Práctica N° 4 de Microbiología General: Obtención de cultivo puro

de bacterias

Fuentes López Karen; Manuel Alvarez Hernández; Heifren Villadiego Morales; Camilo Andrés
Cárdenas
MSc: Johanna Rojas

UNIVERSIDAD DE SUCRE, FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIA, PROGRAMA DE

BIOLOGIA, MICROBIOLOGÍA GENERAL.
cultivo de enriquecimiento de
RESUMEN. WINOGRADSKY Y BEIJERINCK.
La práctica para aislamiento de un cultivo
Un cultivo puro o axenico se define como
de bacterias, Sembrar o inocular es
el que contiene solo un tipo de
introducir artificialmente una porción de
microorganismos. Estos se inician a partir
muestra (inóculo) en un medio adecuado,
de colonias aisladas, de manera que todos
con el fin de iniciar un cultivo microbiano,
los individuos del mismo tengan la misma
para su desarrollo y multiplicación. Se
composición genética. Estos cultivos son
utilizaron tres métodos distintos, una vez
esenciales para estudiar las características
sembrado el medio de cultivo se incuba a
de los microorganismos y así poder
una temperatura adecuada para el
identificarlos con seguridad. Sin embargo
crecimiento, teniendo variaciones debido
cada vez que se realiza un cultivo de este
al procedimiento mal efectuado.
tipo se debe tener en cuenta que las
Palabras clave: crecimiento, aislamiento condiciones en las que estos están
de bacterias, microorganismo. creciendo no son condiciones naturales,
por consiguiente los individuos que crecen
INTRODUCCIÓN.
en cultivos puros no presentan las mismas
El conocimiento de la diversidad de los características fisiológicas que los que
microorganismos se debe a dos crecen en la naturaleza [2].
procedimientos. Algunos microorganismos
La técnica de aislamiento, fue desarrollada
han despertado nuestro interés por la
durante el siglo XIX. En un principio se
formación de colonias, agrupaciones
utilizó diluciones seriadas en medio
llamativas 0 por modificaciones en el
líquido, pero la presencia de contaminantes
medio. Muchos de estos microorganismos
(microorganismos no deseados) dificulto el
aparentes a simple vista pueden someterse
aislamiento. Posteriormente la escuela de
a un aislamiento directo. Para estos
Robert Koch. Introdujo los medios sólidos,
organismos pudieron establecerse
completamente con agar y las placas Petri
fácilmente los medios de cultivo y las
para bacterias, permitiendo así la
condiciones de crecimiento que
separación de física de las colonias sobre la
permitiesen su desarrollo. No obstante,
superficie del medio de cultivo o en el
muchos tipos fisiológicos distintos de
interior del mismo.
microorganismos pudieron investigarse
solo cuando se desarrolló la técnica del

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Los objetivos a seguir son los siguientes: 1.
Obtención de colonias de bacterias en
cultivo puro mediante tres técnicas de
sembrado. 2. Entrenamiento a los
estudiantes en técnicas de trabajo aséptico.
MATERIALES Y MÉTODOS Técnica por siembra masiva.

1. Placas (cajas de Petri) con colonias de

microorganismos.
2. Cajas de agar nutritivo (AN).
3. Tubos con medio inclinado (en cuna)
de AN.
4. Asas bacteriológicas. Resultados y Discusión

5. Papel absorbente.
6. Guantes.
7. Gradilla.
8. Incubadora.

1. Desinfección del área en donde se

trabajó, para asegurar un lugar
completamente limpio y así proceder a
manipular los instrumentos.

2. Las cajas de Petri se marcaron con la Ilustración 1. Técnica de siembra por

técnica aplicada y nombre de los grupos. isotopo.

Se llevara a cabo tres métodos de siembra:

Técnica por estría. El crecimiento de las poblaciones
bacterianas en un sistema de cultivo
cerrado, está limitado por el agotamiento
de los nutrientes o bien por la acumulación
de productos tóxicos del metabolismo. En
el laboratorio para medir el crecimiento de
dicha población bacteriana se debe contar
con un medio de cultivo apto para el
Siembra con isotopo.
desarrollo de las mismas, este medio es una
mezcla equilibrada de nutrientes que
permite dicho crecimiento.

