Facultad de Ciencias Agropecuarias

Escuela Profesional de Medicina Veterinaria

Curso:
Patología Clínica

Alumna(os):

Panesi Asca, Gianfranco

Cano Rivera, Flavia
Dreyfus
Garcia Ramos, Renato

Profesor:

M.V. Alejandro De La Cruz Montoro

Ciclo: V Grupo:

2017
 PRACTICAS REALIZADAS

Practica 5: Uroanálisis, determinación de urea en suero sanguíneo.

Practica 6: Determinación de transaminasas: transaminasa glutámico piruvica (TGP) o

alanina amino transferasa (ALT).

Practica 7: Determinación de proteínas totales y albumina.

Practica 8: Determinacion de Glucosa y Colesterol

Practica 9: Diagnostico citológico.

V.- UROANÁLISIS
FUNDAMENTO

Es una examinación de la orina por medios físicos, químicos y comprende una serie
de exámenes químicos y microscópicos que ayudan al tamizaje de infecciones del
tracto urinario, enfermedad renal y enfermedades de los otros órganos que hacen que
aparezcan metabolitos anormales (productos de descomposición) en la sangre.

El análisis de orina de rutina comprende el examen de las siguientes características:

- Físicas: color, aspecto y densidad
- Químicas: contenido de proteínas, bilirrubina, sangre (hemoglobina), Glucosa,
examen de sedimentación, incluyendo pH.

COMPONENTES ANORMALES:

1. Proteinuria: La orina normalmente contiene menos de 10mg de proteínas en

24 horas. Generalmente cuando estas cantidades son excedidas se habla de
proteinuria, en la gran mayoría de los casos la proteína existente es albúmina.

2. Sangre: La presencia de sangre en la orina puede ser franjas y visibles

(hematuria microscópica), o puede consistir únicamente en una cantidad
excesiva de eritrocitos en el análisis del sedimento.
La cuenta de Adiss, consiste en contar los eritrocitos, leucocitos, células
epiteliales y cilindros, así como las proteínas de la orina de las 24 horas.
Una elevación de las cifras de estos componentes indica alteraciones
Patológicas.

3 Glucosa: La orina no contiene glucosa, la glucosuria es casi regla en los casos

diabetes mellitas. El método más específico para la determinación de la glucosa
verdadera es el enzimático.

4. Pigmentos biliares: Los pigmentos biliares pueden presentarse en los casos

de ictericia en la que la bilirrubina predomina es la conjugada.

5. Cuerpos cetónicos: Son características de las cetoacidocis diabética, la

inanición y por el uso de fármacos como biguanida (fernformin).
MATERIALES Y EQUIPOS

PROTEÍNAS:
- Sobrenadante (orina centrifugada)
- Tubo de ensayo
- Ácido sulfosalicílico al 3%
- Gotero

BILIRRUBINA:
- Tubo de ensayo
- Orina
- Gotero
- Lugol 0.5ml

SANGRE (Hemoglobina):
- Tubo de ensayo
- Orina
- Gotero
- Ácido acético
- Piramidón 0.5ml
- Agua oxigenada

GLUCOSA:
- Tubo de ensayo
- Orina
- Reactivo de Benedit
- Gotero
- Mechero
- Pinzas

EXAMEN DE SEDIMENTACIÓN:
- Orina
- Lamina portaobjeto y cubreobjeto
- Gotero
- Microscopio
- Gradilla
- Pinza
PARA PH.
- Orina
- Tira reactiva
PROCEDIMIENTO

EXAMEN FISICO
Muestra: orina de humano.
1.- color: amarillo claro (lo cual nos indica que el paciente no ha ingerido algún tipo de
medicamento o un alimento que tiñera la orina).
2.- aspecto: transparente, ligeramente turbio.
3.- reacción (pH): 6
4.- densidad: 1.020

EXAMEN QUIMICO
1.- proteínas:
En un tubo colocamos:
 3ml de sobrenadante de orina centrifugada.
 3ml de acido sulfosalicico al 3%
 Mezclar por inversión, dejar en reposo.
2.- bilirrubina:
En un tubo inclinado colocamos:
 4ml de orina.
 0.5 ml de lugol.
 Dejar reposar.
Resultados: salio negativo (no se formo el anillo verde característico del lugol).

3.- glucosa:
Colocar en un tubo:
 5ml de reactivo de Benedict.
 0.5 ml de orina.
Mezclar y colocar sobre el mechero, moviéndolo suavemente y teniendo cuidado que
no nos salpique el liquido.

