distintos largos. Su empleo permite
reducir la mano de obra.
Phylum Ascomycota
Sub-phylum Pezizomycotina
Clase Leotiomycetes
Orden Helotiales
Familia Sclerotinicaeae
Género Botryotinia
Botrytis cinerea se caracteriza por los abundantes conidios (esporas asexuales) de forma
oval en el extremo de conidióforos grises ramificados. El hongo además produce
esclerocios altamente resistentes como formas de resistencia en cultivos viejos. Pasa el
invierno en forma de esclerocio o como micelio intacto, ambas formas germinan en
primavera para producir conidióforos. Los conidios se dispersan por el viento, lluvia y
causan nuevas infecciones.
Se ha observado una considerable variabilidad genética en diferentes estirpes de Botrytis
cinerea (Wikipedia, 2014).
3.1.1.7 Botrytis (moho gris)
El moho gris (Botrytis cinerea) y sus cepas causan la necrosis de las flores, las hojas, las
yemas, los brotes, las plántulas y las frutas de las plantas. Tanto las plantas herbáceas
como las leñosas son susceptibles a esta enfermedad. Esta enfermedad no tiene
hospederos específicos. El moho gris puede infectar a cientos o miles de plantas. La
infección ocurre en condiciones de humedad. Cuanto más húmeda esté la planta, más
riesgo correrá de infectarse de moho gris. La cantidad de zonas infectadas ha aumentado
como así también la cantidad de plantas atacadas y el grado de gravedad de las infecciones
(desarrollo más rápido de la enfermedad y necrosis del tejido).
La botrytis a veces se confunde con los daños que se manifiestan cuando las plantas
envejecen, la marchitez causada por el envejecimiento debe ocurrir primero en los pétalos
externos y en los bordes o en la puntas, cuando los pétalos internos o el centro de los
pétalos desarrollan lesiones marrones primero, la causa probablemente sea el moho gris.
En las hojas delgadas como las del árbol de Judea, las lesiones son irregulares de color
marrón claro a marrón, en las hojas más carnosas como las del rododendro se ven anillos
concéntricos de distintos tonos del marrón.
Algunas plantas herbáceas perennes susceptibles son las anémonas, las aster, las
gypsophilas, las campanitas, el corazón sangrante, la sanguinaria, la campanilla de
Irlanda, el botón de oro, la caléndula, las iberis, el clavel, el crisantemo, la achicoria, la
coral baya, los geranios, el diente de león, la pipa del holandés, la dedalera, amaranto
perenne, los jacintos, los lirios, el aro manchado, el lirio de los valles, los lupinus, la cruz
de malta, el narciso, la peonía, el phlox, las dianthus, las hostas, la amapola, las prímulas,
la echinacea purpúrea, la rosa, la campanilla de invierno, el tulipán, la hierba doncella y
la violeta. (Agrytec, 2010).
3.1.1.8 Síntomas
Los síntomas varían según el tipo de planta atacada, la parte de la planta atacada y las
condiciones de crecimiento. Cuando hay mucha humedad se puede ver un entretejido fino
gris (micelio). Generalmente, en ese “tejido” se forma una estructura denominada
conidióforo que contiene esporas. Las plantas infectadas liberan las esporas de la
enfermedad en forma de nubes cuando por alguna razón se mueven. La humedad también
acelera la liberación de las esporas. La mala circulación de aire también contribuye a la
supervivencia y al desarrollo de la enfermedad. Cuando la temperatura oscila entre los 68
y 76 °F y la humedad es elevada, la enfermedad demora aproximadamente 20 horas para
comenzar a infectar. El clima cálido a muy caluroso y seco contribuye a reducir o detener
el desarrollo y la diseminación de la enfermedad (Schuster, 2014).
3.1.1.9 Fungicidas
Los fungicidas son usados extensamente en la industria, la agricultura, en el hogar y el
jardín para un número de propósitos que incluyen: para protección de las semillas de
granos durante su almacenamiento, transportación y la germinación; para la protección
de los cultivos maduros, de las fresas, los semilleros, las flores e hierbas silvestres,
durante su almacenamiento y transportación; para la eliminación de mohos que atacan las
superficies pintadas; para el control del limo en la pasta del papel ; y para la protección
de alfombras y telas en el hogar. (Quiminet, 2003).
3.1.1.10 Aplicación
Se aplican mediante rociado, pulverizado, revestimiento (ejemplo: para semillas) o por
fumigación de los locales (ejemplo: en invernaderos y almacenes) y en tratamientos de
otros materiales como madera, papel, cuero, etc. Se aplican mediante impregnación o
tinción. Otra forma de administrarse es a modo de medicamentos ingeridos o aplicados
en tratamientos de enfermedades humanas o animales (Quiminet, 2003).