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Este cultivo debe contener todos los
nutrientes necesarios en cantidades
apropiadas a los requerimientos del
microorganismo y en condiciones de pH,
presión osmótica, oxígeno disuelto, etc.,
adecuado para el crecimiento. Aunque los
diferentes tipos de microorganismos
presentan diferencias fisiológicas y
requerimientos nutricionales distintos, la
composición química de las células es
constante en todo el mundo vivo [5].
Ilustración 2. Se sembró el medio por la
técnica estriada y agotamiento de la
muestra, siguiendo el patrón marcado con
anterioridad en forma de T, pasando sin
levantar el asa de un cuadro a otro, a, b y
por ultimo c.
Con ayuda de un asa se sembró una
suspensión bacteriana sobre la superficie
del agar. Las estrías sucesivas iban
perdiendo densidad celular. Las colonias
aisladas situadas al final proceden muy
probablemente de una sola bacteria.
Identificación de pocas colonias debido a
mal procedimiento de la técnica.
Ilustración 3.tecnica de Siembra masiva,
no se puede identificar correctamente
debido a mal arrastre del asa
bacteriológica.
Para todas las muestras se observó un
crecimiento positivo de los
microorganismos pero irregular debido al
momento de realizar la práctica.
Una de las características de las colonias
observadas es que presentan una forma
redondeada y una elevación en el medio.
Comparando las muestras con los otros
grupos de trabajo se puede evidenciar que
la técnica a mejor utilizar es la de la estría
por agotamiento pudiendo identificar con
mayor exactitud muestras puras de un
crecimiento (imagen de anexo).
CONCLUSIÓN
Se logró separar colonias con la técnica
de estrías, aunque este experimento
presento un error ya que las bacterias no
crecieron en el medio con agar debido a
que el momento de sembrar no se tomó
mucha muestra teniendo resultados poco
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favorables, como se puede observar en las
ilustraciones 2 y 3.
Se logró observar colonias individuales c
on asas a partir del inóculo de una mezcla
de bacterias.
La morfología colonial, es una
característica indispensable a tener en
cuenta en el aislamiento primario de una
bacteria y, en la cual se debe considerar el
borde y la elevación de la misma.
Adicionalmente, es importante apreciar la
consistencia y textura de la masa celular,
pues también son características
distintivas.
Un cultivo puro o axenico se define como
el que contiene solo un tipo de
microorganismos. Estos se inician a partir
de colonias aisladas, de manera que todos
los individuos del mismo tengan la misma
composición genética.
CUESTIONARIO.
USTED TIENE UNCULTIVO
LIQUIDO MIXTO Y DESEA OBTENER
CULTIVO PURO ¿COMO
PROCEDERIA?
Un cultivo puro es aquel en el que todos
los microorganismos provienen de una sola
célula. La obtención de un cultivo puro,
a partir de una población mixta, se lleva a
cabo en dos etapas: 1. La muestra debe
diseminarse de manera tal que los
diferentes microorganismos queden
lo suficientemente separados sobre
la superficie de un medio de cultivo sólido,
de manera que luego de la incubación ellos
formen colonias visibles aisladas. Este
proceso se conoce como aislamiento. En
esta placa tendremos diferentes tipos de
colonias correspondientes a los diferentes
microorganismos presentes en la población
original. Para garantizar la pureza del
cultivo obtenido, es conveniente, a partir
de cada tipo de colonia aislada, repetir
el proceso de aislamiento antes descrito. Se
considerara que se ha obtenido un cultivo
puro, cuando al realizar este proceso, todas
las colonias obtenidas presenten las
mismas características [3].
¿QUE ES UNA COLONIA DE
BACTERIAS?