Resultados: No se observó cambio de color, lo cual nos indica que no hay

presencia de glucosa en la muestra de orina.
EXAMEN DE SEDIMENTO
 Colocar en un tubo y mezclar bien la muestra.
 Centrifugar a 1,500 rpm por tiempo de 5 minutos.
 Desechar el sobrenadante y dejar 1ml de orina.
 Agitar el tubo para resuspender el sedimento.
 Colocar una gota del sedimento e una lamina portaobjeto y cubrirla con la
cubreobjeto.
 Observar al microscopio.
Resultados: se reporta la presencia de cristales en el sedimento.

Tiras de Reactivo:

Con una muestra de orina sin sedimento, embelecemos la tira de reactivo con la
muestra de orina y que se moje totalmente. Esperar un minuto para la comparación
de colores con el patrón.

Sangre Negativo
Urobilinógeno Normal
Bilirrubina (-)
Proteínas 500
Nitritos Negativo
Cuerpos cetónicos Negativo
Glucosa Normal
PH 6.0
Densidad 1.015
Leucocitos Negativo

El examen completo de orina es una batería de pruebas de importancia para el

diagnostico de enfermedades del aparato urinario y de otros sistemas u órganos.

El examen de orina comprende el examen físico, el examen químico y el estudio del

sedimento urinario.
CONCLUSIÓN

 En el resultado del uroanálisis observamos que el paciente estaba dentro de

los parámetros normales, con un pH de 6 y con un densidad de 1.015.

 la densidad se encontraba también dentro de lo normal que es 1.015 a 1.045.

 No encontramos presencia de sangre ni glucosa, ni bilirrubina, pero si de

proteínas en la orina, que puede ser Proteinuria Fisiológica.

 Generalmente es transitoria, en estos casos la magnitud de la

proteinuria es moderada y causada por la excreción de albúmina y
algunas globulinas, pudiendo deberse en algunos casos a la presencia
de estrés por frío o calor, fiebre.

 Se observo el aumento ligero de pH que puede ser por el consumo de algunos

alimentos que incrementan el pH pero de manera momentánea, o si no por
alguna infección o el mismo estrés.

DETERMINACIÓN DE UREA EN SUERO SANGUINEO

FUNDAMENTO

La urea se encuentra presente en el suero, es desdoblada por acciones de la ureasa

en conjunto del CO2 y NH3.
Se observa que el amonio producido reacciona con el hipoclorito de sodio en ambiente
alcalino, formándose un complejo de color verdoso. La intensidad producida es
directamente ala cantidad de urea presente en la muestra.

ESPECIE UREA NITROG.

Perro 8.8 – 25.9
Gato 15.4- 31.2
Caballo 10.4 -24.7
Bovino 7.8 -24.6
Cerdo 8.2 -24.6
Oveja 10.3 -26
Cabra 12.6 -25.8
EXPLICACIÓN DEL CICLO DE LA UREA

El hígado es el principal órgano donde se forma la urea; tres aminoácidos, la ormitina,

citrulina y arginina, promueven la formación de urea en rebanadas del hígado; la
enzima anginaza hidroliza la arginina y la convierte en ormitina y urea.

El amonio obtenido por la desaminación de los aminoácidos a través de la

deshidrogenada glutámica, es el sustrato de la carbamilfosfato sintetasa, enzima que
junto con el Co2 y el ATP, cataliza la formación de carbamilfosfato, que es el
alimentador por excelencia del ciclo de la urea. La reacción se lleva acabo en varias
etapas y necesita de la N-Acetil glutamato como modulador alostérico positivo.

El gasto de dos moléculas de ATP desplaza el equilibrio de la reacción

a la derecha y fuerza la síntesis del carbamilfosfato. La ormitina se convierte en
citrulina directamente por el paso del carbamilo del carbamilfosfato a la orina en la
reacción de transcarbamilación.
La citrulina es, por lo tanto, una carbamilornitina, cuya síntesis se realiza en la
mitocondria de la cual sale al citosol para continuar el ciclo. La formación de arginina
es un proceso más complejo que requiere de la presencia de aspartato, ATP y Mg. El
primer paso es la formación de argino-succinato por condensación (presencia de ATP
y Mg) de citrulina y aspartato. El argininosuccinato se fragmenta en arginina (lista para
ser atacada por arginasa) y fumarato, que entra al ciclo de Krebs y permite la
regeneración de aspartato.

