Polimorfismos del receptor de la vitamina D en trombocitopenos Púrpura

inmunes
Sule Yesil, 1 Hikmet Gulsah Tanyildiz, 1 Sibel Akpinar Tekgunduz, 1 Sule Toprak, 1 Ali Fettah, 1 Asiye Ugras
Dikmen2 y
Gurses Sahin1
Departamento de Oncología Pediátrica y Hematología, Dr. Sami Ulus Maternidad y Salud Infantil y
Enfermedades
Hospital de Capacitación e Investigación, y 2
Departamento de Salud Pública, Facultad de Medicina, Universidad de Gazi, Ankara, Turquía

Resumen Antecedentes: Los polimorfismos del receptor de la vitamina D (VDR) se han estudiado en los
trastornos mediados por el sistema inmunológico, pero no pero en la púrpura trombocitopénica inmune (ITP).
Hemos investigado si VDR variantes se asociaron con ITP en niños.
Métodos: El estudio incluyó 44 niños con un diagnóstico de ITP y 100 controles sanos. Cinco polimorfismos
VDR (Cdx-2, FokI, BsmI, ApaI y TaqI) fueron genotipados y utilizados para evaluar la asociación de VDR
variantes Con ITP.
Resultados: La distribución de los tres Cdx-2 genotipo grupos (GG, GA y AA) fue significativamente diferente
entre pacientes ITP y controles (P = 0,025); El genotipo GG homocigótico de Cdx-2 estaba sobrerrepresentado
en ITP Pacientes. La frecuencia del alelo A de Cdx-2 fue significativamente diferente entre los pacientes y los
controles
(P = 0,01). El alelo A de Cdx-2 se asoció con un menor riesgo de ITP (OR, 0,343; IC del 95%: 0,150-0,782).
No se encontró diferencia estadísticamente significativa entre el grupo ITP y el grupo control para Fok1, Bsm1,
Apa1, Y Taq1 polimorfismos (P> 0,5).
Conclusión: Parece haber una interacción entre la variante Cdx-2 de VDR y trombocitopenia inmune en la
infancia.

Estudios de inmunidad en seres humanos y animales carentes de vitamina D receptor (VDR) o falta de vitamina
D ofrecen una visión en las funciones inmunológicas de la vitamina D. La expresión de VDR por células del
sistema inmunológico sugieren que la vitamina D influye función del sistema inmunológico.1 Más de 30 tejidos
humanos tales como el cerebro, el corazón, el estómago, el páncreas, los ganglios linfáticos, la piel, las gónadas
y el tejido prostático incluyendo linfocitos T y B que expresan VDR.2 Vitamina
D se une a la 1,25-dihidroxi vitamina D, el receptor activo forma de vitamina D, y media su actividad biológica.
VDR se encuentra en el cromosoma 12q13.1, y tiene varios polimorfos regiones.3 Más de 470 nucleótidos
comunes polimorfismos (SNP) se han identificado en VDR. 4 Estos polimorfismos modulan la actividad de
VDR, y su frecuencia difiere con la etnicidad. En sujetos caucásicos, varias variantes alélicas comunes (I) Cdx-
2 (cambio de base simple G a A, localizado aguas arriba en la región 50 no traducida del gen), lo que significa
altera la actividad transcripcional del VDR Región promotora; (Ii) FokI (cambio de base simple C a T,
localizado En la región promotora 50 del exón 2), lo que conduce a la síntesis De una proteína más
larga que es menos eficaz como una proteína transcripcional Activador de VDR; (Iii) BsmI (cambio
de base simple G a A, Localizado en el último intrón); (Iv) ApaI (cambio de base simple G a T,
localizado en el último intrón), que afecta a la estabilidad del ARNm Y la actividad de traslación de
VDR; Y (v) TaqI (base única Cambiar C a T, situado en el exón 9), que conduce a codón silencioso
Generación.5,6 Los polimorfismos del receptor de la vitamina D se asocian Incidencia y gravedad de
ciertas enfermedades autoinmunes.7-11 El mecanismo por el cual el polimorfismo de VDR afecta a
la autoinmunidad Aún no está claro, aunque la activación del receptor Contribuye a las respuestas
inmunes a través de la regulación de la T-ayudante (Th) 1 / Th2 equilibrio de citoquinas y reduce la
producción de Th2 Citocinas.12-15 La púrpura trombocitopénica inmunitaria (ITP) es una De los
trastornos hematológicos benignos más comunes. Se caracteriza Por trombocitopenia aislada,
inmunomediada. La etiología del ITP no está clara, pero es probable que se deba a Factores
adquiridos.16-18 Los factores adquiridos con más frecuencia Problemas inmunológicos tales como
anticuerpos reactivos cruzados Glicoproteínas de la membrana de las plaquetas que se producen
Infecciones virales tales como rubéola, varicela, paperas, citomegalovirus Y virus de Epstein-Barr.
Estas infecciones virales pueden Desencadenar un proceso autoinmune que resulta en una pérdida de
tolerancia y producción de anticuerpos autorreactivos que destruye plaquetas. La vitamina D tiene una
influencia importante en la sistema inmunológico modulando tanto el sistema innato como inmunidad y
regulación de la cascada inflamatoria. Así, nosotros hipótesis de que el PTI es un modelo óptimo para investigar
variantes genéticas de VDR. El objetivo de este estudio fue
Para examinar cinco variantes genéticas bien conocidas de VDR en niños con ITP y compararlos con controles
sanos en términos de polimorfismos de VDR.