Es una agrupación de bacterias formada a
partir de la reproducción de una Unidad
Formadora de Colonia sobre un medio
solido; aunque varía de tamaño
generalmente es visible a simple vista. Las
colonias bacterianas tienen una medida,
forma, textura y en algunos casos color
característicos, que aunque puede variar de
acuerdo al medio en que se encuentren, es
constante bajo condiciones controladas y
depende de la especie bacteriana que la
forme [4]
¿A QUE ES LE DENOMINA CEPA EN
MICROBIOLOGIA?
La unidad taxonómica de la Microbiología
es el CLON o CEPA, se denomina así a una
población de células genéticamente
idénticas derivadas de la división sucesiva
de una sola célula. Un grupo de cepas
que tiene la mayoría o todas
las características en común
será clasificado como una ESPECIE, y
las especies relacionadas se clasifican en
el mismo GÉNERO [5].
¿QUE ES UNA CEPA PURA? Y
LAS INSTITUCIONES QUE SE
ENCARGAN DE VENDERLAS.
“De Pura Cepa” contiene todos los
elementos iniciales que definen lo que está
en cuestión. Una Cepa es un origen, por eso
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en la biología la clonan para su estudio, por
eso es tan importante, porque siempre la
BIBLIOGRAFÍA
cepa será la que retendrá la información de
origen de un elemento existente en la tierra.  "Sherris Medical Microbiology";
K. J. Ryan y C. G. Ray; 2004
MORFOLOGICAMENTE,¿QUE
TIPOS DECOLONIAS  [2] Clavell, L.; Pedrique de
BACTERIANAS EXISTEN? Aulacio, M. 1992, Microbiologia.
Manual de Metodos Generales.
La morfología de una colonia viene dada
Segunda edicion. Facultad de
por su borde y forma de elevarse sobre el
Farmacia. Universidad Central de
medio de cultivo. El borde puede ser liso
Venezuela.
(redondeado u ovalado) o irregular
(aserrado, lobulado o especulado). Si  "Proceedings of the U. S. Army
pudiésemos hacer un corte en un plano Chemical Corps"; Detection,
perpendicular a la base de la colonia Elimination, and Prevention of
podríamos encontrar las siguientes Contamination of Cell Cultures
posibilidades: semiesférica o convexa - Pleuropneumonialike Organisms;
plana o en disco -acuminada -cerebro de - Henry J. Hearn; mayo de 1959
plana con bordes elevados -plana con
 Forbes BA, Sahm DF, Weissfeld
centro elevado. f.
A.S. editors. Bailey & Scott's.
QUEINFORMACIÓN PROPORCIONA Diagnostic Microbiology. 11th. ed.
N EL DESARROLLO DE BACTERIAS St.Louis, Missouri, Mosby. 2002.
EN MEDIOS LIQUIDOS
 [3].http://www.ucv.ve/fileadmin/u
Y SEMISOLIDOS.
ser_upload/facultad_farmacia/cate
En los medios líquidos las draMicro/10_Obtenci%C3%B3n_
sustancias nutritivas se encuentran de_cultivos_puros. pdf.
disueltas. Los medios semi sólidos suelen (RECUPERADO 28/09/16)
consistir en una base de agar, polímero de
 [5].https://microdonto.files.wordpr
origen vegetal que se mantiene en fase
liquida a altas temperaturas y que forma ess.com/2009/03/morfologia-de-
un gel al enfriarse, que mantiene una las-colonias bacterianas.pdf.
alta humedad y contiene los (RECUPERADO 28/09/16)
elementos nutricionales necesarios.
El cultivo sobre medios semisólidos
permite disponer fácilmente de las
colonias bacterianas. Por otro lado, en
medios líquidos, el crecimiento suele ser
mayor porque la disponibilidad de
nutrientes también es mayor. El uso de uno
u otro tipo de medios depende del tipo de
muestra y del patógeno que se busca [11].

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 Anexo.

Ilustración de anexo. Técnica en estría y

agotamiento de la muestra, siguiendo el
patrón marcado con anterioridad en forma
de T, pasando sin levantar el asa de un
cuadro a otro, a, b y por ultimo c. grupo
de laboratorio 1.

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