Finalmente, la arginasa hidroliza a la arginina en urea y ormitina, la cual queda

disponible para penetrar ala mitocondria e iniciar el ciclo aceptando otro
carbamilfosfato. Dada la toxicidad y la necesidad de manejar concentraciones
cambiantes de NH4, el ciclo de la urea muestra una gran capacidad de ajuste
pudiendo, de acuerdo con la dieta, formarse y eliminarse , cada 24 horas en
condiciones normales, de a 50 gramos de urea. Los mecanismos de ajuste pueden
ser lentos, requiriendo de 3 a4 días para instalarse, por depender de la cantidad de
enzimas presentes, o rápidos, bajo control hormonal, instalados en minutos, en este
caso en relación con el mayor acopio de sustratos, sobre todo de acetil-glutanato,
alimentador del ciclo. Se conoce algunos cuadros clínicos por bloqueos parciales del
ciclo de la urea.
Se caracteriza por hiperamonemia, retraso mental, vómitos y aversión a comidas ricas
en proteínas. Se mejoran si disminuyen las proteínas en la dieta y se suministra
cetoácidos correspondientes a los aminoácidos esenciales, pues estos al aminarse
disminuyen la hiperamonemia.

MATERIALES Y EQUIPOS

 Reactivos para urea:

 Enzima ureasa
 Estándar
 RA (reactivo Fenolnitropenico)
 RB (reactivo de Na y hidróxido de sodio)
 Suero
 Tubos de ensayo
 Gradillas
 Pipetas volumétricas
 Pipeta automática variable
 Espectrofotómetro
Los reactivos ya vienen preparados y se adquieren en el mercado debiéndose seguir
las instrucciones del fabricante.

PROCEDIMIENTO

- Se utilizo 3 tubos :

Tubo B Tubo estándar Tubo M

Se coloco ureasa Se coloco ureasa Se coloco ureasa y la muestra

Solución estándar

1) Se toman tres tubos en cada unos de ellos se coloca 0.1ml de ureasa

2) En el tubo 2 se coloco solución estándar, tubo B (blanco), y tubo M (muestra).
3) Al tubo Estándar se le agrega 0.001ml (10ul) de solución Estándar de ureasa.
4) Al tubo M se le agrega 1ml de suero de sangre
5) Llevamos los 3 tubos a baño Maria por 5 minutos a 37 oC

6) Luego agregamos 1 ml de reactivo A y reactivo B y mezclamos y llevamos a

incubar a 37 oC por 5 minutos
 7) Al tubo M se le agrega 4ml de agua destilada y se homogeniza.
8) Se toma la muestra y se coloca una porción de ellas en las cubetas, para luego
llevarlas al espectrofotómetro
9) Se mide la cubeta de la muestra blanco a 540mmm de longitud de honda
10) Luego se mide la cubeta donde se encuentra la muestra del tubo M.

RESULTADOS
Nitrógeno ureico
Estándar de nitrógeno ureico es:
60* 0.47 = 28.2 g
Nivel de ureasa
Método Manual: Absorbancia del estándar
0.630 -- 28%
0.177 -- X
- 7.86 %

CONCLUSIONES
Luego de haber realizado los exámenes correspondientes del suero sanguíneo como
es el de nitrógeno ureico y el nivel de ureasa presente en la sangre, se concluye que
los niveles de urea y nitrógeno se encuentran bajos ya que los valores normales son
8.8 – 25.9, y el valor obtenido fue de 7,86%
 VI.- DETERMONACIÓN DE TRANSAMINASAS GLUTÁMICO PIRUVICA
(TGP)O ALANINA AMINO TRASFERASA (ALT)

FUNDAMDENTO CLÍNICO:
Las transaminasas (TGP y ALT) están aumentadas en su concentración cuando hay
problemas de funcionalidad hepática.
La ALT se encuentra aumentada en lesiones agudas de los hepatocitos, como es el
caso de hepatitis viral. Se incrementa en casos de hepatitis activa con o sin cirrosis,
carcinoma hepático primario o secundario, ictericia post – hepática, colangiohepatitis,
caquexia, hipovolemia.
Se debe de tener cuidado de no dar un diagnóstico herrado en pacientes a los que se
le han administrado los siguientes medicamentos como son glucocorticoides,
anticonvulsivos, mebendazol, ketoconazol, tetraciclina, sulfosamidas.
La ALT es común encontrarla en hígado mayormente y en menores cantidades en
riñón y músculo esquelético.
Los valores normales de transaminasas en el perro están en 8.2 – 57.3 y en gatos de
8.3 – 52.5 (U/L)

FUNDAMENTO QUÍMICO:
Como es conocido la TGP cataliza la transferencia del grupo amino de la alanina al
grupo ceto del ácido alfa cetoglutarico, produciendo ácido glutámico y pirúvico.
En la prueba se usa la reacción del ácido pirúvico con la 2 – 4 dinitrofenilhidracina, en
medio alcalino, produciendo un compuesto de color marrón el cual es proporcional a
la actividad de la TGP.