Métodos
Asignaturas
Un total de 44 pacientes pediátricos con ITP fueron referidos al hospital actual en 2 años; 100 controles sanos
también incluido. El diagnóstico de ITP se realizó en excluyendo otros trastornos hematológicos en los
Revisión del frotis, así como sobre características clínicas y / o médula ósea aspirados que muestran
megacariocitos normales aumentados. Niños de 3 meses a 16 años con plaquetas <100 9 109 / L diagnosticados
con ITP eran elegibles. ITP crónica se define actualmente como trombocitopenia que persiste más allá 12 meses
desde el diagnóstico.19 Los controles sanos incluyeron niños admitidos en el hospital actual por diversas
razones y que no tenían enfermedad crónica. Los padres o los tutores proporcionaron el consentimiento por
escrito y las juntas de revisión institucional locales.

Medida de la vitamina D
Se midió 25-hidroxi vitamina D (25 (OH) D) en suero usando un kit ELISA de Immunodiagnostic Systems
(The Boldons, Tyne & Wear, Reino Unido). Posteriormente, 2 ml de sangre venosa
Se recogieron en un tubo de EDTA para el análisis de ADN. La sangre las muestras se almacenaron a 20 ° C
hasta su análisis.

Genotipo
El ADN genómico se extrajo utilizando un aislamiento de ADN de Qiagen Blood equipo. Cinco VDR SNP
común fueron seleccionados, y SNP en los sitios de restricción VDR Cdx - 2 (rs11568820), FokI (rs2228570),
BsmI (rs1544410), ApaI (rs 11168271), y TaqI (rs731236) fueron analizados. La amplificación de ADN de
VDR SNP Cdx-2 (G / A), Se realizó FokI (C / T), BsmI (G / A), ApaI (G / T) y TaqI (C / T)
Utilizando protocolos publicados.20,21 Análisis de polimorfismos de VDR se realizó a través de mini-
secuenciación multiplex utilizando el kit ABI PRISM SNAPshot Multiplex según la
El protocolo del productor (Applied Biosystems, Foster City, CA, ESTADOS UNIDOS). Todos los cinco SNP
fueron probados para asociaciones con ITP. análisis estadístico se utilizaron estadísticas descriptivas para los
datos clínicos y utilizando Microsoft Excel 2010 para Windows. Los grupos fueron
Comparado con la prueba de chi cuadrado de Pearson, la prueba exacta de Fisher y la prueba t de Student.
Diferencias en las frecuencias genotipo y alelo entre los grupos se probaron mediante el chi cuadrado de prueba
Y OR con IC del 95%. El equilibrio de Hardy-Weinberg fue evaluado para cada SNP en los controles de chi
cuadrado de prueba. P <0,05 se consideró significativo. El análisis estadístico realizado con SPSS versión 15.0
(SPSS, Chicago, IL, USA).

Resultados
Características del sujeto
Se analizaron un total de 44 pacientes ITP y 100 controles sanos; de los pacientes con ITP, 37 tenían enfermedad
aguda y siete ITP crónica. Ninguno de los pacientes tenía antecedentes de esplenectomía.
La edad media de presentación en el grupo ITP fue 5,47 4,45 años (rango, 3 meses-16 años). No había
Diferencias en la distribución por edad o sexo entre los pacientes
Controles (P> 0,05). El suero medio 25 (OH) D en el grupo ITP
(18,86 \ pm 8,53 ng / ml, rango, 4,4 - 46,2 ng / ml) fue similar a
Que en el grupo de control (19,02 9,05 ng / ml, rango, 6-49
Ng / ml; P> 0,05).
VDR genotipos e ITP
Todos SNP fueron evaluados para las asociaciones entre los pacientes ITP Y controles (Tabla 1). La distribución
de los tres Cdx-2 Genotipo grupos (GG, GA, AA) fue significativamente diferente
Entre los pacientes ITP y los controles (P = 0,025). El GG Genotipo de Cdx-2 estaba sobrerrepresentada en el
grupo ITP (84,1%) versus controles (62%). No se observaron diferencias significativas
Pacientes de ITP y los controles en la frecuencia de los genotipos CC / CT / TT, GG / GA / AA, GG / GT / TT
y CC /
CT / TT de los sitios polimórficos FokI, BsmI, ApaI y TaqI, respectivamente. alelos VDR e ITP
La frecuencia del alelo Cdx-2 A fue significativamente diferente entre pacientes ITP y controles (P = 0,01,
Tabla 2).
El alelo Cdx-2 A se asoció con un menor riesgo de ITP (OR, 0,343; IC del 95%: 0,150 - 0,782). No hay
diferencias significativas fueron observados entre pacientes con ITP y controles
Frecuencia de los alelos Cdx-2 G, alelos FokI C y T, BsmI Alelos G y A, alelos ApaI G y T, y los alelos TaqI
C y T alelos
Cdx - 2 alelo A y 25 (OH) D
La presencia de la Cdx-2 A alelo se asoció significativamente con un menor riesgo de ITP. El suero medio 25
(OH) D en ITP pacientes con el Cdx-2 A alelo (20,8 8,72 ng / mL; Rango, 11,5-37 ng / mL) no fue
significativamente diferente de que en ITP pacientes que no tienen la Cdx-2 A alelo
(18,68 9,18 ng / ml, intervalo de 4,4 a 46,2 ng / ml, P = 0,576; Tabla 3).