3.1.1.11 Clasificación
Fungicidas protectores: se aplican antes de que lleguen las esporas de los hongos.
Por ejemplo: los compuestos de azufre y cobre.
Fungicidas erradicadores: se aplican para el tratamiento de la planta ya enferma
por hongos. Por ejemplo: compuestos de mercurio, derivados nitrogenados de
fenoles, etc.
(Quiminet, 2003).
3.1.1.12 Score
Score es un fungicida sistémico, eficaz para el control de enfermedades causadas por
hongos ascomicetos, hongos imperfectos y basidiomicetos, inhibiendo el desarrollo
miceliar tanto interno como externo, disminuyendo la germinación de las esporas o
conidias del hongo.
Se puede mezclar con la mayoría de los fungicidas, insecticidas y fertilizantes foliares
existentes en el mercado. Es incompatible con productos de reacción alcalina, para su
mejor utilización se recomienda hacer pruebas preliminares (Agroquim, 2012).
4.2 Específicos
Aislar el hongo (Botrytis cinerea) causante de botrytis en el laboratorio.
Verificar el fungicida eficiente para el control del hongo.
V Hipótesis
El empleo de Novak y Score disminuyen la incidencia de Botrytis cinérea
mejorando la productividad y la calidad de rosas.
El empleo de Novak y Score no disminuyen la incidencia de Botrytis cinérea por
lo que no mejora la productividad y calidad de rosas
VI Materiales y Métodos
6.1 Materiales
6.1.1 Fase de laboratorio
Guantes quirúrgicos
Mascarilla
Balanza analítica
Matraces
Autoclave
Refrigerador
Cajas Petri de vidrio
Asa de inoculación
Agua destilada
Mechero de Bunsen
Incubadora de laboratorio
Atomizadores
Cámara de flujo laminar
Medios de cultivo (Agar papa dextrosa)
Cinta de parafina
Tijera quirúrgica
Pinza
Microscopio
Azul de lactofenol
Porta y cubre objetos
Agua destilada
Muestra de Botrytis cinerea en hojas y flores de rosa
Alcohol antiséptico
Papel toalla
6.1.3 Reactivos
Agar papa dextrosa
Score
Novak (Thiofanato Metil)
6.2 Métodos
6.2.1 Recolección de la muestra
o Se obtuvieron las muestras de botones de las rosas más susceptibles que
presentaron síntomas o signos de la presencia de Botrytis cinerea.
o Luego las muestras vegetales fueron colocadas en fundas plásticas y transportadas
al laboratorio. El material muestreado se colocó en las cámaras húmedas durante
el tiempo necesario para propiciar esporulación del hongo. El material se incubó
a temperatura de laboratorio, después que el hongo esporuló se procedió a realizar
su aislamiento.
Bibliografía
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harzianum,y Bacillus subtilis como controladores biológicos de Sclerotium cepivorum
enel Cultivo de Cebolla paiteña (Allium cepa L.), en el sector La Esperanza,Cantón
Bolívar, Carchi – Ecuador” (tesis pregrado). UNIVERSIDAD POLITÉCNICA
ESTATAL DEL CARCHI, Ecuador.
Heussler, P. (1991). Cultivo del rosal. Universidad politécnica salesiana, Quito-Ecuador, 1991.
Quinche, G. O. (2009). Control de botrytis (botrytis cinerea) y mildiu velloso (Peronospora
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Trichoderma harziamnum Rifai", (tesis pregrado). ESCUELA SUPERIOR
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Agroquim. (2012). Korso 50. Obtenido de Agroquim.com:
http://www.agroquim.com/texto1.php?id_submenu1=17&id_menu=9
Benito, Ernesto, Arranz, M., & Eslava, A. (2000). Factores de patogenicidad de Botrytis cinerea
. Rev Iberoam Micol , 43-46.
López, M. (2012). Control Biológico de Botrytis sp. mediante levaduras filosféricas en rosas de
corte tipo exportación. Universidad Nacional de Colombia , 12-27.
Imagen 1. Desinfección de la cámara de flujo. Imagen 2. Muestra de Botrytis Cinerea para proceder
a sembrar.
Imagen 3. Sembrado en cultivo PDA. Imagen 4. Sellado del cultivo con papel parafilm.
Imagen 5.Cultivos de Botrytis Cinerea que deben ser Imagen 6. Cultivo de Botrytis Cinerea aislado.
aislados.
Imagen 7. Observación del hongo. Imagen 8. Se puede ver un esporangioforo del hongo.