MATERIALES Y EQUIPOS
Reactivos:
Sustrato: L alanina y cetoglutarato.
Reactivo de color: 2 -4dinitrifenilhidracina.
Hidróxido de sodio
Patrón: piruvato

Muestra: suero sanguíneo

Tubo de ensayo
Pipetas graduadas
Baño María
Espectrofotómetro
PROCEDIMIENTO

Paso 1:
Pipeteamos los tubos de ensayo de la siguiente forma:

Tubo: Reactivo blanco: Muestra

Muestra - 0.1 ml.
Tampón 0.5 ml. 0.5 ml.
Agua destilada 0.1 ml. –
Luego procedimos a mezclar hasta homogenizar e incubamos los tubos de ensayo en
baño María a una temperatura de 37° C durante 30 minutos.

Paso 2:
Agregamos el reactivo de color: se colocó 0.5 ml de dinitrofenilhidracina.
Mezclamos homogéneamente y dejamos reposar por 20 minutos a una temperatura
en un rango de 20 – 25° C.

Paso 3:
Agregamos 0.5 ml. De hidróxido de sodio. Mezclamos y dejamos reposar por 5
minutos para posteriormente leer.

Resultados:
La cantidad obtenida de transaminasas fue de 37 UI. Del perro que llevamos para
analizar.

Conclusiones:
Nuestro perro estaba dentro de los valores normales por lo que se puede descartar
que el problema que tenía no fuera hepático.
 VII. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES, ALBUMINA Y FOSFATASA
ALCALINA EN SUERO

VALORES

Proteinas Totales:

- Estandar: 4.3 g/dl

- Reactivo: Reactivo de biuret

- Longitud de onda: 540.

Fosfatasa en Suero:

- Estandar:

- Reactivo: Amino Antipirina

- Longitud de onda: 520

Albumina:

- Estandar: 3 g/dl

- Reactivo: Reactivo de Albumina

- Longitud de onda: 620

PROCEDIMIENTO

1. Proteínas Totales:

- Se coloca 20ul de cada muestra en diferentes tubos.

- Meclar con 2ml de reactivo de biuret, mover un poco y poner a baño maria por 15
minutos.

2. Fosfatasa en Suero:

- Se coloca 0.05 ml de amino antipirina en cada tubo (9).

- Se pasa a baño maría por 5 minutos.

- Se coloca 50ul de cada muestra a los tubos en baño maria y se espera 10 min en
baño maría.

- Colocar ferrocianuro de potasio (2.5 ml) a cada tubo y reposar.

3. Albumina:

- Colocar 10ul de cada muestra en los diferentes tubos.

- Mezclar con 1ml de reactivo de albumina, mover y poner a baño maría por 3 minutos.

* Todas se pasan por el espectofotometro una vez listas.

RESULTADOS:

Animales Fosfatasa Alcalina (ui/l) Albumina (g/dl) Proteinas totales (g/dl)

1 90.1 4.95 5.41

2 708.2 1.96 5.1

3 259.3 4.68 4.63

4 1227 3.67 5.89

5 191.8 2.43 6.28

6 396.9 5.15 5.67

7 179.3 5.63 5.9

8 106.6 0.65 5.44

9 80.7 4.76 4.96

 VIII. DETERMINACION DE GLUCOSA Y COLESTEROL

VALORES

Glucosa:
- Estandar: 100 mg/dl
- Reactivo: glucosa oxidasa
- Longitus de ondas: 505.
Colesterol:
- Estandar: 200 mg/dl
- Reactivo: Peroxidasa
- Longitud de ondas: 505

PROCEDIMIENTO

- Tanto en el examen de glucosa como en el de colesterol, se hizo el uso de

tubos de ensayo con 10ul de muestra, mas 10ul de glucosa liquida (para el
examen de glucosa) y en otros tubos con 10 ul de muestra más 10ul de
reactivo de colesterol.

- Teniendo las respectivas combinaciones se procede al baño maría por

aproximadamente unos 10 minutos.

- Primero se coloca el “blanco” de glucosa y de colesterol, y luego el

“estándar”de glucosa (100mg/dl) y de colesterol (200mg/dl).