Discusión
El presente estudio sugiere una interacción entre el Cdx-2 Variante de VDR y trombocitopenia inmune en la
infancia. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio para investigar la asociación entre el
polimorfismo VDR y ITP. Nosotros encontró que el genotipo homocigoto GG de Cdx-2 fue Sobre representados
en pacientes con ITP, y que la presencia de la alelo en el sitio de unión de Cdx-2 se asoció con un disminución
del riesgo de ITP. El polimorfismo Cdx-2 se encuentra en la región promotora de VDR, y lleva una secuencia
de G a A que afecta la función del factor de transcripción. La presencia del alelo G en el sitio de unión de Cdx-
2 reduce la actividad transcripcional del promotor de VDR en un 70% frente a el alelo A.22,23 Hay informes
limitados sobre este alelo en el literatura. Dickinson et al. Reportaron que el alelo G en la Cdx-2 sitio de unión
se asoció con un mayor riesgo de múltiples el presente estudio es la primera evidencia de que una funcional de
VDR influye en el riesgo de ITP en niños.
Curiosamente, seis de los siete pacientes con ITP crónica tenían una homocigótico genotipo GG de Cdx-2
polimorfismo. Uno tenía un heterocigotos GA genotipo, y ninguno tenía un homocigotos AA genotipo. Estos
resultados también pueden predecir el resultado clínico. No
Asociación significativa entre ITP y tres polimorfismos (BsmI, ApaI, TaqI) en el extremo 30 de VDR, y FokI
polimorfismo. Aunque la presencia del alelo A se asoció con una disminución del riesgo de ITP, no hubo
asociación entre Vitamina D y presencia del alelo A en la unión Cdx-2 sitio. Sugerimos que el examen de los
genes implicados en la vitamina D es el enfoque más importante para identificar el mecanismo por el cual la
vitamina D puede influir etiología de la enfermedad inmunomediada. Esto se debe a que la vitamina D modula
la función inmunológica y es importante en las enfermedades autoinmunes. El VDR es central en este camino
y es un mediador crítico de las acciones biológicas de 1,25-dihidroxi vitamina D, la forma activa de la
hormona.24 otra cuestión importante es que la media 25 (OH) D fue <20 ng / mL y similar en ambos grupos.
La gran mayoría de los participantes vivían en la misma zona geográfica y los se tomaron muestras de sangre
en la misma temporada. En general, en niños así como en adultos, la deficiencia de vitamina D se define como
<20 ng / mL, mientras que 20-50 ng / mL se considera adecuado para proporcionar un efecto
inmunomodulador.25 Sugerimos que proporcionar un alto nivel de vitamina D puede afectar la clínica
Curso de la enfermedad crónica, especialmente en pacientes con el genotipo GG homocigótico de Cdx-2.
Estudios más amplios, sin embargo, son necesarios para confirmar estos hallazgos. Aunque el presente
Tamaño de la muestra era pequeño, los datos proporcionan la interacción de los determinantes genéticos y el
riesgo de ITP.

En conclusión, el genotipo homocigoto GG de Cdx-2 fue sobre-representados en pacientes con ITP y el alelo
Cdx-2 A fue asociado con un menor riesgo de ITP en niños. Vitamina D suplementación en pacientes deficientes
puede cambiar la clínica Evolución de la enfermedad en el PTI crónico, pero se grupos de sujetos más grandes
son necesarios para confirmar estos hallazgos e identificar los mecanismos funcionales involucrados en la
interacción de la expresión del genotipo ITP y VDR.
Revelación
Los autores declaran que no hay conflicto de intereses
Articulo
No. 28
Vargas Gutiérrez Fernando
Salud Infantil 8:00 – 9:00 a.m.