- Al tener las soluciones listas, se hace el uso del espectofotometro. Colocar

cada muestra en el aparato para obtener los resultados.

RESULTADOS

Animales Glucosa (mg/dl) Colesterol (mg/dl)

Pelusa 9.6 172.4

Rukia 15.7 * 149.1

Caprino A 45.9 56.3

Chato 55.4 130

Caprino B 45.2 54

Fortunato 131.7 * -----------

Victor 351.7 * --------

Aiza ------------ 404.5

IMPORTANTE:

- GLUCOSA: Para el diagnostico de diabetes mellitus, tener en cuenta los

valores para la hiperglicemia.

- COLESTEROL: Los valores alterados nos pueden determinar en algunos

casos obstrucción o falla del flujo sanguíneo.

CONCLUSIONES

- En el análisis de glucosa el Paciente n°2 presenta una marcada hipoglucemia.

- Luego los pacientes n° 6 y 7 son de muestra humana de lo cual podemos decir

que en primer lugar el paciente n°6 está ligeramente sobrepasando el rango y
se le sugeriría una nueva muestra para analizar y corroborar los análisis,
mientras que el paciente n°7 presenta una marcada Diabetes, el cual debe
estar en tratamiento.
 IX.- DIAGNÓSTICO CITOLÓGICO Y SEROLÓGICO

FUNDAMENTO CLÍNICO
Las pruebas que se realizan ayudan a prevenir ampliamente la lesión con los datos
obtenidos mediante los antígenos obtenidos en la muestra.

FUNDAMENTO QUÍMICO
Pruebas similares a las de Elisa, se basa en la reacción antígeno-anticuerpo, uno de
los cuales debe ser de reactividad conocida. El color se genera por la interacción de
un sustrato cromogénico y una enzima que ha sido acoplada al anticuerpo detector. Si
debe medirse el anticuerpo, se coloca el antígeno en la fase sólida, como una capa de
captura. Después de la reacción del antígeno con el suero del paciente, la capa de
detección puede ser un reactivo antiinmunoglobulina clase específica (IgM o IgG) para
detectar respuesta de anticuerpos clase específicos

MATERIALES Y EQUIPOS
-Muestra de sangre con anticoagulante.
-Kit de diagnóstico de Ehrliquia – Dirofilaria – Borrelia.
PROCEDIMIENTO
Usando la pipeta del kit colocamos tres gotas al tubo de nuestra muestra del kit. Luego
manteniéndolo de una posición vertical le agregamos cuatro gotas del conjugado del
kit.
Luego lo tapamos y lo mezclamos bien de 3 a 5 veces, y colocamos el contenido al
dispositivo del kit alrededor de 30 a 60 segundos debe llegar a la ventana de lectura.
Observamos un color azul en el círculo de activación del dispositivo de la prueba,
cuando comience a aparecer dicho color presionamos el activador del dispositivo. Se
estima un tiempo de espera entre 8min.

Resultados e interpretaciones
Una de las pruebas dio positivo debido a que el dispositivo del kit detecto los
antígenos que se hallaron en la muestra, en estas pruebas serológicas es muy
importante en cuanto a cantidad de antígenos que se presenta por que estos se
quedan en el individuo que ha tenido una enfermedad de este tipo como parte de su
inmunización ante una posible recaída de esta enfermedad. También se pudo
observar un ligero halo para una sospechasa de anaplasma, aunque se debería de
tomar en cuenta más pruebas para un descarte.

CONCLUSIONES
El animal dio positivo para la prueba de ehrliquia debido a que reaccionó el antígeno
de la enfermedad presentada.
BIBLIOGRAFIA

 William Medway, D.V.M, ph.d. James E.Prier, Jhon S. Wilkinson, Patología

Clínica Veterinaria, editorial UTEHA, México, 1990.

 Willrad Richard .Diagnostico clínico patológico en Animales

pequeños.

 Sodikoff charles .Pruebas de diagnostico y laboratorio de

enfermedades.

 EL MANUAL MERCK de VETERINARIA. Quinta Edición en Español

OCEANO GRUPO EDITORIAL, S.A. pagina 1351-1353.

FUENTES INFORMATICAS
 http//www.jornadasveterinarias.com/pequeos/diabetes_mellitus_canina_y
_felina.htm.

 http/www.encolombia.com/veterinaria/recacovez27102-importancianitro3.htm.

 www.inmunolabcr.com/novedades.html.

 http//:www.engormix.com/deteccion_urea_alimentos_balancea
dos_forumsview5614.htm.